Сравнение на генната експресия между строители и събирачи на храна

Моля свържете сеoscar.xiao@wecistanche.comза повече информация

Ползите, свързани с разделението на труда (DOL), се обсъждат като основни движещи сили, благоприятстващи големи преходи в еволюцията, като еволюцията на еукариотната клетка или многоклетъчните организми. Еволюцията на еусоциалността често се разглежда като най-новият от тези големи еволюционни преходи. Социалните насекоми предлагат предимството да се изучават „преходни фази“, тъй като не всички социални насекоми са суперорганизми (т.е. видове, при които работниците на колонията не могат да се възпроизвеждат и са стерилни), което би се квалифицирало като извършило голям еволюционен преход23. Социалните насекоми също се характеризират с DDL, а именно между репродуктивни и невъзпроизвеждащи се животни в една колония от насекоми. В социалните Hymenolotera, включващи мравки и някои пчели и оси, както и в Blattodean термити, само един или няколко индивида в колония се възпроизвеждат (кралици, а при термитите също крал), докато голямото мнозинство от индивидите в колонията , да се откажат от възпроизвеждането, поне временно, и да изпълняват задачи на работници или войници. В рамките на кастата на работниците обикновено съществува допълнително DOL, което е свързано с възрастта на работниците (т.е. възрастов полиетизъм)*. Младите работници изпълняват задачи в рамките на гнездото, като например грижа за пилото и репродуктивните животни, докато по-възрастните работници изпълняват по-рискови задачи, като търсене на храна извън гнездото. Такъв DOL, базиран на възрастта, се счита за адаптивен - тъй като по-възрастните индивиди обикновено имат намалена продължителност на живота и следователно по-ниска репродуктивна стойност (или нейния еквивалент на включително фитнес) в сравнение с младите работници.

Моля, щракнете тук, за да научите повече

Близките молекулярни механизми, лежащи в основата на разделянето на задачите, са интензивно изследвани в социалните Hymenoptera" 10. Вителогенините (Vgs) се очертават като основни регулатори на DOL между кралици и работници -15, както и между работници, изпълняващи различни задачи 1617.ползи от cynomoriumТе са протеини за съхранение, които са добре известни със своята функция като предшественици на жълтъка по време на оогенезата при женските насекоми18. Например, при най-добре проученото социално насекомо, медоносната пчела Apis mellifera, преходът от задачи за кърмене на закрито към търсене на храна на открито се характеризира с промяна в експресията на много гени19. Физиологично свързаното с възрастта преминаване от кърмене към търсене на храна е свързано с повишаване на титъра на хемолимфния ювенилен хормон (JH)? 20 и се задейства от намаляване на циркулиращите нива на Vg1521-23. Важно е, че при медоносните пчели работнички, които не произвеждат яйца в присъствието на майката, е доказано, че Vg има функция за инхибиране на имуносесенцията2.

В сравнение с пчелите, много по-малко се знае за молекулярните механизми, лежащи в основата на DOL, и особено за разделението на задачите между работниците в термитите. Термитите (инфраразред „Isoptera, по-рано считан за независим разред“ са социални хлебарки, монофилетична линия, гнездяща в Blattodea, която е развила еусоциалност независимо от социалните Hymenoptera2526. Както при социалните Hymenoptera, възрастовият полиетизъм е често срещан при по-възрастните работници, изпълняващи по-рискови задачи като търсене на храна или защита 2728. Също така е установено (i), че Vgs играят важна роля в DOL между термитни репродуктивни и работни; 2930, (ii) че JH титрите и Vg експресията са положително свързани в термитните кралици **, и (iii) че майките имат значително по-високи титри на JH от работниците. Термитите имат три Vg копия, които са регулирани нагоре irn кралици3637 и поне в Cryptotermes Secundus тези три Vg копия са членове на мрежа за коекспресия на ген, която характеризира фенотипа на кралицата (вижте също „Дискусия“)30.пустинен зюмбюлТези резултати ни карат да предположим, че Vgs и JH не само са в основата на репродуктивния DOL, но също така регулират разделението на задачите между работещите с термити, подобно на социалните Hymenoptera.

Имахме за цел да проверим дали разделението на задачите между работниците в термити е свързано със същите механизми, които са в основата на разделението на задачите в социалните Hymenoptera. За да направим това, ние избрахме вид термити, за чието разпределение на задачите между работниците е интензивно проучвано и е най-добре описано, Macrotermes bellicosus Smeathman (Macrotermitinae)283839.M.bellicosus е термит, отглеждащ гъби, който изгражда големи могили и има сложна колония структура, състояща се от до няколко милиона индивиди, разделени в четири стерилни касти: големи и второстепенни работници и големи и второстепенни войници年.Метод за екстракция на флавоноиди pdfDOL сред тези стерилни касти е интензивно изследван, особено за непълнолетни работници283839. Те са жени и следователно могат да бъдат сравнени с кралицата. Освен това те съставляват по-голямата част от индивидите и имат най-разнообразен поведенчески репертоар. Малки непълнолетни работници се грижат за пилото и кралицата. Старите непълнолетни работници извършват строителство и търсене на храна. Последното позволява да се тестват причините за разделяне на задачите на индивиди на сходна възраст, като по този начин се преодолява объркващият ефект на възрастта спрямо задачата, който може да възникне в проучвания, насочени към разделяне на задачите въз основа на възрастта (т.е. възрастов полиетизъм). В допълнение, използването на сходна възраст работници предлага рядка възможност да се провери дали по-рисковите задачи са свързани с намалена инвестиция в механизми против стареене, независимо от присъщата възраст. Това се очаква от теорията за историята на живота, която прогнозира, че зависимата от възрастта по-висока външна смъртност поради случайни причини може да избере по-бързо присъщо стареене (излизане), свързано с по-малко инвестиции в механизми против стареене4,2. В M. bellicosus всички непълнолетни работници са женски; мъжките се развиват в основни работници, които имат напълно различни задачи в колонията и следователно не са разгледани в това проучване.

Cistanche може да спре стареенето

Тествахме хипотезата, че при дребните работници (за простота, по-нататък само работници) събирачите (по-нататък, събирачите) са в по-лоши физиологични условия от тези, които изпълняват строителни задачи на закрито (по-долу, строители). По този начин ние също така предположихме, че строителите са по-сходни с кралиците в общите им профили на генна експресия, отколкото събирачите. И накрая, тествахме дали строителите инвестират повече в механизма против стареене, отколкото събирачите на фураж, като последните са изправени пред по-високи специфични за възрастта рискове от външна смъртност.

За да тестваме тези хипотези, ние генерирахме транскриптоми на глави плюс торакс (за рационален избор на тъкан, вижте Методи) от строители и фуражи. След като сравнихме генната експресия между задачите на работниците, ние сравнихме техните профили на експресия с тези на кралици, които бяха публикувани в по-ранно проучване, което изследва свързаните с възрастта и кастата различия в генната експресия в M. bellicosus43. За по-нататъшно характеризиране на физиологичното състояние ции на работници, ние определихме и сравнихме наличието на овоцити в строители и фуражи.флавоноидиУроцитите са един от трите типа клетки в мастното тяло на термитите; те са клетки за съхранение на азотни отпадъчни продукти45. Натрупването на уроцити може да бъде индикатор за неразположение при термитите, въпреки че тяхната роля изглежда сложна (за повече подробности вижте дискусията)t4-46. Нашето проучване беше допълнено с ендокринни измервания, за да се сравни дали събирачите и строителите се различават в хемолимфните JH титри.

Резултати

Comparison of gene expression between builders and foragers. Using a total of 14 head/thorax transcriptomes (builders: N=7; foragers: N=7), we folund 939 differentially expressed genes (DEGs) between builders and foragers (for a full list of genes, see Supplementary Material).In builders,593 genes were signifi-cantly overexpressed (Supplementary Table S1). Amongthe 'builder genes, all three genes encoding termite Vgs were especially highly expressed (log2FC>2) (Допълнителна таблица S2). Също така регулирани нагоре в строителите бяха пет антиоксидантни гена: два гена, кодиращи каталази (Cat) и три гена, кодиращи супероксид дисмутази (SOD) (2 × CuCn, 1 × MnFe типове). Най-обогатените (GO термини за строителите бяха енергиен метаболизъм, специфичен метаболизъм на АТФ и гликолитичен процес, както и транслация, рибозомни гени и гени, свързани с протеиновия транспорт (допълнителна таблица S3, допълнителни фигури S1-S3).

Триста четиридесет и шест гена са били значително свръхекспресирани в фуражи (допълнителна таблица S4), но не са очевидни поразителни модели. Събирачите се характеризират със следните GO термини: активност на протеин киназа, свързване на хепарин, регулиране на транскрипцията, РНК метаболизъм, протеиново фосфорилиране и ДНК полимеразна активност (допълнителна таблица S3, допълнителни фигури S 4- S6). Сравнение на генната експресия, свързана със задачата на работниците, с „гените на кралицата“. За да проверим дали гените, регулирани нагоре в строителите, са по-сходни с гените, силно експресирани в майките, ние сравнихме текущите специфични за задачата разлики в експресията на работничките с набора от гени, които са специфично регулирани нагоре в кралиците на M. bellicosus в сравнение с кралете и работничките (кралица DEG тук по-нататък )43. Общо 713 DEG бяха специално изразени от кралицата43. От 593 гена, които са били регулирани нагоре при строителите в сравнение с тези за събиране на фураж, 108 (18,2 процента) DEG са били DEG от кралицата. За разлика от това, от 346 гена за фураж, само 18 (5,2 процента) DEG се припокриват с DEG на кралицата. По този начин строителите споделят значително повече гени с майките, отколкото събирачите （x²=24.15,df=1,p=8.94×10-7）. Сред гените, които бяха споделени между строителите и кралиците, бяха трите vg гена (фиг. 1).

Наличие на овоцити и JH титри в строители и фуражири. Въпреки че размерите на пробите са малки, скринингът на строители и фуражи за наличие на уроцити предполага ефект на задача. И тримата фуражири имаха видими уроцити, докато （само）6 от 14 билдера ги имаха（анализ на непредвидени обстоятелства∶ x²=3.24, P=0.072; Допълнителен

Дискусия

Вителогенинът е нещо общо в основата на разделението на труда между социалните насекоми. Подобно на 24,4647, antsl7), ние открихме понижена регулация в експресията на Vg социални Hymenoptera (напр. гени на медоносна пчела при термити работници, търсещи храна, в сравнение с строители. Тази общност на коопция на Vg за регулиране на разпределението на задачите между работниците между линиите, което са разделени от повече от 133 милиона години*@, е поразително. Изследвахме тъканите на главата и гръдния кош. Следователно може да изглежда изненадващо да открием Vg сигнал, който е свързан с възпроизводството. И все пак, в термита C. Secundus, поне един от тези Vg гени, Neofem3, се експресира по подобен начин във всички части на тялото (глава, гръден кош, корем) 2. Освен това, скорошни резултати показват, че тъканите на главата плюс гръдния кош са много подходящи за изследване на черти в историята на живота304, включително експресия на трите Vg гена които открихме, че са регулирани нагоре при строителите в сравнение с фуража.Мастното тяло, основната тъкан, за която е известно, че синтезира вителогенин, също се среща в гръдния кош.

Молекулярните механизми, които са в основата на разделението на задачите, отразяват механизмите, които са в основата на възпроизводственото разделение на труда. Също толкова поразителен е фактът, че вителогенините също характеризират репродуктивната DOL между кралици и работници в социални Hymenoptera и термити, като кралиците се характеризират с високи хранителни условия3050. Хипотезата за основния план на яйчниците5l и нейното преформулиране като хипотеза за репродуктивния план21,2452, твърдят, че молекулярните генетични модули, регулиращи възпроизвеждането при самотни насекоми, са били кооптирани по време на социалната еволюция, за да лежат в основата на репродуктивния DOL. Работниците (физиологично) отразяват етапа на търсене на храна и грижа за потомството на женските на неевсоциалните насекоми, докато цариците на социалните насекоми са физиологично еквивалентни на възпроизвеждащите се единични насекоми. Съответно, репродуктивният DOL може да бъде постигнат чрез отделяне и хетерохронна промяна в експресията на съответните генетични модули, получени от самотни предци. Има подкрепа за тази хипотеза в социалните Hymenoptera (напр. 53-55), но по-малко се знае за термитите. Скорошно проучване на по-малко социално сложния термит C. Secundus разкри мрежа от ко-експресирани гени, централният модул на кралицата (QCM), който характеризира кралиците30.използва хесперидинВажно е, че QCM съдържа гени от всички основни пътища, за които е известно, че регулират характеристиките на историята на живота, включително гени, свързани с JH сигнализирането, пътя на инсулин/инсулиноподобен растежен фактор (IIS) и плодовитостта. QCM също така съдържа ортолозите на всичките три Vgs, които характеризират кралиците на M. bellicosus43 и които открихме, че са регулирани нагоре при строителите в сравнение с фуражистите. Това подкрепя нашето заключение, че разделението на задачите отразява механизмите, лежащи в основата на репродуктивния DOL. Това дава първи намеци, че хипотезата за репродуктивния план изглежда валидна и за термитите.

Търсенето на храна е в съответствие с влошаващите се физиологични условия. Както и в други проучвания върху социални и самотни насекоми?6, търсенето на храна при работещите с M. bellicosus изглежда е свързано с ниска експресия на Vg и лоши физиологични условия (указани от наличието на ооцити), въпреки че размерът на пробата е малък за последните , изискващи допълнителни проучвания. За разлика от това, строителите се характеризират с GO термини, показващи протеинов синтез и висок енергиен метаболизъм, включително гликолитични процеси.

Ролята на астроцитите при термитите изглежда сложна и нощта се различава между видовете*5. При термитите Reticulitermes speratus астроцитите са описани като резервоар на азот под формата на пикочна киселина, за които се предполага, че допринасят за оцеляването на термитите, като функционират като антиоксиданти. При видовете Macrotermes, включително M bellicosus, появата на белезникави уроцити (като урати или пикочна киселина) се свързва със стрес или старост8840 Тъй като изследваните работници са били на сходна възраст, малко вероятно е възрастта да обясни разликата в присъствието на уроцити. Допълнителна подкрепа за връзка със стреса, поне при някои видове, идва от C. secundus. Собствени проучвания, които проследяват термитни индивиди за продължителни периоди, показват, че индивиди от всички касти могат да придобият овоцити по време на стресови условия, като заразяване с акари или лошо качество на храната. Необходими са повече изследвания, за да се разбере ролята на уроцитите в термитите.

За разлика от социалните Hymenoptera, обаче, ние не открихме разлики в титрите на JH между събирачите на храна и строителите при M. bellicosus, но размерът на извадката е малък, особено за събирачите на храна (фиг.2). Работниците, събиращи храна M. bellicosus, са на същата възраст като строителите . Въпреки това, в проучвания върху социалните Hymenoptera работниците, които търсят храна, често се сравняват с медицински сестри, които естествено се различават по възраст, ако не са контролирани в експерименталната среда. Известно е, че високите титри на JH се привеждат в съответствие със стареенето при самотни57 и специални насекоми23.58.59. Следователно лошите физиологични условия изглежда водят до преминаване на задачата към нива на търсене на храна, а не към нива на JH. Това е показано предимно при някои социални Hymenoptera (напр. 21,

Това може да доведе до хипотеза как разделението на задачите може да се поддържа стабилно чрез подсилване на механизмите за обратна връзка, причинени от социалните взаимодействия. Ако ниското хранително състояние накара индивидите да търсят храна и ако връщащите се събирачи са трайно „изтощени“ от изчисления за просене, може да се получи стабилно разделяне на резервоара.

Бяха представени подобни идеи

Събирачите инвестират по-малко в механизми против стареене. Нашите DEG данни подкрепят хипотезата, че повишената зависима от възрастта външна смъртност е в съответствие с ускореното вътрешно стареене42. Високата зависима от възрастта външна смъртност може да избере съкратена продължителност на живота и намалени инвестиции в механизми за предотвратяване на стареенето. Събирачите имат по-ниска експресия на антиоксидантни гени, отколкото строителите. Тези гени облекчават увреждането от оксидативен стрес, причинен от повишени нива на ROS (реактивни кислородни видове)6 За да обобщим, нашите резултати подкрепят хипотезата, че термитите са кооптирали подобни гени като социалните Hymenoptera, които са в основата на разделението на задачите при работниците. Освен това, тези гени характеризират репродуктивния DOL при социалните насекоми по общ начин. Освен това работниците, търсещи храна M.bellicosus, изглежда са в по-лошо физиологично състояние от строителите на сходна възраст, както е посочено, например, от по-ниската експресия на вителогенинови гени, наличието на уроцити и по-ниската експресия на каталази и SOD, които може да поддържа нивата на ROS под контрол. Това подкрепя хипотезата, че индивидуалното физиологично състояние, а не присъщата възраст задейства преминаването към търсене на храна. И накрая, в съответствие с прогнозите от теорията за историята на живота, че високата зависима от възрастта външна смъртност може да избере по-бързо присъщо стареене (стареене), събирачите на храна изглежда инвестират по-малко в механизми против стареене, отколкото строителите, които са по-малко изложени на външни рискове от смъртност.

Методи

Експеримент с транскриптом. Вземане на проби и генериране на транскриптомни данни. Пробите от M. bellicosus бяха събрани в Националния парк Comoe (координати 8946'N 3 градус 47'W, Кот д'Ивоар). За анализите на транскриптомите използвахме 14 непълнолетни работници на подобна възраст, оценени по износване на долната челюст, като описано в Генериране на набор от данни за JH и уроцити'*. Всеки индивид произхожда от различна колония, за да осигури независими проби. Отделни индивиди бяха събрани, докато изпълняваха задачи за изграждане (n=7) или търсене на храна (n=7). Транскриптомите са генерирани от главите на термитите плюс гръдния кош. Скорошни проучвания показват, че пробите от глава плюс гръден кош са най-подходящи за изследвания на транскриптоми при термити, тъй като основните пътища, които са в основата на регулирането на характеристиките на жизнената история, включително плодовитостта при майките, се експресират в тези тъкани *

Пробите бяха подготвени и генерирани точно както в нашето предишно проучване, от което използвахме данните за експресията на кралицата (включително подготовка на пробата и анализи от едно и също лице)43. След това те бяха изпратени в BGI, Хонг Конг върху сух лед. Подготовката на библиотеката беше направена от BGI с помощта на комплекта TruSeq RNA, следвайки протокола за подготовка на проби на BGI. Подробности за всяка проба могат да бъдат намерени под Bioproject ID PRJNA727164. Амплифицираните библиотеки бяха секвенирани на платформа Illumina HiSeq 4000 със стратегии от 100 bp сдвоени крайни (PE) четения, генерирайки най-малко 4 Gigabases необработени данни за всяка проба. След секвенирането, индексните последователности от машинните четения бяха демултиплексирани (сортирани и премахнати) от собствен инструмент на BGI.

Предварителна обработка на необработените четения на RNASeq. Необработените четения на последователности от всички проби, предоставени от BGI, бяха използвани за всички следващи стъпки. След контрол на качеството с FastQC v. {{0}}.11.967, необработените четения на последователности бяха проверени за минимална дължина от 70 bp и адаптерите (включително два BGI inhouuse адаптера) бяха подрязани с помощта на Trimmomatic v.0.3968. Изрязването и други последващи стъпки бяха улеснени от GNU parallel v.2014102269.

Генна експресия и картографиране срещу генома на Macrotermes natalensis. Използвахме генома на Mac-proteomes natalensis (Haviland 1898) версия 1.0 като гръбнак на nnapping в нашето изследване, което служи добре за тази цел43. Подрязаните и почистени необработени четения бяха подбрани срещу генома на M. natalensis с помощта на програмата Hisat2 v.2.2.0 с настройки по подразбиране7. Получените bam файлове бяха сортирани по име на ген с помощта на SAMtools (v.1.5)².HTSeq v .0.9.12 след това беше използван за преброяване на картографираните необработени четения на ген （страничен=не, тип=ген,режим=обединение, ред= име) за всяка проба. Беше съставена таблица с обикновен текст, обобщаваща всички проби (допълнителна таблица S6).

Анализ на генната експресия. DESeq2v.1.18.1 беше използван в R v.3.4.4 за анализиране на диференциалната генна експресия между строители и събирачи на храна7475. За да тестваме разликите в израза по двойки, използвахме обобщения линеен модел с отрицателно биномно разпределение, както е внедрено в DESeq2. Сравнихме диференциалната генна експресия между две задачи, строители и фуражи (допълнителни таблици S1-S2,S4). FDR-коригирани p-стойности (padj) бяха използвани за коригиране на многократно тестване. За да анализираме приликите между генната експресия на строител/събирач и кралица, ние сравнихме припокриването на списъците на DEG: Сравнихме гените, които са били регулирани нагоре в кралици в сравнение с всички други касти от предишно проучване с гените, регулирани нагоре при строителите в сравнение с гените на събирачите от текущо изследване (фиг.1). По подобен начин сравнихме припокриването между гените на кралицата и тези, регулирани нагоре при събирачите на фураж в сравнение с строителите (фиг.1).

Функционална анотация и GO анализ. Функционална анотация на аминокиселинните (AA) последователности на протеинови кодиращи гени на M.natalensis беше извършена в Interproscan v.5.41-78.077. Търсените бази данни бяха pfam, panther, cdd, coils, gene3d, hamap, pirsf , отпечатъци, sfld и суперсемейство. Извлякохме GO анотацията за всяка AA последователност и комбинирахме записи от всички бази данни foreach. Използвахме NCBI BLASTX v. 2.2.31 плюс, за да сравним кодиращите последователности на генома на M. natalensis с базата данни на NCBI nr протеин (достъп до ноември 2015 г.)78. Приложихме TopGOv.2.30.1**, за да сравним гените за строител и фураж; ние изследвахме йерархията на GO и прекомерно представяне на термини и изградихме графични представяния. Неанализиран биологичен процес (BP), клетъчен компонент (CC) и молекулярна функция (MF) (допълнителна таблица S3).

Генериране на набор от данни за JH и уроцити. Индивиди от M. bellicosus бяха събрани на полето в Националния парк Comoe (виж по-горе). Количеството на уроцитите се оценява на полето като високо или ниско в зависимост от очевидното присъствие или отсъствие на големи уроцити. Те се виждат като бели „кристали“/точки в мастното тяло през прозрачната кутикула на термитите. От същите тези индивиди бяха взети хемолимфни проби за JH измервания. За да направят това, техните коремчета бяха пробити с щифт и изпъкнали капчици хемолимфа бяха абсорбирани в калибрирани стъклени капиляри (5 μL капилярни пипети за еднократна употреба, Neolab, Hirschmann, Eber-stadt, Германия) (за повече подробности вижте 35). За JH измервания, хемолимфни аликвоти от единични индивиди от 1 uL бяха незабавно разтворени в 0.5 mL ацетонитрил. Тези проби се съхраняват при -20 градуса (с изключение на транспортирането от полето до лабораторията) в стъклени флакони с тефлонова запушалка с винтова капачка. Останалите мъртви индивиди се съхраняват в етанол за определяне на възрастта в лабораторията чрез изследване на износването на долната челюст под дисекционен микроскоп. Следователно ние знаехме само възрастта на индивидите със задна дата и трябваше да отхвърлим проби, които бяха твърде стари (много износени мандибули; главно събирачи на храна) или твърде млади (до голяма степен неизползвани мандибули; няколко строители). Това намали и промени размера на нашата извадка, така че в крайна сметка имахме проби от хемолимфа от 14 стари непълнолетни работници в строителството и 3 стари непълнолетни работници, търсещи храна. Всеки индивид произхожда от различна колония, за да осигури независима проба.

JH се екстрахира след протокол за разделяне на течна фаза8, както е описано в ³5. RIA протоколът, разреждания на JH-специфичния антисерум, концентрация на радиоактивност на [10-3H(n)]-ювенилен хормон III (специфична активност 19.4 Ci/mmol Perkin Elmer Life Sciences, Waltham, MA), и диапазонът на стандартната крива (50-10 ng), установен с небелязан ювенилен хормон III (Fluka, Buchs, Швейцария), по същия начин, както в нашето предишно проучване35. JH титрите на пробите са изчислени въз основа на нелинейна регресия с четири параметъра върху стойностите на стандартната крива (електронна таблица за изчисления на ImmunoAssay, Bachem, Bubendorf, Швейцария) и са изразени като JH-III еквиваленти （pg/μL хемолимфа）. JH-III е единствената JH част, произведена от термитни corpora allata и открита в хемолимфата **

Ооцитите и наборите от данни за JH бяха анализирани с помощта на непараметрична статистика. Ние сравнихме честотата на поява на ооцити между събирачи и строители, използвайки анализ на непредвидени обстоятелства, докато количеството на JH титри между събирачи и строители беше анализирано с U-тест на Mann Whitney. Всички тестове бяха двустранни и статистическите анализи бяха направени с IBM SPSS 23.082. Тествахме мощността им с помощта на G*Power 3.1.9.783.84. Наличност на данни

Необработените данни за последователности, използвани в тази публикация, са депозирани в архива на NCBI SRA под присъединяване PRJNA727164. Данните, използвани за генериране на фигури, са предоставени в този документ.

Тази статия е извлечена от https://doi.org/10.1038/s41598-021-97515-w