Актеозидът, компонент на Stachys Sieboldii MIQ, може да бъде обещаващ антинефритен агент: Ефект на актеозид върху анти-GBM нефрит от полумесечен тип при плъхове

За повече информация:ali.ma@wecistanche.com

Казуми Хаяши, Тадаши Нагамацу, Микио Ито, Томохиса Хатори и Йошио Сузуки

Катедра по фармакология, Факултет по фармация, Университет Мейджо, 150 Яготояма, Тенпаку-Ку, Нагоя 468, Япония

РЕЗЮМЕ

Ефекти отактеозид(ACT) върху анти-GBM от тип полумесецнефритпри плъхове са изследвани. Когато плъховете са третирани сАктеозидот 1-ия ден след iv инжектиране на анти-GBM серум,Актеозидинхибира повишаването на екскрецията на протеин в урината. ВАктеозид-третирани плъхове, съдържанието на холестерол и креатинин и производството на антитела срещу заешки r-глобулин в плазмата са по-ниски от тези на контролните плъхове с нефрит. Хистологичното наблюдение показва, че този агент потиска хиперцелуларността и честотата на образуване на полумесец, адхезията на капилярната стена към капсулата на Bowman и фибриноидната некроза в гломерулите. Освен това, отлаганията на плъши IgG и C3 върху GBM са значително по-малко вАктеозидлекуваната група, отколкото в контролната нефритна група. Когато лечението е започнало от 20-ия ден след интравенозно инжектиране на анти-GBM серум, с което е установено заболяването,Актеозиддоведе до подобен ефект върхунефритенплъхове, както е посочено по-горе. Тези резултати предполагат, че Acteoside може да бъде полезно лекарство срещу бързо прогресиращ гломерулонефрит, който се характеризира с тежки гломерулни лезии с дифузни полумесеци.

Ключови думи: анти-GBM от тип полумесецнефрит,Актеозид, плъх-IgG, плъх-C3

Кликнете, за да използвате Cistanche с Acteoside

Chyorogi Stachys sieboldii MIQ (Labiatae) се предписва за много заболявания и тази грудка се използва като храна от китайци, руснаци и японци. Скорошни изследвания показват, че chyrogi има анти-аноксия действие (1), инхибиращо действие върху хиалуронидазната активност (2) и имуносупресивно действие (3).

От друга страна, споменато е, че имунният отговор участва в развитието на нефрит. Казано по-конкретно, гломерулното увреждане се медиира от отлагане на имунен комплекс в гломерулите, последвано от имунно-възпалителна реакция, включително активиране на комплемента и освобождаване на други възпалителни медиатори. В последните проучвания много внимание се обръща на приноса на клетъчно-медиирания имунен отговор в развитието на гломерулонефрит (4, 5). Освен това, Neild et al. (6) съобщават, че потискането на функцията на Т клетките от циклоспорин А (CyA) блокира последващото развитие на гломерулни лезии при остър нефрит. Докладвахме, че мизорибин (7), азатиоприн (7), CyA (8), метилпреднизолон (9) и някои растителни компоненти (10) имат имуносупресивно действие, което показва благоприятен ефект върху анти-GBM нефрит. Въпреки че тези имуносупресивни агенти упражняват антинефритно действие, е трудно да се използват в клинични изпитвания поради техните странични ефекти (11). Следователно се очаква да бъде разработен нов имуносупресивен агент за лечение на нефрит в клиничния стадий.

Целта на настоящото изследване беше да се изясниантинефритен ефект на актеозид, компонент на chyorogi, върху анти-GBM нефрит от полумесечен тип при плъхове.

МАТЕРИАЛИ И МЕТОДИ

Животни

Мъжки плъхове от щам Sprague-Dawley, тежащи прибл. 160 g (Nihon SLC, Hamamatsu) бяха използвани за всички експерименти. Тези животни бяха настанени в климатизирана стая при 23 ± 1 C по време на експерименталния период.

лекарства

Химическата структура на актеозид (ACT) (Tsumura Co., Ltd., Токио) е показана на Фиг. 1. Този компонент е извлечен от надземната част на chyorogi (Stachys sieboldii MIQ). Чистотата на ACT се проверява чрез HPLC (Колона: TSK гел ODS-80TM (4.0 id x 250 mm); Подвижна фаза: 20 процента CH3CN/H2O, съдържаща 10 AcOH; Скорост на потока: 0,7 ml/min; Температура: стайна температура; Откриване: UV 254 nm) в Tsumura Co., Ltd. ACT, използван в тези експерименти, има чистота над 9970. ACT се разтваря в дестилирана вода. Използвани са също дипиридамол (Dip) (Boehringer Ingelheim, Германия) и азатиоприн (Aza) (Sigma, St. Louis, MO, USA); Тези лекарства са суспендирани в 1070 гуми арабика.

Индукция на анти-GBM нефрит от полумесечен тип

Анти-GBM нефрит от полумесечен тип се индуцира чрез имунизиране на плъхове, които са получили нефритогенна доза заешки анти-плъши GBM (анти-GBM) серум със заешки r-глобулин (rG) съгласно лека модификация на докладвания по-рано метод ( 12). В този експеримент плъховете тежаха прибл. 160 g бяха приложени 0,6 ml/животно анти-GBM серум във вената на опашката.

Ефектът на тестовите лекарства беше оценен чрез прилагането им от 1-ия ден след инжектирането на анти-GBM серум (хетероложна фаза) или 20-ия ден след инжектирането на анти-GBM серум (автоложни фази). В експериментите бяха събрани 24-часови проби от урина и след това плъховете бяха разделени на 5 или 6 групи от по 8 плъха, така че средното съдържание на протеин в 24-часовата урина във всяка група да беше на подобно ниво.

Оценка на антинефритния ефект на изпитваните лекарства

В експеримента с лекарствено лечение от хетероложната фаза четири групи получават перорално 3, 10 или 30 mg/kg/ден ACT или 100 mg/kg/ден Dip, съответно, в обем от 1 ml на 100 g телесно тегло, ежедневно от 1-вия ден или деня след iv инжектиране на анти-GBM серум до 40-ия ден. В експериментите на лекарствено лечение от автоложната фаза, три или четири групи са получавали перорално 3, 10 или 30 mg/kg ден ACT (A) или 30 mg/kg/ден ACT, 100 mg/kg/ден ACT Потопете или 50 mg/kg/ден Aza (B), съответно, в обем от 1 ml на 100 g телесно тегло, дневно от 20-ия ден след iv инжектиране на анти-GBM серум до 40-ия (A) или 45-ия ден (B) ден. Останалата група получава перорално носителя (дестилирана вода) вместо тестови лекарства и служи като нефритна контрола. В допълнение, нелекувана (нормална) група е използвана за сравнение с нефритните групи.

Събиране на урина и кръв

{{0}}-часовите проби от урина бяха получени чрез задържане на всяко животно в индивидуална метаболитна клетка за 24 часа. В началото на събирането на урина всяко животно получава 8 ml дестилирана вода перорално без хранене. След това урината се центрофугира при 3,000 rpm за 15 минути при 41°C и супернатантата се използва за определяне на протеин. В последния ден от експеримента 20 ml кръв бяха изтеглени от бъбречната вена на всеки анестезиран плъх със спринцовка за еднократна употреба и поставени в епруветка, съдържаща 0,125 ml хепарин. Кръвта се центрофугира при 5,000 rpm, за да се получи плазма за определяне на някои параметри.

Определяне на съдържанието на протеин в урината и холестерол и креатинин в плазмата

Екскрецията на протеин в урината се определя по метода на Kingsbury et al. (13) и изразено като mg/24 часа урина. Съдържанието на холестерол се определя с търговски комплект за анализ (Determine TC-5; Kyouwa Medix Co., Ltd, Tokyo) (14) и се изразява като mg/dl плазма. Съдържанието на креатинин се определя чрез използване на комплект за определяне на креатинин (CRE-EN; Kainos, Inc., Токио) и се изразява като mg/dl плазма/100 g телесно тегло.

Измерване на плазмен титър на антитела срещу -G

Титърът на плазмените антитела срещу rG се определя чрез индиректна хемаглутинация, използвайки сенсибилизирани овчи червени кръвни клетки (15).

Измерване на нивото на плазмения комплемент CH50

Нивото на плазмения комплемент CH50 се определя по метода на Mayer (16).

Оценка на хистопатологичните параметри

За изследването под светлинен микроскоп бъбреците се изолират от плъхове, анестезирани с пентобарбитал, след това се дехидратират и фиксират, като тъканите се потапят постепенно в различни традиции на етилов алкохол от ниско до високо. След това тъканите се поставят в парафин и се нарязват на срезове с дебелина 2 до 3 em. При изследванията на анти-GBM нефрит от полумесечен тип, срезовете се оцветяват с хематоксилин и еозин и трихром на Masson. Броят на ядрата (хиперцелуларност), образуването на полумесец, адхезията на капсулата на Bowman към капилярната стена (адхезия) и фибриноидната некроза в гломерулите се наблюдават под светлинен микроскоп. За оценка на тези параметри е избрано екваториално напречно сечение чрез методи на произволно вземане на проби. Бяха наблюдавани петдесет гломерули/напречни сечения и степента на поява на образуване на полумесец, адхезия и фибриноидна некроза беше изразена като проценти на гломерулите (честота), които имат тези морфологични промени, както е описано по-горе (17). Оценката беше извършена от различно лице, което не знаеше самоличността на всяка проба. За оценка на хиперцелуларността е избрано екваториално напречно сечение чрез метод на произволно вземане на проби. Броят на ядрата (включително ядра на гломерулни клетки и ексудативни левкоцити) се преброява и изразява като среден брой на гломерулно напречно сечение в 10 гломерули/срез.

Имунохистохимия

В тъканите за имуноензимно оцветяване на плъши IgG, парафиновите срезове бяха нарязани, както е описано по-горе, и срезовете бяха третирани с 0.1% протеаза в 0.05 М Tris- HCl буфер за 7 минути и след това се промива в охладен 0.01 М фосфатно буфериран физиологичен разтвор (PBS), рН 7,4. След това срезовете се инкубират с анти-плъши IgG миши моноклонални антитела (mAb) (Cappel, West Clester, PA, USA) при разреждане 1:100 за 90 минути. Срезовете се промиват отново с PBS, третират се с 0,3 процента водороден пероксид в метанол за 20 минути, за да се блокира ендогенна пероксидаза, и се инкубират с биотинилиран афинитетно пречистен анти-миши IgG и авидинирана пероксидаза от хрян с 3,3'-диаминобензидин тетрахидрохлорид (DAB) (Vecta оцветяване ABC Kit; Vector institution, Бърлингейм, Калифорния, САЩ). Всички етапи се провеждат при стайна температура.

Тъканите за имуноензимно оцветяване на пролифериращ клетъчен ядрен антиген (PCNA), който е маркер за клетъчна пролиферация, се фиксират в 10 процента формалин в PBS и вградените в парафин тъкани се оцветяват по същата процедура като тази за плъши IgG, с изключение на използването на mAb (19A2; Coulter Immunology, Hialeah, FL, USA) към PCNA.

Количествено определяне на плъши IgG, C3 и PCNA върху тъканни срезове

Общата площ на имунореактивен плъши IgG и C3 в гломерула се измерва в 30 гломерула на секция с помощта на анализатор на изображения (Toyobo Image analyser V1; Toyobo Co., Ltd., Токио) и се представя като mm2/гломерулно напречно сечение (GCS ). PCNA-позитивните клетки в гломерула се преброяват с анализатора на изображения и резултатите се изразяват като брой клетки/GCS

статистически анализи

Данните представляват средната стойност ± SD и резултатите бяха статистически оценени чрез ANOVA. Когато тези резултати са параметрични, те са статистически оценени чрез теста на Дънкан. Когато резултатите са непараметрични, те се оценяват статистически чрез теста на Kruskal-Wallis. Инхибиторният процент се изчислява, както следва:

Инхибиторен процент (проценти)=(Контрола - Тествано лекарство) x 100 / (Контрола - Нормално)

РЕЗУЛТАТИ

Ефект на Acteoside при анти-GBM нефрит от тип полумесец

Екскреция на протеин в урината (Фигури 2 и 3): Когато лечението с ACT започна от деня след инжектирането на анти-GBM серум (хетероложна фаза), първото значително потискане на протеина в урината се наблюдава на 5-ия ден при 30 mg /kg, po; на 20-ия ден при 3 и 10 mg/kg, перорално; и на 40-ия ден с Dip при 100 mg/kg, ро

Когато ACT се прилага от 20-ия ден след инжектирането на антиGBM серум (автоложна фаза), ACT при 10 и 30 mg/ден инхибира повишаването на екскрецията на протеин в урината до 30-ия ден. От друга страна, Aza при 50 mg/kg е по-слаб от ACT при 30 mg/kg, макар и не значително, и Dip няма ефект.

Съдържание на холестерол и креатинин в плазмата (Таблица 1): Съдържанието на холестерол и креатинин в плазмата се определя на 40-ия или 45-ия ден. Съдържанието на плазмен холестерол в нефритните контролни плъхове е значително повишено. За разлика от това, повишаването на съдържанието на холестерол беше намалено с ACT (30 mg/kg) от хетероложната фаза с 60 процента от контролното ниво и с ACT (30 mg/kg) от автоложната фаза с 62'o от контролата ниво. Съдържанието на плазмен креатинин при плъхове с нефрит също е повишено. От друга страна, в ACT (30 mg/kg) от двата фазово третирани плъхове, съдържанието на плазмен креатинин е подобно на това на нормалните плъхове.

Плазмен титър на антитела срещу rG: Нефритни плъхове показват значително ускорено производство на антитела. Ускореното производство на антитела беше потиснато до 72 процента от контролното ниво чрез третиране с ACT (10 и 30 mg/kg) от хетероложната фаза (Таблица 2), ACT (30 mg/kg) от автоложната фаза и Aza до 70 и 51 процента от контролното ниво, съответно (данните не са показани) и не е повлияно от Dip.

Хистологично наблюдение (Таблица 3, Фигури 4 и 5): Светлинно микроскопско изследване на нефритните гломерули разкри лезии, характеризиращи се със силно образуване на полумесец, адхезия, фибриноидна некроза и пролиферация на мезангиални клетки. Хистологичното наблюдение показва, че ACT (както от хетероложната, така и от автоложната фаза) инхибира хиперцелуларността и честотата на образуване на полумесец, адхезия и фибриноидна некроза в гломерулите до 40-ия или 45-ия ден. Лезиите на третирани с Dip и Aza нефритни плъхове също са по-малко от тези на нефритните контролни плъхове. Въпреки това, когато нефритни плъхове са третирани с Dip от автоложната фаза, хистологичните промени са слабо повлияни от Dip (данните не са показани).

Гломерулна клетъчна пролиферация, а именно увеличаването на PCNA-позитивните клетки в гломерулите, се наблюдава принефритни плъхове. За разлика от това, на 30-ия ден, 52 процента намалениеНаблюдавана е промяна в клетъчната пролиферация и това е свързано wсъс значително намаляване на гломерулните клеткилуларност в сравнение с контролата (Таблица 3).

Отлагане на имунен реагент (Таблица 2 и Фиг. 6): Възможно е да се наблюдават отлагания на плъши IgG и C3 върху GBM при нефритни контролни плъхове; те обаче не са открити при нормални плъхове. ACT (30 mg/kg) от хетероложната фаза намалява отлагането на плъши IgG върху GBM със 72 процента от контролното ниво. Освен това, ACT (3, 10 и 30 mg/kg) от хетероложната фаза намалява отлагането на C3 на плъх върху GBM с 60 до 69 процента до 40-ия ден. Дори когато ACT се дава от автоложната фаза, инхибирането на плъши IgG и отлагането на C3 е подобно на горните резултати. Потапянето не повлиява отлагането на плъши IgG и C3. Aza обаче намалява отлагането на плъши IgG и C3 върху GBM съответно с 67 и 68 процента (данните не са показани).

Ефект на ACT върху активността на комплемента и отлаганията на C3 върху GBM при оригинален тип анти-GBM нефрит (фиг. 7)

Оригинален тип анти-GBM нефрит е индуциран при плъхове чрез инжектиране на 0.6 ml анти-GBM серум в опашните им вени, както е описано по-рано (18). Нефритни плъхове бяха предварително и след това третирани с ACT при 30 mg/kg, перорално и фактор на отровата на кобра (CVF) (Sigma) при 10 fig/плъх, ip, три пъти, на всеки 8 часа. Лечението с ACT и CVF намалява отделянето на протеин в урината с инхибиторен процент от прибл. 35 градуса и 71 процента, съответно. CH50 при нефритни контролни плъхове е значително по-нисък от този при нормалните плъхове до 24 часа след предизвикване на нефрит. ACT инхибира намаленото CH50 и повишеното отлагане на C3 върху GBM при нефритни контролни плъхове. CVF премахна отлагането на CH50 и C3. Освен това, в експеримента in vitro, ACT инхибира активирането на комплемента с 37 процента. Когато ACT се прилага на нормални плъхове, ACT намалява активирането на комплемента в експеримента ex vivo (данните не са показани).

ДИСКУСИЯ

Бързо прогресиращият гломерулонефрит и бъбречните заболявания при синдрома на Goodpasture са злокачествени заболявания, които преминават в бъбречна недостатъчност 2 или 3 месеца след развитието на заболяването (19). Характеристиките на този нефрит включват хиперцелуларност, изразена инфилтрация на неутрофили и моноцити и образуване на полумесец в гломерулите. Коктейлна терапия с имуносупресивни средства, антиагреганти и стероиди се прилага главно при това заболяване. От друга страна, въпреки че CyA е превъзходен имуносупресор, който оказва благоприятен ефект върху експериментален нефрит (6, 8), се съобщава, че CyA причинява бъбречна дисфункция и причинява необратима хистологична промяна в гломерулите (11). Метилпреднизолон има много странични ефекти. Освен това феноменът на отскок и синдромът на отнемане след продължително лечение с това лекарство са два от проблемите. Следователно трябва да се разработи нов имуносупресивен агент за лечение на нефрит, който има по-малко странични ефекти.

Анти-GBM нефрит от полумесечен тип е експериментален модел, който показва хистологични и патологични промени, подобни на тези при бързо прогресиращ гломерулонефрит и бъбречно заболяване на синдрома на Goodpasture (20). Развитието и прогресията на този нефрит се състои от 2 фази, които се медиират от имунни отговори. Ранната реакция, така наречената хетероложна фаза, се дължи на отлагането на анти-GBM антитяло, последвано от зависимо от комплемента натрупване на полиморфонуклеарни гранулоцити (21, 22). Късната фаза (автоложна фаза) се развива чрез свързване на автоложни антитела, отложени по протежение на GBM и приток на моноцити/макрофаги към гломерулите след тази реакция (22, 23). Този нефрит се характеризира с двуфазен протеин в урината и хиперцелуларност, която включва образуване на полумесец и фибриноидна некроза. Смята се, че образуването на полумесец се медиира от мигриращи макрофаги и пролиферирани епителни клетки (22, 24).

По-рано докладвахме, че мизорибин и Aza, имуносупресивен агент (7), инхибират повишаването на плазмените антитела срещу заешки IgG и Pachyman, основният компонент на Poria cocos (18), намаляват степента на отлагане на C3 върху GBM, и двете са били подчертано ефективен срещу анти-GBM нефрит.

Лечението с ACT потиска развитието на анти-GBM гломерулонефрит, както се оценява чрез намаляване на протеинурията и плазмения холестерол, предотвратяване на увреждане на бъбречната функция и предотвратяване на прогресивни хистологични промени, включително развитие на гломерулни полумесеци и хиперцелуларност. На 40-ия ден, ACT при 30 mg/kg самостоятелно значително намалява количеството отлагане на плъши IgG върху GBM, медиирано от потискане на производството на антитела в този нефритен модел. От друга страна, количеството C3 отлагания върху GBM беше намалено чрез ACT при 3, 10 или 30 mg/kg. Освен това, ACT значително инхибира активирането на комплемента както в in vitro, така и в ex vivo експерименти. Намаляването на CH50 при нефритни контролни плъхове се инхибира от ACT. Горните данни предполагат, че ACT инхибира бъбречното увреждане чрез потискане на активирането на комплемента, тъй като комплементният мембранен атакуващ комплекс (MAC) участва в патогенезата на гломерулното увреждане (25), а сублитичният MAC има потенциални възпалителни медиатори, които могат да бъдат свързани с гломерулно увреждане, мезангиална клетъчна пролиферация и екстрацелуларна матрична дифузия, като реактивни кислородни видове (26), протеаза (27), простагландини (28) и интерлевкин-1 подобни цитокини (29), както и колаген (30).

Смята се, че активирането на комплемента е тясно свързано с левкоцитната инфилтрация. В скорошни проучвания се съобщава, че C5a провокира моноцитна и неутрофилна адхезия съответно към мезангиални клетки и ендотелни клетки (31, 32). Следователно, в по-нататъшно проучване, ние ще изследваме ефекта на ACT върху натрупването на левкоцити в гломерулите.

ПРЕПРАТКИ

1 Yamahara J, Kitani T, Kobayashi H и Kawahara Y: Проучвания върху Stachys sieboldii MIQ. II Антианоксия действие и активните съставки. Yakugaku Zasshi 110, 932-935 (1990) (Абстрин английски)

2 Takeda Y, Fujita T, Satoh T и Kakegawa H: Относно гликозидните съставки на Stachys sieboldii MIQ. и техните ефекти върху хиалуронидазната активност. Yakugaku Zasshi 105, 955-959 (1985) (Резюме на английски)

3 Sasaki H, Nishimura H и Morita T: Имуносупресивни принципи на Rehmannia gluttons var. hueichingensis. Planta Med 55, 458-462 (1989)

4 Saito T и Atkins RC: Принос на мононуклеарните левкоцити за прогресията на експериментална фокална гломерулна склероза. Kidney Int 37, 1076-1083 (1990)

5 Tipping PG, Neale TJ и Holdsworth SR: Участие на Т лимфоцити в индуциран от антитела експериментален гломерулонефрит. Kidney Int 27, 530-537 (1985)

6 Neild GH, Ivory K и Williams DG: Циклоспорин А инхибира сактусната серумна болест при зайци. Clin Exp Immunol 52, 586-594 (1983)

7 Okamoto K, Ito M и Suzuki Y: Проучвания върху антинефритния ефект върху мизорибин (p-INN, Bredinin®), нов имуносупресивен агент, и азатиоприн (2): Ефект върху анти-GBM нефрит от полумесечен тип при плъхове. Jpn J Pharmacol 34, 33-41 (1984)

8 Nagamatsu T, Kojima N, Kondo N, Hattori T, Kojima R, Ito M и Suzuki Y: Потискане от циклоспорин А на анти-GBM нефрит при плъхове. Jpn J Pharmacol 58, 27-36 (1992)

9 Taniguchi H, Nagamatsu T, Kojima R, Ito M и Suzuki Y: Изразено антинефритно действие и по-малко неблагоприятни ефекти на метилпреднизолон султанат чрез периодично приложение при плъхове. Jpn J Pharmacol 64, 79-88 (1994)

10 Hattori T, Furuta K, Hayashi K, Nagamatsu T, Ito N и Suzuki Y: Проучвания върху антинефритните ефекти на растителни компоненти (6): Антинефритни ефекти и механизми на фелоген дрин (OB-5) върху полумесец- тип анти-GBM нефрит при плъхове (2). Jpn J Pharmacol 60, 187-195 (1992)

11 Мейсън Дж: Ефектите на Sandimmune върху бъбреците. Clin Res Bull 6, 47-51 (1989)

12 Ito M, Yamada H, Okamoto Y и Suzuki Y: Нефрит от полумесечен тип, индуциран от анти-гломерулна базална мембрана (GBM) серум при плъхове. Jpn J Pharmacol 33, 1145-1154 (1983)

13 Kingsbury FB, Clark CP, Williams G и Post AL: Бързото определяне на албумин в урината. J Lab Clin Med 11, 981-989 (1926)

14 Zurkowski P: Бърз метод за определяне на холестерол с един реактив. Clin Chem 10, 451-453 (1964)

15 Mcleish KR, Clark CP, Williams G и Post AL: Потискане на синтеза на антитела от простагландин Е като механизъм за предотвратяване на гломерулонефрит с имунен комплекс на мишки. Lab Invest 47, 147-152 (1982)

16 Mayer MM: Комплемент и фиксиране на комплемента. В Експериментална имунохимия, стр. 133-240, Чарлз С. Томас, Спрингфийлд (1961 г.)

17 Hattori T, Ito M, Nagamatsu T и Suzuki Y: Проучвания върху антинефритния ефект на TJ-8014, ново японско билково лекарство (3): Ефекти върху анти-GBM нефрит от полумесечен тип при плъхове. Jpn J Pharmacol 52, 131-140 (1990)

18 Hattori T, Hayashi K, Nagao T, Furuta K, Ito M и Suzuki Y: Проучвания върху антинефритните ефекти на растителните компоненти (3): Ефект на pachyman, основният компонент на Poria cocos Wolf върху произхода на нален тип анти-GBM нефрит при плъхове и неговите механизми. JpnJ Pharmacol 59, 89-96 (1992)

19 Shibata S, Miyakawa Y, Naruse T, Nagasawa T и Takuma T: Гликопротеин, който индуцира нефротоксично антитяло: Неговото изолиране и пречистване от гломерулна базална мембрана на плъх. J Immunol 102, 593 601 (1969)

20 Falk RJ: ANCA-свързано бъбречно заболяване. Kidney Int 38, 998-1010 (1990) 21 Mulligan MS, Johnson KJ, Todd RF III, Issekutz TB, Miyasaka M, Tamatani T, Smith CW, Anderson DC и Ward PA: Изисквания за левкоцитни адхезионни молекули при нефротоксичен нефрит. J Clin Invest 91, 577-587 (1993)

22 Nahas AME: Растежни фактори и гломерулна склероза. Kidney Int 41, Supp 36, S15-S20 (1992)

23 Boyce NW, Holdsworth SR, Dijkstra CD и Atkins RC: Количествено определяне на интрагломерулни мононуклеарни фагоцити при експериментален гломерулонефрит при плъхове с помощта на специфични моноклонални антитела. Патология 19, 290-293 (1987)

24 Becker GJ, Hancock WW, Stow JL, Glasgow EF, Atkins RC и Thomson NM: Участие на макрофаги в експериментален хроничен имунокомплексен гломерулонефрит. Nephron 32, 227-233 (1982) 25 Perkinson DT, Baker PT, Couser WG, Johnson BJ и Adler S: Отлагане на мембранен атакуващ комплекс при експериментално гломерулно увреждане. Am J Pathol 120, 121-128 (1985)

26 Alder S, Baker PJ, Johnson RJ, Ochi RF, Pritzl P и Couser WG: Комплексът за атака на мембраната на комплемента стимулира производството на реактивни кислородни метаболити от култивирани мезангиални клетки на плъхове. J Clin Invest 77, 762-767 (1986)

27 Johnson RJ, Couser WG и Alpers CE: Човешката неутрофилистинова протеаза, естераза и катепсин G могат да медиират гломерулно увреждане in vivo. J Exp Med 168, 1169-1174 (1988)

28 Cybusky AV, Lieberthal W, Quigg RJ, Rennke HG и Salant DJ: Роля на тромбоксана при комплемент-медиирано гломерулно увреждане. Am J Pathol 128, 45-51 (1987)

29 Lovett D, Hansch G, Resch K и Gemsa D: Активиране на гломерулни мезангиални клетки от терминални компоненти на комплемента. Стимулиране на освобождаването на простаноиди и интерлевкин-1-подобен фактор. Имунобиология 168, 34-35 (1986)

30 Torbohm I, Schonermark M, Wingen AM, Berger B, Rother K и Hansch GM: C5b_8 и C5b_9 модулират освобождаването на колаген от човешки гломерулни епителни клетки. Kidney Int 37, 1098-1104 (1990)

31 Lo SK, Detmers PA, Levin SM и Wrigh SD: Преходна адхезия на неутрофили към ендотела. J Exp Med 169, 1779 -1793 (1989) 32 Brady HR, Denton MD, Jimenez W, Takata S, Palliser D и Brenner BM: Хемоатрактантите провокират моноцитна адхезия към човешки мезангиални клетки и увреждане на мезангиалните клетки. Kidney Int 42, 480-487 (1992)