Оценка на състава на мастни киселини, антиоксидантна и фармакологична активност на масло от семена на тиква (Cucurbita Moschata) от водна ензимна екстракция, част 1

May 08, 2023

Резюме:Маслото от тиквени семки е страничен продукт, богат на хранителни вещества и биоактивни компоненти, които насърчават няколко ползи за здравето. Това проучване имаше за цел да сравни химическия състав, антиоксидантната и фармакологичната активност на маслата от тиквени семки, извлечени от Cucurbita moschata Duch. Ex Poir. (PSO1) и Cucurbita moschata (японска тиква) (PSO2) чрез водна ензимна екстракция. В процеса на ензимна екстракция се използва ензимна смес, състояща се от пектиназа, целулаза и протеаза (1:1:1). Съставът на мастните киселини на маслата се определя с помощта на метилов естер на мастни киселини/газова хроматографска масспектрометрия. Анализите на антиоксидантната активност бяха измерени чрез използване на стабилен свободен радикал дифенилпикрилхидразил, радикален катион 2, 20 -азинобис-(3- етилбензотиазолин-6-сулфонат, желязо редуцираща/антиоксидантна сила и анализ на железен тиоцианат. изследвани са ензими, включващи стареене на кожата и процес на избелване. Линоловата киселина е основен компонент на всички масла от тиквени семки. Освен това е открито значително количество олеинова киселина, палмитинова киселина и стеаринова киселина. PSO2 притежава най-високата антиоксидантна активност в сравнение с PSO1 и търговски масла от тиквени семки (COM1 и COM2). Както PSO1, така и PSO2 показват по-високи инхибиторни ефекти върху хиалуронидазата, колагеназата и тирозиназата в сравнение с рекламите. Следователно, водната ензимна екстракция може да доведе до масла от тиквени семки с по-високи антиоксидантни, анти-стареещи и избелващи дейности Това е полезно за по-нататъшни фармакологични изследвания и може да се използва като функционална храна за ползи за кожата.

Според съответните проучвания,цистанчее широко разпространена билка, известна като „чудотворната билка, която удължава живота“. Основният му компонент ецистанозид, който има различни ефекти катоантиоксидант, противовъзпалително, инасърчаване на имунната функция. Механизмът между цистанче икожата избелванесе крие в антиоксидантния ефект на цистанчегликозиди. Меланинът в човешката кожа се произвежда от окислението на тирозин, катализирано оттирозиназа, а окислителната реакция изисква участието на кислород, така че свободните от кислород радикали в тялото се превръщат във важен фактор, влияещ върху производството на меланин. Cistanche съдържа цистанозид, който е антиоксидант и може да намали генерирането на свободни радикали в тялото, като по този начининхибиране на производството на меланин.

cistanche para que serve

Кликнете върху добавката Cistanche Tubulosa

За повече информация:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

Ключови думи:Cucurbita moschata; японска тиква; тиквено масло; водна ензимна екстракция; мастни киселини; антиоксидант; против стареене

1. Въведение

Тиквата принадлежи към рода Cucurbita и семейството Cucurbitaceae, често срещано и известно растение, култивирано в Северно Мексико и разпространено в Европа, Западна Америка и Азия [1]. Тиквата се счита за функционална храна, която съдържа изобилие от хранителни вещества като протеини, въглехидрати, липиди, фибри и др., заедно с фитохимични съединения като токофероли, каротеноиди и -ситостерол [2]. Установено е, че фитонутриентите от различни части на тиквата имат фармакологична активност [2]. Екстрактът от тиквена кора показва благоприятни ефекти при изгаряния при животински модели [3]. Пулпът от тиква демонстрира антиоксидантна, противовъзпалителна и антиангиогенезна активност [2], както и активност против умора при мишки [4]. В допълнение, тиквеното семе е добър естествен източник на незаменими мастни киселини и фитостероли, които намаляват риска от сърдечно-съдова смъртност [5,6]. Маслото от тиквени семки е страничен продукт от преработката на тиквени семки, които са богати на различни мастни киселини и биоактивни съединения като -каротин, -токоферол, витамин B, лутеин, фитостероли и други минерали [7,8]. Маслото има антиоксидантно, противовъзпалително, антибактериално и ранозаздравяващо действие [1,9]. Освен това има няколко ползи за здравето срещу заболявания, като например хипертония, диабет и рак [8,10].

Разработени са различни методи за извличане на масло от семена, включително механични методи като студено пресоване [11] и екстракция под високо налягане [12]. Екстракция с разтворител на масло от семена с помощта на органични разтворители като хексан, етил ацетат, ацетон и метанол също е документирана [13,14]. Екстракцията с помощта на ензими е алтернативен метод за производството на растителни масла, тъй като е екологична и безопасна технология. Основният механизъм на водната ензимна екстракция е хидролизиране и разрушаване на клетъчните стени на растителния материал, което води до по-голяма пропускливост и освобождаване на биоактивни компоненти, включително маслената фаза [15]. Различни ензимни смеси, използвани в тази екстракция, са съставени от пектинази, целулази, хемицелулази, арабиноза, -глюканаза и ксиланаза [16,17]. Оптимизираните условия на ензимната смес, например температура, рН, реакционно време, размер на частиците и концентрация на ензима, също повишават ензимната активност [16]. В наши дни този метод се използва широко за извличане на масло от много плодове и семена на растения [18,19]. Някои предишни проучвания демонстрираха оптимизираното състояние на маслото от тиквени семки за получаване на висок добив и ефективна фармакологична активност [20,21].

В момента хората консумират масло от тиквени семки в десерти или дресинги за салати, а също така е популярна съставка в козметиката. Стареенето на кожата е сложен биологичен процес, който се характеризира с набръчкване, загуба на еластичност, загуба на влага и груба текстура, причинени от оксидативен стрес, увреждане на ДНК и напреднало натрупване на краен продукт на гликиране [22]. Хиалуроновата киселина, колагенът и еластинът, които са важни компоненти на кожата, могат да бъдат разградени съответно от ензимите хиалуронидаза, колагеназа и еластаза, което води до стареене на кожата. Няколко растителни масла, като зехтин, масло от слънчогледови семки, масло от гроздови семки и масло от жожоба, са използвани за кожни козметични свойства за задържане на влага, подобряване на кожната бариерна функция и предотвратяване на стареенето на кожата [23]. Освен това пигментацията на кожата е променлив и забележим фенотип при хората, който включва меланогенеза и се регулира от ензима тирозиназа [24]. Понастоящем различни растителни екстракти са тествани за козметични и фармацевтични продукти за намаляване на производството на меланин, действайки като избелващи агенти [25,26].

cistanche tubulosa supplement

Наскоро C. moschata Duch. Ex Poir е един сорт тиква, който е често култивиран и популярен в Тайланд, но има малко проучвания, включващи неговите функционални стойности и фармакологични свойства. Освен това, водната ензимна екстракция е интересен метод за извличане на масло от тиквени семки за получаване на висок добив и ефективност. Следователно, това проучване се фокусира върху определянето на основните съставки, антиоксидантната и фармакологичната активност на маслото от тиквени семки от C. moschata Duch. Ex Poir. (тайландски сорт) и C. moschata (японска тиква), използвайки метода на водна ензимна екстракция.

2. Материали и методи

2.1. Растителни материали

Пресните плодове на C. moschata Duch. Ex Poir и C. moschata (японска тиква) бяха закупени от местен пазар в Чианг Май, Тайланд през декември 2020 г. Семената бяха събрани и всички влакнести нишки бяха отстранени. След отстраняване на обвивката на семената, обелените тиквени семки се измиват и изсушават при стайна температура. Семената се съхраняват в запечатана найлонова торбичка до по-нататъшно експериментиране. Освен това две търговски проби от тиквено масло (COM1 и COM2) бяха закупени от супермаркет в Чианг Май, Тайланд. Всички експерименти бяха извършени в рамките на датата на годност за консумация на търговските масла.

2.2. Химикали и реактиви 

Колагеназа от Clostridium histolyticum (ChC—EC.3.4.23.3), еластаза от свински панкреас (PE—EC 3.4.21.36), N-сукцинил-Ala-Ala-p-нитроанилид, железен сулфат (FeSO4), натриева сол на хиалуронова киселина от Streptococcus equi, хиалуронидаза от говежди тестове, пектиназа от Aspergillus niger (EC 3.2.1.15, по-голямо или равно на 5 единици/mg протеин, оптимално pH=4.{{20}}, оптимална температура=61 ◦C), целулаза от Aspergillus niger (EC 3.2.1.4, По-голямо или равно на 0.3 единици/mg твърдо вещество, оптимално pH=6.5, оптимална температура {{ 30}}–55 ◦C), протеаза от Aspergillus Saito (EC 3.4.21.112, По-голямо или равно на 0,6 единици/mg твърдо вещество, оптимално pH=5.1, оптимална температура=57.2 ◦ C), 2,20 -азинобис 3-етилбензотиазолин-6-сулфонат (ABTS), 2,2-дифенил-1-пикрилхидразилхидрат (DPPH), 2,4,6 трипиридил-s-триазин (TPTZ), 6-хидрокси-2,5,7,8-тетраметилхроман-2-карбоксилова киселина (Trolox), говежди серумен албумин, коджикова киселина, L -тирозин, L-DOPA, линолова киселина, моноосновен натриев фосфат (NaH2PO4·2H2O), двуосновен натриев фосфат и тирозиназа от гъби бяха закупени от Sigma-Aldrrich (St. Луис, Мисури, САЩ). Освен това, 37 процента солна киселина, 95 процента етанол, дестилирана (DI) вода, диметилсулфоксид (DMSO) и метанол бяха закупени от RCI Labscan Co., Ltd. (Бангкок, Тайланд). Амониев тиоцианат (NH4SCN) и железен хлорид (FeCl2) са закупени от Loba Chemie Pvt. Ltd. (Мумбай, Индия). Трис (хидроксиметил) аминометан е закупен от Merck (Дармщат, Германия).

2.3. Водна ензимна екстракция

Масла от тиквени семки от C. moschata Duch. Ex Poir и C. moschata (японска тиква) се екстрахират чрез метод на водна ензимна екстракция, като се използват параметрите на ензимна хидролиза от предишно проучване на Kanopka et al. (2016), включително ензимна концентрация, съотношение ензим-субстрат, реакционна температура, рН и реакционно време [21]. Три различни вида ензими, включително пектиназа, целулаза и протеаза, бяха комбинирани в тегловно съотношение 1:1:1, за да се създаде концентриран коктейл от ензими. След това, полученият концентриран коктейл се разрежда в DI вода, за да се получи 2 процента w/w водна ензимна смес. След това тиквените семки без черупки се добавят към получената водна ензимна смес в тегловно съотношение 1:1. След това сместа се смила фино с помощта на блендер Moulinex DB81 при стайна температура до хомогенност. След това рН на получената суспензия се коригира до 4.7 с помощта на 0.1 М НС1 и се инкубира при 54 °С в продължение на 15 часа. След като суспензията се охлади до стайна температура, тя се центрофугира при 11 500 × g за 10 минути. Горният слой от супернатанти, който е маслената фаза, се събира. Кремът, получен по време на процеса на екстракция, не беше емулгиран, а отстранен чрез сифониране с помощта на микропипета. Остатъкът от тиквено семе се отстранява чрез филтруване през филтърна хартия Whatman No.1 под вакуум [21]. Масло от тиквени семки от C. moschata Duch. Ex Poir (PSO1) и C. moschata (японска тиква) (PSO2) се съхраняват в добре затворени, светлоустойчиви контейнери при стайна температура до по-нататъшно експериментиране.

2.4. Определяне на химичния състав на масло от тиквени семки с помощта на метилов естер на мастни киселини/газохроматографско-масспектрометричен (FAME/GC/MS) метод

Съставът на мастни киселини в тиквеното масло се определя чрез използване на метилов естер на мастни киселини/газов хроматографски масспектрометричен (FAME/GC/MS) метод. FAME е вид естер на мастна киселина, който се получава чрез киселинно катализирана трансестерификация на мазнини с метанол. В това проучване маслата от тиквени семки (PSO1, PSO2, COM1 и COM2) са осапунени чрез добавяне на 0.5 M разтвор на NaOH в метанол при 100 ◦C за 15 минути . След охлаждане маслените проби се дериватизират с борен трифлуорид (BF3) в разтвор на метанол при 100 ◦C за 1 минута, за да се образуват FAME продукти. След охлаждане и добавяне на наситен разтвор на NaCl и хексан, FAME се разпределя в хексанова фаза и се събира във флакони за инжектиране. Екстрактите от FAME бяха анализирани чрез използване на GC/MS техника при следните условия: размер на капилярната колона (TR-FAME, размер 60 m × 0,25 mm, размер на частиците 0.25-µm), програма за работна температура от 50 ◦C ; задръжте 2 минути със скорост 1 от 10 ◦C/мин до 180 ◦C, задръжте 15 минути; скорост 2 от 4 ◦C/min, крайна температура 230 ◦C, задържане 22,50 min. Като газ носител се използва хелий при скорост на потока 1.0 mL/min. Маслените проби бяха инжектирани в режим без разделяне (съотношение на разделяне 1:20 и разделяне на другата част 20 mL/min) при 235 ◦C от автопробоватор. MS-детектор, снабден с източник на йонизация с електроразпръскване (ESI), работещ при 70 eV с температури на източника на йони и трансферната линия, настроени съответно на 200 ◦C и 220 ◦C, записва масспектри в m/z диапазона на 38–600. Анализираните съединения бяха определени чрез сравняване на техните масови спектри с публикувани данни (Национален институт за стандарти и технологии, 2008). Процентният състав се изчислява чрез интегриране на пикове в общи йонни хроматограми (TIC). Всички измервания са извършени от Лабораторията за изследвания и услуги, Научния център за халал, университета Чулалонгкорн, Банкок, Тайланд съгласно Halal GMP/HACCP и Halal-QHS/ISO 22000.

cistanches herba

2.5. Определяне на антиоксидантни активности

2.5.1. 2,2-Дифенил-1-Пикрилхидразил (DPPH) Анализ за отстраняване на радикали

Активността за отстраняване на DPPH радикали (DPPH•) се определя чрез използване на метода, установен от Chaiyana et al. (2017) [27]. Накратко, 20 µL маслени проби (PSO1, PSO2, COM1, COM2) и линолова киселина, разтворени в DMSO, се смесват със 180 µL от 167 µM DPPH етанолов разтвор в 96-плочка с ямки и след това се инкубират за 30 минути при стайна температура на тъмно. Аскорбинова киселина (1 mg/mL) се използва като положителна контрола. Оптичната плътност (OD) се измерва при 520 nm с помощта на четец на микроплаки (Microplate readers EZ Read 2000, Biochrome, England). Експериментите бяха проведени в три екземпляра и проведени в три независими. Процентът на инхибиране на DPPH се изчислява с помощта на уравнение (1):

DPPH инхибиране (проценти)={[(ODA − ODB) − (ODC − ODD)]/(ODA − ODB)} × 100, (1)

където ODA е OD на смес, съдържаща DI вода и DPPH•разтвор; B е ODB на смес, съдържаща DI вода и DMSO; C е ODC на смес, съдържаща маслени проби и DPPH•разтвор; и ODD е OD на смес, съдържаща маслени проби и DMSO.

2.5.2. 2, 20 -Азино-бис-3-Етилбензтиазолин-6-сулфонова киселина (ABTS) анализ

ABTS активността на катионни радикали (ABTS• plus) се измерва чрез колориметричен метод съгласно Chaiyana et al. (2017) и Paradee et al. (2019) [27,28] с лека модификация. ABTS• plus се генерира чрез добавяне на 2 mL от 7 mM ABTS с 3 mL от 2,45 mM калиев персулфат и се инкубира в продължение на 16–24 часа при стайна температура на тъмно. Полученият ABTS• plus впоследствие се разрежда с етанол, за да се получи OD от 0,7 ± 0,1 при 750 nm. Накратко, 20 µL маслени проби (PSO1, PSO2, COM1, COM2) и линолова киселина, разтворени в DMSO, се смесват със 180 µL ABTS• плюс етанолов разтвор в 96-плочка с ямки и се инкубират за 5 минути при стайна температура . OD се измерва при 750 nm с помощта на четец на микроплаки (Microplate readers EZ Read 2000, Biochrome, England). Аскорбинова киселина (1 mg/mL) се използва като положителна контрола. Стандартната крива се получава чрез начертаване на абсорбцията при 750 nm спрямо различни концентрации на Trolox, вариращи от 2,5–30 µg/mL. ABTS• плюс активността на пречистване се изчислява от стандартната крива на Trolox (R2=0.9922) и се изразява като еквивалентен антиоксидантен капацитет на Trolox (TEAC). Експериментите бяха проведени в три екземпляра и проведени в три независими.

2.5.3. Тест за намаляване на желязо антиоксидантната сила (FRAP).

Редуциращата желязо антиоксидантна сила (FRAP) на всяка от пробите се определя с помощта на FRAP анализ, както е описано в предишно проучване от Chaiyana et al. (2017), който е леко модифициран от Saeio et al. (2011) [27,29]. FRAP реагентът беше прясно генериран чрез смесване на 300 mM ацетатен буфер (рН 3.6), 10 mM 2,4,6 трипиридил-s-триазин (TPTZ) в 40 mM HCl и 20 mM FeCl3 в съотношение 10:1:1. В това изследване 20 µL маслени проби (PSO1, PSO2, COM1, COM2) и линолова киселина се смесват със 180 µL FRAP реагент в 96-плака с ямки и се инкубират за 5 минути при стайна температура на тъмно. OD се измерва при 595 nm с помощта на четец на микроплаки (Microplate readers EZ Read 2000, Biochrome, England). Аскорбинова киселина (1 mg/mL) се използва като положителна контрола. Стандартната крива се получава чрез начертаване на абсорбцията при 595 nm спрямо различни концентрации на железен сулфат (FeSO4), вариращи от 0,003–0,5 mM. Стойността на FRAP се изчислява от стандартната крива на FeSO4 (R2=0.9965) и се изразява като еквивалентен капацитет (EC1). Експериментите бяха проведени в три екземпляра и проведени в три независими.

2.5.4. Анализ на железен тиоцианат (FTC).

Инхибирането на липидната пероксидация е изследвано чрез метода на железен тиоцианат (FTC). Този метод се извършва съгласно стъпките, описани от Osawa et al. (1981) [30] с лека модификация. Сместа се състои от 5 0 µL маслени проби (PSO1, PSO2, COM1, COM2) и линолова киселина, 50 µL 50 процента линолова киселина в DMSO, 50 µL 10 процента воден разтвор на амониев тиоцианат (NH4SCN). и 50 µL от 2 mM железен хлорид (FeCl2). След това сместа се инкубира при 37 ± 2 °C за 1 час и OD се измерва при 500 nm с помощта на четец на микроплаки (Microplate readers EZ Read 2000, Biochrome, England). -Токоферол (0,025–0,1 mg/mL) се използва като положителна контрола. Експериментите бяха проведени в три екземпляра и проведени в три независими. Активността на инхибиране на липидната пероксидация се изчислява с помощта на уравнение (2):
Инхибиране на липидната пероксидация (проценти)={[(ODA − ODB) − (ODC − ODD)]/(ODA−ODB)} × 100, (2)
където ODA е OD на сместа, съдържаща линолова киселина, NH4SCN и FeCl2; ODB е OD на DMSO; ODC е OD на сместа, съдържаща маслени проби, линолова киселина, NH4SCN и FeCl2; и ODD е OD на сместа, съдържаща маслени проби и DMSO.

2.6. Определяне на дейности против стареене

2.6.1. Антихиалуронидазна активност

Измерването на антихиалуронидазната активност се извършва, както е описано по-рано от Chaiyana et al. (2020) [31]. Първо, 20 µL маслени проби (PSO1, PSO2, COM1, COM2) се смесват със 100 µL от 15 U/mL разтвор на хиалуронидаза и се инкубират при 37 ◦C за 10 минути. След инкубацията се добавят 100 µL от 0,03 процента w/v хиалуронова киселина, която се разтваря в 20 mM фосфатен буфер (рН 5,35), след което се инкубират при 37 °C за 45 минути. След това се добавя 1 mL 0,1 процента говежди серумен албумин и се инкубира при стайна температура в продължение на 10 минути. OD се определя при 600 nm с помощта на многомодов детектор (Beckman Coulter DTX880, Fullerton, СА, САЩ). Олеанолова киселина (0,25 процента w/v) се използва като положителна контрола. Експериментите бяха проведени в три екземпляра и проведени в три независими. Процентът на инхибиране на хиалуронидазата се изчислява с помощта на уравнение (3):

Инхибиране на хиалуронидаза (проценти)={[(ODA − ODB) − (ODC − ODD)]/(ODA − ODB)} × 100, (3)
където ODA е OD на сместа, съдържаща DI вода, разтвор на хиалуронидаза и хиалуронова киселина; ODB е OD на сместа, съдържаща DI вода и фосфатен буфер (рН 5,35); ODC е OD на сместа, съдържаща маслени проби, разтвор на хиалуронидаза и хиалуронова киселина; и ODD е OD на сместа, съдържаща маслени проби и фосфатен буфер (рН 5,35).

2.6.2. Антиколагеназна активност

Измерването на антиколагеназната активност се извършва съгласно процеса, установен от Chaiyana et al. (2019) и Thring et al. (2009) с леки модификации [32,33]. Накратко, 20 µL маслени проби (PSO1, PSO2, COM1, COM2) се смесват с 20 µL от 0,1 U/mL разтвор на колагеназа от Clostridium histolyticum и се инкубират при 37 ◦C за 15 минути. След инкубацията, 80 µL от 50 mM трицинов буфер (400 mM NaCl и 10 mM CaCl2, pH 7,5) и 40 µL от N-[3-(2-фурил)акрилоил]-Leu-Gly- Добавен е Pro-Ala (FALGPA) субстратен разтвор. OD незабавно се открива при 340 nm и след това се измерва непрекъснато в продължение на 20 минути с помощта на четец на микроплаки (Microplate readers EZ Read 2000, Biochrome, England). Олеанолова киселина (1 процент w/v) се използва като положителна контрола. Експериментите бяха проведени в три екземпляра и проведени в три независими. Процентът на инхибиране на колагеназата се изчислява с помощта на уравнение (4):

Инхибиране на колагеназа (проценти)=[(ODA − ODB)/ODA] × 100, (4)
където ODA е OD на сместа, съдържаща маслени проби, разтвор на колагеназа, трицин буфер и FALGPA субстрат; и ODB е OD на сместа, съдържаща DMSO, разтвор на колагеназа, трицин буфер и FALGPA субстрат.

2.6.3. Антиеластазна активност

Измерването на антиеластазна активност се извършва съгласно процеса, установен от Chaiyana et al. (2019) и Thring et al. (2009) с леки модификации [32,33]. Накратко, 10 µL маслени проби (PSO1, PSO2, COM1, COM2) се смесват с 40 µL от 0,03 U/mL разтвор на еластаза от свински панкреас, след това 50 µL от 200 mM Tris-HCL буфер (рН 8,0) и 100 µL от Добавят се 0.8 mM субстратен разтвор на N-сукцинил-Ala-Ala-Ala-р-нитроанилид (AAAPVN). OD незабавно се открива при 410 nm и след това се измерва непрекъснато в продължение на 20 минути с помощта на четец на микроплаки (Microplate readers EZ Read 2000, Biochrome, England). Олеанолова киселина (1 процент w/v) се използва като положителна контрола. Експериментите бяха проведени в три екземпляра и проведени в три независими. Процентът на инхибиране на еластазата се изчислява с помощта на уравнение (5):

Инхибиране на еластаза (проценти)=[(ODA − ODB)/ODA] × 100, (5)
където ODA е OD на сместа, съдържаща маслени проби, разтвор на еластаза, Tris-HCl буфер и AAAPVN субстрат; и ODB е OD на сместа, съдържаща DMSO, разтвор на еластаза, Tris-HCl буфер и AAAPVN субстрат.

2.7. Определяне на анти-тирозиназни активности

Избелващият ефект на естествения екстракт е установен чрез измерване на антитирозиназната активност, което е извършено съгласно Saeio et al. (2011) и Laosirisathian et al. (2020) [29,34]. L-тирозин и L-DOPA са субстратите на ензима тирозиназа в това изследване. Накратко, 10 µL маслени проби (PSO1, PSO2, COM1, COM2) се смесват с 30 µL тирозиназа в 96-плака с ямки, след което се инкубират при стайна температура за 10 минути. След инкубиране се добавят 100 µL от субстрата, който е 2,5 тМ L-тирозин или L-DOPA, и се инкубират в продължение на 30 минути. OD се определя при 450 nm с помощта на четец на микроплаки (Microplate readers EZ Read 2000, Biochrome, England). Kojic киселина (20 ug/mL) се използва като положителна контрола. Експериментите бяха проведени в три екземпляра и проведени в три независими. Процентът на инхибиране на тирозиназата се изчислява с помощта на уравнение (6):

Инхибиране на тирозиназа (проценти)={[(ODA − ODB) − (ODC − ODD)]/(ODA − ODB)} × 100, (6)
където ODA е OD на сместа, съдържаща DMSO, ензим тирозиназа и L-тирозин; ODB е OD на сместа, съдържаща ензим тирозиназа и PBS с рН 6.8; ODC е OD на сместа, съдържаща маслени проби, ензима тирозиназа и L-тирозин; и ODD е OD на сместа, съдържаща маслени проби, ензима тирозиназа и PBS с рН 6.8.

2.8. Статистически анализ

Всички данни бяха демонстрирани като средно ± стандартно отклонение (SD). Статистическата значимост беше анализирана с помощта на еднопосочен дисперсионен анализ (ANOVA), последван от пост-хок теста на Tukey с помощта на GraphPad Prism (версия 8.0, GraphPad Software) и беше взето предвид p < 0.05 статистически значим.

cistanche herb

3. Резултати и дискусия

3.1. Тиквено масло характер

В това изследване използвахме водна ензимна екстракция вместо екстракция с органичен разтворител, за да извлечем масло от тиквени семки от C. moschata Duch. Ex Poir (PSO1) и C. moschata (PSO2), защото това е прост, ефективен и продуктивен процес [15,21]. PSO1 беше тъмнокафява течност с нисък вискозитет, докато PSO2 беше зеленикаво-кафява течност с нисък вискозитет. И двете масла от тиквени семки имаха своя характерна миризма. Добивите на PSO1 и PSO2 бяха съответно 17,7 процента v/w и 15,6 процента v/w. Освен маслото се съобщава, че тиквеното семе съдържа различни хранителни съединения. Близките състави на C. moschata са главно въглехидрати (39,51 процента), следвани от мазнини (28,49 процента), протеини (19,23 процента), вода (7,67 процента) и пепел (5,18 процента), съответно [35]. Въпреки това, в сравнение с предишните проучвания, използващи разтворител и механично пресоване, настоящото проучване разкрива по-ниски добиви на масло от C. moschata. Въпреки че екстракцията с разтворител е описана като най-ефективният метод за екстракция на масло, извличайки до 98 процента от маслата от семената, има някои проблеми, свързани с остатъците от разтворители и чистотата на произведеното масло [36]. Освен това разтворителят, използван в процеса на екстракция, повлия на добива на генерираното масло. Екстракцията с хексан, петролев етер, петролен бензен, циклохексан, изопропилов етер, етилацетат, тетрахидрофуран, пропан-2-ол и ацетон дава добив 43,4–64,4 процента [37,38]. Следователно студеното пресоване е за предпочитане пред екстракцията с разтворител. Въпреки това студената преса може да причини някои усложнения в началния етап на използване на винтова преса [39]. Следователно, водната ензимна екстракция може да бъде алтернативен метод за екстракция, тъй като дава по-високо съдържание на масло от тиквени семки (36.0 процента) в сравнение със студено пресовано масло (33,5 процента) [21]. Въпреки че процесът на водна ензимна екстракция е по-сложен от студеното пресоване, той включва относително по-евтини инвестиционни разходи, непрекъснато намаляване на цената на търговските ензимни препарати, потенциал за едновременно изолиране на уникални и ценни фитохимични компоненти, както и адресиране широко разпространеното желание за внедряване на зелени технологии [21]. Предварителните проучвания описват, че няколко ензима като целулази, пектинази, хемицелулаза и протеаза често се използват за разрушаване на структурата на растителната клетъчна стена, за да се подобри биоактивната екстракция от растения [16,17]. Ето защо, ние проектирахме това проучване за извличане на масло от семена чрез използване на ензимна смес, съдържаща пектиназа, целулаза и протеаза (1:1:1), както е описано по-рано от Kanopka et al. (2016), които оптимизираха условията на ензимна хидролиза, за да получат най-висок добив на тиквено масло [21]. Освен това, този метод показва по-безопасни и по-екологично устойчиви алтернативи на екстракцията с разтворител, тук наречена „зелена екстракция“.

3.2. Химичен състав на маслото от тиквени семки

За анализ на състава на мастни киселини, тиквеното масло с помощта на водна ензимна екстракция (PSO1 и PSO2) беше сравнено и анализирано заедно с търговското масло от тиквено семе (COM1 и COM2), произведено чрез екстракция чрез студено пресоване. Съставите на мастни киселини на PSO1, PSO2, COM1 и COM2 са показани в таблица 1. Всички проби от тиквено масло се състоят от полиненаситени (PUFA), мононенаситени (MUFA) и наситени мастни киселини. Цис-линоловата киселина (C18:2) е основният компонент във всички маслени проби. COM2 съдържа най-високо съдържание на мастни киселини (51,74 процента), следван от COM1 (48.00 процента), PSO1 (39.09 процента) и PSO2 (37,63 процента), съответно. По същия начин, цис-олеиновата киселина (C18:1) присъства във висок процент, особено в PSO2 (37,45 процента), следвана от COM1 (33,39 процента), PSO1 (31,22 процента) и COM2 (28,64 процента). Наситени мастни киселини като палмитинова киселина (C16:0) и стеаринова киселина (C18:0) бяха открити само в малки количества във всяка от пробите масло. Следи от други PUFA, MUFA и наситени мастни киселини също бяха наблюдавани и идентифицирани.

В литературата линоловата киселина е известна още като омега-6, есенциална мастна киселина, която не може да се синтезира от човешкото тяло, а се приема само чрез диета. Линоловата киселина е важен хранителен елемент за здравословните функции при хората, включващ прекурсор на керамиди, които са основен компонент на клетъчните мембрани, витамин D и различни хормони [40,41]. Проучванията при животни показват, че дефицитът на линолова киселина може да причини лющене и сърбяща кожа [23]. Освен това, линоловата киселина от растителното масло е подпомогнала заздравяването на кожни рани, заедно с предотвратяването на възпаление на кожата и акне [23]. Освен това олеиновата киселина, или омега -9, е полезна за предотвратяване на рак, автоимунни и възпалителни заболявания [42]. Наистина, олеиновата киселина значително намалява производството на азотен оксид на мястото на раната, което води до по-бързо затваряне на раната [43]. Тези данни подкрепят, че маслото от тиквени семки, което обогатява линолова киселина (омега-6) ​​и олеинова киселина (омега-9), проявява потенциални ползи за здравето.

cistanche tubulosa

Според нашите открития маслото от тиквени семки (PSO1, PSO2, COM1 и COM2) се състои от много мастни киселини, включително линолова киселина (C18:2), олеинова киселина (C18:2), палмитинова киселина (C16:0) и стеаринова киселина (C18: 0), които са често срещани компоненти в маслото от тиквени семки [44]. Линоловата киселина (омега-6) и олеиновата киселина (омега-9) бяха доминиращи във всички проби от масла. Най-голямото количество линолова киселина е COM2, следвано съответно от COM1, PSO1 и PSO2. Освен това най-голямото количество олеинова киселина е PSO2, следвано от COM1, PSO1 и COM2. Тези резултати обясняват, че водната ензимна екстракция на масло от тиквени семки има малко по-ниско съдържание на линолова киселина, но не и олеинова киселина, отколкото екстракцията чрез студено пресоване. Причината за по-ниското съдържание на линолова киселина в тиквените семки от водна ензимна екстракция, отколкото в търговските маслени проби, се дължи на разликата в процеса на екстракция. Предишни проучвания са открили несъответствия в количеството ненаситени мастни киселини, особено олеинова киселина и линолова киселина, в масла от тиквени семки от различни екстракции [39]. Съдържанието на олеинова киселина варира от 28,19 процента в студено пресовано тиквено масло до 30,56 процента в тиквено масло, екстрахирано с пентан, докато съдържанието на линолова киселина варира от 43.86 процента в тиквено масло, екстрахирано с пентан до 46,67 процента в студено пресовано масло от тиквени семки [39]. Освен различните методи на екстракция, разтворителите, използвани в процеса на екстракция, и температурата по време на узряването на семената също оказват влияние върху съдържанието на линолова киселина в семената на растенията. Предишно проучване подчерта, че петролевият етер дава ленено масло с ниско съдържание на линолова киселина (26,2 процента), докато n-хексанът дава противоречиви резултати със съдържание на линолова киселина от 46,5 процента [45]. Освен това линоловата киселина е обратно пропорционална на температурата по време на узряването на слънчогледовите семена [46].

В допълнение, относително проучване открива, че химичният състав по отношение на състава на мастни киселини разкрива, че линоловата и олеиновата киселина присъстват съответно в 47,45 процента и 35 процента в маслото от тиквени семки (C. maxima), извлечено с диетилов етер [47] . Според Akin et al. (2018), съдържанието на линолова киселина варира от 53,19 процента до 53,27 процента, последвано от олеинова киселина, която също присъства във високи количества, вариращи от 27,52 процента до 27,59 процента в студено пресованото извличане на масло от семена на C. pepo L. [48 ]. Следователно, водната ензимна екстракция в това изследване също така дава по-ниски добиви на мастни киселини от екстракцията с разтворител и екстракцията чрез студено пресоване, споменати в предишни проучвания. При сравнение на сортове открихме, че PSO1 (C. moschata Duch. Ex Poir) показва по-високо количество линолова киселина от PSO2 (C. moschata или японска тиква). От друга страна, PSO2 представя по-високо количество олеинова киселина от PSO1. Важно е, че вариациите в профилите на мастни киселини и количествата масло от тиквени семки зависят от произхода на определени сортове, климатичните условия и управлението след прибиране на реколтата [49]. Освен разликите в профилите на мастни киселини на масла от тиквени семки, получени чрез различни методи на екстракция, се съобщава, че маслата от водна ензимна технология са богати на фитостерол и токоферол [50]. Следователно PSO1 и PSO2, които са произведени чрез метода на зелена екстракция, се предлагат като алтернативни масла от тиквени семки за по-нататъшни приложения.


За повече информация: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

Може да харесаш също