Двувалентна жива атенюирана ваксина срещу грипен вирус предпазва от клинични изолати на H1N2 и H3N2 при свинете, част 2

2.5. Ензимно-свързан имуносорбентен анализ (ELISA)

За да се направят покриващи антигени, SD435 и SD467 се размножават в MDCK клетки и се пречистват с ултрацентрофугиране с градиент на захароза. Инактивирането на вирусите става чрез добавяне на 97 процента -пропиолактон към вируса в концентрация 1:1000 (v/v) (Thermo Fisher Scientific, AAB2319703). Тази смес се разклаща при 4 ◦C за една нощ, инкубира се при 37 ◦C в продължение на два часа, за да се улесни хидролизата на -пропиолактон, след което се съхранява при -80 ◦C до употреба.

Антигените и имунитетът са неразделни. Антигенът се отнася до всяко вещество, което може да бъде разпознато от имунната система и да предизвика имунен отговор, включително бактерии, вируси, туморни клетки и т.н., докато имунитетът се отнася до способността на тялото да реагира на тези антигени.

Връзката между антигените и имунитета може да се илюстрира с проста метафора: точно както упражненията изискват достатъчно обучение и хранителни добавки, подобряването на имунитета също зависи от повтарящия се контакт с антигени и съответните имунни клетки и имунни молекули. произвеждат. Когато имунната система срещне антиген, тя атакува, като произвежда специфични антитела или имунни клетки, заедно с клетки на паметта, за да ни предпази от повторна инфекция.

Науката потвърди, че развиването на добри навици на живот и хранене може да помогне за подобряване на имунитета. Например поддържането на чистота, отказът от пушене, умерените упражнения и навиците за сън могат да помогнат за намаляване на инвазията на антигени като бактерии и вируси. В същото време консумацията на някои храни, богати на антиоксиданти, витамини и минерали, като зеленчуци и плодове, пълнозърнести храни и риба, също може да помогне за подобряване на имунитета.

Накратко, връзката между антигена и имунитета е много тясна. Само чрез многократен контакт с антигени и правилни жизнени навици имунитетът може непрекъснато да се подобрява и различни заболявания да се предотвратяват и лекуват. Затова трябва да поддържаме положително отношение и да развием добри навици на живот, за да се предпазим от болести. Вижда се, че трябва да подобрим имунитета си. Cistanche може да ни помогне да подобрим имунитета си, тъй като Cistanche е богат на различни антиоксидантни вещества, като витамин С, каротеноиди и др. Тези съставки могат да поглъщат свободните радикали и да намалят оксидативния стрес, подобрявайки устойчивостта на имунната система.

Кликнете върху добавката Cistanche deserticola

За измерване на swIAV-специфичните нива на IgG, индуцирани от ваксинация и провокация, беше взет свински серум след първата (ден 20) и втората (ден 30) ваксинации и преди аутопсия (ден 36).

Пречистени -пропиолактон-инактивирани вируси SD435 (1 µg/mL) и SD467 (2 µg/mL), разредени в карбонат/бикарбонатен буфер за покритие (рН 9,6) се прилагат към Immulon-2 96-плаки с ямки при 1{{ 12}}0 µL/ямка (Thermo Labsystems, Ottawa, ON, Канада, 3655) и се инкубира една нощ при 4 ◦C. След инкубация за една нощ, покритите плочи се промиват четири пъти с TBST (0.1 М Tris, 0,17 М NaCl и 0,05 процента Tween 20), към които се добавят четирикратни серийни разреждания на серума или BALF. плаката в два екземпляра, последвано от двучасова инкубация при стайна температура. Беше добавен серум при начално разреждане от 1:10 и BALF беше добавен неразреден. Проби от предварително дефинирани положителни контролни серуми и съответните отрицателни контроли, серум и BALF от неваксинирани прасета в предишно проучване бяха пуснати на всяка плака [14].

Плаките се промиват четири пъти с TBST, след което козе анти-свински IgG (H плюс L) белязано с фосфатаза афинитетно пречистено антитяло (1:5000) (Sigma Aldrich, SAB3700435) или миши анти-свински IgA (Serotec, MCA658) ( 1:300), разреден в TBST, се добавя и се оставя да се инкубира при стайна температура за един час. IgA ELISA бяха разработени чрез добавяне на биотинилирани кози анти-миши IgG (H плюс L) антитела (CALTAG, Burlingame, CA, USA, M30015) и разтвор на стрептавидин алкална фосфатаза (Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA) и двете за един час при стайна температура.

След инкубацията, както IgG, така и IgA плаките се промиват четири пъти с TBST, към който р-нитрофенил фосфатен субстрат (PNPP) [10 mg/mL р-нитрофенил фосфат ди(трис) кристална сол (Sigma-Aldrich) , 1 процент диетаноламин (Sigma-Aldrich), 0.5 mg/mL MgCl2 и рН 9.8] (1 mg/mL) се добавя и се инкубира при стайна температура в продължение на два часа.

Реакцията беше спряна чрез добавяне на 0.3 М етилендиаминтетраоцетна киселина (EDTA) и плаките бяха отчетени в спектрофотометър при 405 nm с референтна дължина от 490 nm. Титърът на пробата се определя като най-високото разреждане, при което OD на тази проба е по-висока от определената граница (средната OD на известна отрицателна проба плюс два пъти стандартното отклонение).

2.6. Тест за неутрализиране на вируса (VN).

MDCK клетки (3.5 × 104) се поставят в 96-плаки с ямки. Серумът и BALF се инактивират нагряване при 56 ◦C за 30 минути. Двукратни разреждания на серума и BALF бяха добавени към плаката в четири повторения и 60 µL разреден серум или BALF бяха инкубирани с равен обем SD435 или SD456, съдържащ 100 TCID50 при 37 ◦C за 1 час. След това 100 uL от сместа се добавят към MDCK клетките и цитопатогенният ефект (CPE) се документира на 48 часа и 72 часа след инфекцията (pi). Титърът на неутрализиращото антитяло е най-високото разреждане на всяка серумна проба, което напълно защитава клетките от CPE в поне 2 от 4 ямки.

2.7. Вирусно определяне

След събирането белодробните проби незабавно се поставят върху лед и се замразяват при -80 ◦C до обработка. За обработка всяка белодробна тъкан се претегля и се добавя 10 процента (w/v) концентрация на MEM, допълнена с 1 × антибиотик-антимикотик (Thermo Fisher Scientific, 15240-062). Белодробната тъкан се хомогенизира в TissueLyser II (Qiagen, Hilden, Германия) при 30 Hz за 5 минути, последвано от центрофугиране при 5000 × g за 10 минути при 4 ◦C. Хомогенизираният супернатант се събира и съхранява при -80 ◦C до по-нататъшен анализ. Назалните тампони се разбъркват за 15 секунди и се центрофугират при 1600 × g за 25 минути при 4 ◦C. Супернатантите се събират и съхраняват при -80 ◦C до по-нататъшен анализ. Вирусните титри бяха определени чрез TCID50 анализ за белите дробове и количествен RT-PCR за назални тампони.

2.8. Екстракция на РНК и количествена RT-PCR (qRT-PCR)

За да се определят нивата на вирусна РНК на SD467 и SD435 в назалните тампони след предизвикване, се извършва qRT-PCR. Беше направена стандартна крива, използвайки РНК, извлечена от SD435 и SD467 с известен титър. Накратко, RNeasy Plus Mini Kit (Qiagen, Торонто, ON, Канада, 74136) беше използван за извличане на vRNA от 200 µL назална промивка. РНК се превръща в сДНК с помощта на универсалния грипен праймер Uni12 и SuperScript III транскриптаза (Invitrogen, Burlington, ON, Канада) [19]. qPCR се извършва в три екземпляра на StepOnePlusTM Real-Time PCR система (Applied Biosystems, Калифорния, САЩ) с Power SYBR Green PCR Master Mix (Applied Biosystems), 5 µL cDNA и 1 µL от 10 µM прав и обратен праймери. PCR реакциите се провеждат при температура на отгряване от 58 ◦C за 40 цикъла. Всички последователности на qPCR праймери са налични при поискване.

2.9. Статистически анализ

Статистическият анализ беше извършен с помощта на софтуер GraphPad Prism 8. Използвани са непараметричните тестове на Mann-Whitney и Kruskal-Wallis. Значимите разлики са означени с * (p < 0.05), ** (p < 0.01), *** (p < 0,001) , или **** (р <0,0001). ns=не е значим.

3. Резултат

3.1. Ваксинирането с двувалентната ваксина осигури защита срещу нови клинични изолати

Измерихме физическия отговор на предизвикателни вируси, както и вирусната репликация в респираторния тракт, за да оценим защитата, осигурена от двувалентната ваксина срещу тези нови клинични изолати. Температурата се записва ежедневно в продължение на пет дни след заразяване с вируса във всички групи. Прасета, които са били фалшиво ваксинирани и заразени с SD435 (H3N2) (MEM/SD435) или SD467 (H1N2) (MEM/SD467), показват типичен скок на температурата на ден 1 след заразяване с вируса, със средни температури от 40,6 ◦C и 41,1 ◦ C, съответно. Този скок не е наблюдаван при ваксинираните групи, които са били заразени с SD435 (Bivalent/SD435) или SD467 (Bivalent/SD467), които са имали средни температури съответно 39,4 ◦C и 39,6 ◦C. В дните 2-5 след заразяването и ваксинираните, и неваксинираните групи имат температури около 39 ◦C (Фигура 2А).

Пет дни след заразяването всички прасета бяха подложени на аутопсия, като белите дробове бяха отстранени изцяло и анализирани за количествено определяне на количеството налични лезии. Групата Bivalent/SD435 показа минимални или никакви лезии, с медиана от 0.65 процента общи белодробни лезии. Групата MEM/SD435 има значително по-високи лезии от ваксинирания си аналог, с медиана от 5,1 процента (p=0.0025) (Фигура 2B). В групата Bivalent/SD467, пет от седем прасета са имали малко количество лезии (<2%), one had minor lesions (3.75%), and one outlier had high lesions (31%), with a group median of 1.9%. Compared with the vaccinated group, the MEM/SD467 group had a higher degree of lesions with a median of 4.55% (p = 0.0417) (Figure 1C).

В белите дробове групите Bivalent/SD435 и Bivalent/SD467 имаха ниски титри на вируса със средни стойности съответно от 8,6 PFU/mL/gr и 3.0 PFU/mL/gr. Обратно, групите MEM/SD435 и MEM/SD467 имат по-високи количества вирус, със средни стойности от съответно 656,1 и 9118,2 PFU/mL/gr (p=0.0025 и за двете) (Фигура 3A, Б). Подобни тенденции се наблюдават при назалните тампони. В групата Bivalent/SD435 назалните титри бяха ниски на дни 1, 3 и 5 след предизвикване (dpc), докато в групата MEM/SD435 титрите бяха леко повишени и нарастваха с напредването на дните (ns) (Фигура 3C). В групата Bivalent/SD467 назалните титри също са ниски, средно под 5 PFU/mL на ден 1 и 5 и 10,0 PFU/mL на ден 3 след провокацията. Титрите бяха по-високи в групата MEM/SD467 всеки ден, средно 4123,6 PFU/mL/gr на 1dpc (p=0.0278), 77233.1 PFU/mL/gr (p=0.0009) на 3dpc и 65,2 PFU/mL/gr при 5dpc (ns) (Фигура 3D).

Като цяло, тези резултати предполагат, че двувалентната ваксина предлага значителна степен на защита срещу заразни щамове, намалявайки белодробните лезии и вирусната репликация, свързана с инфекция с тези два изолата на swIAV в белите дробове и носните проходи.

3.2. Двувалентната ваксина предизвиква имунни отговори срещу предизвикани щамове

Измерихме отговора на антителата в серума и белите дробове, специфични за двата провокационни щама след ваксинация с бивалентна ваксина. Беше взет серум от прасета след първата ваксина (ден 20) и след втората ваксина (ден 30). Провокационните вируси SD435 (H3N2) и SD467 (H1N2) бяха използвани като улавящи антигени за измерване на вирус-специфичния IgG антитяло отговор в серума. При SD435 няма значима разлика между титрите на антителата в MEM и двувалентно ваксинираните групи след първата ваксинация (ден 20). Въпреки това, титрите на антитялото срещу SD467 са значително по-високи във ваксинираната група на 20-ия ден (p=0.0321). След втората ваксина (ден 31), титрите на антителата са значително по-високи във ваксинираната група срещу SD435 и SD467, отколкото в групите с фалшива ваксина MEM (p <0,0001) (Фигура 4A, B). По-конкретно, срещу улавящ антиген SD435, серумните IgG титри в групата с фалшива ваксинация с MEM са средно 52 на дни 20 и 30, докато те са 311 (ден 20) и 4852 (ден 30) в групата с двувалентна ваксина (Фигура 3А). Срещу SD467, серумните IgG титри в групата с фалшиво ваксинирана MEM бяха 39 (ден 20) и 38 (ден 30), докато в групата с двувалентна ваксина те бяха 219 (ден 20) и 3509 (ден 30) (Фигура 3B).

Подобни тенденции се наблюдават, когато титрите на неутрализиращи антитела се измерват в серума срещу двата предизвикателни щама. Отново, няма значителна разлика между титрите на неутрализиращи антитела в MEM и двувалентно ваксинираните групи срещу SD435 след една доза ваксина (ден 20) ​​(Фигура 5A, B). Срещу SD467, нивата на антитела бяха значително по-високи на ден 20, след една ваксина (p=0.0069). Срещу двата вируса се наблюдава повишаване на титрите на антителата в групите с двувалентна ваксина след втората доза ден 30) (p < 0,0001). Титрите в групата с фалшива ваксинация с MEM бяха предизвикани със SD435 средно 1 (ден 20) и 3 (ден 30), докато титрите в двувалентната група бяха средно 10 (da20) и 77 (ден 30) (Фигура 5А). Титрите в групата с фалшива ваксинация с MEM, заразена с SD467, са средно 0 (ден 20) и 2 (ден 30), докато титрите в групата с двувалентна ваксина са средно 10 (ден 20) и 54 (ден 30) (Фигура 5B).

При аутопсия (ден 36), BALF се събира от всяко от прасетата, така че нивата на антителата да могат да бъдат измерени в белите дробове. Провокационните вируси SD435 и SD467 бяха използвани като улавящи антигени за измерване на вирус-специфичния IgA и IgG отговор. Срещу SD435 нивата на IgA в групите с фалшива ваксина MEM бяха средно 17, докато титрите в групата с двувалентна ваксина бяха значително по-високи, средно 95 (p=0.0014) (Фигура 6А). За SD467 нивата на IgA са средно 18 в групата с фалшива ваксина и са значително по-високи при 158 в групата с двувалентна ваксина (p=0.0185) (Фигура 6B). По отношение на IgG, титрите срещу SD435 в групата с фалшива ваксина MEM са средно 3, докато в двувалентната група те са значително по-високи при средно 138 (p <0,0001) (Фигура 6C). IgG антителата срещу SD467 са средно 16 в групите с фалшива ваксина MEM, докато в групата с двувалентна ваксина те са значително по-високи, средно 259 (p <0,0001) (Фигура 6D).

По отношение на неутрализиращите антитела в BALF, тенденциите са подобни на тези, наблюдавани при IgA и IgG ELISA. Срещу SD435 титрите на неутрализиращи антитела бяха неоткриваеми в групите с фалшива ваксина MEM и те бяха средно значително по-високи при 13,2 в групата с двувалентна ваксина (p < 0.0001) (Фигура 7А). По подобен начин титрите на антитела, специфични за SD467, са средно 0,7 в групите с фалшива ваксина MEM и са значително по-високи в групата с двувалентна ваксина със среден титър от 10,9 (p=0.0002) (Фигура 7B). Като цяло тези данни показват, че две дози от двувалентната ваксина предизвикват мощен системен хуморален отговор, както и локален имунен отговор в белия дроб срещу тези два нехомоложни клинични изолати.

4. Дискусия

По-рано демонстрирахме, че зависимите от еластаза вируси SD191-R342V и SD69.K345V са напълно атенюирани и невирулентни при прасета и че две ваксинации с този двувалентен LAlV предизвикват силен имунен отговор и осигуряват защита срещу инфекция с хомоложен SD191 ( H1N2) и щамове SD69 (H3N2) [14). В това настоящо проучване искахме да проверим дали двувалентната ваксина би издържала in vivo срещу по-нови клинични изолати, които са претърпели антигенен дрейф. SD467, подобно на SD191, е член на антигенната група Ho-3, която се е появила в Канада, но е придобила множество мутации в ключови антигенни места (12,15). По същия начин SD435 представлява клъстера H3N2 IV-E който присъства в западна Канада и притежава множество аминокиселинни замествания в ключови H3 антигенни места от тези, присъстващи в SD69 (17).

Двувалентният LAlV значително намалява лезиите при ваксинирани прасета, когато са провокирани с SD435 (H3N2) или SD467 (H1N2) и предотвратява скок в температурата, който се наблюдава при MEM (фалшиво) ваксинирани групи един ден след провокацията. Това също доведе до намаляване на вирусната репликация на двата щама в белите дробове и намаляване на SD467 (H1N2) в назалните секрети. Интересното е, че назалните титри на SD435 (H3N2) са ниски както при ваксинирани, така и при неваксинирани групи, въпреки идентичните методи за вземане на проби, което предполага, че този щам може да няма толкова много тропизъм за носните проходи. По отношение на извънредното прасе в групата, което има висок резултат от белодробни лезии от 31, измерванията на температурата не показват пик при заразяването и титрите на вируса в белия дроб са под 10 PFU/g/mL. Нивата на антитела в серума и локалният белодробен отговор също са същите, както при всички други ваксинирани прасета. Това ни кара да спекулираме, че лезиите не са свързани с грип. Сероанализът разкри, че е бил монтиран силен имунен отговор срещу двата щама след две дози от ваксината и същото се оказа вярно по отношение на локалния анализ в белия дроб. Повърхностните гликопротеини, насочени към антитела, са от първостепенно значение за защита срещу инфекция с IAV, така че високото ниво на неутрализиращи антитела, както и lgG и lgA, открити при ваксинирани прасета, поддържат защитата, наблюдавана in vivo [20].

Цялостните инактивирани вирусни (WIV) ваксини са най-често наличните за свине, формулирани по традиционен начин с адювант, те се считат за безопасен подход, тъй като няма риск от реасортиране с циркулиращи щамове. Въпреки това, те осигуряват ограничена ефикасност срещу несъответстващи щамове и е доказано, че водят до свързано с ваксината усилено респираторно разстройство (VAERD), когато се използват срещу несъответстващи щамове. Тяхната ефикасност също намалява в присъствието на майчини антитела (MDAs) [4]. Тези, които се предлагат в търговската мрежа в Северна Америка, включват FluSure XP®, който се предлага като четиривалентна формула в САЩ с H1N1, H1N2 и H3N2 клъстери IV-A и IV-B [21]. По-стара формулировка на Flusure XP® се предлага в Канада с два щама H1N1 и един щам H1N2, изолирани между 2000 и 2005 г. [22]. И в двете северноамерикански страни се предлага FluSure® Pandemic, моновалентна ваксина, съставена от щама H1N1pdm09, както и Pneumostar SIV Complete (Elanco, Greensboro, North Carolina, US Inc.), която съдържа H1N1, H1N2 и H3N2, и Pneumostar SIV, с щамове подтип H1N1 и H3N2 (GOC, USDA) [23,24]. Тези налични в търговската мрежа ваксини представляват около 50 процента от ваксините срещу свински грип в Северна Америка, а останалите 50 процента от ваксинациите са автогенни ваксини [4].

По отношение на алтернативните платформи за ваксини, в САЩ е лицензирана ваксина с репликонни частици, получена от рекомбинантен алфавирус [4]. Тази платформа за ваксина използва алфавирус с променен геном, където вирусните структурни гени са заменени с ген по избор, което прави репликацията на алфавируса дефектна. Тази РНК се самовъзпроизвежда, така че платформата на ваксината води до висока експресия на гена, който представлява интерес, а за грипа и НА, и нуклеопротеинът (NP) са тествани като антигени [25]. Проучванията показват, че използването на тази платформа предпазва от антигенно HA-съвпадащи и несъвпадащи предизвикателства, както и NP-несъвпадащи щамове, въпреки че платформата не е в състояние да защити срещу наличието на MDA.

Първата LAIV за свински грип беше одобрена от Министерството на земеделието на САЩ (USDA) през 2017 г. Ingelvac Provenza™ е двувалентна H3N2 и H1N1 ваксина, с HA и NA от два щама, изолирани в САЩ, експресирани върху гръбнака на TX98, атенюиран чрез съкращаване на неструктурния протеин (NS1) [14,26]. LAIV имитират естествената инфекция и водят до повишен имунитет на лигавицата в горните дихателни пътища, когато се доставят интраназално. Когато инактивираните ваксини водят главно до производството на системни IgG антитела, живите атенюирани ваксини могат да индуцират мукозен IgA в респираторния тракт, както и повишен клетъчно-медииран отговор поради излагането на имунната система на вътрешни грипни протеини, които съдържат повече T клетъчни епитопи [27]. Това води до по-добра защита срещу несъответстващи щамове.

Те са показали частична защита в присъствието на MDA. Целите IgG антитела са по-разпространени в долните дихателни пътища, а полимерните IgA антитела преобладават в горните дихателни пътища на прасетата, най-често като димери [28]. Тези антитела се произвеждат локално и се транспортират през слоя на епителните клетки, където остават в лигавицата, подпомогнати от секреторен компонент, който се противопоставя на разграждането от протеази [28,29]. IgA антителата са първата линия на защита на адаптивната имунна система срещу входящи патогени, работещи за блокиране на прикрепването на вируса към рецепторите на сиалова киселина [30]. Полимерните IgA антитела са по-широко кръстосано реактивни от мономерните IgG антитела, потенциално поради многовалентно свързване [31]. Проучванията показват също, че тези антитела могат да предотвратят освобождаването на новообразуван IAV от инфектирани клетки много по-ефективно от IgG или мономерен IgA, които могат да бъдат открити в свински серум, което предполага, че полимерната структура на IgA е благоприятна за кръстосано свързване на вирусното потомство към HA, експресиран върху инфектираната клетъчна повърхност [31–33]. Локалният отговор на IgA антитела следователно е неразделна част от защитата срещу инфекция с IAV и се предполага, че е корелат на защитата при хора [34].

Въпреки това, рискът с LAIV е потенциалът за реасортиране с циркулиращи щамове. Филогенетично проучване в САЩ откри нови щамове в обращение, които са се съчетали с щамовете на ваксината, включени в Ingelvac Provenza™ [26]. Зависещата от еластаза LAIV платформа намалява този риск, тъй като протеинът еластаза е много оскъден в респираторния тракт на свинете, така че репликацията на вирусите на ваксината е много ограничена, както и времевата рамка за извършване на повторно сортиране. Бъдещите проучвания ще включват оценка на риска от пренареждане на тази двувалентна ваксина, както и как тази ваксина се задържа в присъствието на MDA. Също така би било интересно да се тества клетъчно-медиираният отговор на тази ваксина, тъй като това е едно от основните предимства на LAIV. В заключение, двувалентният зависим от еластаза LAIV разшири защитата до нови клинични изолати, открити в западна Канада, и ще запълни някои празнини на пазара на ваксини срещу свински грип.

Авторски принос:

Концептуализация, YZ; методология, YZ и LA; формален анализ, LA; разследване, LA и UB-C.; ресурси, SD; писане—подготовка на оригинална чернова, LA; писане - преглед и редактиране, YZ, UB-C. и SD; надзор, YZ; придобиване на финансиране, YZ Всички автори са прочели и са съгласни с публикуваната версия на ръкописа.

Финансиране:

Това изследване е финансирано от Фонда за развитие на земеделието (ADF), Министерство на земеделието на Саскачеван. Лос Анджелис е частично подкрепен от стипендията за ваксинология и имунотерапия (V&I) от Училището по обществено здраве, Университета на Саскачеван. VIDO получава оперативно финансиране от правителството на Саскачеван чрез Innovation Saskatchewan и Министерството на земеделието и от Канадската фондация за иновации чрез Major Science Initiatives за своето съоръжение CL3 (InterVac).

Изявление на институционалния съвет за преглед:

Не е приложимо.

Декларация за наличност на данни:

Всички данни и анализи от това проучване са докладвани в тази статия.

Благодарности:

Бихме искали да благодарим на ветеринарните лекари и зоотехниците на VIDO за извършването на цялата работа с животни за нашите опити върху животни. Тази работа е публикувана с разрешението на директора на VIDO като ръкописна серия #1005.

Конфликти на интереси:

Авторите декларират липса на конфликт на интереси.

Препратки

Webster, RG Грипен вирус: Предаване между видовете и значение за появата на следващата човешка пандемия. Арх. Virol. Доп. 1997, 13, 105–113. [PubMed]

2. Ли, Й.; Робъртсън, И. Епидемиологията на свинския грип. Anim. дис. 2021, 1, 21. [CrossRef] [PubMed]

3. Донован, Т. Ролята на грипа върху производителността на растящите прасета; Университет на Минесота: Минеаполис, Минесота, САЩ, 2005 г.

4. Грасия, JCM; Pearce, DS; Масич, А.; Balasch, M. Вирус на грип A при свинете: епидемиология, предизвикателства и стратегии за ваксиниране. Преден. вет.-наук. 2020, 7, 647. [CrossRef] [PubMed]

5. Ma, W. Вирусът на свинския грип: Текущо състояние и предизвикателство. Virus Res. 2020, 288, 198118. [CrossRef]

6. Сузуки, Й.; Ито, Т.; Сузуки, Т.; Холандия, RE; Chambers, ТМ; Кисо, М.; Ишида, Х.; Kawaoka, Y. Видове сиалова киселина като детерминанта на обхвата на гостоприемника на вируси на грип A. J. Virol. 2000, 74, 11825–11831. [CrossRef]

7. Сън, Х.; Xiao, Y.; Liu, J.; Уанг, Д.; Li, F.; Wang, C.; Li, C.; Zhu, J.; Песен, J.; Sun, H.; et al. Разпространен вирус на свински грип H1N1, подобен на евразийския птичи, с пандемични вирусни гени от 2009 г., улесняващи човешката инфекция. Proc. Natl. акад. Sci. САЩ 2020 г., 117, 17204–17210. [CrossRef]

8. Хенрици, Д.; Петрич, П.П.; Луис, NS; Грааф, А.; Песия, А.; Старик, Е.; Breithaupt, A.; Strebelow, G.; Luttermann, C.; Паркър, LMK; et al. Наблюдението на европейските популации от домашни свине идентифицира възникващ резервоар от потенциално зоонозни вируси на свинския грип A. Клетъчен гостоприемник микроб 2020, 28, 614–627.e6. [CrossRef]

9. Винсент, Алабама; Ма, В.; Лагер, КМ; Янке, BH; Richt, JA Вируси на свинския грип: гледна точка на Северна Америка. адв. Virus Res. 2008, 72, 127–154.

10. Раджао, Д.С.; Андерсън, TK; Китикун, П.; Stratton, J.; Луис, NS; Vincent, AL Антигенна и генетична еволюция на съвременни вируси на свинския H1 грип в Съединените щати. Вирусология 2018, 518, 45–54. [CrossRef]

11. Мена, И.; I Нелсън, М.; Quezada-Monroy, F.; Dutta, J.; Кортес-Фернандес, Р.; Лара-Пуенте, JH; Кастро-Пералта, Ф.; Cunha, LF; Trovão, NS; Lozano-Dubernard, B.; et al. Произходът на пандемията от грип H1N1 през 2009 г. при свинете в Мексико. Elife 2016, 5, e16777. [CrossRef]

12. Нелсън, Мичиган; Culhane, MR; Trovão, NS; Patnayak, DP; Halpin, RA; Лин, X.; Шилтс, MH; Das, SR; Detmer, SE Появата и еволюцията на вирусите на грип A (H1) при свинете в Канада и Съединените щати. J. Gen. Virol. 2017, 98, 2663–2675. [CrossRef] [PubMed]

13. Чаухан, RP; Гордън, ML Систематичен преглед, анализиращ разпространението и циркулацията на грипните вируси в популацията на свинете по света. Патогени 2020, 9, 355. [CrossRef]

14. Ландрет, С.; Детмер, С.; Гердтс, В.; Zhou, Y. Двувалентна жива атенюирана ваксина срещу грипен вирус предпазва от вирусна инфекция H1N2 и H3N2 при свинете. ветеринарен лекар Microbiol. 2020, 253, 108968. [CrossRef] [PubMed]

15. Маккормик, К.; Jiang, Z.; Жу, Л.; Лоусън, SR; Langenhorst, R.; Ransburgh, R.; Brunick, C.; Трейси, MC; Hurtig, HR; Mabee, LM; et al. Конструиране и оценка на имуногенността на рекомбинантни вируси на грип A, съдържащи химерни хемаглутининови гени, получени от генетично различни вируси на подтип на грип A H1N1. PLoS ONE 2015, 10, e0127649. [CrossRef] [PubMed]

For more information:1950477648nn@gmail.com