Екстрактът от Herba Cistanche подобрява митохондриалното генериране на АТФ в сърцата на плъхове и H9c2 клетки
Mar 04, 2022
За контакт: Одри Хуaudrey.hu@wecistanche.com
Хой Ян Люн и Кам Мин Ко
За да цитирате тази статия: Hoi Yan Leung & Kam Ming Ko (2008) Herba Cistanche Extract Enhances Mitochondrial ATP Generation in Rat Hearts and H9c2 Cells, Pharmaceutical Biology, 46:6, 418-424, DOI: 10.1080/13880200802055883
Резюме
За да се изследва фармакологичната основа на „Ян-ободряващото“ действие на Herbal Cistanche [изсушеното цяло растение от Cistanche deserticola YC Ma (Orobanchaceae)] в китайската медицина, ефектите на метаноловия екстракт от Herba Cistanche върху капацитета за генериране на митохондриален АТФ изследвани с помощта на ex vivo модел на сърце на плъх и in situ H9c2 клетъчен анализ. Лечението с екстракт от Herba Cistanche повишава миокардния митохондриален капацитет за генериране на АТФ по дозозависим начин при плъхове, както е оценено чрез in vitro измерване. Стимулирането на капацитета за генериране на АТФ се свързва с паралелно усилване на митохондриалния електронен транспорт, поддържан от пируват, но не и от сукцинат. Лечението с Herba Cistanche също повишава активността на миокардния митохондриален комплекс I и комплекс III, като степента на стимулация върху активността на комплекс I е по-голяма. Лечението с Herba Cistanche води до зависимо от дозата и времето увеличение на капацитета за генериране на митохондриален АТФ в клетки H9c2. Резултатите показват, че лечението с Herba Cistanche може да увеличи генерирането на митохондриален АТФ в сърцата на плъхове ex vivo и H9c2 клетки in situ, вероятно чрез засилване на окислителното фосфорилиране.
Ключови думи:ATP, Cistanche deserticola, H9c2 клетки, сърце, митохондрии.
Въведение
„Ян ободряването“, което въплъщава общото подобряване на функциите на тялото в китайската медицина, включва използването на енергия за задвижване на различни биохимични процеси. В това отношение АТФ, който е универсалната валута на енергия за захранване на клетъчната функция, се генерира главно чрез окислително фосфорилиране в митохондриите. Ние постулирахме, че "Ян ободряващите" билки притежават способността да увеличават капацитета за генериране на митохондриален АТФ (Ko et al., 2004). Това е подкрепено от нашето скорошно откритие, че "ян-оживяващите", но не и "ин-подхранващите" китайски тонизиращи билки могат да подобрят миокардния капацитет за генериране на АТФ в миши сърца ex vivo (Ko et al., 2006). Herba Cistanche, изсушеното цяло паразитно растение (с изключение на цвета) от Cistanche deserticola YC Ma (Orobanchaceae), се класифицира като „оживяваща Ян“ тонизираща билка в традиционната китайска медицина (Chen, 1998) и изглежда като най-популярната съставка в редица китайски патентни формулировки, използвани за подсилване на Ян“. В Китай и Япония Herba Cistanche се използва широко за лечение на множество симптоми на дефицит на Ян. Фармакологичните изследвания показват, че Herba Cistanche може да извлича свободните радикали (Xiong et al., 1996), да произвежда седативни (Lu, 1998), да забавя стареенето (Lee et al., 1990), антиноцицептивни и противовъзпалителни ефекти (Lin et al., 2002). ) и подобряват имунната функция (Wu et al., 2005). Основната активна съставка на Herba Cistanche са фенилетаноидни гликозиди (Ouyang et al., 2003), за които е установено, че имат антибактериални, антистресови и антиоксидантни свойства (Xiong et al., 1998), както и антиапоптотични ефекти върху културите неврони (Tian & Pu, 2005). В настоящото проучване, за да се изследва фармакологичната основа на Ян-ободряващото действие на Herba Cistanche, бяха изследвани ефектите от лечението с Herba Cistanche върху капацитета за генериране на АТФ в митохондриите, изолирани от сърца на плъх ex vivo и култивирани H9c2 кардиомиоцити in situ. За да се изследва биохимичният механизъм, лежащ в основата на действието за повишаване на генерирането на АТФ, ефектите от лечението с Herba Cistanche върху митохондриалния електронен транспорт и сложните I–IV дейности също бяха изследвани в сърцата на плъхове.
Екстракт от Cistanche deserticola
Материали и методи
Химикали, клетъчни култури и растителни материали ATP, ADP и 3-[4,5-диметилтиозол-2-ил]-2,5-дифенил-тетразолиев бромид ( MTT) са закупени от Sigma Chemical Co. (Сейнт Луис, Мисури, САЩ). Луциферазен разтвор (ATPlite) беше получен от PerkinElmer (Бостън, Масачузетс, САЩ). Модифицираната среда на Eagle на Dulbecco (DMEM) и фетален говежди серум (FBS) бяха закупени от GIBCO BRL Life Technologies (Grand Island, NY, USA). H9c2 клетъчна линия е закупена от ATTC (Rockville, MD, USA). Herba Cistanche е доставена от местен търговец на билки (Lee Hoong Kee). Билката беше удостоверена от доставчика и образец от ваучер (HKUSTY00301) беше депозиран в Департамента по биохимия, Хонконгския университет за наука и технологии (HKUST).
Билкова екстракция
Herba Cistanche (100 g) се нарязва на малки парчета и след това се екстрахира чрез нагряване под обратен хладник в 300 mL метанол
при 65◦C за 2 часа. Процедурата се повтори два пъти. Обединеният екстракт се изсушава чрез изпаряване на разтворителя при понижено налягане и се получава метанолов екстракт от Herba Cistanche с добив от 39 процента (w/w). Химическият анализ показва, че метаноловият екстракт от Herba Cistanche съдържа общо сапонини, общи флавоноиди, общи лигнани и полизахариди в концентрации от 1,62 процента (w/w), 0.{08 процента, 0,15 процента и съответно 75,6 процента.
Грижа за животните
Възрастни мъжки плъхове Sprague-Dawley (8–10 седмици; 250–300 g) се държат при 12--часов цикъл на тъмно/светло в стая с контролиран въздух/влажност при около 22°C и им е разрешена храна и вода ad libitum в заведенията за грижа за животните
в HKUST. Експерименталните протоколи бяха одобрени от Комитета по изследователска практика в HKUST.
Медикаментозно лечение
Животните бяха произволно разделени на групи, с пет до шест животни във всяка. В групите на лечение, на плъхове е прилаган интрагастрално метанолов екстракт от Herba Cistanche (разтворен/суспендиран във вода) при нарастващи дневни дози ({{0}}.031–0,5 g/kg) в продължение на 3 дни. Контролните животни получават само вода. Двадесет и четири часа след последното дозиране сърцето се взема от анестезирани с фенобарбитал животни и се подлага на биохимичен анализ.
Приготвяне на митохондриални фракции и измерване на капацитета за генериране на АТФ (ATP-GC) ex vivo
Проби от сърдечна лява вентрикуларна тъкан бяха изрязани и изплакнати с ледено студен изотоничен буфер (0.32 М захароза, 1 mM EDTA, 50 mM Tris/HCl, рН 7.4). Сърдечните митохондриални фракции се приготвят чрез диференциално центрофугиране в изотоничен буфер при 4 ° С. Приготвя се 10 процента (w/v) сърдечен хомогенат чрез хомогенизиране на смляната вентрикуларна тъкан с хомогенизатор от тефлоново стъкло при 4000 rpm за 20-30 пълни удара. Хомогенатът се центрофугира при 600 g за 10 минути за отстраняване на ядрата и клетъчните остатъци. След това супернатантата се центрофугира при 8000 g за 30 минути, за да се утаят митохондриите (Evan, 1992). Пелетите се ресуспендират в 1 mL от изотоничния буфер и се възстановяват митохондриалните фракции. Митохондриалният ATP-GC на нетретирани животни се измерва по метода на Leung et al. (2005).
Измерване на митохондриалния електронен транспорт
Измерването на електронния транспорт в изолирани митохондрии, което се основава на редукцията на МТТ, се извършва, както е описано от Cohen et al. (1997). Митохондриите се приготвят при протеинова концентрация от 1 mg/mL с инкубационен буфер (250 mM захароза, 50 mM HEPES, 10 mM KH2PO4, 2 mM MgCl2, 1 mM EGTA, pH 7.4) . Аликвотна част (40 µL) от митохондриите се смесва със 100 µL всеки от 15 mM пируват или 0.5 mM сукцинат и 0.42 mg/mL МТТ. Реакционната смес се инкубира при 37°С в продължение на 10 минути с леко разклащане. След инкубацията, реакционната смес се прекратява чрез добавяне на 100 uL лизисен буфер (10 процента, w/v, натриев додецил сулфат и 45 процента диметилформамид, коригирано до рН 4.7 с ледена оцетна киселина). След престояване в продължение на 5 минути, показанията на абсорбцията на реакционната смес бяха взети с четец на микротитърни плаки (Bio-Rad, Hercules, СА, САЩ) и отчетени като разлика между 570 nm и 630 nm. Данните бяха изразени като процент от средната стойност на контролната (т.е. Herba Cistanche – нетретирана) група.
Клетъчна култура
H9c2 клетки, постоянна клетъчна линия, получена от сърдечни миобласти (Hescheler et al., 1991), се култивират като монослоеве в DMEM, допълнен с 10 процента (v/v) FBS. Средата съдържа глюкоза (4.5 g/L) и глутамин (4.5 mM), допълнени с NaHC03 (17 mM), пеницилин (100 IU/mL) и стрептомицин (100 ug/mL). Всички клетки се отглеждат в атмосфера от 5 процента (v/v) CO2 във въздуха при 37 °C. Средата се заменя със свежа среда на всеки 2 или 3 дни. Запас от клетки се отглежда в 75 cm2 културална колба и се разделя преди сливане при съотношение на субкултивиране 1:10. За ATP-GC анализ, H9c2 клетки се посяват при плътност от 2.5 104 клетки/ямка в 24-плака с ямки. След прикрепването на клетките, екстракт от Herba Cistanche (разтворен във фосфатно буфериран физиологичен разтвор; PBS) се прилага в средата и клетките се инкубират за увеличаващи се периоди (2–16 часа) от време. Контролните (нетретирани) клетки получават само PBS.
Измерване на ATP-GC in situ
След посочените периоди на инкубация с екстракт от Herba Cistanche при нарастващи концентрации (5{{10}}–300 µg/mL), беше извършен ATP-GC анализ. Средата се аспирира и клетките се третират с дигитонин (50 µg/mL) в инкубационен буфер (120 mM KCl, 5 mM KH2PO4, 2 mM EGTA, 10 mM HEPES, 0,1 mM MgCl2, 0,5 процента BSA, рН 7,4) за 3 мин. при 37◦C. След аспириране на дигитонин, глутамат (5 mM), малат (5 mM) и ADP (60 µM) бяха добавени към клетките за генериране на митохондриален АТФ, което беше наблюдавано на увеличаващи се интервали от време, вариращи от 0 до 15 минути. Реакцията се прекратява чрез добавяне на 60 µL перхлорна киселина (30 процента, w/v) и реакционните смеси след това се центрофугират при 600g за 10 минути при 4°C. Аликвотна част (120 uL) от супернатантата се смесва с 90 uL от 1.4 М KHCO3 за неутрализация. Смесите се центрофугират отново при 600 g при 4 ° С и супернатантите се измерват за съдържание на АТР, както е описано по-рано. ATP-GC на нетретираните клетки беше оценен чрез изчисляване на площта под кривата на графиката (AUC1), нанасяйки генерирания ATP (nmol/mg протеин) спрямо времето (0–15 минути) и изразен в произволни единици. За клетки, третирани с Herba Cistanche, стойностите на AUC1 за увеличаващи се времена на инкубация (3, 5, 7, 10 и 15 минути) бяха нормализирани до съответната средна контролна стойност от нетретирани проби и изразени като контролен процент. След това площта под кривата (AUC2) на графиката, нанасяща процентни контролни стойности спрямо инкубационното време (3–15 минути) беше изчислена и изразена в произволни единици. Данните от групите, третирани с Herba Cistanche, бяха изразени като процент от контролата от уравнението:
[AUC2(HerbaCistanche − третиран)/AUC2(нетретиран)]×100 процента.
Измервания на активността на комплекс I–IV и цитрат синтаза
Активностите на комплекс I–III на митохондриалната електрон-транспортна верига (ETC) се измерват чрез спектрофотометрични методи, като се използват специфични за комплекса субстрати (NADH за комплекс I, сукцинат за комплекс II и децилубихинол за комплекс III), както е описано (Grad & Lemire, 2004; Hsu et др., 2005; Марк и др., 2001). Активността на комплекс IV се измерва с помощта на комплект за анализ на цитохром с оксидаза от Sigma. Активността на митохондриалната цитрат синтаза се измерва по метода на Srere (1969).
Протеинов анализ
Протеиновите концентрации на митохондриалните фракции и клетъчните лизати се определят с помощта на комплект за анализ на протеин BioRad, като се използва говежди серумен албумин като стандарт ({{0}}.038–0.600 mg/mL).
Статистически анализ
Всички данни бяха изразени като средна стандартна грешка на средната стойност (SEM). Те бяха анализирани чрез еднопосочен дисперсионен анализ (ANOVA). Post hoc множество сравнения бяха направени с LSD. P стойности<0.05 were="" regarded="" as="" statistically="">
Резултати
Ефекти от лечението с Herba Cistanche върху миокарден митохондриален ATP-GC при плъхове
Както е показано на Фигура 1, лечението с екстракт от Herba Cistanche в дози до 0.5 g/kg повишава миокардния митохондриален ATP-GC по дозозависим начин при плъхове, като степента на стимулация е 89 процента при доза 0.5 g/kg.
Ефекти от лечението с Herba Cistanche върху митохондриалния електронен транспорт в сърцата на плъхове
Степента на електронен транспорт в изолирани митохондрии се измерва чрез наблюдение на намаляването на МТТ. Субстратът, използван за анализа, е или пируват, или сукцинат. Както е показано на Фигура 2а, лечението с Herba Cistanche дозозависимо повишава степента на митохондриален електронен транспорт, поддържан от пируват в сърцата на плъхове, като оптималната стимулация се наблюдава при дози от 0.5 g/kg. Въпреки това, не са открити значителни промени в степента на митохондриалния електронен транспорт, поддържан от сукцинат, в сърцата на плъхове, третирани с Herba Cistanche (фиг. 2b).
Ефекти от лечението с Herba Cistanche върху дейностите на митохондриалния респираторен комплекс в сърцата на плъхове
Както е показано на Фигура 3, лечението с Herba Cistanche при оптимална доза от 0.5 g/kg значително повишава активността на комплекс I (34 процента) и комплекс III (22 процента) в сърцата на плъхове. Активността на цитрат синтазата, ключов ензим за цикъла на трикарбоксилната киселина, не се повлиява от лечението с Herba Cistanche (фиг. 3). Western blot анализът показва, че протеиновите нива на комплекс I и III не са повлияни от лечението с Herba Cistanche (данните не са показани).
Времеви курс на Herba Cistanche-индуцирани промени в митохондриален ATP-GC в H9c2 клетки
Промените в ATP-GC бяха изследвани в клетки, третирани с Herba Cistanche (50 и 150 µg/mL) след 2 до 16 часа инкубация. Както е показано на Фигура 4, лечението с Herba Cistanche повишава ATP-GC по зависим от времето и двуфазен начин в H9c2 клетки, като максималната стимулация (съответно 44 процента и 89 процента) се наблюдава след 8 часа инкубация и за двете лекарствени концентрации. След това ATP-GC се върна към нетретирани контролни стойности, когато инкубационното време беше удължено до 16 часа. По-ранно начало на стимулацията се получава, когато клетките са третирани с по-висока концентрация (150 µg/mL) екстракт от Herba Cistanche.
Концентрационна зависимост от Herba
Индуцирано от Cistanche увеличение на ATP-GC в H9c2 клетки
Клетките H9c2 бяха третирани с нарастващи концентрации (50–300 µg/mL) екстракт от Herba Cistanche в продължение на 4 часа. Фигура 5 показва, че лечението с Herba Cistanche повишава ATP-GC по начин, зависим от концентрацията, като максималната стимулация (82 процента) се наблюдава при концентрация от 300 µg/mL.
Екстрактът от Cistanche увеличава производството на АТФ
Дискусия
Регулирането нагоре на клетъчните дейности за подобряване на функцията на тялото, като мускулна контракция и имунни реакции чрез Ян инвигорация, налага увеличаването на потреблението на АТФ, което от своя страна се поддържа от митохондриалното окислително фосфорилиране. В настоящото проучване беше установено, че лечението с Herba Cistanche в зависимост от дозата повишава капацитета за генериране на митохондриален АТФ ex vivo в сърцата на плъхове. Това наблюдение е в съответствие с нашето предишно откритие, че сред ободряващите китайски тонизиращи билки Yang, лечението с Herba Cistanche води до относително по-голяма степен на стимулация върху митохондриалното генериране на АТФ в миши сърца (Ko et al., 2006). Повишаването на генерирането на митохондриален АТФ беше успоредно с увеличаването на митохондриалния електронен транспорт, задвижван от пируват, но не и от сукцинат, както се оценява чрез намаляването на МТТ. Резултатите, получени от кинетичното измерване на митохондриалния комплекс I–IV, показват, че активността на двата комплекса I и III е повишена в сърцата, третирани с Herba Cistanche, като степента на стимулация върху активността на комплекс I е по-голяма от тази на комплекс III. Тъй като активността на цитрат синтазата, ключов ензим от цикъла на трикарбоксилната киселина, не е повлияна, повишаването на митохондриалния капацитет за генериране на АТФ чрез лечение с Herba Cistanche може да се отдаде главно на стимулирането на активностите на комплекс I и/или III. Повечето от нуждите на сърцето от АТФ се задоволяват от митохондриите, които разчитат почти изцяло на свързаното с комплекс I (NADH) окисление на мастна киселина и глюкоза (Stanley et al., 1997; Taegtmeyer, 1998). Комплекс I, който проявява по-ниска активност от другите респираторни комплекси, се счита за важен фактор в регулирането на окислителното фосфорилиране. По този начин, стимулирането или инхибирането на активността на комплекс I може да има голямо влияние върху сърдечната енергетика. Въпреки че Western blot анализът не разкри никакви промени в протеиновото ниво на тези два комплекса (данните не са показани), повишената ензимна активност може да е резултат от промените в протеиновия тиолов статус и/или липидната среда (Davey et al., 1998; Paradies и др., 2004).
Екстракт от Herba Cistancheможе да доведе до ефект на повишаване на генерирането на АТФ в култивирани H9c2 клетки in situ. Сравнително ранното начало на стимулиращото действие, предизвикано от лечението с Herba Cistanche, особено при високи дози, е в съответствие с наблюдението от проучванията ex vivo, които показват, че синтезът на комплекс I и III протеини е малко вероятно да участва в генерирането на АТФ, повишаващо действие. Демонстрацията на индуцирано от Herba Cistanche подобрение в генерирането на АТФ in situ състояние подкрепя идеята, че увеличаването на митохондриалния капацитет за генериране на АТФ, както е оценено чрез измерване ex vivo, може просто да отразява паралелен ефект, предизвикан от лекарственото лечение in vivo състояние. Измерването на генерирането на АТФ в изолирани митохондрии и култивирани клетки, използващи малат и глутамат като субстрати, е косвена мярка за митохондриално дишане в състояние 3 (Chen et al., 2003). Използвайки същия биолуминесцентен анализ на ATP, скоростта на генериране на митохондриален ATP в различни тъкани на нетретирани плъхове, както беше съобщено по-рано в нашата лаборатория (Leung et al., 2005), беше в добро съответствие с наскоро публикуваните данни (Drew & Leeuwenburgh, 2003). ). Капацитетът за генериране на АТФ беше оценен чрез двустепенна интеграция на зависими от времето промени в нивото на АТФ както в ex vivo, така и в in situ анализи. Следователно наблюдаваният стимулиращ ефект, предизвикан от лекарството, беше увеличен за сравнение. Увеличаването на капацитета за генериране на АТФ чрез третиране с Herba Cistanche в митохондрии на сърце на плъх ех vivo беше успоредно със стимулиране на генерирането на АТФ в H9c2 клетки in situ. Като се има предвид наличието на активност за повишаване на генерирането на АТФ в ободряващите китайски тонизиращи билки, включително Herba Cistanche, в миши сърца ex vivo (Ko et al., 2006), резултатите предполагат, че измерването на капацитета за генериране на АТФ в H9c2 клетки в situ може да се използва като фармакологичен тест за китайски тонизиращи билки или билкова формула, ободряващи Ян.
В заключение, лечението с екстракт от Herba Cistanche може да повиши капацитета за генериране на митохондриален АТФ в сърца на плъх ex vivo и в клетки H9c2 in situ. Констатациите подкрепят нашата постулация, че фармакологичната основа на Ян-инвигорацията включва подобряване на телесните функции чрез стимулиране на митохондриалното производство на АТФ.
Екстрактът от Herba Cistanche повишава капацитета за генериране на митохондриален АТФ
Препратки
Chen P (1998): Тонични билки. Разширена серия TCM. Пекин, Китай, Science Press, стр. 233–320.
Chen Q, Vazquez EJ, Moghaddas S, Hoppel CL, Lesnefsky EJ (2003): Производство на реактивни кислородни видове от митохондриите: централна роля на комплекс III. J Biol Chem 278: 36027–36031.
Cohen G, Farooqui R, Kesler N (1997): Болест на Паркинсон: Нова връзка между моноаминооксидазата и митохондриалния електронен поток. Proc Natl Acad Sci USA 94: 4890–4894.
Davey GP, Peuchen S, Clark JB (1998): Енергийни прагове в мозъчните митохондрии. Потенциално участие в невродегенерация. J Biol Chem 273: 12753–12757.
Drew B, Leeuwenburgh C (2003): Метод за измерване на производството на АТФ в изолирани митохондрии: Производство на АТФ в мозъчни и чернодробни митохондрии на плъхове Fischer-344 с възрастово и калорично ограничение. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol 285: R1259–R1267.
Evan WH (1992): Изолиране и характеризиране на мембрани и клетъчни органели. В: Rickwood D, ed. Подготвително центрофугиране: практически подход. Ню Йорк, Oxford University Press, стр. 223–270.
Grad LI, Lemire BD (2004): Мутациите на митохондриален комплекс I в Caenorhabditis elegans предизвикват дефицит на цитохром с оксидаза, оксидативен стрес и чувствителна към витамините лактатна ацидоза. Human Mol Genetics 13: 303–314.
Hescheler J, Meyer R, Plant S, Krautwurst D, Rosenthal W, Schultz G (1991): Морфологична, биохимична и електрофизиологична характеристика на клонална клетъчна (H9c2) линия от сърце на плъх. Circ Res 69: 1476–1486.
Hsu M, Srinivas B, Kumar J, Subramanian R, Andersen J (2005): Изчерпването на глутатиона, което води до селективно инхибиране на митохондриален комплекс I в допаминергичните клетки, е чрез NO-медииран път, който не включва пероксинитрит: Последици за болестта на Паркинсон. J Neurochem 92: 1091-1103.
Ko KM, Leon TYY, Mak DHF, Chiu PY, Du Y, Poon MKT (2006): Характерно фармакологично действие на „Yang-оживяващите“ китайски тонизиращи билки: Подобряване на капацитета за генериране на миокарден АТФ. Фитомедицина 13: 636-642.
Ko KM, Mak DH, Chiu PY, Poon MKT (2004): Фармакологична основа на „Yang-invigoration“ в китайската медицина. Тенденции Pharmacol Sci 25: 3–6.
Lee CJ, Chuan S, Lee SL (1990): Проучване на ефекта против стареене на Cistanche deserticola Ma. Shanghai J Trad Chin Med 11: 22–23.
Lei L, Song ZH, Tu PF, Li YZ, Wu LJ, Chen FK (2001): Метаболитно регулиране на фенилетаноидни гликозиди от Herba cistanches в стомашно-чревния тракт на кучета. Яо Сюе Сюе Бао 36: 432–435
Leung HY, Chiu PY, Poon MKT, Ko KM (2005): Китайска билкова формула, ободряваща Yang, подобрява митохондриалната функционална способност и антиоксидантния капацитет в различни тъкани на мъжки и женски плъхове. Rejuven Res 8: 238–247.
Lin LW, Hsieh MT, Tsai FH, Wang WH, Wu CR (2002): Антиноцицептивна и противовъзпалителна активност, причинена от Cistanche deserticola при гризачи. J Ethnopharmacol 83: 177–182.
Lu MC (1998): Проучвания върху седативния ефект на Cistanche deserticola. J Ethnopharmacol 59: 161–165.
Mark A, Birch M, Douglass MT (2001): Анализ на активността на митохондриалния респираторен комплекс в митохондриите, изолирани от човешки клетки и тъкани. Meth Cell Biol 65: 97–117.
Ouyang J, Wang X, Zhao B, Yuan X, Wang Y (2003): Ефекти на редкоземни елементи върху растежа на клетките на Cistanche deserticola и производството на фенилетаноидни гликозиди. J Biotech 102: 129–134.
Paradies G, Petrosillo G, Pistolese M, Di Venosa N, Federici A, Ruggiero FM (2004): Намаляване на активността на митохондриален комплекс I в исхемично/реперфузирано сърце на плъх: участие на реактивни кислородни видове и кардиолипин. Circ Res 94: 53–59.
Srere PA (1969): Цитрат синтаза. Цикъл на лимонената киселина. Meth Enzymol 13: 3–11.
Stanley WC, Lopaschuk GD, Hall JL, McCormack JG (1997): Регулиране на миокардния въглехидратен метаболизъм при нормални и исхемични състояния. Потенциал за фармакологични интервенции. Cardiovasc Res 33: 243–257.
Taegtmeyer H (1998): Метаболизмът на енергийния субстрат като цел за фармакотерапия при исхемичен и реперфузиран сърдечен мускул. Сърце Metab 1: 5–9.
Tian XF, Pu XP (2005): Фенилетаноидните гликозиди от Cistanches salsa инхибират апоптозата, индуцирана от 1-метил-4- фенилпиридиниев йон в невроните. J Ethnopharmacol 97: 59–63.
Wu XM, Gao XM, Tsim KW, Tu PF (2005): Арабиногалактан, изолиран от стъблата на Cistanche deserticola, индуцира пролиферацията на култивирани лимфоцити. Int J Biol Macromol 37: 278–282.
Xiong Q, Hase K, Tezuka Y, Tani T, Namba T, Kadota S (1998): Хепатопротективна активност на фенилетаноиди от Cistanche deserticola. Planta Med 64: 120–125.
Xiong Q, Kadota S, Tani T, Namba T (1996): Антиоксидативни ефекти на фенилетаноиди от Cistanche deserticola. Biol Pharm Bull 19: 1580–1585.
