Ехинакозидът подобрява увреждането на черния дроб при диабет
Mar 28, 2022
Контакт:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791
Luo Yang, Xiang Zhang, Min Liao, Yarong Hao *
РЕЗЮМЕ
Цели:Ехинакозид (ECH) е естествено съединение, извлечено от стъблото на растението Cistanche deserticola, има значителни биологични свойства, включително антиоксидантни, противовъзпалителни, невропротективни, антитуморни, хепатопротективни и имуномодулиращи свойства. В това проучване ние имахме за цел да проучим защитните ефекти и механизми на ECH върху диабетно чернодробно увреждане при DB/DB мишки.
Основни методи:Като цяло, 6-седмични DB/DB мишки (n=20) бяха разпределени на случаен принцип в 2 групи: диабетна моделна група (DB/DB група, интрагастрално приложение на нормален физиологичен разтвор, n=10 ) и ECH-третирана група (DB/DB плюс ECH група, n=10). В допълнение, нормалната контролна група включва 6-седмични db/m мишки (db/m група, нормален интрагастрален физиологичен разтвор, n=10). ECH се прилага веднъж дневно в продължение на 10 седмици. Теглото и кръвната захар на гладно (FBG) се измерват на всеки две седмици. HE оцветяването и Oil O оцветяването се използват за оценка на патологичните промени в чернодробната тъкан и съответно натрупването на липиди. Имунофлуоресцентно оцветяване, Western blot и RT-PCR анализ бяха използвани за откриване на експресията на компоненти на AMPK/SIRT1 сигналната ос.
Ключови констатации:Резултатите показват, че прилагането на ехинакозид за 10 седмици може значително да подобри чернодробното увреждане и инсулиновата резистентност при DB/DB мишки (p < 0.01).="" също="" така,="" лечението="" с="" ехинакозид="" спомогна="" за="" намаляване="" на="" липидите="" в="" кръвта="" и="" кръвната="" глюкоза="" (p=""><0,01). освен="" това,="" ech="" активиран="" ampk/sirt1="" сигнализиране,="" регулиран="" пероксизомен="" пролифератор-активиран="" рецептор="" гама="" ко-активатор="" 1="" алфа="" (pgc-1),="" пролифератор-активиран="" рецептор-="" (ppar),="" карнитин="" палмитоилтрансфераза-1a="" (cpt1a)="" при="" db/db="" мишки="" (p=""><>
Значение:Ефектът на ECH може да бъде предизвикан от активирането на чернодробния AMPK/SIRT1 път и неговите фактори надолу по веригата за подобряване на затлъстяването, инсулиновата резистентност и дислипидемията.
cistanche redditподобрявазатлъстяване, инсулинова резистентност и дислипидемия.
1. Въведение
Захарният диабет тип 2 (T2DM) е хронично метаболитно заболяване и сериозна заплаха за човешкото физическо и психическо здраве. Може да причини увреждане на множество органи, включително увреждане на черния дроб. Неалкохолната мастна чернодробна болест (NAFLD) е най-често срещаното чернодробно увреждане [1,2]. Прекомерното натрупване на липиди в хепатоцитите нарушава метаболитния процес и причинява възпаление, чернодробна фиброза и дори рак на черния дроб [3,4]. Патогенезата на заболяването остава неясна. Въпреки че има голямо разпространение на клинично значими чернодробни усложнения при пациенти с T2DM, те често се пренебрегват при лечението. Използваните понастоящем агенти за лечение на диабет включват метформин, сулфонилуреи, тиазолидиндион (TZD) и инхибитори на дипептидил пептидаза-4 (DPP-4). Повечето от тези агенти обаче причиняват чернодробна дисфункция и не се препоръчват при пациенти с чернодробна недостатъчност, което предполага необходимост от изследване на агенти с терапевтична ефективност и нисък профил на нежелани реакции. Проучванията показват антиоксидантни, противовъзпалителни, противотуморни, хепатопротективни и имуномодулиращи свойства на ехинакозид (ECH), основният компонент на Cistanche deserticola [5]. Освен това, пътят на AMP-активираната протеин киназа (AMPK) е признат за основен превключвател на клетъчния енергиен метаболизъм, свързан с регулацията на липидите в черния дроб и терапевтична цел за NAFLD. AMPK засилва активността на заглушаващия регулаторен протеин при бозайници -1(SIRT1) чрез повишаване на клетъчните нива на NAD плюс, което води до деацетилиране и модулиране на активността на низходящите SIRT1 мишени, които включват активирания от пероксизомен пролифератор рецептор-коактиватор 1 (PGC{ {20}} ) [6]. Поради много положителни функции както при алкохолно мастно чернодробно заболяване (AFLD), така и при NAFLD, SIRT1 е широко изследван сред семейството на SIRT. Протеинът е ключов регулатор на метаболизма на липидите и глюкозата и може да подобри инсулиновата чувствителност на черния дроб и други тъкани и да намали чернодробната стеатоза [7]. PPAR- принадлежи към PPARs, подсемейство от ядрени хормонални рецептори, PPAR- подобрява липидния метаболизъм чрез митохондриално и пероксидазно бета-окисление на мастни киселини, медиирано чрез CPT1A. Db/DB мишките са спонтанно затлъстели мишки с диабет тип 2. Тъй като тези мишки пораснат, може да има постепенна проява на диабетни състояния като булимия, затлъстяване, явна хипергликемия, хиперлипидемия и инсулинова резистентност [8]. Патогенезата е подобна на тази, наблюдавана при пациенти с T2DM. Това проучване предполага терапевтичния ефект на ECH върху чернодробно увреждане, предизвикано от T2DM и медиация на този ефект чрез активиране на пътя AMPK/SIRT1 и неговите ефектори надолу по веригата. DB/DB мишките се използват като модел на чернодробно увреждане на T2DM и ECH се прилага интрагастрално.
2. Материали и методи
2.1. Опитни животни
Черният дроб на DB/DB мишки с диабет тип 2 се разглежда като модел за спонтанно чернодробно увреждане на T2DM, db/m мишки се използват като контролна група, а диабетни db/db мишки се използват като моделна група и група, лекувана с ECH (мъжки , на 6 седмици, SPF клас) с 10 мишки във всяка група. Всички мишки са закупени от университета в Нанкин (Институт по биомедицина в Нанкин, Китай; Сертификат за производство на животни №: SCKK (Su) 2015–0001). Животните (n=5 на клетка) бяха настанени в централната лабораторна стая за животни на болница Renmin на университета Ухан (SPF) при стандартни условия на температура (22 ◦C ± 2 ◦C), относителна влажност (60 процента) и цикъл светлина/тъмнина (12 часа/12 часа), с ad libitum достъп до питейна вода и храна по време на експерименталния период от 10 седмици. Експериментите са проведени в съответствие с насоките за етика на експерименталните животни, препоръчани от болница Renmin на университета в Ухан.
2.2. Основни инструменти и реактиви
Глюкомер OneTouch Ultra и тест ленти за кръвна захар (LifeScan Inc., Johnson & Johnson); заешко античовешко моноклонално антитяло SIRT-1 (#9475; CST Company от Съединените щати); AMPK (Ab80039), p-AMPK (Ab23875), PGC-1 (Ab54481), PPAR- (Ab8934) и GAPDH (Ab37168; всички от Abcam Company); CPT1A (15184-1-AP; Wuhan Sanying Biotechnology Co., Ltd); Комплект за откриване на BCA протеинова концентрация (Biyuntian Biotechnology Co., Ltd.); Комплект за приготвяне на SDS-PAGE гел (Google Biotechnology Co., Ltd.); и RT-PCR комплект за обратна транскрипция (Takara, Япония) бяха използвани за експериментите.
2.3. Групиране и администриране на животни
Преди започване на експеримента, {{0}}седмични мишки бяха поставени под карантина за 1 седмица и хранени адаптивно за 1 седмица. Db/DB мишките бяха произволно номерирани и разпределени към групата на диабетния модел (db/db група, n=10) или към групата, лекувана с ехинакозид (db/db плюс ECH група, n =10), и 10 db/m мишки бяха разпределени към нормалната контролна група (DB/m група, n=10). На 8-седмична възраст нормалната контролна и диабетна моделна група мишки бяха интрагастрално администрирани с нормален физиологичен разтвор (0,05 mL/10 g), а третираната с ECH група мишки бяха интрагастрално администрирани 300 mg/kg/d ECH. През този период на мишките беше разрешен ad libitum достъп до храна и вода в продължение на 10 седмици.
2.4. Общо състояние и кръвна захар на гладно
По време на експеримента са наблюдавани здравословното състояние, приема на храна и питейна вода и лъскавината на козината. Започвайки от първата седмица на експеримента, телесното тегло на мишките се измерва на всеки 2 седмици. Кръвни проби за изследване на кръвната захар на гладно са взети от вената на опашката. След 10-седмичното лечение с ECH беше проведен орален тест за глюкозен толеранс (OGTT). След нощно гладуване, на мишките беше дадена глюкоза (2 g/kg телесно тегло) и концентрациите на глюкоза в кръвта бяха оценени преди (0 минути) и 15, 30, 60 и 120 минути след прилагане на глюкоза. Площта под кривата (AUC) се определя с помощта на GraphPad Prism 7.0.
2.5. Колекция от проби
След 10 седмици интервенция, храна, но не и вода, беше задържана за 12 часа, животните бяха анестезирани, за да се получат кръвни проби от ретро-орбиталния плексус. Серумът от събраната кръв бързо се отделя и съхранява при -80 ◦C за определяне на биохимичния индекс. След получаване на кръвни проби, мишките бяха убити и перфузирани с нормален физиологичен разтвор. Черният дроб беше дисектиран и претеглен. Чернодробният индекс (LI) се изчислява по следната формула: LI=[чернодробно тегло (g)/телесно тегло (g)] × 100 процента. Част от свежата чернодробна тъкан се запазва за патологичен анализ, а останалата част от чернодробната тъкан се поставя в течен азот за 1 час и след това се съхранява при -80 ◦C за последващо откриване на протеин и количествена полимеразна верижна реакция в реално време ( PCR).
Cistanche опитекстракт
2.6. Хистопатологично изследване на черния дроб
Прясната чернодробна тъкан бързо се отделя и срезът се фиксира в 4% параформалдехид за 24 часа, последвано от дехидратиране и вграждане в парафин. Срезовете бяха депарафинизирани с ксилен и рехидратирани през градиент на етанол във вода. Ядрото и цитоплазмата се оцветяват с хематоксилин и еозин (HE) и се запечатват с неутрална смола след дехидратация. Друга част от тъканта използва срезове, вградени в смес за оптимална температура на рязане (OTC) за оцветяване с маслено червено-O.
2.7. Откриване на биохимични индекси на серум и чернодробна тъкан
Серумните проби бяха изпратени в лабораторния отдел на болница Ренмин на университета Ухан за автоматизиран биохимичен анализ. Индексите на кръвните липиди включват триглицериди (TG), общ холестерол (TC), липопротеинов холестерол с висока плътност (HDL–C), липопротеинов холестерол с ниска плътност (LDL-C). Индексите на чернодробната функция включват глутаминова пирогроздена трансаминаза (ALT) и глутаминова оксалоцетна трансаминаза (AST). Нивата на инсулин на гладно (FINS) се определят с помощта на комплекта ELISA (Meimian Biological Inc. Китай). Построена е стандартна крива на базата на концентрацията и оптичната плътност (OD) на стандартната проба; концентрацията на пробата след това се изчислява от стандартната крива. И накрая, индексът на инсулинова чувствителност (ISI) и индексът на инсулинова резистентност (HOMA-IR) се изчисляват, както следва: ISI=1/(FPG × FINS); HOMA-IR=FPG × FINS/22,5.
2.8. Експресиите на AMPK, p-AMPK, SIRT-1, PGC-1, PPAR- и CPT1A в чернодробната тъкан бяха открити с помощта на Western blot
Замразената чернодробна тъкан се нарязва на секции. За тотална протеинова екстракция, 1 mL RIPA лизат се добавя към 50 g секция и се подлага на центрофугиране при 13, 000 rpm при 4 ◦C за 5 минути, последвано от събиране на супернатантата. Концентрацията на протеин се определя с помощта на комплекта за определяне на концентрацията на протеин BCA. Около 40 ug протеин бяха взети проби от всяка група и прехвърлени към мембраната от поливинилиден флуорид (PVDF). Мембраните се маркират с посочените вторични антитела при стайна температура в продължение на 1 час и се развиват. Анализирани са сивите стойности на всяка протеинова лента и GAPDH е използван като вътрешна референция за полуколичествен анализ.
2.9. Експресиите на p-AMPK и SIRT1 в чернодробната тъкан се откриват чрез имунофлуоресцентно оцветяване
Чернодробните тъкани се фиксират в 4 процента параформалдехид, вграждат се в парафин и след това се разделят на парчета черен дроб с дебелина 10- μm. Добавете 3 процента BSA за 30 минути. Инкубирайте предметните стъкла с първично антитяло за една нощ при 4 ◦C. Покрийте обективната тъкан с вторично антитяло, инкубирайте при стайна температура за 50 минути на тъмно. След това се инкубира с разтвор на DAPI при стайна температура за 10 минути, съхраняван на тъмно място. Добавете реагент за потушаване на спонтанната флуоресценция за инкубиране в продължение на 5 минути. Микроскопско откриване и събиране на изображения чрез флуоресцентна микроскопия.
2.10. SIRT-1, PGC-1, PPAR- и CPT1A mRNA експресии в чернодробната тъкан бяха открити чрез RT-PCR
Използвани са около 100 mg от чернодробната тъкан, съхранявана при -80 ◦C от всяка група. Общата РНК се екстрахира с помощта на комплекта Trizol; методът на ултравиолетова (UV) абсорбция беше използван за определяне на качеството на РНК и тази РНК след това беше обратно транскрибирана в сДНК. SYBR green qPCR беше пуснат на Bio-Rad CFX96 Touch PCR система за откриване в реално време (Bio-Rad Laboratories, Херкулес, Калифорния, САЩ). Праймерните последователности на SIRT-1, PGC-1, PPAR- и CPT1A са проектирани от софтуера Primer Premier5.0 и са синтезирани от Wuhan Seville Biotechnology Co., Ltd., като обслужва гена на икономката GAPDH като вътрешна препратка. Условията на усилване бяха както следва: предварително денатуриране при 95 ◦C, денатуриране при 95 ◦C и отгряване при 60 ◦C (30 s), с общо 40 цикъла. В края на реакцията, специфичността на PCR амплификацията се определя чрез анализ на кривата на разтваряне, стойността на Ct се отчита и относителната експресия на mRNA на целевия ген се изчислява по метода 2-ΔΔCt. Последователностите на праймерите са показани в таблица 1.
2.11. Статистически методи
Статистическият софтуер SPSS22.0 беше използван за обработка на данни и статистически анализ и GraphPad Prism7.0 за чертане. Нормално разпределените данни са представени като средна стойност ± стандартно отклонение (вариация x ± s). Сравнението по двойки между групите беше проведено чрез еднофакторен анализ на дисперсията. Значимостта на разликите между групите беше идентифицирана или с теста за най-малко значими разлики (LSD) (хомогенност на дисперсиите), или с t-теста на Dunnett (нехомогенен) за множество сравнения. Ако данните не съответстват на нормалното разпределение, се използват медианата и квартилната разлика, както и непараметричният тест (тест на Kruskal-Wallis). AP стойност на<0.05 was="" considered="" statistically="">
cistanche мъжки ползизабъбрек
3. Резултати
3.1. ECH подобрява общото здравословно състояние и LI на db/db мишки
По време на експеримента мишките от групата db/m бяха здрави и активни и показаха лъскава козина. Мишките от групата db/db демонстрираха прекомерен прием на вода и храна, затлъстяване, летаргия и приклекнало положение и груба, тъмна коса. В сравнение с мишките от db/db групата, мишките от db/db плюс ECH групата показват подобрени условия във всички проучвания. Нещо повече, тяхното телесно тегло и чернодробен индекс са по-ниски от тези на диабетната моделна група мишки (P < 0.05)="" (таблица="">
Таблица 1 RT флуоресцентни количествени PCR праймери.
Таблица 2 Телесно тегло, мокро тегло на черен дроб и чернодробен индекс при мишките от всяка група.
3.2. ECH намалява кръвната захар на гладно и инсулиновата резистентност и повишава глюкозния толеранс и инсулиновата чувствителност при db/db мишки
С напредването на експеримента, в сравнение с групата на db/m, кръвната захар на гладно в групата на db/db се повишава значително (P< 0.01)="" (fig.="" 1a).="" in="" contrast,="" blood="" glucose="" decreased,="" and="" glucose="" tolerance="" and="" insulin="" sensitivity="" improved="" in="" the="" db/db="" +="" ech="" group="" (p="">< 0.01)="" (fig.="" 1b,="">
3.3. ECH подобрява структурното разстройство на черния дроб и облекчава патологичните промени като натрупване на липиди в db/db мишки
HE оцветяването разкри, че размерът и морфологията на хепатоцитите в db/m групата са нормални и структурите на чернодробните лобули и синусоидите са ясни. Имаше екстензивна хепатоцитна дегенерация в db/db групата, увеличен обем на хепатоцитите, различен размер на ядрото, фокална клетъчна некроза и възпалителна клетъчна инфилтрация в порталната област. В групата db/db плюс ECH имаше значително намалени липидни капчици и възпалителни клетки, некротичните клетъчни увреждания бяха облекчени (фиг. 2А). Микроскопският анализ на чернодробната тъкан, оцветена с маслено червено О, разкрива спретнато подреждане на клетките, без липидни капчици или патологични промени, в групата db/m. В групата db/db клетките са имали нередовно разположение и в цитоплазмата са присъствали голям брой мастни частици с различни размери. В сравнение с db/db групата, броят на липидните капчици в db/db плюс ECH групата е значително по-нисък, което предполага възможния защитен ефект на ECH върху черния дроб (Фиг. 2B, C).
Фигура 1. ECH подобрява глюкозния толеранс и отслабва инсулиновата резистентност на db/db мишки.
3.4. ECH подобрява липидния метаболизъм и чернодробната функция при db/db мишки
В сравнение с db/m групата, нивата на кръвните липиди на TC, TG и LDL бяха значително повишени, а HDL беше значително намален в db/db групата (P < {{0}}.{{4}="" }1).="" нивата="" на="" tc,="" tg="" и="" ldl="" обаче="" бяха="" понижени="" и="" нивото="" на="" hdl="" беше="" повишено="" в="" групата="" на="" db/db="" плюс="" ech="" в="" сравнение="" с="" групата="" на="" db/db="" (p="">< 0.05,="" p="">< 0.01)="" (фиг.="" 3a).="" в="" сравнение="" с="" db/m="" групата,="" нивата="" на="" alt="" и="" ast="" са="" значително="" повишени="" в="" db/db="" групата="" (p=""><0,05, p=""><0,01). нивата="" на="" ast="" и="" alt="" са="" значително="" по-ниски="" в="" групата="" на="" db/db="" плюс="" ech,="" отколкото="" в="" групата="" на="" db/db="" (p=""><0,05, p=""><0,01) (фиг.="" 3b,="">
Фиг. 2. ECH атенюирано структурно разстройство на чернодробната тъкан и натрупване на липиди при мишки с NAFLD.
3.5. Ефектът на ECH върху активирането на AMPK/SIRT1 пътя в различни групи мишки
Според резултатите от Western blot, в сравнение с db/m групата, протеиновите нива на p-AMPK/AMPK, SIRT1, PGC-1, PPAR- и CPT1A в чернодробната тъкан са значително по-ниски в db/db групата ( P < 0.01).="" нивата="" на="" протеин="" обаче="" са="" значително="" по-високи="" в="" db/db="" плюс="" ech="" групата,="" отколкото="" в="" db/db="" групата="" (p=""><0.01) (фиг.="" 4a,="" b).="" освен="" това,="" имунофлуоресцентното="" оцветяване="" показа,="" че="" експресията="" на="" p-ampk="" и="" sirt1="" е="" открита="" очевидно="" в="" чернодробната="" тъкан="" на="" ech-третирани="" мишки,="" отколкото="" db/db="" групата="" (фиг.="">
3.6. Ефект на ехинакозид върху експресията на иРНК на SIRT1 пътя в черния дроб на различни групи мишки
Според резултатите от RT-PCR, нивата на SIRT1, PGC-1, PPAR- и CPT1A намаляват значително в db/db групата в сравнение с db/m групата. Въпреки това, тези нива се повишават значително в db/db плюс ECH групата в сравнение с db/db групата (фиг. 5).
Фиг. 3. Свързаните със серума индекси при мишките от всяка група.
4. Обсъждане
Диабетът е основен медицински проблем в света и се очаква броят на хората с диабет да нарасне до около 592 милиона до 2035 г. [9]. Степента на разпространение на диабета, предимно T2DM, в Китай показва значително нарастваща тенденция [10,11]. Съществува сложна връзка между T2DM и чернодробното заболяване и NAFLD, характеризиращо се с прекомерно отлагане на мазнини в черния дроб, е най-често срещаното чернодробно увреждане, причинено от T2DM и най-честото хронично чернодробно заболяване в света [12,13]. Клиничните генетични изследвания показват, че генът, свързан с T2DM, е свързан с повишен ИТМ, хиперхолестеролемия и намален HDL-C, които придават по-висок риск от NAFLD [14]. NAFLD е тясно свързана с инсулиновата резистентност и дислипидемията и следователно е силно разпространена при пациенти с T2DM и/или затлъстяване. Въпреки че няколко метаболитни фактора изглежда са свързани с развитието на NAFLD, неговата патогенеза остава до голяма степен неясна и сложна [15]. Cistanche deserticola е многогодишно паразитно растение, което расте върху корените на пясъчни растения. Според китайската фармакопея, Cistanche deserticola се използва като традиционно лекарство за лечение на бъбречни заболявания и безплодие [16,17]. През последните години проучвания потвърдиха, че Cistanche deserticola може значително да инхибира повишаването на нивата на кръвната захар на гладно и след хранене при мишки с диабет, да подобри инсулиновата резистентност и дислипидемията и да подпомогне загубата на тегло [18]. Като основен компонент на Cistanche deserticola, ECH се очаква да допринесе допълнително за подобряване на чернодробното увреждане, свързано със ЗД. Нашите експериментални резултати разкриха, че затлъстяването и диабетът могат да причинят чернодробно увреждане при мишки, характеризиращо се със значително повишаване на серумните нива на ALT и AST и типични хистопатологични промени. ECH значително намалява LI и кръвната глюкоза, намалява нивата на TC, TG и LDL, повишава нивата на HDL и подобрява инсулиновата чувствителност. Хистопатологичното изследване разкрива намалена дегенерация на хепатоцитна стеатоза и възпалителна клетъчна инфилтрация при мишки, третирани с ECH, потвърждавайки, че агентът може да подобри увреждането на черния дроб при затлъстели мишки с диабет.
AMPK е силно запазена протеин киназа, широко разпространена в организмите и се нарича рецептор за енергиен метаболизъм. Той играе роля в облекчаването на оксидативния стрес, възпалението, пролиферацията и апоптозата [19]. Активирането на ензима чрез индиректни активатори привлича научното внимание за лечение на диабет, затлъстяване, рак и други свързани метаболитни нарушения [20,21]. Той може да регулира липидния метаболизъм чрез няколко подхода, като инхибиране на синтеза на мастни киселини и триглицериди, инхибиране на синтеза на холестерол и насърчаване на окисляването и разграждането на мастни киселини [22]. В черния дроб AMPK регулира липидния метаболизъм чрез фосфорилиране.
Когато вътреклетъчното съотношение AMP към ATP се увеличи, AMPK се активира, увеличавайки p-AMPK/AMPK и регулирайки нагоре експресията на SIRT1 чрез увеличаване на клетъчните нива на NAD плюс [23,24]. SIRT1, NAD-зависима деацетилаза, наскоро беше доказано, че е свързана с патофизиологията на NAFLD [25]. Ензимът участва в различни клетъчни физиологични процеси, като липидна и глюкозна хомеостаза и инсулинова чувствителност, и е ключов регулатор на метаболизма [26]. Пациентите със затлъстяване, особено тези с инсулинова резистентност, диабет и NAFLD, имат по-ниски нива на SIRT1 [27,28]. Цена и др. са изследвали ролята на SIRT1 в превенцията на чернодробна стеатоза и са установили, че експресията на SIRT1 е намалена при пациенти с NAFLD [29]. Други проучвания показват, че хепатоцитно-специфичният нокаут на SIRT1 може да намали окисляването на мастни киселини и да предизвика стеатоза и възпаление в черния дроб, докато свръхекспресията на SIRT1 може да подобри липидния метаболизъм през PGC-1 пътя [30]. SIRT1 регулира активността на PGC-1 и двете са от решаващо значение за поддържане на клетъчната енергийна хомеостаза. Следователно SIRT1 и факторите надолу по веригата PGC-1 могат да бъдат основната цел на чернодробно увреждане. PGC коактиваторът е протеин, който може да се свързва с транскрипционни фактори или ядрени рецептори, за да увеличи транскрипционната активност [31]. Повечето транскрипционни фактори се нуждаят от коактиватори, особено PPAR-, главно в окислени тъкани като черния дроб, миокарда и скелетните мускули. Той може да активира генна транскрипция, която насърчава транспорта и окислението на мастни киселини, производството на кетони и глюконеогенезата [32,33]. CPT1A е ключов ограничаващ скоростта ензим в окисляването на мастни киселини. Неговата експресия се регулира от сложни транскрипционни механизми, включващи няколко транскрипционни фактора и коактиватори, включително SIRT1, PGC-1 и PPAR [34]. В това проучване открихме, че при високата концентрация на кръвна глюкоза в db/db групата, натрупването на липиди в хепатоцитите се увеличава с регулирането надолу на факторите надолу по веригата на експресията на сигналния път на AMPK/SIRT1; в групата, третирана с ECH, експресиите на p AMPK/AMPK, SIRT1 и PGC-1 бяха значително повишени, а експресиите на факторите надолу по веригата PPAR и CPT1A бяха значително увеличени, което показва, че сигналната ос AMPK/SIRT1 и нейните фактори надолу по веригата играят полезна роля при лечението на диабетно чернодробно увреждане (фиг. 6). Предоставените тук данни обаче се основават на in vivo експерименти; следователно са необходими допълнителни in vitro изследвания, за да се потвърди влиянието на ECH върху сигналните пътища AMPK/SIRT1 и ефекторните протеини.
Като цяло, ECH може да регулира кръвната глюкоза и липидния метаболизъм чрез регулиране на експресията на AMPK/SIRT1 и неговите фактори надолу по веригата, като по този начин подобрява диабетното чернодробно увреждане.
ECH цистанчемогарегулират кръвната глюкозаилипиден метаболизъм.