Ефекти на водния екстракт от Cistanche Tubulosa върху чревната микробиота на мишки с чревни разстройства

Контакт: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Имейл:audrey.hu@wecistanche.com

Нарушенията на чревната микробиота са свързани с много заболявания. те воднистиекстрактотCistanche tubulosa(CT), традиционна китайска билкова формула, се съобщава, че играе роля в защитата на човешките черва. Малко се знае обаче за ефектите му върху чревната микробиота. *Настоящото изследване е проведено, за да се определи дали CT воденекстрактможе да модулира чревния микробиом при мишки с чревни разстройства. Установихме, че увредената чревна морфология в резултат на лечение с цефиксим може да бъде спасена с помощта наCTводен екстракт. *сравнение на микробното разнообразие между мишки, третирани сCTекстракт и контролни мишки също показват, че разстройството в микробиомната общност на моделните групи може да бъде възстановено чрез третиране с високи и средни концентрации наCTводен екстракт. Лечението с цефиксим води до значително намаляване на млечнокисели бактерии; обаче допълването наCTводен екстракт възстанови растежа на тези млечнокисели бактерии. Освен това, CT воденекстрактуспя да смекчи драматичните промени в метаболитните пътища на чревния микробиом, предизвикани от цефиксим. Тези открития дадоха представа за благоприятните ефекти на водния екстракт от CT върху чревната микробиота и също така предоставиха важна справка за разработването на свързани лекарства в бъдеще.

функцията против стареене на Cistanche

1. Въведение

Чревните микроорганизми колонизират главно чревния лумен и лигавичния слой и се взаимодействат с гостоприемника чрез обмен на материали и енергия, трансформация и други процеси [1].They са сигнални центрове, които интегрират съобщения от околната среда, като диета, с генетични и имунни сигнали, като впоследствие засягат метаболизма, имунитета, нервната система и отговора на инфекциите на гостоприемника [2]. Обикновено има динамичен баланс между чревната флора и гостоприемниците; обаче чревната дисбиоза може да доведе до промени в баланса здраве/болест, имунни нарушения и множество заболявания [3]. Умерените промени в чревната микробиота са приемливи за гостоприемника; това все пак може да предостави възможности за усилване на промените в други утежняващи фактори, като бактериофаги, бактериоцини и оксидативен стрес [4]. Предишни проучвания показват, че етаноловият екстракт отCistanche tubulosa(CT), традиционна китайска билкова формула, може да регулира чревния микробен състав при плъхове [5], а общите гликозиди на CT регулират нарушената чревна микробиота [6]. Видовете Cistanche, които основно паразитират в корените на видовете Tamarix, се наричат ​​също „женшен от пустинята“ и тоник, състоящ се от стъблата на Cistanchedeserticola (CD) иЦистанче tubulosa(CT) се използва като билково лекарство [7].TheУстановено е, че основните химични компоненти на CTphenylethanol гликозиди (PHGs), които са антиоксидантни вещества [8, 9], подобряват репродуктивната дисфункция [10], потискат активирането на чернодробните звездни клетки, блокират провеждането на сигнални пътища в TGF- 1/SMAD [ 11] и предотвратява индуцирана от говежди серумен албумин чернодробна фиброза при плъхове [12]. Сред повече от 100 компонента в CT, полизахаридът също е едно от важните вещества с изобилно съдържание [13, 14]. Предишни проучвания показват, че полизахаридите на C. deserticola индуцират меланогенеза в меланоцитите, намаляват оксидативния стрес [15], облекчават когнитивната дисфункция чрез регулиране на антиоксидантни и противовъзпалителни процеси при плъхове [16], защитават PC12 клетките срещу OGD/RP-индуцирано увреждане [17] , подобряват абсорбцията на ехинакозид in vivo и засягат чревната микробиота [18]. Пробиотиците са живи непатогенни микроорганизми, които имат ползи за здравето и осигуряват микробен баланс в стомашно-чревния тракт, когато се прилагат в адекватни количества [19].They може да подобри неспецифичните клетъчни имунни отговори, характеризиращи се с активиране на макрофаги, естествени клетки убийци (NK) и антиген-специфични цитотоксични Т лимфоцити и освобождаване на различни цитокинизини по специфичен за щама и дозозависим начин [20]. Пробиотичните щамове подобряват свойствата на чревния епител чрез TJ модулация и е доказано, че специфични пробиотични щамове регулират експресията на муцин, като по този начин влияят върху свойствата на мукусния слой и индиректно регулират чревната имунна система [21]. Щамовете на млечнокисели бактерии (LAB) и Bifidobacterium са основни пробиотици, които се използват в много области [22–26].Thползите за тяхното здраве са многобройни, като техният антиоксидантен капацитет е важен фактор за техните функции, свързани със здравето[27]. Пробиотиците могат да хелатират металните йони, за да им предотвратят катализирането на окислението [28, 29]; те могат също така да увеличат експресията на антиоксидантни ензими [30, 31], да произвеждат различни метаболити с антиоксидантна активност [32, 33], да медиират антиоксидантните сигнални пътища [34–36] и да регулират ензимите, произвеждащи реактивни кислородни видове (ROS) и реакцията на чревния тракт микроорганизми до оксидативен стрес [37]. Скорошно проучване показа, че полизахаридите на CD могат да стимулират растежа на някои млечнокисели бактерии, което може да е от полза за човешкото здраве [38]. Съдържанието на полизахариди в CD обаче е различно от това в CT [7, 39] и тази разлика може да доведе до различни ефекти върху чревните микроорганизми. Освен това, въпреки че CD полизахаридите могат да намалят оксидативния стрес чрез активиране на пътя NRF2/HO-1 [15], ефектите на единичен полизахарид може да се различават от общия ефект на множество състави в CT.ThЗа нас е необходимо да се дефинират точно ефектите на CT водните екстракти върху чревните микроорганизми. В допълнение, PHG могат също така да устоят на оксидативния стрес [40] и да потиснат липополизахарид-медиираните възпалителни реакции чрез активиране на пътя Keap1/Nrf2/HO-1 [41].Theследователно, определянето на ефекта на CT водния екстракт е от голяма стойност. В допълнение, ефектите на някои съставки на водния екстракт от CD върху оксидативния стрес и чревната флора предполагат, че резистентността към оксидативен стрес може да бъде свързана с промените в чревната флора. За да запълним празнините в знанията по гореспоменатите теми, ние изследвахме ефектите на CTaqueous екстракт върху чревната микробиота на мишки с нарушения на чревната флора. Тези резултати ще предоставят ценна информация за възможните механизми, чрез които CT променя чревната флора и придава устойчивост на червата към оксидативен стрес.

2. Материали и методи

2.1. Експериментални животни.

Общо 18 SPF-клас мъжки C57BL/6J мишки, тежащи 18–22 g, бяха закупени от Центъра за експериментални животни на Медицинския университет в Синдзян с номер на лиценз SCXK (нов) 2018-0003.They бяха настанени в клетки при стандартизирани условия: 12 часа светъл/тъмен фотопериод, температура от 23 ± 2 градуса и влажност от 55 ± 5 процента.Theживотните бяха хранени с търговска диета (51 процента екстракт без азот, 25 процента суров протеин, 4,6 процента сурова мазнина, 6,5 процента сурова пепел, 4.0 процента сурови фибри и 8,9 процента влага) и чешмяна вода.Theживотните са третирани съгласно препоръките, описани в Ръководството за грижа и използване на лабораторни животни на Националните здравни институти.

2.2. Екстракция на водния екстракт.

Изсушени резени от C.тубулоза,предоставени от Hotan Dichen PharmaceuticalBiotechnology Co., Ltd., бяха смлени на прах и бяха избрани гранули с размер на частиците между 20 и 40 меша.Theусловията на екстракция са както следва: съотношение твърдо вещество-течност 1:19, температура 80 градуса, микровълново време 6 минути, ултразвуково време 16 минути, микровълнова мощност 400 W и ултразвукова мощност 400 W.Theсъдържанието на основните компоненти на водния екстракт се измерва чрез HPLC (Agilent 1260 Infinity II, Калифорния, САЩ). Накратко, стандартните субстанции на ехинакозид (0.2 mg/mL) и актеозид (0,2 mg/mL) бяха разтворени в 50 процента метанол, за да служат като разтвор на еталонно вещество.Then, 1 g от CTaqueous екстракт се разтваря в 100 mL 50 процента метанол и се оставя да се стегне за 30 min.Theекстрактен разтвор се третира с ултразвук при 250 W и 35 kHz за 10 минути и след това се центрофугира при 12, 000 rpm/min.Theсупернатантата беше филтрирана от {{0}}.45 μm микропореста филтърна мембрана. Разтворът на референтното вещество и филтратът след това се откриват чрез HPLC при следните условия: силикагел, свързан с октадецилсилан, като пълнител, метанол като подвижна фаза А и 0,1 процента мравчена киселина като подвижна фаза В.Theтемпературата на колоната беше зададена на 30 градуса, дължината на вълната на откриване беше зададена на 330 nm, а инжекционният обем беше 10 μL.

2.3. Експерименти.

След една седмица адаптация, 18-те мишки бяха разделени на случаен принцип в шест групи: A (нормални с добавена средна доза CT воден екстракт), B (нормални без CT воден екстракт), C (модел без воден екстракт), D (модел с висока добавена доза CT воден екстракт), E (модел с добавена средна доза CT воден екстракт) и F (модел с добавена ниска доза CT воден екстракт).Theгрупите бяха третирани както следва: нормалната група беше напоена с нормален физиологичен разтвор, моделната група беше напоена с цефиксим (30 mg/kg, Shiyao Group OuyiPharmaceutical Co., Ltd., Shijiazhuang, Китай) и нормален физиологичен разтвор, групата с висока доза беше напоена от цефиксим и 221,14 mg/kg от CT водния екстракт, групата със средна доза беше напоена с цефиксим и 165,54 mg/kg воден екстракт, а групата с ниска доза беше напоена с цефиксим и 110,57 mg/kg от водния екстракт.TheГрупата се напоява с 165,54 mg/kg воден екстракт и не се добавя цефиксим. Цефиксим беше2 Допълнителна и алтернативна медицина, базирана на доказателства, прилаган ежедневно в 12:00 h, а други вещества бяха прилагани ежедневно в 15:00 h. По време на експериментите групите C, D, E и F бяха поддържани в моделно състояние на чревни разстройства.TheИзпражненията се събират на всеки седем дни на астерилна операционна маса и се съхраняват при -20 градуса.

2.4. Хистопатологично наблюдение на дебелото черво на мишка.

В края на експеримента, мишките бяха убити чрез дислокация на шийката на матката и тяхното съдържание на дебелото черво беше събрано върху астерилна операционна маса и съхранено при -80 градуса; в същото време проби от тъкани на дебелото черво се фиксират в 10 процента неутрален формалин.Then, пробите се дехидратират с помощта на градиентна концентрация на етанол, хиалинизират се с помощта на ксилен, вмъкват се в парафин, нарязват се и се оцветяват с хематоксилин-еозин. Наблюдават се морфологични промени в лигавицата на дебелото черво и се сравняват с помощта на оптичен микроскоп. Измерени са дължината на вилуса и дълбочината на криптата в дебелото черво и е изчислено съотношението на дължината на вилуса към дълбочината на криптата (V/C стойност) (51).

2.5. Извличане на ДНК и изграждане на библиотека.

ДНК се екстрахира от изпражненията с помощта на EZNA ®Soil DNA Kit (Omega Bio-Tek, Norcross, GA, USA) съгласно протокола на производителя. Качеството на ДНК се определя с помощта на флуорометър (QuantiFluor™–ST, Promega Corporation, САЩ). Сдвоените праймери в областта V3-V4 на 16s rDNA са проектирани да усилват региона и да произвеждат 466 bp ДНК фрагменти.Theпредният праймер беше 341F (-5-CCTACGGGNGGCWGCAG-3-), а обратният праймер беше 806R (-5-GGACTACHVGGGTATCTAAT-3-). Всеки PCR обем беше 25 μL, съдържащ 2,5 μL 10 × PCR буфер, 2 μL dNTPs, 1 μL от всеки праймер и 20–30 ng матрична ДНК. След това индексираните адаптери бяха прикрепени към края на ампликоните, за да генерират библиотеки за секвениране. Библиотеките бяха валидирани с помощта на флуорометър QuantiFluor™ и количествено определени до 10 nmol.

2.6. 16s rRNA генно секвениране и анализ на микробната общност.

Платформата Illumina (Illumina MiSeq) беше използвана за получаване на 2 × 250 bp данни от сдвоен край. Оперативни таксономични единици (OTUs) бяха получени с помощта на софтуера Uparse чрез стандартно клъстериране с 97 процента сходство. Наивният алгоритъм за присвояване на Байес на RDP класификатора беше използван за привеждане в съответствие на OTU с базата данни на Greengene версия 13.5 и за извършване на анотация на видове. Алфа разнообразието на чревната микробиота беше изчислено с помощта на индексите на Shannon и Simpson и разликите между групите бяха анализирани чрез размера на ефекта на линейния дискриминантен анализ (LEfSe). Бета разнообразието беше анализирано чрез анализ на главните координати (PCoA) на разликите на Bray-Curtis. PICRUSt2 беше използван за оценка на микробния метаболитен капацитет на микробиома на червата [42].

2.7. Анализ на статистически данни.

SPSS 20 беше използван за еднопосочна ANOVA и експерименталните данни бяха изразени като X ± S; X показва средната стойност, а S показва стандартното отклонение.

3. Резултати

3.1. Ефектът на CT водния екстракт върху морфологията на дебелото черво.

Представителните съединения (ехинакозид и актеозид) и техните концентрации в CT екстракта бяха валидирани чрез HPLC (Фигура S1). За да определим ефекта на водния екстракт върху червата, ние изследвахме дължината на дебелото черво и дълбочината на вдлъбнатините след третирането с CTaqueous екстракт.Theвласинките на дебелото черво в групите с нормални и високи дози (A, B и D) бяха по-дълги и подобни на пръсти, докато власинките на дебелото черво в модела и групите с ниски дози (C и F) бяха къси, а върховете на власинките на дебелото черво бяха счупени ( Фигура 1). Съответно висока доза CT воден екстракт значително увеличава дължината на въси на дебелото черво и намалява дълбочината на вдлъбнатината при мишки с чревни разстройства в сравнение с мишките в моделната група (P < 0.01).="" за="" разлика="" от="" това,="" дълбочината="" на="" вдлъбнатините="" не="" се="" различава="" значително="" между="" групата="" с="" висока="" доза="" и="" нормалната="" група="" (p=""> 0,05) (Таблица S1). Тези резултати показват, че високата доза воден екстракт от CT може да подобри морфологията в дебелото черво на мишки при чревни разстройства.

3.2. Ефектът на CT водния екстракт върху разнообразието на чревната микробиота.

Извършихме 16s rRNA генно секвениране, за да изследваме потенциалната причина за морфологичните промени в дебелото черво и да изследваме промените в чревната микробиота след третиране с CT воден екстракт. Средно 100 553 ефективни маркера, вариращи от 77 734 до 125 144, бяха получени от необработените данни (Таблица S2).Thesetags бяха групирани в 4932 OTU (Таблица S3). След това анализирахме разнообразието на чревната микробиота въз основа на тези OTU. Индексите на Шанън и Симпсън не показват разлика между група А (нормална с CT воден екстракт) и B група (нормална без CT воден екстракт) (Фигура 2(a)). Това показва, че при мишки без лечение с цефиксим водният екстракт от CT може да не е имал допълнителни полезни или вредни ефекти върху разнообразието на чревната микробиота. Въпреки това, разнообразието в моделната група (C) показва тенденция на намаляване в сравнение с това в нормалните групи. Мишките, третирани с високи и средни дози CT водни екстракти, показват признаци на възстановяване на разнообразието, докато такова явление не се наблюдава при мишки, третирани с ниска доза CT воден екстракт (Фигура 2(a)). Междувременно PCoA разкрива, че нормалните групи (A и B) и групите с чревни разстройства, на които са прилагани високи дози (D) и средни дози (E) CTaqueous екстракти, имат тенденция да имат по-къси разстояния между пробите от тези в моделната група и при ниски дози C Група добавки с воден екстракт (F) (Фигура 2 (b)). Тези резултати показват, че водният екстракт от CT може да помогне за подобряване на разнообразието на чревната микробиота при мишки в рамките на чревни разстройства.

3.3. Промени в състава на чревната микробиота, третирана с CT воден екстракт.

*Профилите на състава на микробиотата бяха сравнени между различни групи. На ниво тип относителното изобилие на протеобактерии в моделната група е по-високо от това в другите групи (Фигура 3 (а)). *Увеличаването на Proteobacteria предполага, че микробиомът на моделни мишки е променен от цефиксим и че CT водният екстракт може да е от полза за чревната микробиота, тъй като увеличеното разпространение на Proteobacteria е основен маркер за нарушена чревна флора [43–45]. В допълнение, на ниво род, относителното изобилие на Lactobacillus в моделната група намалява в сравнение с това в групите с нормални и високи дози; въпреки това, той се е увеличил в сравнение с този в групата със средна и ниска доза (Фигура 3(b)). Тези резултати показват, че високата доза CTaqueous екстракт може да насърчи растежа на някои бактерии от рода Lactobacillus. Различната микробиота между изследваните групи беше допълнително определена според LEfSe анализа. *анализът показва, че след лечение с цефиксим, относителното количество на Turicibacter, Alphaproteobacteria, Acidobacteria, Betaproteobacteriales и Chloroflexi значително се увеличава, докато относителното количество на Lactobacillus, групата Eubacterium_nodatum_, Pseudonocardinals и Christensenellaceae_R-7_групата значително намаля в сравнение с тези в нормалната група (Фигура 4(a)). Поразително е, че когато моделната група беше допълнена с висока доза CT воден екстракт, относителното изобилие на Muribaculaceae, Lactobacillus, Kineosporiaceae, Eubacterium nodatum група и Pedobacter бяха значително увеличени в сравнение с тези в моделната група. Междувременно относителното изобилие на Rhodobacter, Ruminococcaceae UCG_013, Roseburia, Ruminiclostridium_9 и Candidatus Stoquefichus намалява значително в сравнение с тези в моделната група (Фигура 4(b)).

3.4. Функции на чревната микробиота, свързани с лечението с CT воден екстракт.

Използвахме софтуера PICRUSt2, за да предвидим метаболитните пътища на чревната микробиота, а нормалната група беше използвана като референтна за анализиране на промените в други групи. При лечение с цефиксим се увеличава относителното изобилие от разграждане на етилбензен, биосинтеза на нерибозомни пептиди от групата на сидерофорите и метаболизъм на ксенобиотици по пътя на цитохром Р450; след третирането с високи и средни дози CT водни екстракти, тяхното относително изобилие се върна към нормалните нива. Междувременно относителното изобилие на пътя на метаболизма на цианоаминокиселините намалява при лечението с цефиксим; въпреки това, той се е увеличил след лечението с висока доза CT воден екстракт. Освен това, като цяло, промените в различните метаболитни пътища след лечението с цефиксим са значителни в сравнение с тези в нормалната група; въпреки това, добавянето на екстракт от CTaqueous успя да предотврати прекомерни промени (Фигура 5).

4. Обсъждане

Морфологията на дебелото черво може да бъде променена чрез растеж, храносмилане и абсорбция, имунна регулация и възстановяване на чревни наранявания [46–50]. *e V/C съотношението може изчерпателно да отразява храносмилателния статус на чревния тракт и е право пропорционално на храносмилателния и абсорбционния капацитет на стомашния тракт [51, 52]. В настоящото проучване биопсията на вилите и вдлъбнатините и статистическите данни показват, че високите дози водниекстрактможе частично да подобри дефектната морфология вътре в дебелото черво. За да изследваме как воднатаекстрактпроменя чревната морфология и засяга чревната микробиота, работихме назад от промените в чревната флора. Ние открихме, че относителното изобилие на Proteobacteria, хъб маркер на нарушена чревна флора, се увеличи при лечение с цефиксим в сравнение с това без лечение с цефиксим.*e Относителното изобилие на други хъб маркери, Bacteroidetes и Firmicutes, нямаше значителни промени, въпреки че тези групи преобладават в човешките черва; Установено е, че съотношението Bacteroidetes/Firmicutes е намалено при хора със затлъстяване в сравнение с това при слаби хора и е установено, че това съотношение се увеличава със загуба на тегло при хора на два вида нискокалорични диети [38, 41, 43–45, 48, 53, 54]. Междувременно Turicibacter, който се свързва със затлъстяването [55], е значително повишен в моделната група в сравнение с тази в другите групи. Трябва да се отбележи, че разнообразието на чревната микробиота в моделните мишки беше подобрено чрез добавянето на CTaqueous екстракт. Отбелязахме някои специфични чревни бактерии при мишки при различни лечения; например, Lactobacillus и Muribaculaceae са двата основни бактериални рода, които се увеличават в групата, лекувана с воден екстракт с висока доза CT, в сравнение с тези в моделната група (Фигура 4). Последните проучвания показват, че полизахаридите на CT водните екстракти притежават значителна антиоксидантна активност in vitro [56] и могат да стимулират растежа на някои млечнокисели бактерии, което може да е от полза за здравето на домакините [43]. Успоредно с това Muribaculaceae са пробиотични организми, свързани с дълголетието [57]. Те предполагат, че механизмът, чрез който CT водният екстракт подобрява чревната микробиота, може да бъде насърчаването или защитата на растежа на пробиотичните организми. Друга бактерия, която заслужава внимание, беше бактерията YE57. Въпреки че високата доза CTaqueous екстракт насърчава относителното изобилие на бактерия YE57 в настоящото изследване (Фигура 4), предишни проучвания са установили, че нейното изобилие е по-високо в нормалното черво, отколкото в червата, третирани с висока концентрация на остатък от билков чай ​​[58] и че неговото изобилие е намалено след интервенцията с Bacillus licheniformis, комбинирана с XOS (ксилоолигозахариди) [59]. *за нас, ролята на тази бактерия в чревната микробиота заслужава допълнително проучване. Освен това сравнително малкият брой проби в това изследване може да доведе до измерване на фалшиво положителни и фалшиво отрицателни резултати и се предлага бъдещо изследване на по-големи проби за валидиране на идентифицираните бактериални маркери.

CT воденекстрактсъставът може да е важен за неговите ефекти върху състава и функционалните промени в чревната микробиота на мишки с чревни разстройства. PHGs са общи активни компоненти, открити в CD и CT, а ехинакозидът е идентифициран като основният PHG в CT [60]. През последните десетилетия е доказано, че ехинакозидът притежава много фармакологични дейности, като антистареещи и невропротективни ефекти, подобряване на сърдечната функция, намаляване на хиперлипидемията и хипергликемията и превенция на предизвикания от затлъстяване диабет и метаболитен синдром [53, 61–65]. Всъщност ние открихме промени в метаболитните пътища на чревната микробиота.* Лечението с цефиксим доведе до обогатяване на бактерии, свързани с разграждането на етилбензен и биосинтезата на нерибозомни пептиди от групата на сидерофорите, докато третирането с високи и средни дози CT воден разтворекстрактможе да облекчи тези промени, което показва, че този екстракт модерира бактериалната общност, свързана с тези функции. В допълнение, повишеното бактериално обогатяване, свързано с пътя на метаболизма на цианоаминокиселините при лечение с воден екстракт с висока доза и намаленото му обогатяване при моделни мишки, показва, че CT водният екстракт може да насърчи метаболизма на цианоаминокиселината. *Промените в съответните метаболити могат да осигурят на този воден екстракт фармакологична активност.

Препратки

[1] A. Heintz-Butchart и P. Wilmes, „Чревният микробиом на човека: функцията има значение“, Тенденции в микробиологията, том. 26, бр. 7, стр. 563–574, 2018 г.

[2] CA Thaiss, N. Zmora, M. Levy и E. Elinav, „*емикробиом и вроден имунитет“, Nature, том. 535, бр. 7610, стр. 65–74, 2016 г.

[3] G. Quaranta, M. Sanguinetti и L. Masucci, "Трансплантация на фекална микробиота: потенциален инструмент за лечение на заболявания на репродуктивния тракт при хора и жени", Frontiers in Immunology, том. 10, стр. 2653, 2019 г.

[4] GA Weiss и T. Hennet, "Механизми и последствия от чревна дисбиоза", Cellular and Molecular Life Sciences, vol. 74, бр. 16, стр. 2959–2977, 2017.

[5] Y. Li, Y. Peng, P. Ma et al., „Подобни на антидепресанти ефекти на екстракт от Cistanche tubulosa върху плъхове с хроничен непредсказуем стрес чрез възстановяване на хомеостазата на чревната микробиота, Frontiersin Pharmacology, vol. 9, стр. 967, 2018 г.

[6] L. Fan, Y. Peng, J. Wang, P. Ma, L. Zhao и X. Li, „Тоталните гликозиди от стъбла на Cistanche tubulosa облекчават подобно на депресия поведение: двупосочно взаимодействие на фитохимикалите и чревната микробиота,“ Фитомедицина, кн. 83, ИД на артикул 153471, 2021 г.

[7] Y. Li, Y. Peng, M. Wang, P. Tu и X. Li, „Човешки стомашно-чревен метаболизъм на водния екстракт от herba cistanches in vitro: изясняване на метаболитния профил въз основа на цялостна идентификация на метаболита в стомашния сок, чревен сок, човешки чревни бактерии и чревни микрозоми, "Journal of Agricultural and Food Chemistry, vol. 65, бр. 34, стр. 7447–7456, 2017 г.

[8] H. Wang, Y. Sun, W.-C. Ye et al., "Антиоксидативни фенилетаноиди и фенолни гликозиди от Picrorhiza scrophulariiflora," Chemical and Pharmaceutical Bulletin, vol. 52, бр. 5, стр. 615–617, 2004.

[9] S.-L. Джи, К.-К. Цао, X.-X. Zhao et al., "Антиоксидантна активност на фенилетаноидни гликозиди върху индуцирана от глутамат невротоксичност", Bioscience, Biotechnology и Biochemistry, vol. 83, бр. 11, стр. 2016–2026, 2019.

[10] Q. Wang, J. Dong, W. Lu et al., „Phenylethanol glycosides from Cistanche tubulosa подобряват репродуктивната дисфункция чрез регулиране на тестикуларните стероиди чрез CYP450-3 -HSDpathway,“ Journal of Ethnopharmacology, vol. 251, член ID112500, 2020 г.

[11] С.-П. Вие, Л. Ма, Дж. Джао, С.-Л. Zhang и T. Liu, "Фенилетанол гликозидите от Cistanche tubulosa потискат активирането на чернодробните звездовидни клетки и блокират провеждането на сигнални пътища в TGF- 1/smad като потенциални средства против чернодробна фиброза," Molecules, vol. 21, бр. 1, стр. 102, 2016 г.

[12] С.-П. Вие, J. Zhao, L. Ma, M. Tudimat, S.-L. Zhang и T. Liu, "Превантивни ефекти на фенилетаноидни гликозиди от Cistanche tubulosa върху индуцирана от говежди серумен албумин чернодробна фиброза при плъхове", DARU Journal of Pharmaceutical Sciences, vol. 23, бр. 1, стр. 52, 2015 г.

[13] T. Morikawa, H. Xie, Y. Pan et al., "Преглед на биологично активни натурални продукти от пустинно растение Cistanche tubulosa," Chemical and Pharmaceutical Bulletin, vol. 67, бр. 7, стр. 675–689, 2019 г.

[14] J. Li, J. Li, A. Aipire et al., „Фенилетаноидните гликозиди от Cistanche tubulosa инхибират растежа на B16-F10 клетки както in vitro, така и in vivo чрез индуциране на апоптоза чрез митохондриално-зависим път, " Journal of Cancer, том. 7, бр. 13, стр. 1877–1887, 2016.

[15] Y. Hu, J. Huang, Y. Li et al., „Полизахаридът на Cistanche deserticola индуцира меланогенеза в меланоцитите и намалява оксидативния стрес чрез активиране на NRF2/HO-1 пътя,“ Journalof Cellular and Molecular Medicine, vol. 24, бр. 7, стр. 4023–4035, 2020 г.

[16] S. Peng, P. Li, P. Liu et al., "Cistanches облекчава индуцираната от севофлуран когнитивна дисфункция чрез регулиране на PPAR-c-зависим антиоксидант и противовъзпалително действие при плъхове," Journalof Cellular and Molecular Medicine, vol. 24, бр. 2, стр. 1345–1359, 2020 г.

[17] Y. Liu, H. Wang, M. Yang et al., "Cistanche deserticolapolysaccharides защитават PC12 клетките срещу OGD/RP-индуцирано увреждане," Biomedicine & Pharmacotherapy, vol. 99, стр. 671–680, 2018 г.

[18] Z. Fu, L. Han, P. Zhang et al., "Cistanche polysaccharidesenhance абсорбция на ехинакозид in vivo и засяга чревната микробиота," International Journal of Biological Macromolecules, том. 149, стр. 732–740, 2020 г.

[19] NT Williams, "Probiotics," American Journal of Health-System Pharmacy, vol. 67, бр. 6, стр. 449–458, 2010.[20] R. Ashraf и NP Shah, "Стимулиране на имунната система чрез пробиотични микроорганизми," Critical Reviews in Food Scienceand Nutrition, vol. 54, бр. 7, стр. 938–956, 2014 г.

[21] G. La Fata, P. Weber и MH Mohajeri, „Пробиотиците и чревната имунна система: индиректна регулация“, Probiotics and Antimicrobial Proteins, vol. 10, бр. 1, стр. 11–21, 2018 г.

[22] MA Zocco, LZ dal Verme, F. Cremonini et al., "Ефикасност на лактобацилус GG при поддържане на ремисия на улцерозен колит", Хранителна фармакология и терапевтика, том. 23, бр. 11, стр. 1567–1574, 2006.

[23] MJ Saez-Lara, C. Gomez-Llorente, J. Plaza-Diaz и A. Gil, "*e ролята на пробиотичните млечнокисели бактерии и бифидобактериите в превенцията и лечението на възпалителни заболявания на червата и други свързани заболявания: систематично преглед на рандомизирани клинични изпитвания при хора," BioMed Research International, vol. 2015 г., номер на артикул 505878, 15 страници, 2015 г.

[24] MAO Dawood, S. Koshio, M. Ishikawa и др., „Ефекти от хранителните добавки на Lactobacillus rhamnosus или/и Lactococcus lactis върху растежа, чревната микробиота и имунните реакции на червена морска ципура, Pagrus major,“ Fish & ShellfishImmunology, об. 49, стр. 275–285, 2016.

[25] A. Sivan, L. Corrales, N. Hubert et al., „Commensal bifidobacterium насърчава антитуморния имунитет и улеснява анти-PD-L1 ефикасността,“ Science, vol. 350, бр. 6264, стр. 1084–1089, 2015 г.

[26] PJ Whorwell, L. Altringer, J. Morel et al., "Ефикасност на капсулиран пробиотик Bifidobacterium infantis 35624 при жени със синдром на раздразнените черва," 8e American Journalof Gastroenterology, vol. 101, бр. 7, стр. 1581–1590, 2006.

[27] Y. Wang, Y. Wu, Y. Wang et al., "Антиоксидантни свойства на пробиотичните бактерии", Nutrients, vol. 9, бр. 5, стр. 521, 2017 г.

[28] JMC Gutteridge, R. Richmond и B. Halliwell, "Инхибиране на катализираното от желязо образуване на хидроксилни радикали от супероксид и на липидна пероксидация от десфериоксамин," Biochemical Journal, vol. 184, бр. 2,стр. 469–472, 1979 г.

[29] E. Deriu, JZ Liu, M. Pezeshki, et al., „Пробиотичните бактерии намаляват чревната колонизация на Salmonella Typhimurium чрез конкуренция за желязо,“ Cell Host & Microbe, vol. 14, бр. 1,стр. 26–37, 2013 г.

[30] T. Kullisaar, M. Zilmer, M. Mikelsaar, et al., "Два антиоксидантни щама на лактобацили като обещаващи пробиотици", International Journal of Food Microbiology, vol. 72, бр. 3,стр. 215–224, 2002 г.

[31] JG LeBlanc, S. del Carmen, A. Miyoshi, et al., "Използване на супероксид дисмутаза и каталаза, произвеждащи млечнокисели бактерии в TNBS, индуцира болестта на Crohn при мишки," Journal of Biotechnology, vol. 151, бр. 3, стр. 287–293, 2011.

[32] M. Rossi, A. Amaretti и S. Raimondi, "Производство на фолат чрез пробиотични бактерии", Nutrients, vol. 3, бр. 1, стр. 118–134,2011.

[33] A. Pompei, L. Cordisco, A. Amaretti, et al., „Прилагането на бифидобактерии, произвеждащи офолитна киселина, подобрява статуса на фолат при плъхове Wistar,“ 8e Journal of Nutrition, том. 137, бр. 12, стр. 2742–2746, 2007 г.

[34] Л.-Х. Wang, K. Liu, DW Gao и JK Hao, "Защитни ефекти на два щама на Lactobacillus Plantarum при хиперлипидемични мишки," Световен журнал по гастроентерология, том. 19, бр. 20, стр. 3150–3156, 2013 г.

[35] EO Petrof, K. Kojima, MJ Ropeleski, et al., „Пробиотиците инхибират ядрен фактор-κB и индуцират протеини на топлинен шок в епителните клетки на дебелото черво чрез инхибиране на протеазома,“ Gastroenterology, vol. 127, бр. 5, стр. 1474–1487, 2004 г.

[36] A. Seth, F. Yan, DB Polk и RK Rao, „Пробиотиците подобряват разрушаването на епителната бариера, предизвикано от водороден пероксид, чрез PKC- и MAP киназа-зависим механизъм,“ American Journal of Physiology-Gastrointestinal andLiver Physiology, vol. 294, бр. 4, стр. G1060–G1069, 2008.

[37] M. Gomez-Guzman, M. Toral, M. Romero, et al., "Антихипертензивни ефекти на пробиотичните лактобацилусни щамове при спонтанно хипертензивни плъхове," Molecular Nutrition & FoodResearch, vol. 59, бр. 11, стр. 2326–2336, 2015 г.

[38] H. Zeng, L. Huang, L. Zhou, P. Wang, X. Chen и K. Динг, "Галактоглюкан, изолиран от Cistanchedeserticola YC Ma. и неговата биоактивност върху щамове на чревни бактерии", въглехидратни полимери, том. 223, ИД на статия 115038, 2019 г.

[39] S. Zheng, X. Jiang, L. Wu, Z. Wang и L. Huang, „Химическа и генетична дискриминация на билки cistanches herba на базата на UPLC-QTOF/MS и ДНК баркодиране,“ PLoS One, vol. 9, бр. 5, номер на статия e98061, 2014 г.

[40] M. Li, T. Xu, F. Zhou et al., „Невропротективни ефекти на четири фенилетаноидни гликозида върху индуцирана от H2O2- апоптоза на PC12 клетки чрез пътя Nrf2/ARE, International Journalof Molecular Sciences, vol. 19, бр. 4, стр. 1135, 2018 г.

[41] A. Wu, Z. Yang, Y. Huang et al., „Естествените фенилетаноидни гликозиди, изолирани от Callicarpa kwangtungensis, потискат медиираната от липополизахарид възпалителна реакция чрез активиране на пътя Keap1/Nrf2/HO-1 в клетка RAW 264.7 макрофаги, " Journal of Ethnopharmacology, vol. 258, ИД на артикул 112857, 2020 г.

[42] GM Douglas, VJ Maffei, JR Zaneveld et al., "PICRUSt2 за предсказване на метагеномни функции," Nature Biotechnology, vol. 38, бр. 6, стр. 685–688, 2020 г.

[43] Х.-Л. Ли, Л. Лу, X.-S. Wang et al., „Промяна на чревната микробиота и профилите на възпалителни цитокини/хемокини при индуциран от 5-флуоро урацил чревен мукозит,“ Frontiers in Cellular and Infection Microbiology, vol. 7, стр. 455, 2017 г.

[44] M. Pammi, J. Cope, PI Tarr, et al., „Чревна дисбиоза при недоносени бебета, предхождаща некротизиращ ентероколит: систематичен преглед и мета-анализ,“ Microbiome, vol. 5, бр. 1,стр. 31, 2017 г.

[45] Н.-Р. Shin, TW When и J.-W. Bae, "Proteobacteria: микробен подпис на дисбиоза в чревната микробиота", Trends inBiotechnology, vol. 33, бр. 9, стр. 496–503, 2015 г.

[46] M. de Oliveira Belem, CP Cirilo, AP de Santi-Rampazzoet al., „Коригирането на чревната морфология, причинено от диетично ограничение, подобрява хранителния статус по време на процеса на стареене на плъхове,“ Експериментална геронтология, том. 69, стр. 85–93, 2015 г.

[47] B. Potsic, N. Holliday, P. Lewis, D. Samuelson, V. DeMarco и J. Neu, "Добавяне на глутамин и лишаване: ефект върху морфологията на тънките черва на изкуствено отглеждани плъхове," Педиатрични изследвания, том. 52, бр. 3, стр. 430–436, 2002.

[48] ​​JL Daniels, RJ Bloomer, M. van der Merwe, SL Davis, KK Buddington и RK Buddington, „Чревни адаптации към комбинация от различни диети със и без упражнения за издръжливост,“ Journal of the International Society of Sports Nutrition, vol. 13, бр. 1, стр. 35, 2016 г.

[49] L. Muñoz, MJ Borrero, M. Ubeda et al., "Чревната имунна дисрегулация, предизвикана от дисбиоза, насърчава разрушаването на бариерата и бактериалната транслокация при плъхове с цироза," Hepatology, vol. 70, бр. 3, стр. 925–938, 2019 г.

[50] X. Li, Y. Wu, Z. Xu et al., „Ефекти от отвара от hetiao jianpi върху чревно увреждане и възстановяване при плъхове с диария, свързана с антибиотици,“ Medical Science Monitor, vol. 26, член IDe921745, 2020 г.

[51] Y. Xie, F. Ding, W. Di et al., „Въздействие на диета с високо съдържание на мазнини върху чревните стволови клетки и функцията на епителната бариера при женски мишки на средна възраст,“ Molecular Medicine Reports, vol. 21, бр. 3, стр. 1133–1144, 2020 г.

[52] Б. Л. Биволарски и Е. Г. Вачкова, "Морфологични и функционални събития, свързани с отбиването при зайци", Journal of Animal Physiology and Animal Nutrition, vol. 98, бр. 1,стр. 9–18, 2014 г.

[53] H. Shimoda, J. Tanaka, Y. Takahara, K. Takemoto, S.-J. Шан и М.-Х. Su, "*e хипохолестеролемични ефекти на екстракт от Cistanchetubulosa, китайско традиционно сурово лекарство, inmice," 8e American Journal of Chinese Medicine, vol. 37, бр. 6, стр. 1125–1138, 2009 г.[54] RE Ley, PJ Turnbaugh, S. Klein и JI Gordon, "Хумангут микроби, свързани със затлъстяването", Nature, vol. 444, бр. 7122, стр. 1022-1023, 2006.

[55] J.-Y. Ким, Ю. М. Куон, И.-С. Kim et al., „Ефекти от добавянето на кафяви морски водорасли laminaria japonica върху серумните концентрации на IgG, триглицериди и холестерол и състава на чревната микробиота при плъхове“, Frontiers in Nutrition, vol. 5, стр. 23, 2018 г.

[56] W. Zhang, J. Huang, W. Wang et al., "Екстракция, пречистване, характеризиране и антиоксидантни активности на полизахариди от Cistanche tubulosa," International Journal of BiologicalMacromolecules, vol. 93, стр. 448–458, 2016.

[57] M. Sibai, E. Altuntas¸, B. Yıldırım, G. Ozt¨urk, S. Yıldırım и ¨T. Demircan, „Микробиом и дълголетие: голямо изобилие от Muribaculaceae, свързани с дълголетието, в червата на дългоживеещия гризач Spalax leucodon, OMICS: Журнал за интегративна биология, том. 24, бр. 10, стр. 592–601, 2020 г.

[58] Y. Xie, Z. Chen, D. Wang et al., „Ефекти от ферментирали остатъци от билков чай ​​върху характеристиките на чревната микробиота на холщайнски юници при топлинен стрес,“ Frontiers in Microbiology, vol. 11, стр. 1014, 2020 г.

[59] Y. Li, M. Liu, H. Liu et al., „Оралните добавки от комбинирани Bacillus licheniformis zhengchangsheng и ксилоолигозахариди подобряват предизвиканото от диета с високо съдържание на мазнини затлъстяване и модулират чревната микробиота при плъхове,“ BioMed Research International, том. 2020 г., номер на артикул 9067821, 17 страници, 2020 г.

[60] Y. Jiang и P.-F. Tu, "Анализ на химически съставки incistanche видове," Journal of Chromatography A, vol. 1216, бр. 11, стр. 1970–1979, 2009.

[61] F. Li, Y. Yang, P. Zhu et al., „Echinacoside насърчава костната регенерация чрез увеличаване на съотношението OPG/RANKL в MC3T3-E1 клетки,“ Fitoterapia, vol. 83, бр. 8, стр. 1443–1450, 2012 г.

[62] F. Tang, Y. Hao, X. Zhang и J. Qin, „Ефект на ехинакозида върху бъбречна фиброза чрез инхибиране на TGF- 1/Smads сигнален път в db/db мишки модел на диабетна нефропатия,“ Дизайн, разработка и терапия на лекарства, том. 11, стр. 2813–2826, 2017 г.

[63] W.-T. Xiong, L. Gu, C. Wang, H.-X. Sun и X. Liu, "Антихипергликемични и хиполипидемични ефекти на Cistanche tubulosa при диабетни db/db мишки тип 2," Journal of Ethnopharmacology, vol. 150, бр. 3, стр. 935–945, 2013 г.

[64] X.-x. Бао, Х.-х. Ма, Х. Динг, В.-в. Li и M. Zhu, "Предварително оптимизиране на формула за китайска билкова медицина, базирана на невропротективните ефекти в модел на плъх на индуцирана от ротенон болест на Паркинсон", Journal of IntegrativeMedicine, vol. 16, бр. 4, стр. 290–296, 2018 г.

[65] Y. Chen, Y.-Q. Li, J.-Y. Fang, P. Li и F. Li, "Установяване на паралелен експериментален модел на остеопороза, комбинирана с болестта на Алцхаймер при плъхове и двойните ефекти на ехинакозид и актеозид от Cistanche tubulosa," Journalof Ethnopharmacology, vol. 257, номер на статия 112834, 2020 г.

[66] M. Hensel, AP Hinsley, T. Nikolaus, G. Sawers и B. C. Berks, "*e генетична основа на тетратионатното дишане в Salmonella typhimurium," Molecular Microbiology, vol. 32, бр. 2, стр. 275–287, 1999.

[67] SE Winter, P. Thiennimitr, MG Winter et al., „Възпалението на червата осигурява респираторен акцептор на електрони за Salmonella,“ Nature, vol. 467, бр. 7314, стр. 426–429, 2010 г.

[68] SE Winter, MG Winter, MN Xavier et al., "Host-derivednitrate boosts growth of E. coli in the inflamed gut," Science, vol. 339, бр. 6120, стр. 708–711, 2013 г.

[69] C. Lupp, ML Robertson, ME Wickham et al., „Медиираното от гостоприемника възпаление разрушава чревната микробиота и насърчава свръхрастежа на Enterobacteriaceae,“ Cell Host & Microbe, vol. 2, бр. 2, стр. 119–129, 2007 г.

[70] B. Stecher, R. Robbiani, AW Walker et al., "Salmonellaenterica serovar typhimurium използва възпалението, за да се конкурира с чревната микробиота," PLoS Biology, vol. 5, бр. 10, стр. e244–2189, 2007.

[71] В. Мишра, К. Шах, Н. Мокаше, Р. Чаван, Х. Ядав и Дж. Prajapati, "Пробиотиците като потенциални антиоксиданти: систематичен преглед", Journal of Agricultural and Food Chemistry, vol. 63, бр. 14, стр. 3615–3626, 2015 г.

[72] JMP Mart´ın, PF Freire, L. Daimiel et al., "*e антиоксидантно бутилиран хидроксианизол потенцира токсичните ефекти на пропилпарабен в култивирани клетки на бозайници," Food and Chemical Toxicology, vol. 72, стр. 195–203, 2014 г.

[73] RS Lanigan и TA Yamarik, "Окончателен доклад за оценката на безопасността на BHT", International Journal of Toxicology, vol. 21, бр. 2, стр. 19–94, 2002