Atriplex Canescens е нов хост за Cistanche Deserticola

Контакт: emily.li@wecistanche.com

Fangming Wang и др

Резюме

Cistanche deserticolaисторически е бил използван в традиционната китайска медицина за допълване на бъбречната (ян) функция, благоприятствайки кръвта и есенцията и овлажнявайки червата, за да премине изпражненията. Неговият гостоприемник, Haloxylon ammodendron, е важно пионерско растение, използвано за прегради срещу вятър и фиксиране на пясъчни дюни, които са стратегии, използвани за контрол на опустиняването. Дълго време се смяташе, че C. deserticola може да паразитира само с H. ammodendron. В това проучване бяха проведени морфологична идентификация, идентификация на генен баркод и експерименти с инокулация, накрая открихме, че C. deserticola може също да паразитира Atriplex canescens. A. canescens е вид Chenopodiaceae с широк диапазон на адаптивност. В сравнение с H. ammodendron, той има повече биомаса и по-широк диапазон на екологична адаптивност, което го прави по-подходящ за промишлено производство на C. deserticola. В допълнение, ние също открихме, че концентрацията на активните компоненти е по-висока в C. deserticola, паразитирани върху A. canescens, отколкото в тези, паразитирани върху H. ammodendron; това откритие допълнително предполага, че прилагането на C. deserticola в по-голям мащаб изисква по-нататъшно проучване.

Ключови думи:Cistanche deserticola, Паразитизъм, Идентификация на базата на ДНК баркод, Традиционна китайска медицина, Cistanche salsa

Щракнете тук, за да научите повече за цистанче

1. Въведение

Използването на Cistanche в традиционната китайска медицина е записано за първи път в Shennong Herbal Scripture, за неговите ефекти натонизиранебъбрекян, подсилваненасъщностнакръв, иовлажняваненачерватаза улесняване на изпражненията. Също така е записано в произведенията на древната билкова медицина като "пустиненженшен'. Сухите месести стъбла и люспести листа на Cistanche deserticola YC Ma и Cistanche tubulosa (Schenk) Wight са първите съединения, описани през 2005 г. в Китайската фармакопея. Cistanche се отглежда главно в Xingjiang, Вътрешна Монголия и Гансу в Китай, а в световен мащаб се среща в полусухи и сухи райони в целия Европейски Иберийски полуостров, Северна Африка, Арабия, Иран, Афганистан, Пакистан, Северна Индия, Монголия и др. ал. [1]. Той е устойчив на сурови условия на околната среда, като изключително сух климат, тежки температурни колебания и изтощени почви [2]. Според Таксономичния индекс на китайските висши растения в Китай има шест вида Cistanche. Въпреки това, по-нататъшно проучване потвърди съществуването само на четири вида и един вариант на Cistanche, а именно C. deserticola YC Ma, C. tubulosa (Schenk) R. Wight, C. salsa (CA Mey.) G. Beck, C. sinensis G. Beck и C. salsa var. albiflflora PF Tu et al., [3].

C. deserticola се счита за единствения традиционен източник на Cistanche и има дълга история на употреба в медицината, от Източната династия Хан (25 г. сл. н. е. – 220 г. сл. н. е.) [4]. В Compendium of Materia Medica (написан от Li Shizhen, династия Ming), е документирано, че плавно тонизира ян (за разлика от други билки, които имат по-силно действие). Множество ефикасни химически съставки, включително фенилетаноидни гликозиди, иридоиди, лигнани, алдитоли, олигозахариди, полизахариди и алкалоиди, са изолирани от C. deserticola чрез съвременни фитохимични методи [5]. Фармакологичните изследвания показват, че фенетилгликозидът е основният активен компонент и се съобщава за товаподобрявамсексуаленфункция, упражнявамневрозащитенефекти, подобрявамизучаване наипамет, изащитавамначерен дроб. Той също така упражнява терапевтични ефекти срещу деменция,Алцхаймерзаболяване, Паркинсон заболяване, умора, итуморизаедно с експонатианти-възпалителениимуномодулиращосвойства [6, 7].

C. deserticola е задължително паразитно растение, което живее изключително върху корените на Haloxylon ammodendron [8]. Проучване съобщава, че C. deserticola дори не се среща в Haloxylon persicum [9]. През последните години все по-голямо внимание се обръща на C. deserticola, тъй като той не само е източник на компоненти с медицинска стойност, но също така допринася значително за контрола на опустиняването [10]. H. ammodendron е единственият гостоприемник, който е бил използван в проучвания, включващи C. deserticola. През април 2017 г. Wang Shuai, служител на фонда за обществено благосъстояние Zhejiang Quheng, инокулира семена от C. deserticola върху Atriplex canescens в пустинната ботаническа градина на Minqin, провинция Gansu, и беше установено, че C. deserticola цъфти през май 2018 г. и продължава да цъфтят до май 2019 г. Семената обаче са закупени от пазара и е съмнително дали наистина са семена от C. deserticola. Освен това този феномен нарушава традиционните знания и трябва да бъде проучен допълнително

A. canescens е C4 многогодишен храст, роден в пустините на Югозападна Америка и бързо се адаптира към условия на соленост, тежки метали, суша и високи температури [11]. Тъй като е много вкусен и богат на хранителни вещества, той се използва като фураж за повечето добитък и големи животни [12]. Освен това, той е особено полезен за контрол на ерозията и рекултивация на маргинални земи поради отличната си адаптивност и обширна коренова система. За първи път е въведен в Китай от Съединените американски щати през 1989 г. и е широко използван за опазване на почвата и водата, фиксиране на пясък и възстановяване на солени земи [13]. Въпреки че изследването, съобщаващо за растежа на C. deserticola върху A. canescens, преобръща изключителното паразитно разбиране за C. deserticola, това може да се окаже революционно откритие, тъй като A. canescens е по-подходящ за растежа на C. deserticola, тъй като има повече биомаса и по-широк диапазон на екологична адаптивност в сравнение с H. ammodendron.

За да се гарантира точността на случайното откритие, бяха проведени експерименти за идентификация на растенията и изкуствено инокулиране. Традиционната идентификация на растенията включва органолептична оценка (като докосване, мирис, зрение и вкус), анализ на морфологични характеристики (като микроскопични и макроскопични) и химическо профилиране (като високоефективна течна хроматография, тънкослойна хроматография и газова хроматография) [14]. Сравнително лесно е да се изключат C. tubulosa и C. Sinensis поради разликата в размера, цвета и разположението на съдовите снопове в стъблото. Истинското предизвикателство е да се направи разлика между C. deserticola и C. salsa. Според Flora of China дължината на прицветника на C. salsa е около 1/3 от венчето, докато при C. deserticola тя е равна. Разрезът на месестите стъбла е подобен при C. deserticola и C. salsa и се състои от епидермис, кора, съдови снопчета и сърцевина. Основната разлика е в обвивката на съдовия сноп, тъй като тя е опашата за C. deserticola и триъгълна или полукръгла за C. salsa.

През последните години технологията за ДНК баркодиране често се използва за идентифициране на видове. Това е процес, който използва къса ДНК последователност от стандартния геном, която като цяло е запазена и не се влияе от външни фактори, като възраст и тип растителна тъкан. Популярните кандидат последователности за растителни ДНК баркодове са rbcL, matK, psbA-trnH, ITS и ITS2 [15]. Няколко проучвания показват, че ITS/ITS2 е най-ефективният инструмент за идентификация на растения. Също така беше предложено регионът ITS2 да бъде включен в основните баркодове поради неговата по-висока дискриминационна сила от тази на пластидните баркодове. Прието е, че ITS2 може да се използва като нов универсален баркод за идентифициране на широк спектър от растителни таксони [16, 17, 18, 19, 20, 21]. Въпреки че много проучвания са се опитвали да идентифицират универсален растителен баркод, нито един от наличните локуси не работи за всички видове, така че е необходим многолокусен метод за разграничаване на растителните видове [22, 23, 24, 25, 26, 27, 28] . В това проучване ITS2, rbcL, psbA-trnL са използвани като баркодове.

В допълнение към техниките за морфологична и молекулярна идентификация, преки доказателства идват от експерименти с инокулация. Трябва да се проведат експерименти с инокулация, за да се докаже, че C. deserticola може да паразитира A. canescens. В допълнение към идентификацията, контролът на качеството става основен фактор. Необходими са по-нататъшни изследвания, за да се установи разликата между качеството на C. deserticola, паразитирала върху корена на H. ammodendron, и тази, паразитирала върху A. canescens.

2. Материали и методи

2.1. Растителни материали

Cistanche расте на меки песъчливи почви с леко засоляване, като обикновено паразитира върху 30–100 cm дълбоки странични корени на гостоприемника. Климатът в подходящата зона за отглеждане е сух, по-малко дъждовен, има голямо изпарение, дълги слънчеви часове и голяма температурна разлика между деня и нощта. Окръг Minqin и град Baiying са местата за събиране на тези проби. Те са географски близки и имат умерен континентален сух климат със средни годишни валежи от 113,2 mm и средна годишна относителна влажност от 44 процента. Конкретна и подробна информация за събиране на проби е показана в таблица 1. Всички проби бяха замразени и запазени при -20 C в Държавната ключова лаборатория за природни и биомиметични лекарства Lab, Пекин, Китай.

2.2. Оцветяване и наблюдение на тъканите

Пресни проби бяха получени и съхранени в разтвор, състоящ се от 70 процента етанол, ледена оцетна киселина и формалдехид в съотношение 90:5:5 и бяха дехидратирани с помощта на градиент на етанол (75 процента, 95 процента, 100 процента, 100 процента) за 1 час. Дехидратираните срезове се подлагат на градиент на ксилен (25 процента, 50 процента, 75 процента, 100 процента, 100 процента) за 1 час, за да се получат прозрачни срезове. Прозрачните срезове се подлагат на инфилтрация с парафин, при което обем парафин, равен на обема ксилен, се добавя към ксилена, съдържащ пробата, половината от получения разтвор след това се изсмуква и отново се добавя равен обем парафин. Този процес се повтаря 10 пъти и накрая всички разтвори се изсмукват и се заменят с равен обем парафин; този последен етап се повтаря два пъти и полученият разтвор след всеки етап се инкубира в продължение на 1 час при 75°С. След инфилтрация с парафин, срезовете се подлагат на вграждане, при което пробите се поставят в железен резервоар, съдържащ течен парафин и допълнителен течен парафин се поставя бързо се добавя, за да изпълни целия резервоар и се оставя да се втвърди. Полученият восъчен блок беше подрязан и разделен. Вградените срезове се поставят в топла вода, завършват се, поставят се върху предметно стъкло и се инкубират при 45 °С за 30 минути. Секциите на предметното стъкло бяха депарафинизирани чрез серийно накисване в 100 процента ксилен, 100 процента ксилен, 50 процента ксилен, 50 процента ксилен, 100 процента етанол, 100 процента етанол, 95 процента етанол и 75 процента етанол и след това накиснати в сафранин O за 40 мин. Това беше последвано от друг кръг от серийно, бързо накисване в 75 процента етанол и 95 процента етанол и след това предметните стъкла се потапят в бързо зелено за 1 минута. Накрая, срезовете бяха подложени на едно последно серийно накисване в 95 процента етанол, 95 процента етанол, 100 процента етанол, 100 процента етанол, 50 процента ксилен, 50 процента ксилен и 100 процента ксилен. След като срезовете бяха оцветени, капка лепило от смола беше поставена върху предметното стъкло и върху него беше поставено покривно стъкло. Слайдовете бяха оставени необезпокоявани за една седмица и тъканните срезове бяха наблюдавани с помощта на оптичен микроскоп Olympus и изобразени.

2.3. Екстракция на ДНК и PCR амплификация

Общата геномна ДНК беше извлечена от екземпляри от цветя, като се използва комплект за екстракция на растителна геномна ДНК (Solarbio Science & Technology Co., Ltd., Пекин, Китай) съгласно протоколите на производителя. Праймерите за генна амплификация и секвениране и реакционните условия са показани в таблица 2. Всяка генна амплификация се повтаря три пъти за всеки образец.

2.4. Анализ на последователността

За да се получат точни последователности, окончателните PCR продукти, след пречистване с помощта на комплекти за трансгенна бърза гел екстракция, бяха клонирани отделно в pEASY®-Blunt Cloning Vectors, съгласно инструкциите на производителя. След клонирането те бяха трансформирани в химически компетентни Trans5ɑ клетки. Три колонии от всяка проба бяха избрани на случаен принцип и секвенирани с помощта на M13 праймери. Тези колонии бяха секвенирани двупосочно чрез секвениране на Sanger, използвайки комплекти за секвениране на цикли BigDye Terminator V3.1 на ДНК анализаторите ABI Prism 3700. Получените последователности бяха подравнени с помощта на Clustal X (v1.8.7) [29] и синхронизирани ръчно в BioEdit (v7.1.3.0) [30]. Използвайки подравнените данни за последователностите, ние реконструирахме филогенезата с помощта на софтуера MEGA 7, използвайки метода за присъединяване на съседи (NJ), използван беше моделът на параметъра Kimura 2- (K2P) и първоначалното зареждане беше 1000 повторения [31].

2.5. Инокулация на C. deserticola

Три грама семена от C. deserticola се добавят към саксиите (диаметър височина дъно диаметър ¼ 20 cm- 20 cm-12 cm), съдържащи песъчлива почва и се разбъркват, за да се осигури равномерно разпространение. Контролната група се състои от 3 g семена от C. salsa, добавени в подобни саксии, съдържащи песъчлива почва. Накрая A. canescens беше засадена във всяка саксия и саксиите бяха поставени на открито. Когато съдържанието на влага в почвата е по-малко от 13 процента (g/g), саксиите се поливат. Експериментът е проведен в Zhongguancun Life Science Park, Пекин, Китай (ширина 39-560 N, дължина 116 200 E; 20 m над морското равнище) от май до юли. Дневните температури варират от 16 до 35°, нощните от 12 до 16 -C. Относителната влажност на въздуха е над 50 процента. Слънчевата светлина е в изобилие. Приблизително 80 дни по-късно почвата се отстранява от саксиите и се определя степента на инокулация.

2.6. Определяне на концентрацията на лекарствените компоненти

Определянето на концентрацията на лекарствените компоненти включва две части, едната е процедурата за течна хроматография, а другата е подготовката на референтното вещество и изпитваното вещество, повече подробности са както следва:

i). Определяне на ехинакозид и вербаскозид-ехинакозид и вербаскозид се претеглят и се добавят в 50 процента метанол до получаване на 0.2 mg/ml разтвор, който се използва като референтен разтвор. Първият е да се смила сух C. deserticola на прах, прахът се смесва в 5 0 ml 50 процента метанол в 100 ml кафява мерителна колба и тестовата течност се получава след подлагане на сместа на разклащане, накисване , обработка с ултразвук, стоене и филтриране. Хроматографската колона беше Agilent ZORBAX SB-C18 колона (4,6 mm 150 mm, 5 μm), с метанол (A) - 0.1% разтвор на мравчена киселина (B) като подвижна фаза, градиентно елуиране (0–17 минути, 26,5 процента А; 17–20 минути, 26,5 процента → 29,5 процента А; 20–27 минути, 29,5 процента А), скоростта на потока е 1,0 mL/min, температурата на колоната е 35 °С, дължината на вълната на откриване е 330 nm, инжекционният обем е 10ул.

ii). Определяне на бетаин, манитол, фруктоза, глюкоза и захароза Бетаин, манитол, фруктоза, глюкоза и захароза бяха претеглени прецизно и добавени към вода, за да се получи разтвор от {{0}}.25 mg/ml, който беше използван като референтен разтвор. Пет милилитра от гореспоменатия тестов разтвор на Cistanche се смесват с 50 процента метанол в мерителна колба от 25 ml, разклащат се добре и се филтруват с 0,2 μm микропореста мембрана. Хроматографската колона беше SHODEXASHAIPAK NH2P-50 4E полимеризирана гел колона (250 mm 4,6 mm, 5 μm), подвижната фаза беше ацетонитрил-вода (77:23), скоростта на потока беше 0,7 mL/min, температурата на колоната беше 25°С, използвайки детектор за разсейване на светлината при изпаряване (ELSD), температурата на дрейфовата тръба беше 100°С, скоростта на потока на носещия газ беше 3 L/min, инжекционният обем на референтното вещество и пробата бяха 5 ul.

3. Резултати

3.1. Морфологична идентификация на цветята

За потвърждаване на вида Cistanche, който паразитира A. canescens, беше извършен морфологичен анализ на екземпляри от цветя (Фигура 1 и Фигура S1). Общата морфология на цветовете на паразитното растение е подобна на тази на C. deserticola. Освен това, венчето беше по-дебело от това на C. salsa при различни гостоприемници. Според Flora of China, C. deserticola и C. salsa имат очевидни разлики в прицветниците на цветята. При C. deserticola прицветниците са равни на венчето, докато прицветникът на C. salsa е 1/3 от дължината на венчето. Въз основа на нашия статистически анализ, прицветниците на Cistanche паразитират върху A. canescens, а тези на C. deserticola се равняват на венчето (Фигура S2). Cistanche на A. canescens показва морфологични характеристики на C. deserticola, което предполага, че C. deserticola може да е паразитът на A. canescens.

Фигура 1. Морфологични характеристики на цветята на Cistanche. (A) Cistanche deserticola (гостоприемник: Haloxylon ammodendron); (B) Cistanche (домакин: Atriplex canescens); (C) Cistanche salsa (домакин: Sympegma regelii); (D) Cistanche salsa (домакин: Salsola passerina).

3.2. Микроскопска идентификация на оцветени тъканни проби

Разрезът на месестото стъбло на C. deserticola е много подобен на този на C. salsa и двете са съставени от епидермис, кора, съдов сноп и сърцевина. Съдовите снопчета и на двете растения са подредени във вълнообразни или дълбоки вълнообразни пръстени, като сърцевините са ясно видими. Основната разлика е в страничната форма на обвивката на съдовия сноп; тя е опашата при C. deserticola и триъгълна или полукръгла при C. salsa. При извършване на анализ на микроструктурата на Cistanche, паразитиращ върху A. canescens, открихме, че той има обвивка на съдов сноп с форма на опашка, наподобяваща тази на C. deserticola (Фигура 2).

Фигура 2. Микроскопични характеристики на месестото стъбло при различни видове Cistanche. (A) Микроскопични характеристики на месестото стъбло на Cistanche deserticola: 1. епидермис, 2. кортекс, 3. сноп следи от листа, 4. съдов сноп, 5. медуларен лъч, 6. обвивка на съдов сноп, 7. флоем, 8. ксилема , 9. сърцевина. (B) Увеличен изглед на съдовия сноп в Cistanche deserticola: 1. обвивка на съдовия сноп, 2. влакно, 3. пролинови клетки, 4. ликово влакно, 5. флоема, 6. ксилема, 7. съд, 8. найлон. (C) Микроскопични характеристики на месестото стъбло на Cistanche salsa: 1. епидермис, 2. сноп следи от листа, 3. кортекс, 4. съдов сноп, 5. медуларен лъч, 6. сърцевина. (D) Увеличен изглед на съдовия сноп на Cistanche salsa: 1. обвивка на съдовия сноп, 2. пролинови клетки, 3. Влакна, 4. флоема, 5. съд, 6. ксилема. (E) Микроскопични характеристики на месестото стъбло на Cistanche, паразитирано върху Atriplex canescens 1. епидермис, 2. кортекс, 3. съдов сноп, 4. медуларен лъч, 5. сърцевина. (F) Увеличен изглед на съдовия сноп на Cistanche, паразитиран върху Atriplex canescens 1. съд, 2. ксилема, 3. камбий, 4. флоем, 5. обвивка на съдов сноп.

3.3. Молекулярна идентификация

В допълнение към морфологичната идентификация, ние също извършихме молекулярна идентификация и избрахме три генни фрагмента, а именно ITS2, rbcL и psbA-trnL. Беше конструирано еволюционно дърво, използвайки информацията за последователността на всеки фрагмент (Фигура 3) и всичките три филогенетични дървета показаха, че Cistanche, паразитиран върху A. canescens, има тясна филогенетична връзка с C. deserticola. Тези резултати показват, че C. deserticola може да е паразит върху A. canescens. Подробни генни различия между различните видове Cistanche се наблюдават при множествено подравняване на последователности (Фигура 4). Открихме три единични нуклеотидни полиморфизма (SNPs) в генното тяло на ITS2 между C. deserticola и C. salsa, при бази 139, 295 и 472. В генното тяло на rbcL имаше четири генни различия между C. deserticola и C. salsa, съдържащ два SNP и две инсерции и делеции (indel) мутации. В сравнение с ITS2 и rbcL, разликите в тялото на гена psbA-trnL между C. deserticola и C. salsa бяха по-очевидни, със седем разминавания на последователности, където четири бяха SNPs и три бяха InDel мутации. По-специално, серия от тиминови повторения, започващи от основа 414 на подредената последователност, може да се използва за разработване на маркери за просто повторение на последователността (SSR) за разграничаване на C. deserticola и C. salsa.

3.4. Инокулация на C. deserticola

За да проверим дали C. deserticola или C. salsa могат да паразитират в A. canescens, беше проведен експеримент с инокулация и ние открихме доказателства за паразитизъм във всички инокулирани с C. deserticola саксии със степен на инокулация от почти 100 процента (Фигура 5). В контролните групи не се наблюдава опаразитяване. Този резултат директно доказва, че C. deserticola лесно паразитира A. canescens, докато C. salsa не може.

3.5. Определяне на концентрацията на значими лекарствени компоненти

Ние оценихме концентрацията на важни лекарствени компоненти в C. deserticola, паразитирали върху A. canescens. Специфичната хроматограма е показана в допълнителния материал. За да се получат точни резултати, бяха организирани четири независими експеримента. Въз основа на нашите измервания (Таблица 3), ние открихме, че концентрацията на вербаскозид и ехинакозид е 20 пъти по-висока от тази, докладвана в Китайската фармакопея (според Китайската фармакопея, процентът от сбора на концентрациите на ехинакозид и вербаскозид в C. deserticola трябва да бъде по-малко от 0.30 процента). Концентрациите също са значително по-високи от тези в C. deserticola, паразитирали върху H. ammodendron (обикновено 0,2–1,5 процента) [32]. Концентрацията на манитол, бетаин, фруктоза и други въглехидратни компоненти също беше много висока и общото качество беше по-добро от това в C. deserticola, паразитиращ върху H. ammodendron. По този начин тези резултати показват, че A. canescens може да се използва за отглеждане на C. deserticola на индустриално ниво и за защита на застрашени диви ресурси.

4. Обсъждане

Преди това се смяташе, че C. deserticola паразитира изключително върху H. ammodendron. Въпреки това, в това проучване, използвайки техники за морфологична и молекулярна идентификация, ние демонстрирахме, че C. deserticola може също да паразитира A. canescens. Въпреки че всички H. ammodendron, A. canescens и H. persicum принадлежат към семейство Chenopodiaceae, интересно и странно е, че C. deserticola има видова селективност, вероятно управлявана от сигналните молекули, секретирани от гостоприемника. A. canescens, произхождащ от Съединените американски щати, проявява силна устойчивост на смущения в околната среда и има относително голяма биомаса. A. canescens е жизнеспособен гостоприемник за C. deserticola по различни причини. Първо, той може да оцелее в широк диапазон от условия на околната среда. Второ, биомасата и скоростта на растеж на C. deserticola могат да бъдат по-големи и по-бързи съответно при A. canescens, отколкото при H. ammodendron. Трето, поради широкия диапазон на адаптивност на A. canescens, площта на засаждане може да бъде допълнително разширена. По този начин A. canescens има отличителни предимства пред H. ammodendron като гостоприемник и ще подпомогне промишленото производство на C. deserticola.

C. deserticola и C. salsa са трудни за разграничаване и морфологичната идентификация в миналото е довела до объркващи резултати. С напредъка в областта на молекулярната биология, техниките за идентифициране на базата на молекули са широко използвани в китайската билкова медицина. Тъй като повечето китайски билкови лекарства предлагат малко геномна информация, технологията за ДНК баркодиране се очертава като революционна техника за идентификация. В това изследване морфологичната и ДНК технологията за баркодиране бяха изчерпателно приложени за идентифициране на неизвестните видове Cistanche; това не е било опитвано преди и нашите резултати показват, че този подход е осъществим.

Тъй като C. deserticola паразитира A. canescens, важно е да се определят разликите в качеството на C. deserticola върху корените на A. canescent и това върху корените на H. ammodendron. Според нашите резултати концентрацията на активните компоненти е по-висока в C. deserticola, паразитирала върху A. canescens, отколкото в тази, паразитирана върху H. ammodendron. По този начин нашите резултати полагат солидна теоретична основа за широкомащабното производство на C. deserticola, паразитиращ върху A. canescens.

5. Изводи

Дълго време се смяташе, че C. deserticola паразитира изключително върху H. ammodendron. По-рано беше установено, че семената на C. deserticola, закупени от пазара, могат да паразитират A. canescens, друг

Chenopodiaceae растение. Използвайки морфологични и молекулярни методи за идентификация, ние потвърдихме, че видовете Cistanche, паразитиращи A. canescens, са C. deserticola. Този резултат беше допълнително потвърден от експеримента с инокулацията. Ние определихме концентрацията на значими лекарствени компоненти и нашите резултати показват, че концентрацията и качеството на компонентите са по-високи в C. deserticola, паразитиран върху A. canescens, отколкото в този, паразитиран върху H. ammodendron. Откриването на нови гостоприемници може да насърчи промишленото производство на C. deserticola и може също така ефективно да защити дивите ресурси и екологичната среда.

Препратки
[1] DY Tan, QS Guo, CL Wang, Проучване на статуквото на Cistanche deserticola и неговата експлоатация и използване в Китай, For. Resour. Управл. 33 (2004) 29–32.
[2] XY Qiao, HL Wang, YH Guo, Изследване на условията за покълване на семената на Cistanche, Zhongguo Zhong Yao Za Zhi 32 (2007) 1848–1850.
[3] PF Tu, YP He, ZC Lou, Проучване за произхода и защитата на ресурсите на Cistanche, Чин. Традиция. Билка. Лекарства 25 (1994) 205–208.
[4] LD Karalliedde, CT Kappagoda, Предизвикателството на традиционните китайски лекарства за алопатичните лекари, Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 297 (2009) 1967–1969.
[5] Y. Jiang, PF Tu, Анализ на химичните съставки във видовете Cistanche, J. Chromatogr. A 1216 (2009) 1970–1979.
[6] T. Wang, XY Zhang, WY Xie, Cistanche deserticola YC Ma, „пустинен женшен“: преглед, Am. Дж. Чин. Med. 40 (2012) 1123–1141.
[7] Фармакопея NCOC, Фармакопея на Китайската народна република, The Chemical Industry Press, Пекин, 2020 г.
[8] GX Meng, XS Cui, Y. Wu, YH Guo, Ефекти на Leveillula saxaouli върху растежа, хлорофила и въглехидратите на Haloxylon ammodendron, Север. Хортик. 14 (2012) 141–143.
[9] YC Chen, M. Li, MZ Wu, YX Song, Структура и състав на корените в два вида Haloxylon Bunge, Plant Physiol. J. 49 (2013) 1273–1276.
[10] PF Tu, Y. Jiang, YH Guo, YZ Tian и др., Развитие на екологичната индустрия на Cistanches herba за насърчаване на екологичната цивилизация в западния пустинен регион, Мод. Брадичка. Med. 4 (2015) 297–301.
[11] SC Sanderson, HC Stutz, Високи хромозомни числа в пустинята Мохаве и Сонора Atriplex canescens (Chenopodiaceae), Am. J. Bot. 81 (1994) 1045–1053.
[12] JL Peterson, DN Ueckert, RL Potter, JE Huston, Екотипна вариация в избрани популации на четирикрили солени храсти в западен Тексас, J. Range Manag. 40 (1987) 361–366.
[13] DS Kong, Морфологични характеристики и екофизиологична адаптивност на Atriplex canescens: преглед, Чин. J. Ecol. 32 (2013) 210–216.
[14] MA Bashir, MS Faezah, SSO Mohd, W. Alina, Преглед: ДНК баркодиране и хроматографски отпечатъци за удостоверяване на автентичността на растителни продукти в билкови лекарствени продукти. Evid. Базирано допълнение, алтернат. Med. 2017 (2017) 1–28.
[15] XW Li, Y. Yang и др., Баркодиране на растителна ДНК: от ген към геном, Biol. Rev. 90 (2015) 157–166.
[16] SL Chen, H. Yao, JP Han, et al., Валидиране на региона ITS2 като нов ДНК баркод за идентифициране на видове лечебни растения, PloS One 5 (2010), e8613.
[17] К. Луо, С. Л. Чен, К. Л. Чен и др., Оценка на кандидат-баркодове за растителна ДНК с помощта на семейство Rutaceae, Sci. China Life Sci. 53 (2010) 701–708.
[18] T. Gao, H. Yao, JY Song и др., Идентифициране на лечебни растения от семейство Fabaceae с помощта на потенциален ДНК баркод ITS2, J. Ethnopharmacol. 130 (2010) 116–121.
[19] T. Gao, H. Yao, JY Song, et al., Оценка на осъществимостта на използването на кандидат ДНК баркодове при разграничаване на видове от голямото семейство Asteraceae, BMC Evol. Biol. 10 (2010) 324.
[20] XH Pang, JY Song, YJ Zhu и др., Използване на ДНК баркод за идентифициране на видове в Euphorbiaceae, Planta Med. 76 (2010) 1784–1786.
[21] XH Pang, JY Song, YJ Zhu и др., Прилагане на баркодове на растителна ДНК за идентификация на видовете Rosaceae, Cladistics 27 (2011) 165–170.
[22] PD Hebert, EH Penton, JM Burns, DH Janzen, W. Hallwachs, Десет вида в едно: ДНК баркодирането разкрива загадъчни видове в неотропичната пеперуда скипер Astraptes fulguration, Proc. Natl. акад. Sci. САЩ 101 (2004) 14812–14817.
[23] MW Chase, RS Cowan и др., Предложение за стандартизиран протокол за баркодиране на всички земни растения, Taxon 56 (2007) 295–299.
[24] WJ Kress, DL Erickson, Двулокусен глобален ДНК баркод за сухоземни растения: кодиращият rbcL ген допълва некодиращия разделителен регион trnH-psbA, PloS One 2 (2007) e508.
[25] DL Erickson, J. Spouge, A. Resch и др., ДНК баркодиране в сухоземни растения: разработване на стандарти за количествено определяне на максималния успех, Taxon 57 (2008) 1304–1316.
[26] NC Kane, Q. Cronk, Botany without borders: barcoding in focus, Mol. Ecol. 17 (2008) 5175–5176.
[27] R. Lahaye, M. van der Bank, D. Bogarin и др., ДНК баркодиране на флората на горещите точки на биоразнообразието, Proc. Natl. акад. Sci. САЩ 105 (2008) 2923–2928.
[28] N. Kane, S. Sveinsson, H. Dempewolf и др., Ултрабаркодиране в какао (Theobroma spp.; Malvaceae) с използване на цели хлоропластни геноми и ядрена рибозомна ДНК, Am. J. Bot. 99 (2012) 320–329.
[29] JD Thompson, TJ Gibson, F. Plewniak, F. Jeanmougin, DG Higgins, Интерфейсът на прозорците CLUSTAL_X: гъвкави стратегии за подравняване на множество последователности, подпомогнати от инструменти за анализ на качеството, Nucleic Acids Res. 25 (1997) 4876–4882.
[30] TA Hall, BioEdit: удобен за потребителя редактор за подравняване на биологични последователности и програма за анализ за Windows 95/98/NT, Nucl. Киселини Symp. сер. 41 (1999) 95–98.
[31] С. Кумар, М. Ней, Дж. Дъдли, К. Тамура, MEGA: биологоцентричен софтуер за еволюционен анализ на ДНК и протеинови последователности, Кратко. Биоинформ. 9 (2008) 299–306.
[32] PF Tu, B. Wang, T. Deyama, ZG Zhang, ZC Lou, Анализ на фенилетаноидни гликозиди на Herba cistanchis чрез RP-HPLC, Acta Pharm. Синица. 32 (1997) 294–300.