Ефекти на суровия полизахарид от Cistanche Deserticola върху антитяло срещу вирусна ваксина срещу шап и подгрупа на Т клетки

За контакт: Одри Хуaudrey.hu@wecistanche.com

ЧЖАН Ай-Лиан; BA Xue-li; УАН Дан-янг; ZHAO Bing

Болест на шап (шап)е заболяване, причинено отвирус на болестта шап (FMDV)който се разпространява сред чифтокопитните животни, сериозно застрашавайки здравето на добитъка и причинявайки огромни икономически загуби. Ваксинацията се използва широко като ефективно средство за предотвратяване на болестта шап и е постигнала забележителни резултати. Поради слабата имуногенност на инактивирания антиген на вируса на болестта шап, често е необходимо да се добави адювант, който да играе ролята му [1-2]. Понастоящем често използваният адювант в търговските ваксини срещу болестта шап е маслената емулсия ISA-206, която е активатор на клетките и може също така да подобри хуморалния имунен отговор, но неговите странични ефекти са относително големи. Въпреки че има много видове адюванти, като често използвани адюванти (адюванти с алуминиева сол, емулсии масло-вода и т.н.) и нови адюванти (MF59, растителни полизахариди и т.н.), адювантите, използвани за ваксини срещу болестта шап все още са ограничени, включително главно алуминиев хидроксид, Span, леко минерално масло и др., всички имат различни дефекти, като незадоволителен имунен ефект или силно токсични и странични ефекти [3-4]. Поради това има спешна необходимост от разработване на нови високоефективни, нискотоксични адюванти за ваксини срещу болестта шап, за да се подобри имунозащитният ефект на ваксината, което е от положително значение запрофилактика и лечение на болестта шап.

китайска медицинабилков има широки перспективи за приложение в профилактиката и лечението на инфекциозни заболявания. Китайската билкова медицина има дълга история на лечение на човешки и животински болести. В областта на изследването на адювантите на ваксините местни и чуждестранни изследователи са извлекли полизахариди от различни китайски билкови лекарства, за да проучат техните адювантни ефекти, като полизахариди от женшен, полизахариди от астрагал, полизахариди от тукахое, полизахариди от епимедиум и др., и са открили, че имат имунни функции на хора и животни. Има добър промоционален ефект и се превръща в нов кандидат адювант [5-7].

Цистанче (Cistanche deserticola YCMa)е растение от семейство Dang. Това е често използвано подхранващо китайско билково лекарство и се използва като подхранваща храна за дългосрочна консумация от хората. През последните години изследователите са извършили много изследователска работа върху химичната структура и фармакологичната активност на полизахарида от Cistanche и са установили, че неговите активни съставки включват главно полизахариди, общ фенилетаноиден гликозид, алкалоиди и др., сред които съдържанието на полизахариди е относително висока и може да се регулира. Имунната система има антиоксидантни и анти-стареещи ефекти [8-9].

Цистанче (Cistanche deserticola YCMa)

Предварителните проучвания установиха, че комбинацията от суров пустинен полизахарид цистанче и OVA имунизирани мишки значително повишава нивото на OVA-специфични антитела и съвместимостта с противогрипна ваксина може да повиши нивото на антителата на противогрипната ваксина [10-11]. С оглед на това, това проучване използва суровия полизахарид от Cistanche deserticola като кандидат адювант за инактивираната ваксина срещу болестта шап и избрани водоразтворими адюванти със значителни имуностимулиращи ефекти и малки странични ефекти, така чеСуровият полизахарид от Cistanche deserticola може да се използва ефективно като нов адювант за ваксини срещу болестта шап.

Подготовка на агента

В това проучване,Суров полизахарид от Cistanche deserticola (CDCP)беше комбиниран свирус на болестта шапза приготвяне на ваксини. ICR мишки бяха имунизирани чрез мускулния път. Ефектите от имунизацията върху хуморалния и клетъчния имунен отговор на мишките бяха открити и тяхната безопасност беше наблюдавана. Разработването на безопасен нов адювант за ваксината срещу болестта шап дава ориентир.

Суров полизахарид от Cistanche deserticola

Ефектът на суровия полизахарид от Cistanche deserticola (CDCP) върху нивото на специфични за шапа антитела в серума

Нивото на серумния IgG показва постепенно нарастваща тенденция на 14 дни, 21 дни и 28 дни след първоначалната епидемия (Фигура 1). На 14 и 21 дни след първоначалната имунизация, нивото на антителата в групата с FMDV-Ag Ag/CDCP беше значително по-високо от това на групата без адювант на FMDV-Ag (P<0.05), and="" there="" was="" no="" significant="" difference="" from="" the="" fmdv="" group="" (p="">0.05). На 28-ия ден след първоначалната имунизация, в сравнение с FMDV-Ag без адювант, нивото на IgG антитела на FMDV-Ag/CDCP беше значително повишено (P<0.05), but="" it="" was="" extremely="" significantly="" lower="" than="" that="" of="" the="" fmdv/isa-206="" group=""><0.01). the="" antibody="" level="" of="" the="" fmdv-ag="" adjuvant-free="" group="" was="" significantly="" different="" from="" that="" of="" the="" 0.9%="" nacl="" control="" group=""><>

Суров полизахарид от Cistanche deserticola (CDCP) върху пролиферацията на лимфоцити от далака

21 дни след първоначалната имунизация, методът МТТ беше използван за откриване на ефекта на пролиферация на суровия полизахарид от Cistanche deserticola върху лимфоцитите на далака. Както е показано на Фигура 2, след като in vitro стимулира лимфоцитите на далака с FMDV-Ag, индексът на лимфоцитна стимулация на групата на FMDV-Ag/CDCP е значително по-висок от този на групата на FMDV-Ag без адювант (P<0.05), and="" compared="" with="" fmdv/isa-206="" there="" was="" no="" significant="" difference="" between="" the="" groups="" (p="">0.05). След стимулиране от ConA и LPS, той може значително да засили пролиферацията на лимфоцити от далака (P<>

Ефектът на суровия полизахарид от Cistanche deserticola (CDCP) върху експресията на CD4 плюс и CD8 плюс Т клетки

21 дни след първоначалната имунизация бяха тествани ефектите на CDCP и FMDV-Ag върху CD4 плюс и CD8 плюс Т клетки в далака на мишки. Резултатите са показани на Фигура 3-A D. Съотношението на CD3 плюс, CD4 плюс, CD3 плюс, CD8 плюс Т клетъчни подгрупи в групата на FMDV-Ag/CDCP беше значително по-високо от това на адюванта на FMDV-Ag -безплатна група (P<0.05), and="" compared="" with="" fmdv/isa-="" the="" difference="" between="" the="" 206="" groups="" was="" not="" significant="" (p="">0.05). Групата без адювант на FMDV-Ag не повишава експресията на CD4 плюс и CD8 плюс Т клетки.

Ефектът на суровия полизахарид от Cistanche deserticola (CDCP) върху CD4 плюс, CD44 плюс и CD8 плюс CD44 плюс ефекторни Т клетъчни подгрупи

За да се наблюдава ефектът на суровия полизахарид от Cistanche deserticola върху ефекторните Т клетки, беше използвана поточна цитометрия за откриване на експресията на CD4 plus, CD44 plus и CD8 plus, CD44 plus в клетките на далака на мишки след имунизация. Резултатите са показани на фигура 4-AD. Процентите на CD4 плюс, CD44 плюс и CD8 плюс, CD44 плюс в групата с шап Ag/CDCP бяха значително по-високи от тези в групата с шап без адювант (P<0.05), and="" were="" different="" from="" the="" fmdv/isa-206="" group="" not="" significant="" (p="">0.05).

Ефект на суровия полизахарид от Cistanche deserticola (CDCP) върху растежа на мишки

After immunizing animals with Crude Polysaccharide from Cistanche deserticola through the muscle route, the growth of the mice was observed during the entire immunization period and the body weight was weighed weekly to observe the granuloma at the injection site (Table 1). After the immunization, the mice did not have hair loss or refusal to eat. The weight of each group of mice increased normally at 14 d, 21 d, and 28 d after immunization, and there was no significant change in body weight between the groups (P>0.05). Мишките в групата с FMDV Ag/CDCP нямат грануломи на мястото на инжектиране, а мишките ввирус на болестта шапваксиналната група, съдържаща маслен адювант ISA 206, имаше грануломи на мястото на инжектиране.

Адювантите се използват в различни ваксини от дълго време, могат да помогнат на ваксините да имат имуностимулиращ ефект, да намалят дозата на ваксината и да играят много важна роля в превенцията и епидемията от инфекциозни заболявания [3]. С разработването на нови ваксини, независимо дали в областта на изследванията на ветеринарни ваксини или изследвания на ваксини за хора, изискванията за количеството и качеството на адювантите на ваксината стават все по-високи и по-високи. Идеалният нов адювант трябва да има ефективен стимулиращ ефект върху клетъчния или хуморален имунитет на организма, да има дълготраен и стабилен ефект, да намалява броя на имунизациите, да има по-малко странични ефекти и да бъде лесен за производство и лесен за инжектиране [13] .

ввирус на болестта шапинактивираните ваксини обикновено се добавят маслени адюванти за повишаване на имунитета на ваксината, но има недостатъци като висок имунен стрес. В сравнение с маслените адюванти, водните адюванти са лесни за използване, могат да се смесват с антигените на ваксината във всяко съотношение, не се нуждаят от емулгиране и са лесни за инжектиране. Следователно водните адюванти имат добри перспективи за приложение във ваксините срещу шам. Китайските билкови полизахариди имат добри имуномодулиращи ефекти, съчетани с техните предимства в безопасността, плейотропията и независимостта, и се превръщат в гореща точка в изследванията на нови адюванти за ваксини [14]. В областта на изследването на адювантите за ваксина срещу шам, някои китайски билкови полизахариди се използват в изследването на нови адюванти. Например полизахаридите на астрагал се използват като адюванти за ваксини срещу шам. Оралната имунизация може да подобри хуморалния и клетъчния имунитет и ниските дози могат да инхибират зрелостта на дендритните клетки, високите дози могат да насърчат зрелостта им.

Изследователите също са използвали полизахариди от Baizu и полизахариди отЕвкомиякато адюванти навирус на болестта шапваксина, за да проучи техните имуностимулиращи ефекти [15-17]. Поради големите разлики в съдържанието на активните съставки на различните китайски билкови лекарства, обширният скрининг на китайски билкови лекарства с имунологична активност, за да се намерят подходящи адюванти, е от голямо значение за превенцията на заболяванията и човешкото здраве и също така е изследователска гореща точка в областта на ваксинология. В този експеримент, aСуров полизахарид от Cistanche deserticolaбеше избран като кандидат адювант завирус на болестта шапваксина и е проведено експериментално изследване на адювантния ефект. Превенцията и лечението на инфекциозни заболявания зависят главно от хуморалния имунен отговор, медииран от В-лимфоцити, и клетъчния имунен отговор, медииран от Т-лимфоцити [18-20].

Тъй катовирус на болестта шапваксината всъщност използва мускулна имунизация при производството, мускулният път се използва за имунизиране на мишки в експеримента и ефектът на CDCP за подобряване на имунната система се оценява чрез оценка на ефекта на CDCP върху производството на антитела и Т клетъчните подгрупи и се оценява неговата безопасност. Предварителни наблюдения. Резултатите от проучването показват, че суровият полизахарид на Cistanche cistanche може да повиши нивото на антитела, специфични за шапа на 14 и 21 дни след имунизацията, и няма значителна разлика между ефекта и нивото на адюванта ISA-206 ; нивото на антителата на 28-ия ден след имунизацията е по-ниско от това на ISA-206 маслен адювант, което показва, чеСуровият полизахарид от Cistanche deserticola може да повиши нивото на хуморалния имунитетв рамките на определен период от време след имунизацията. Скоростта на пролиферация на лимфоцити е в положителна корелация с нивото на индекса на стимулация. В експеримента MTT,Суровият полизахарид от Cistanche deserticola може да насърчи пролиферацията на лимфоцититестимулирани от антиген на шап, ConA и LPS. В експеримента с Т клетъчна подгрупа, CDCP може не само да увеличи експресията на CD4 плюс и CD8 плюс Т клетки, но също така да повиши нивата на CD4 плюс, CD44 плюс и CD8 плюс, CD44 плюс ефекторни Т клетки и няма значителна разлика от групата на адювантите ISA-206; в безопасност При сексуални експерименти беше установено, че мишките в групата с ваксина, съдържаща ISA-206, са имали грануломи на мястото на инжектиране, докато групата с ваксина, съдържаща CDCP воден адювант, не е открила грануломи, което предварително показва, чеСуровият полизахарид от Cistanche deserticola има добра безопасност. За по-голяма безопасност трябва да се извършат съответните експерименти, за да се потвърди.

Суров полизахарид от Cistanche deserticolaне само засили хуморалния имунен отговор, но също така увеличи нивото на пролиферация на лимфоцитите, повиши нивото на CD4 плюс и CD8 плюс Т клетъчни подгрупи, активирани ефекторни Т клетки и не бяха открити грануломи на мястото на инжектиране след инжектиране. Мишките растат нормално и нямат необичайно поведение. Тези резултати от изследването дават основа за по-нататъшни изследванияСуров полизахарид от Cistanche deserticolaкато нов адювант завирус на болестта шапваксина и също така предоставя полезна справка за прилагането на полизахаридни адюванти в други ваксини.

справка

［1］Diaz-san Segundo F, Median GN, Steinfeldt C, et al. Ваксини срещу болестта шап［J］. Vet Microbiol, 2017, 206: 102-112.

［2］Парк JH. Изисквания за подобрени ваксини срещу епидемии от шап［J］. Clin Exp Vaccine Res, 2013, 2(1): 8-18.

［3］Cao Y. Адюванти за ваксини срещу вируса на болестта шап: скорошен напредък［J］. Expert Rev Vaccines, 2014, 13(11）:1377-1385.

［4］Parid AS. Ваксинация срещу вируса на шап: стратегии и ефективност［J］. Expert Rev Vaccines, 2009, 8:347-365.

［5］Licciardi PV, Underwood JR. Лекарства с растителен произход: нов клас имунологични адюванти［J］. Int Immunopharmacol, 2011, 11(3):390-398.

［6］Sun B, Yu S, Zhao D, et al. Полизахаридите като адюванти на ваксината［J］. Vaccine, 2018, 36: 5226-5234.

［7］Meng XY, Chu ZF, Zhang JJ и др. Имуномодулиращи функции на полизахарида от листата на Ginkgo biloba върху vvIBDV ваксина［J］. ChinaJ Vet Sci, 2019, 39(4):640-645.

［8］Tu PF, Jiang Y, Guo YH, et al. Изследвания и индустриално развитие на Cistanche［J］. Chin Pharm J, 2011, 46(12):882-887.

［9］Zhang W, Huang J, Wei W, et al. Екстракция, пречистване, характеризиране и антиоксидантна активност на полизахариди от Cistanche tubulosa［J］. Int J Biol Macromol, 2016, 93: 448-458.