Ефекти на общите гликозиди на Cistanche Deserticola върху увреждане от оксидативен стрес и клетъчна апоптоза при плъхове с церебрална исхемия-реперфузия Ⅰ
Mar 15, 2024
Абстракт
Цел: Да се изследват ефектите и възможните механизми наCistanche deserticola общи гликозиди(GCs) за увреждане от оксидативен стрес и апоптоза на нервни клетки при плъхове с церебралнаисхемично реперфузионно увреждане(CIRI).
Методи: Моделът на оклузия на средната мозъчна артерия (MCAO) е конструиран в моделни плъхове, като се използва методът на емболизация с шев. След като моделът беше успешно установен, на плъховете в групата на лекарството (GCs) бяха дадени GCs 50 mg/(kg·d) чрез сонда за 14 последователни дни; на плъховете в групата с фиктивна операция (Sham) и моделната група (Model) са дадени еднакви количества нормален физиологичен разтвор. Перорално приложение. След приложението е използван методът Longa score за оценка на неврологичния дефицит; след това плъхове бяха умъртвени и беше извършено ТТС оцветяване, за да се изчисли процентът на зоната на церебралния инфаркт; Методът ELISA се използва за откриване на серуммалонов диалдехид(MDA) съдържание,супероксид дисмутаза(SOD) иГлутатион пероксидаза (GSH-Px)дейност; Уестърн блот за откриване на ядрен фактор E2-свързан фактор 2 (Nrf2), хемоксигеназа-1 (HO-1) и B в мозъчна тъканКлетъчен лимфом/левкемия-2 (Bcl-2), Bcl-2-свързан X протеин (Bax) и експресия на каспаза-3 (Caspase-3).
Резултати: В сравнение с групата на Sham, групата на модела има повишен неврологичен дефицит, увеличен процент на зоната на мозъчен инфаркт,повишено съдържание на MDA, намалени активности на SOD и GSH-Px и намалено ниво на експресия на протеини Nrf 2, HO -1 и Bc l-2 Нивата на протеинова експресия на Bax и Caspase-3 се увеличиха; в сравнение с моделната група, оценката на неврологичния дефицит на плъховете в групата с GCs намалява, процентът на зоната на мозъчен инфаркт намалява,Съдържанието на MDA намалява, активността на SOD и GS H-Px се увеличава, нивата на протеинова експресия на Nrf 2, HO -1 и Bcl - 2 се повишават и нивата на протеинова експресия на Bax и Caspase - 3 намаляват. Заключение: GCs могат ефективно да намалят церебралната исхемия-реперфузионно увреждане и неговият механизъм може да е свързан с активирането на пътя Nrf 2 / HO - 1, като по този начин намалява нивата на оксидативен стрес и инхибира апоптозата на нервните клетки.
[Ключови думи]Cistanche deserticola общи гликозиди; церебрална исхемия-реперфузионно увреждане; оксидативен стрес; клетъчна апоптоза
НАТУРАЛЕН ОРГАНИЧЕН ЕКСТРАКТ ОТ ЦИСТАНША
Кликнете, за да получите повече подробности
Поддържаща услуга на Wecistanche-най-големият износител на cistanche в Китай:
Имейл:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/телефон:+86 15292862950
Пазарувайте за повече подробности за спецификациите:
https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop
Церебрална исхемия-реперфузия,
CIS е заболяване с изключителновисока заболеваемост, уврежданеинива на смъртност. Мозъчните клетки са изключително чувствителни към исхемия и хипоксия, така че реканализацията на мозъчните кръвоносни съдове възможно най-скоро е най-ефективният начин за справяне с острия исхемичен инсулт. Интравенозната тромболиза и механичната тромбектомия понастоящем са широко използвани методи, но поради тяхната относителна
Само поради тесния времеви прозорец и други неконтролируеми фактори<10% of stroke patients can achieve vascular recanalization within an effective time. Реперфузия на церебрална исхемияCIRI е вид възстановяване на мозъчните кръвоносни съдове от насложена стеноза А патологично увреждане, което възниква по време на кръвния поток. Понастоящем се смята, че неговият патологичен механизъм може да бъде свързан с възбуждаща аминокиселинна токсичност, претоварване с калций, освобождаване на възпалителни фактори и натрупване на свободни кислородни радикали, причинени от увреждане на митохондриите [1], което в крайна сметка води до разрушаване на кръвно-мозъчната бариера, нарушения на микроциркулацията , апоптоза на нервните клетки и некроза [1] 2] и серия от реакции, като по този начин допълнително влошават неврологичните дефицити.
Общите гликозиди на Cistanche deserticola (гликозиди на цистанче, GCs) се извличат от традиционната китайска медицина Herba Cistanche Основната активна съставка се извлича от стъблата и корените на инча). Предишни проучвания показват, че GC могат ефективно да инхибират липидната пероксидация, да подобрят функцията на митохондриите, да пречистват излишните свободни кислородни радикали, да инхибират освобождаването на възпалителни цитокини, да намалят цитотоксичността, антитромбоцитната агрегация, да инхибират клетъчната пролиферация, да инхибират невронната апоптоза и да намалят нивата на хормоните, като по този начин има анти-стареене, анти-тумор, анти-депресия, повишава имунитета, подобрява исхемичните сърдечно-съдови и мозъчно-съдови заболявания, подобрява способностите за учене и памет и когнитивните функции и подобрява репродукцията [3].
Проучванията показват, че GC могат да намалят окислителното увреждане на клетките и да поддържат целостта на кръвно-мозъчната бариера.
[4]; GC могат ефективно да подобрят жизнеспособността на клетките и да блокират възпалението и апоптозата, предизвикани след исхемия-реперфузия [5]; Nrf 2 играе важна роля в противовъзпалителните и антиоксидантни процеси [6]. Въз основа на горния фон, тази статия има за цел да проучи допълнително ефектите и възможните пътища на GC върху оксидативния стрес и апоптозата след CIRI чрез възпроизвеждане на модела CIRI.
1 Материали и методи
1. 1 лекарства и реактиви GC (SN-5692, чистота 98%, западен
Anshenong Biotechnology Co., Ltd.), 2% разтвор на багрило трифенилтетразолиев хлорид (TTC) (Beijing Solebao Technology Co., Ltd.), комплект ELISA (Beijing Boosen Co., Ltd.), комплект за количествен анализ на BCA протеин (USA Cell Signaling Technology Company), заешки анти-миши антитела Bcl-2, Bax, Caspas Антитела като e-3, Nrf 2, HO-1 и кози анти-заешки вторични антитела бяха закупени от Proteintech Company от Съединените щати.
1. 2 инструмента
Центрофуга (Модел: TDL-40B, Shanghai Anheng Scientific Instrument Factory), Четец на микроплаки (Модел: Max-M5, American Molecular Devices Company), SDS-PAGE инструмент за електрофореза (модел: DYY-7C, Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd. Company), гел скенер (Модел: 4466611, US BIO-RAD Company).
1. 3 животни
Мъжки плъхове Wistar [SCXK (Пекин) 2019-0010], чист клас, на възраст 8 седмици, телесно тегло 250-280 g.
1. 3 метода
1. 3. 1 Групиране и моделиране
Плъховете бяха разделени на фалшива група (Sham), моделна група (Model) и лекарствена група (GCs), като се използва прост метод на рандомизация. Във всяка група имаше 15 плъха. Те бяха адаптивно отгледани за 1 седмица и след това моделирани. Строго гладувайки и гладувайки 12 часа преди операцията, групата Модел и групата GCs използваха метода за емболизация на конците [7], за да създадат оклузия на средната церебрална артерия (оклузия на средната церебрална артерия). оклузия, MCAO) модел на плъх, отстраняването на ембола се извършва след 2 часа исхемия, за да се постигне реперфузия. , запишете началния час на реперфузията. Раната се зашива, кожата се дезинфекцира с йодофор и животните се връщат в клетката и се отглеждат, след което се перфузират за 24 часа. Операцията за плъховете в групата Sham беше същата като тази за моделните плъхове, но не беше извършено запушване. Накрая, 10 плъха във всяка група бяха задържани за последващи експерименти.
1. 3. 2. Начин на приложение
Вземете GCs прах и добавете чиста вода, за да приготвите разтвор от 15 mg/mL. Предварителните проучвания показват, че дозата от 50 mg/(kg·d) е по-добра от другите дозови групи [8], така че дозата, избрана за този експеримент, е същата като преди. На плъхове в групата GCs бяха дадени GCs чрез сонда след 24 часа исхемия и реперфузия, а на плъхове в групата Sham и групата на модела беше даден равен обем нормален физиологичен разтвор чрез сонда за 14 дни.
1. 3. 3 Оценка за неврологичен дефицит
Методът за оценяване на Longa [7] беше използван за оценяване 24 часа след операцията и моделни плъхове с резултати от 1 до 3 бяха запазени за последващи експерименти. Резултат след последната доза. 0 точки: Няма
Неврологични симптоми; 1 точка: лек неврологичен дефицит, контралатералният преден крайник се огъва и повдига при повдигане на опашката, а адуктите на рамото; 2 точки: умерен неврологичен дефицит, контралатералният преден крайник се огъва и повдига при повдигане на опашката, аддукция на рамото, завъртане в кръг към противоположната страна на лезията при ходене; 3 точки: тежък неврологичен дефицит, наклон към противоположната страна на лезията при ходене; 4 точки: несъзнателни и автономни дейности.
1. 3. 4 Определяне на процента на зоната на мозъчен инфаркт
След последното приложение, 4 плъха от всяка група бяха избрани на случаен принцип, дълбоко анестезирани, обезглавени и мозъците им бяха отстранени бързо.
Бързо замразете мозъчната тъкан в хладилник с -20 градуса за 20 минути. След като мозъчната тъкан е относително фиксирана, извадете я. Започвайки от пресечната точка на предния полюс на мозъка до оптичната хиазма и от челото до тила, изрежете мозъка на плъха по коронарната равнина. Нарязват се на 5 парчета мозък с дебелина 2 мм, потапят се в 2% разтвор на ТТС, поставят се във водна баня 37 градуса за боядисване за 15 минути, обръщат се и се боядисват още 15 минути. Накрая мозъчните срезове бяха потопени в 4% разтвор на параформалдехид и фиксирани за 12 часа, преди да бъдат фотографирани. Нормалната мозъчна тъкан е показана в червено, а инфарктната мозъчна тъкан е показана в бяло. Използвайте софтуер за изображения, за да анализирате и изчислите честотата на инфаркта на всеки мозъчен срез. Честота на инфаркта=инфарктна площ/обща площ на мозъчния срез × 100%.
1. 3. 5 Откриване на индикатори, свързани с оксидативен стрес
Анестезирайте плъха, вземете 4 mL кръв от коремната аорта, разпределете я в чисти EP епруветки и я поставете в хладилник при 4 градуса за 0. Центрофугирайте при 3 500 r/min за 5 часа при 4 градуса за 15 минути, вземете супернатантата и накрая запазете серума от 3 плъха във всяка група. Съдържанието на малондиалдехид (MDA) и супероксид дисмутаза (супероксид дисмутаза) се определя съгласно метода на работа на комплекта ELISA. е дисмутаза,
SOD), активност на глутатион пероксидаза (глутатион пероксидаза, GSH-Px).
1. 3. 6 Уестърн блот откриване
Оксидативният стрес и протеините, свързани с апоптозата, бяха измерени за измерване на експресията на протеини Nrf 2, HO -1, Bcl -2, Bax и Caspase -3 в мозъчната тъкан. Три плъха бяха избрани от всяка група и беше взето подходящо количество мозъчна кора от болната област, към него беше добавен лизиращ разтвор и концентрацията на протеин беше изчислена след екстракция на протеин. След електрофореза с протеинов гел, прехвърляне към мембрана, блокиране с блокиращ разтвор за 2 часа, изплакване и след това инкубиране с първично антитяло при 4 градуса за една нощ, на следващия ден TBST се отстранява, изплаква се и се добавя вторично антитяло за инкубиране за 2 ч. Поставете целевата лента върху анализатора за изображения, за да анализирате стойността на сивото. Изчислете относителната стойност на сивото на лентата, стойността на относителната сива лента на лентата=целева стойност на сивото на лентата / вътрешна референтна стойност на сивото на лентата.
1. 4 Методи за статистически анализ
Приложение за данни SPSS 25. 0 софтуер за анализ на данни и статистическите графики в тази статия са начертани със софтуера GraphPad Prism 8. Резултатите от данните, съответстващи на нормалното разпределение, са изразени като средно ± стандартно отклонение. Еднофакторен анализ на дисперсията беше използван за сравнения между множество проби, а LSD-t беше използван за сравнения между две независими проби. Тест, с P < 0. 05 показва, че разликата е статистически значима.
