Методи за контрол на качеството на Cistanche deserticola

за повече информация:ali.ma@wecistanche.com

Shi Ziyi, Wu Yun, Zhu Yuemei и др.

Традиционната китайска медицинаЦистанчее сочно стъбло наCistanche deserticolaYC Ma или Cisanche tubulosa (Schenk) Wight със сухи люспести листа. Има функциите на тонизиране на бъбречния ян, подхранване на есенция и кръв, овлажняване на червата и лаксативи и др. Използва се най-вече при дефицит на бъбречен ян, дефицит на есенция и кръв, импотентност и безплодие, болезненост и слабост на кръста и коленете, слабост на мускулите и костите, чревна сухота и запек. Съвременните фармакологични изследвания показват товаЦистанчеима много функции като подобряване на сексуалната функция, устойчивост на болестта на Алцхаймер и болестта на Паркинсон, подобряване на способността за учене и памет, против стареене, против умора, защита на черния дроб и слабително [4]. Голям брой изследвания потвърждават, че фенилетаноидните гликозиди вCistanche deserticolaимат очевидни ефекти върху подобряването на способността за учене и памет, като се противопоставят на болестта на Алцхаймер и болестта на Паркинсон (4, олигозахаридите и полиолите имат ефект на слабително и слабително 64). "Фармакопеята на Китайската народна република" измерва само съдържанието на фенилетаноидни гликозиди ехинакозид и вербаскозид вЦистанчеdeserticola, но не измерва активните компоненти на неговия слабителен ефект, така че е трудно да се постигне цялостен анализ на лекарствените материали наЦистанчеdeserticola. Контрол на качеството. За да се преодолее това ограничение и да се създаде многоиндексна система за оценка на качеството, свързана с основните функции и показания наЦистанчеdeserticola, това проучване използва HPLCELSDP4 за установяване на метод за количествен анализ на бетаин, манитол, фруктоза, глюкоза и захароза в медицинските материали наЦистанчеdeserticola. В допълнение, 58 партиди отЦистанчеdeserticolaлекарствени материали от различен произход и 10 партиди лекарствени материали отЦистанчев района на Хотан в Синдзян бяха тествани, което може да предостави справка за цялостен контрол на качеството и оценка на медицинските материали наЦистанчеdeserticolaв бъдеще.

Щракнете, за да получите полезни продукти за екстракт от цистанче

1 Инструмент и реактиви

1.1 Инструменти

Електронен баланс Sartorius BT25 S, BS 124 S (Beijing Sartorius Balance Co., Ltd.); Agilent 1100 високоефективна течна хроматография; ALLTECH 2000ES детектор за разсейване на изпарителна светлина (EISD); Ултразвукова почистваща машина KQ 250 (Kunshan Ultrasonic Instrument Ltd). 1.2 Реактиви

Контролно вещество: бетаин (партида: {{0}}, чистота: 99,2 процента), манитол (партида: 10053-201304, чистота: 99,0 процента), D-фруктоза (партида: 111504-201703 , чистота: 99,8 процента), D - безводна глюкоза (партиден номер: 110833-201506, чистота: 99,9 процента), захароза (партиден номер: 111507-201303, чистота: 99,8 процента), всички закупени от Китайския национален институт за контрол на храните и лекарствата.

Лечебните материали наЦистанчеdeserticolaбяха събрани във Вътрешна Монголия, Синдзян, Гансу и други места, с общо 58 партиди. Те бяха идентифицирани от професор Ту Пенгфей от Факултета по фармация на Пекинския университет като изсушени месести стъбла наЦистанчеdeserticolaYCMa на растението Lidangaceae, както е показано в таблица 3.

Лечебните материали наЦистанчеdeserticolaбяха събрани в района Хотан, Синдзян, в общо 10 партиди. Те бяха идентифицирани от професор Tu Pengfei от Факултета по фармация на Пекинския университет като изсушени месести стъбла с люспести листа на Cistanche tubulosa (Schenk) Wight от растението Liedangaceae, както е показано в таблица 4.

1.3 Реактиви

Ацетонитрилът е хроматографски чист (Tianjin Boshiqi Technology Development Co., Ltd.), метанолът е хроматографски (Tianjin Saifu Century Technology Development Co., Ltd.), а водата е свръхчиста вода.

2 Методи и резултати

2.1 Хроматографски условия

Хроматографската колона беше ShodexAshaipak NH2P-50 4E полимерна гел колона (250 mm × 4.6 mm, 5 μm); подвижната фаза е ацетонитрил-вода (77∶23); скоростта на потока беше 0,7 mL·min-1; температурата на колоната е 25 градуса; Детектор за разсейване на светлина (ELSD): Температурата на дрейфовата тръба беше 100 градуса, а скоростта на потока на газа носител беше 3 L·min-1.

2.2 Приготвяне на сравнителен разтвор

Вземете подходящо количество референтно вещество бетаин, манитол, фруктоза, глюкоза и захароза, претеглете го точно, добавете вода, за да направите смесен разтвор, съдържащ 0.25 mg бетаин, манитол, фруктоза, глюкоза и захароза на 1 ml, разклатете добре и вземете.

2.3 Приготвяне на тестовия разтвор

Вземете около 1.0 g отЦистанчемедицински прах (прекаран през сито № 4), претеглете го точно, поставете го в кафява мерителна колба от 100 ml, добавете точно 50 ml 50 процента метанол, запушете го плътно, разклатете го, претеглете накиснете го за 30 минути и след това ултразвуково (мощност 250 W, честота 35 kHz) за 40 минути, извадете го, оставете го да изстине, претеглете го отново, добавете 50 процента метанол, за да намалите масата, разклатете добре и оставете стои. Прецизно аспирирайте 5 mL супернатант, поставете го в мерителна колба от 25 mL, разредете до марката с 50 процента метанол, разклатете добре и филтрирайте през 0,2 μm микропореста мембрана.

2.4 Метод на определяне

Прецизно изтеглете съответно 5 и 10 μL от референтния разтвор и 5 μL от тестовия разтвор, инжектирайте ги в течния хроматограф, запишете площта на пика и изчислете според логаритмичното уравнение на външния стандартен двуточков метод.

2.5 Тест за пригодност на системата

Съгласно хроматографските условия по точка 2.1, изтеглете точно 5 μ от референтния разтвор и съответно тестовия разтвор и ги инжектирайте във високоефективната течна хроматография, измерете и запишете хроматограмата, както е показано на фигура 1. Хроматографските пикове от тестовата проба показва същото време на задържане като хроматографските пикове на референтното вещество, разделителната способност е добра и хроматографските условия са изпълними.

Забележка: A. Контролно вещество; Б.ЦистанчеNo 49 проба; 1. бетаиме ; 2. фнукесе ; 3. манибол; 4. глюкоза; 5. успявам

Фиг. 1 HPLC профили на референтното вещество и пробата от Cistanche No. 49

2.6 Изследване на линейните зависимости

Вземете подходящи количества бетаин, манитол, фруктоза, глюкоза и захароза като референтни вещества, претеглете ги точно и добавете вода, за да направите всеки 1 ml, съдържащ бетаин 0.496 0 mg манитол {{3} }.994 0 mg, плод 1.0126 mg, глюкоза 1.0882 mg и захароза 0.9922 mg. 0.0992, 0.2480, 0.4960, 0.9920, 1.9840, 2.9760 μ, манитол 0.1988, 0.4970 , 0,9940, 1,9880, 3,9760, 5,9640 μ, фруктоза 0,5063, 1.012 6. 2.025 2. 4.050 4. 5.063 0. Хроматографските условия бяха инжектирани и открити и площта на пика беше записана; след това стойността на логаритъм X (ug) на всяко количество инжектирано референтно вещество се използва като абциса, а стойността на логаритъм Y на площта на пика е ордината и се начертава стандартната крива. Резултатите са показани в таблица 1.

Таблица 1 Резултатите от изследването на линейната зависимост

2.7 Тест за точност

Изтеглете точно тестовия разтвор (проба № 49), при горните хроматографски условия, инжектирайте непрекъснато 6 пъти, измерете площта на пика на всеки хроматографски пик и изчислете неговата RSD стойност. Резултати RSDs на пиковите площи на бетаин, манитол, фруктоза, глюкоза и захароза бяха съответно 0.84 процента, 2,56 процента, 1,27 процента, 2,62 процента и 1,52 процента, което показва, че прецизността на инструмента, използван в това проучване беше добро. 2.8 Тест за повторяемост

Вземете 6 проби отЦистанчеdeserticola(проба № 49), приготвя се тестовият разтвор по метода на т. 2.3, измерва се пиковата площ на всеки хроматографски пик и се изчислява съответното съдържание. Резултати Средното съдържание на бетаин, манитол, фруктоза, глюкоза и захароза (n=6) е 7,93 процента, 7,27 процента, 8,74 процента, 2,75 процента и 4,81 процента, а RSDs са 2,83 процента, 1,94 процента, {{ 18}}.97 процента и съответно 2.60. процента, 1,40 процента, което показва, че методът има добра повторяемост. 2.9 Тест за стабилност

Вземете тестовия разтвор (проба № 49), инжектирайте го на 0, 4, 8, 12, 16 и 24 часа след подготовката за измерване и изчислете RSD стойността на всеки хроматографски пик. Резултати RSDs на бетаин, манитол, фруктоза, глюкоза и захароза бяха съответно 0.61 процента, 1.92 процента, 1.34 процента, 2.83 процента и 0.69 процента, което показва, че тестовият разтвор има добро стабилност в рамките на 24 часа. 2.10 Тест за възстановяване

Вземете 6 проби отЦистанчеdeserticolaс известно съдържание (проба № 49), претеглете точно 0.25g, поставете ги в 50mL кафява мерителна колба и точно изтеглете 25mL от смесения референтен разтвор при концентрация 1: 1 (който съдържа {{10}}.7900 mg бетаин). mL-, фруктоза 0,7236 mg"mL-1, манитол 0,8812 mg·mL-1, глюкоза 0,2708 mg·mL-1, захароза 0,4883 mg'mL-') бяха добавени към пробата, и тестовият разтвор беше приготвен съгласно метода в 2.3. Открит съгласно гореспоменатите хроматографски условия, изчислено неговото възстановяване, резултатите са показани в таблица 2, което показва, че методът има добра точност.

Таблица 2: Резултати от измерването на степента на възстановяване на пробата от 5 тествани компонента (n=6)

3 Дискусия

3.1 Избор на компоненти на индекса

Общите олигозахариди наЦистанчеса ефективните части наЦистанчеза лаксативи. Авторът анализира химичния състав на тази част чрез LC-MS и референтното вещество и установи, че тази част се състои главно от бетаин, манитол, фруктоза, глюкоза и захароза. Следователно, тези 5 компонента бяха избрани като индексни компоненти наЦистанчеdeserticolaи беше установен методът за определяне на съдържанието.

3.2 Избор на хроматографски колони

Петте компонента, които трябва да бъдат тествани, бетаин, манитол, фруктоза, глюкоза и захароза, са относително полярни и не могат да бъдат задържани в колоната Cn с обърната фаза. Обикновено пиковете се появяват в рамките на 1-2 минути и компонентите не могат да бъдат разделени. Амино колони Waters Bonoapar NH, (300 mm × 4,6 mm, 10 μm) и Phenomenex Bondclone 10 NH, (300 mm × 3,9 mm, 10 μm) за отделяне на захар и полиоли и амино колони на полимерна основа Prevail Carbohydrate ES (250 mm ×4,6 mm, 5 μm), ShodexAshaipak NH2P-50 4E (250 mm × 4,6 mm, 5 μm). Резултатите показват, че амино колоната с полимерна матрица може ефективно да раздели тези пет компонента.

3.3 Избор на детектор

Петте компонента, които трябва да бъдат тествани, нямат очевидна UV абсорбция и съдържанието на UV детектора не може да бъде директно определено. Следователно, тази статия установи метод за количествен анализ на компонентите на захарния алкохолЦистанчеdeserticolaизползвайки HPLC-EISD. Резултатите показват, че методът има висока чувствителност, добра повторяемост и висока точност и може да се използва за контрол на качеството наЦистанчеdeserticolaи други медицински материали, съдържащи бетаин и захарни алкохоли.

3.4 Изследване на метода за приготвяне на тестовия разтвор

Различни екстракционни разтворители, включително вода, 30 процента метанол, 50 процента метанол, 70 процента метанол, метанол и т.н., бяха сравнени съответно. Резултатите показват, че с изключение на малко по-ниската степен на екстракция на 70 процента метанол и метанолов разтворител, няма значителна разлика в други разтворители, така че е направен директен подбор. 50 процента метанол се използва като разтворител в точка "Определяне на съдържанието" наЦистанчевъв фармакопеята на Китайската народна република и се приготвя съгласно метода за приготвяне на съответния тестов разтвор и след това се разрежда 5 пъти, за да се определят компонентите на захарния алкохол.

3.5 Откриване и анализ на проби с различни основи

В това изследване съдържанието на 5 компонента в 58 партиди отЦистанчеdeserticolaи 10 партиди отЦистанчеdeserticolaса определени лекарствени материали. Масовите фракции на бетаин, манитол, фруктоза, глюкоза и захароза в 58 партиди отЦистанчеdeserticolaпробите бяха 2,73 процента -17.65 процента, 2,46 процента -16.34 процента, 2,52 процента {{10}}.74 процента, 0,97 процента -14.06 процента , 3,15 процента -27.16 процента ; Манитолът, фруктозата и глюкозата бяха 1.00 процента -13.04 процента, 2,98 процента -8.85 процента, 1,09 процента -5.33 процента в 10-те партиди отЦистанчепроби, съответно, и бетаин и захароза не бяха открити. Съдържанието на лекарствените материали се различава значително между партидите и няма правило, което да се следва, което предполага необходимостта от установяване на стандарт за определяне на съдържанието за контрол на качеството на лекарствените материали. В допълнение, този метод може ефективно да разграничи два видаЦистанчебазови растения, а именно,Цистанчене съдържа бетаин и захароза, докато съдържанието на тези два компонента е по-високо вCistanche deserticola. Това също осигурява основа за анализиране на разликите в текстурата и местообитанието на двата медицински материала наCistanche deserticola. В сравнение с лекарствения материал наCistanche deserticola, текстурата е по-мека и е известна на местно ниво като "Soft Dayun", докатоЦистанчесе нарича "Chai Dayun", защото съдържа захароза (3,15 процента ~ 27,16 процента). ).Cistanche deserticolaе разпространен главно в Алкса във Вътрешна Монголия, докатоЦистанчее разпространен главно в района на Хотан в Синдзян, където температурата е по-висока от тази в района на Алкса и често се използва капково напояване в местния район, но след като температурата падне,Цистанчеще претърпи сериозни щети. Увреждането от замръзване, от една страна, има известна връзка с високото съдържание на вода, а от друга страна, има нещо общо със съставките, които съдържа. Бетаин 243 е важно осмотично регулиращо вещество, което играе важна роля за повишаване на устойчивостта на растенията към стрес, като устойчивост на соленост, суша, ниска температура и силна светлина. Именно поради високото съдържание на бетаин, който се съдържа вCistanche deserticolaче има по-добра устойчивост на сол-алкали, суша и щети от замръзване отЦистанчеи има относително широко разпространение.

3.6 Анализ наЦистанчеdeserticolaпроби от различен произход

Сред 58-те партиди пустиняцистанчепроби от медицински материали, 45 партиди са произведени от Alxa League, Вътрешна Монголия, 3 партиди са от Wangyedi (окръг Dengkou), Вътрешна Монголия, а 1 партида е неизвестна. Всичките 49 партиди лекарствени материали са с различно съдържание на 5 компонента. Въпреки това няма съществена разлика. Причината за анализа може да е, че всички медицински материали се произвеждат в една и съща пустинна зона, екологията и географската среда са сходни и качеството на продукта е относително еднакво и стабилно. Има 3 партиди, произведени в окръг Минцин, Гансу, и 6 партиди от Синдзян. Според анализа на фигура 2, в сравнение с медицинските материали, произведени във Вътрешна Монголия, основната разлика се отразява в съдържанието на фруктоза и захароза. Съдържанието на захароза в лекарствените материали е относително най-високо, но предвид малкото количество проби от двата произхода, това заключение трябва да бъде потвърдено чрез събиране на повече проби. 3.7 Резюме

В това проучване беше създаден HPLC Wang ISD за едновременно определяне на 5 активни съставки на лаксативи, което предостави по-удобен, ефикасен и точен метод за контрол на качеството наCistanche deserticolaи предостави основа за подобряване на стандарта за качество и по-нататъшно развитие наЦистанчеdeserticola. смислена справка.

Препратки

【1】 Държавна фармакопейна комисия. Фармакопея на Китайската народна република: A 【M】. Пекин: China Pharmaceutical Science and Technology Press, 2015; 135.

【2】 Song Zhihong, Lei Li, Tu Pengfei. Напредъкът на изследванията върху фармакологичната активност наЦистанчеИзложба. Китайска билкова медицина, 2003, 34(9); 113415.

【3】 Сюе Хайян. Jiao Danyuan, Yao Jun. Изследователски статус на фармакологичните ефекти на общите глюкозиди в Cilantro [J]. Китайски вестник по клинична фармакология, 2018 г., 34 (4): 486-488.

【4】 An Chunna, Zhang Hongning, Pu Xiaoping. Напредък на изследванията на неврофармакологията наCistanche deserticolaИзложба [J]. Китайски вестник по фармация, 2011, 46(12): 887-890.

【5】 Gao Yuhong, Ke Zunji. Напредъкът на изследванията върху фармакологичните ефекти наCistanche deserticolaпри лечението на болестта на Алцхаймер []. Shanghai Journal of Traditional Chinese Medicine, 2018, 52(1): 109-112.

【6】 Zhang Baishun, Zhao Xuewen, Chen Shuanghou и др. Слабително действие на изолирани части отCistanche deserticolaЕкспериментални изследвания □. Китайски вестник за традиционна китайска медицина, 2003, 10(1I1): 31-32.

【7】 Zhang Baishun, Chen Shuanghou, Zhao Xuewen и др.Cistanche deserticolaекстракт галактитол Проучване доза-отговор върху действието на изпражненията [J]. Китайски вестник за традиционна китайска медицина, 2003, 10 (12): 28-29.

【8】 Gao Yunjia, Jiang Yong, Dai Fang и др. Изследване на лечебните вещества наCistanche deserticolaза изследване на лаксативи [J]. Съвременна китайска медицина в Китай, 2015, 17(4): 307-311.

【9】 Bao Zhong, Cai Hong, Jiang Yong и др. Три дейности наCistanche deserticolaпри различни фактори на влияние Количествен анализ на компонентите J. Китайска билкова медицина, 2013, 44 (22): 32233230.

【10】 Bao Zhong, Cai Hong, Jiang Yong и др. Определяне наCistanche deserticolaот HPLCEISD Съдържание на галактитол. Journal of Pharmaceutical Analysis, 2007, 27(7): 1004-1006.

【11】 Zhao Kuijun, Liang Lijuan, Bi Dan и др. HPLCELSD определяне наЦистанчеи епруветка Съдържание на галактитол вЦистанче[J]. Китайски вестник за традиционна китайска медицина, 2012, 19(8): 52-54.

【12】 Wang Guiping, Xue Xiaomin, Lu Chao и др. Ефектът на бетаина върху подобряването на устойчивостта на растението към стрес и неговия механизъм на действие. Jiangxi Agricultural Journal, 2014, 26(8): 2226.

【13】 Wang Qingjie, Wang Li. Преглед на изследванията на гените за студоустойчивост на растенията. Селска икономика и технологии, 2018, 29(8): 23-25.