Химични свойства на маноглюкан от Cistanche Deserticola

Контакт: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Имейл:audrey.hu@wecistanche.com

1. Материали

Използвани са орални пасти за коне от два различни производителя, съдържащи съответно 10 mg/g (A) или 20 mg/g (B) ивермектин. Извършен е количествен анализ на ивермектин, като съдържанието му е 104,4–107,7% от декларираната концентрация.

2. Тест за разтваряне

Тестът е извършен с Ph. Eur. лопатков апарат (Pharma Test, Heinberg, Германия), при разбъркване от 75 rpm или 50 rpm, при 37 -0.5 C. Натриев лаурил сулфат (BDH Chemicals, Poole, Англия) 0,5 процента (w /v) воден разтвор се използва като среда за разтваряне (900 ml). Пастата (4 g от A или 2 g B) се поставя в съда със спринцовка с канюла (A) или пробата се пуска върху повърхността на средата за разтваряне (B). След интервалите от време (15, 30, 45, 60 минути и 2 часа) се взема проба от средата за разтваряне (2 ml), филтрува се през стъклен филтър и се анализира.

3. HPLC анализ

Определянето на ивермектин се извършва с модифициран HPLC метод, както е описано във Ph. Eur. Анализираните разтвори се разреждат с метанол (1:10). HPLC системата се състои от октадецилна колона (250 -4 mm; 5 mm; Lichrospher RP-18; Merck), интегратор D-12500 A, детектор UV-Vis L{{7} }, помпа L-6200A (Merck-Hitachi, Дармщат, Германия). Смес от ацетонитрил:метанол:вода (64:24:16) се използва като подвижна фаза със скорост на потока 1.9 ml/min. Обемът на инжектираната проба е 20 ml и откриването се извършва при 254 nm.

4. Изследвания на разтворимостта

Достъп от веществото се разклаща в плътно затворени стъклени колби с подходящ разтворител (Таблица 1) в продължение на 20 часа при 37 0.1°С. Суспензиите се филтруват и филтратът, след разреждане в метанол, се анализира чрез HPLC .

5. Стабилност в кисел разтвор

Разтвори на ивермектин в HCl {{0}}.1 М се съхраняват в плътно затворени стъклени флакони при 20°С и 37°С. Хроматограмите на разтворите се записват при t=0 и след 1, 2 и 6 часа. Бяха изчислени площта на ивермектина (време на задържане 10,5 минути) и допълнителните пикове.

Препратки

Ръководство на FDA за индустрията: SUPAC-SS нестерилни полутвърди дозирани форми. Промени в мащабиране и след одобрение: химия, производство и контрол; in vitro изпитване на освобождаване и in vivo документация за биоеквивалентност. Май 1997 г. Насоки на FIP за тестване за разтваряне на твърди орални продукти (1997 г.) Dissolute. техн. 4: 5–14. Siewert M, Dressman J, Brown C, Shah VP (2003) Насоки на FIP/AAPS за тестване на разтваряне/ин витро освобождаване на нови/специални дозирани форми, AAPS PharmSciTech, 4 (1) статия 7 Модерен изследователски център за традиционна китайска медицина, училище по фармацевтични науки, Център за здравни науки на Пекинския университет, Пекин, Китай

Xiang mei Wu, Pengfei Tu Получено на 13 февруари 2004 г., прието на 4 април 2004 г., проф. д-р Pengfei Tu, Модерен изследователски център за традиционна китайска медицина, Факултет по фармацевтични науки, Център за здравни науки на Пекинския университет, № 38, Xueyuan Road , Haidian District, Пекин 100083, Китай Pengfeitu@bjmu.edu.cn Pharmazie 59: 815–816 (2004)

Нов маноглюкан отCistanche deserticolaот Китай се характеризира. Съединението е отговорно за леко стимулиране на митоген-индуцираната Т и В лимфоцитна пролиферация.

Cistanche deserticolaYC Ma е холопаразит, растящ върху корените на двусемеделното растение Haloxylon ammodendron Bunge, което е широко разпространено в северозападния Китай. Тъй като е важен тоник в ориенталската медицина, много активни компоненти и фармакологични действия са твърдени (Karasawa et al. 1986; Yoshizawa et al. 1990). Тези свойства могат да бъдат свързани с някои от полизахаридните компоненти наЦистанчекоито все още не са изследвани. Митогенни пектинови полизахариди и неутрални полизахариди са изолирани и характеризирани отCistanche deserticolaот Монголия (Radna et al. 1996; Anna et al. 1997; Bozena et al. 1999). Тук съобщаваме химичните свойства на нов маноглюкан отCistanche deserticolaот Китай, който е отговорен за лекото стимулиране на митоген-индуцираната пролиферация на Т и В лимфоцити. След стъблата наCistanche deserticolaYC Ma бяха екстрахирани с 95 процента етанол, студена дестилирана вода беше използвана за екстрахиране на остатъка. Студеният воден екстракт се утаява с EtOH, протеинът се отстранява и се диализира, като се получава суровият полизахарид CCDP. Суровият полизахарид се фракционира на колона DEAE и колона Sephadex G-150, за да се получи полизахарид без протеин (CDP-6), който включва глюкоза (89,2 процента) и маноза (1{{58} }.4 процента ), и от които средният Mr се оценява на 6.8 -104. Полизахаридът CDP-6 показва [a 20 D 42 (c 1, H2O). Абсолютните конфигурации на захарите бяха определени чрез GC на TMS (– )-2-бутил гликозиди. CDP-6 беше метилиран (Needs et al. 1993), хидролизиран, превърнат в алдитол ацетати и анализиран чрез GC и GC-MS (Таблица). Този резултат заедно с данни за моларно съотношение от анализ на метилиране предполагат, че CDP-6 има предимно 1,6-свързан Glcp и скелет 1,6- свързан в по-малка степен, разклонен при O{{ 24}} маноза. Анализът на метилиране на два полимера (CDP-6-1, CDP-6–2) от частична хидролиза потвърди, че CDP-6 има скелет, състоящ се от 1,6-свързани глюкозилни остатъци и 1,6-свързани манозилови остатъци, които са заместени при O-3 на манозата с разклонения, състоящи се от крайните, 1,6- свързани глюкозилни остатъци и 1,3,{{38} }свързани манозилови остатъци. Според моларните съотношения и литературата (Bozena et al. 1999; Bacon et al. 1996), 13C NMR спектърът на CDP-6 показва сигнали, дължащи се на аномерни въглероди на a-d-Glcp (C{{45 }} при 98,4 ppm), bd-Map (C-1 при 104,3–104,9 ppm) и ad-Map (C-1 при 100.0 ppm). 1Н NMR спектърът на CDP-6-2 в D2O показва протонни сигнали, съответстващи на ad-Glcp (H-1 при 4,94–4,95 ppm) и a-d-Map (H-1 при 4,96–5,00 ppm). 13C NMR спектърът на CDP-6-2 в D2O показва протонни сигнали, съответстващи на aD-Glcp (C-1 при 98,6 ppm) и ad-Map (C-1 при 98,4 ppm). Съобщава се, че маноглюканите имат 1,4-свързан глюкопиранан и 1,4-свързан гръбнак на манопиранан (Radjabi Nassab et al. 1984; Tanabe et al. 2000). CDP-6 има някои различни структурни характеристики чрез своя a-1,6-свързан Glcp и b-1,6-свързан Map гръбнак и е заменен от маноглюканови клонове (фиг.). За да се проучи използването наCistanche deserticolaв народната медицина е оценен ефектът на CDP-6 върху Т- и В-клетъчните системи. Установено е, че леко стимулира индуцираната от митоген Т и В лимфоцитна пролиферация.

Експериментален

1. Общи процедури

Оптичното въртене беше измерено с W22-1S автоматичен поляриметър. IR спектрите се определят на спектрометър Perkin-Elmer 599B. GC анализът беше извършен на инструмент Agilent HP6890N, оборудван с FID детектор. GC-MS се извършва на Finnigan Trace GC-MS инструмент. Хомогенността и Mr на CDP-6 бяха оценени от кривата на калибриране на обема на елуиране на стандартни декстрани, която беше извършена на

апарат от серия Agilent 1100 с колона Shodex KS-805.1Н NMR и 13C NMR спектрите са записани с инструмент INOVA-500. Съдържанието на протеин се анализира по метода на Bradford (Andre et al. 1975). Монозахаридите бяха анализирани по отношение на техния алдитол ацетат, след като бяха хидролизирани (2 М TFA, 2 часа, 110°С), редуцирани и ацетирани. Хидролизатите се анализират с помощта на TLC върху силикагелна плоча, съдържаща 5 процента натриев дихидроген фосфат в BuOH-EtOAc-изопропилов алкохол-HOAC––H2Oпиридин (3,5:10:6:3,5:3:3) и захарите се откриват чрез пръскане с орцинол -H2SO4. Получените алдитол ацетати се анализират чрез GLC с помощта на HP-5 капилярна колона (30 m 0.32 mm). CDP-6 се метилира по метода на Ciucanu, последвано от хидролиза и се анализира като частично метилирани алдитол ацетати чрез GC-MS. След частична хидролиза, продуктите бяха диализирани и разделени, като се получиха два полимера, CDP-6-1 и CDP-6–2.

2. Растителен материал

Растението е събрано от провинция Вътрешна Монголия в Китай през август 2001 г. и е идентифицирано от Hu-Biao Chen, Катедра по естествена медицина, Факултет по фармацевтични науки, Център за здравни науки към Пекинския университет. Ваучерен екземпляр [E-1-(9)] от това растение е депозиран в Училището по фармацевтични науки, Пекинския университет. 3. Екстракция, изолиране и пречистване на полизахарид CDP-6 Стъблото наCistanche deserticolaYC Ma (1500 g) се екстрахират с 95 процента етанол (6 L) под обратен хладник. Изсушеният неразтворим в етанол остатък се мацерира три пъти със студена дестилирана вода за 12 часа. Студеният воден екстракт се филтрува и филтратът се центрофугира. След утаяване с четири обема EtOH (разбъркване и престояване в продължение на 24 часа при 4°С), се получава утайката (35.5 g). Протеинът в утайката се отстранява по метода на Savage. След разтваряне в дестилирана вода, остатъкът (25.5 g) се диализира и лиофилизира (добив: 10.6 g). Суровият полизахарид (8 g) се разтваря в дестилирана вода (100 mL, 8 процента w/v) и се разделя с помощта на DEAE колона (70 5 cm, градиент от 0–2 M NaCl, на 1,5 L). Получава се елуирана с вода фракция (600 mg). Проба (250 mg) се пречиства чрез колонна гел-проникваща хроматография на Sephadex G- 150 колони (4 - 80 cm, 1600 mL, 5 mL на фракция). Фракции от CDP-6 (1500–1600 mL) бяха събрани, диализирани и лиофилизирани. След обезсоляване от Sephadex G-25 (60 1 cm). CDP-6 (110 mg) беше получен и определен като единичен пик чрез HPSGC.

Признание:Авторът благодари на д-р Баомей Шао и проф. Сяоминг Гао, Факултет по основни медицински науки, Център за здравни науки на Пекинския университет, за измерването на имуномодулиращата активност на CDP-6.