Контакт:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Фенилетаноидните гликозиди на Cistanche tubulosa индуцират апоптоза в H22 клетки на хепатоцелуларен карцином както чрез външни, така и чрез вътрешни сигнални пътища

Пънфей Юан¹ и др

Резюме

Заден план: Cistanche tubulosa(Schenk) R. Wight е традиционна китайска медицина, която паразитира в корените на растението Тамарикс и се използва за лечение на мъжка импотентност, стерилитет, телесна слабост и като тоник. Въпреки това, неговият антитуморен ефект върху хепатоцелуларен карцином все още е неуловим. Тук изследвахме антитуморния ефект наCistanche tubulosa фенилетаноидни гликозиди(CTPG) върху H22 клетки на хепатоцелуларен карцином както in vitro, така и in vivo и неговите механизми.

Методи:Морфологията, жизнеспособността,апоптоза, клетъчен цикъл и потенциал на митохондриалната мембрана (Δψm) на H22 клетки бяха анализирани съответно чрез обърната микроскопия, МТТ анализ и поточна цитометрия. Експресията и активирането на протеини вапоптозапът са открити чрез Western blot. Антитуморният ефект in vivo беше оценен в модел на туморна мишка, установен с помощта на мъжки мишки Kunming.

Резултати:Лечението с CTPG значително потиска растежа на H22 клетките в зависимост от дозата и времето, което корелира с повишенотоапоптозаи спиране на клетъчния цикъл във фазите G0/G1 и G2/M. Освен това се наблюдава хромозомна кондензация в третирани с CTPG H22 клетки. Лечението с CTPG значително повишава съотношението Bax/Bcl-2, намалява Δψm и засилва освобождаването на цитохром c. Нивата на разцепената каспаза-8 и каспаза-9 както във външните, така и във вътрешните сигнални пътища бяха значително повишени, което последователно активира каспаза-7 и -3 за разцепване на PARP. И накрая, CTPG инхибира растежа на H22 клетки в мишки и подобрява степента на преживяемост на туморните мишки.

Изводи: Тези резултати предполагат, че CTPG потиска растежа на H22 клетките както чрез външни, така и чрез вътрешниапоптозапътеки.

Ключови думи: Cistanche tubulosa, Фенилетаноидни гликозиди, апоптоза, Сигнален път, Туморен миши модел

Cistanche tubulosaфенилетаноидни гликозиди

Заден план

Ракът на черния дроб е на шесто място по заболеваемост от рак и на четвърто място по смъртност от рак в света. Нещо повече, той се класира на четвърто място по заболеваемост от рак и на първо място по смъртност от рак в страни с нисък социално-демографски индекс [1]. В Китай ракът на черния дроб е третата водеща причина за смърт, свързана с рак през 2015 г. [2]. Повече от 90 процента от първичните ракови заболявания на черния дроб са хепатоцелуларен карцином (HCC) в света [3]. Понастоящем чернодробната резекция е основната възможност за лечение на HCC. Въпреки това, по-малко от 30 процента от пациентите с HCC отговарят на критериите за лечебна чернодробна резекция и общата 5-годишна преживяемост все още е толкова ниска, колкото 35-50 процента поради високия процент на рецидиви [4, 5] . Наличието на възможности за лечение на пациенти с междинен до напреднал HCC е много ограничено. Сорафениб, молекулярно насочено лекарство, е одобрено от FDA като лечение от първа линия за напреднал HCC. Въпреки това, сорафениб удължава само около 3 месеца преживяемост и степента на отговор е по-малко от 4 процента [6, 7]. Спешно е да се разработят нови лекарства или стратегии срещу HCC.

Традиционната китайска медицина (ТКМ) самостоятелно или в комбинация с други стратегии се използва за лечение на HCC и показва клиничните ползи, включително удължено време на преживяемост, подобрено качество на живот, намалени нежелани реакции и т.н. [8, 9]. Cistanche, вид TCM, има различни биологични функции, като анти-оксидация, противовъзпалителни, против стареене и невропротекция [10, 11].Фенилетаноидни гликозидисе считат за основните активни компоненти на Cistanche, които имат различни дейности, включително антиоксидантна, противовъзпалителна, хепатопротекция и невропротекция [12–15]. Нашата група съобщи товаCistanche tubulosa фенилетаноидни гликозиди(CTPG) може да предизвикаапоптозав клетките на меланома B16-F10 и инхибират растежа на тумори при мишки [16]. В това проучване ние измерихме антитуморния ефект на CTPG върху HCC H22 клетки както in vitro, така и in vivo и изследвахме неговите механизми. Открихме, че CTPG(Cistanche tubulosa фенилетаноидни гликозиди)индуциранапоптозав H22 клетки чрез външни и вътрешни сигнални пътища и потиска растежа на H22 тумори при мишки.

Методи

Клетъчна линия

Клетките на миши H22 хепатоцелуларен карцином са получени от Синдзянската ключова лаборатория по биологични ресурси и генно инженерство, Синдзянския университет (Урумчи, Синдзян, Китай) и са култивирани в среда RPMI 1640 (Gibco), допълнена със 100 U/ml пеницилин и 100 ug/ml стрептомицин и 10 процента топлинно инактивиран фетален говежди серум (Gibco) при 37 градуса във влажна атмосфера с 5 процента CO2.

МТТ анализ

CTPG(Cistanche tubulosa фенилетаноидни гликозиди)е закупен от Hetian Dichen Biotech Co., Ltd. (Hetian, Xinjiang, Китай) и основните съединения на CTPG(Cistanche tubulosa фенилетаноидни гликозиди)са квалифицирани и количествено определени чрез високоефективна течна хроматография [16]. Клетъчната жизнеспособност беше оценена с 3-(4, 5-диметилтиазол-2-ил)-2, 5-дифенилтетразолиев бромид (MTT) (Sigma, St. Louis, MO , САЩ) анализ. H22 клетките се инокулират в 96-плаки с ямки при плътност от 2 × 104 клетки в 100 ul среда на ямка и се култивират при 37 градуса. След 24 часа клетките бяха третирани с различни концентрации на CTPG (0, 100, 200, 300 и 400 ug / ml) или 0, 3% DMSO (равно на това в 400 ug / ml CTPG) за 24, 48 и 72 часа, съответно. След центрофугиране при 1000 rpm за 7 минути, супернатантата се изхвърля и към всяка ямка се добавят 100 ul разтвор на МТТ (5 mg/ml в PBS). Плаките се инкубират при 37 градуса за 4 часа и се добавят 100 ul DMSO за разтваряне на образуваните формазанови кристали. Стойностите на OD490 бяха открити от 96-четец за микроплаки (Bio-Rad Laboratories, Калифорния, САЩ). Клетъчната жизнеспособност се изчислява съгласно формулата: Клетъчна жизнеспособност (проценти)=(ODтретирани/ODнетретирани) x 100 процента.

Cistanche tubulosa фенилетаноидни гликозиди

Откриване на апоптоза

H22 клетки бяха третирани с различни концентрации на CTPG(Cistanche tubulosa фенилетаноидни гликозиди)({{0}}, 100, 200, 300 и 400 ug/ml) или 0,3 процента DMSO за 24 часа и след това оцветени с Анексин VFITC/пропидиев йодид (PI)апоптозаКомплект за откриване (YEASEN, Китай) съгласно инструкциите на производителя. Пробите бяха анализирани чрез поточна цитометрия (BD FACSCalibur, САЩ).

Откриване на потенциала на митохондриалната мембрана

H22 клетки бяха третирани с различни концентрации на CTPG(Cistanche tubulosa фенилетаноидни гликозиди)(0, 200 и 400 ug/ml) за 24 часа и след това се оцветява с мембранно-пропусклива JC-1 боя (Beyotime, Китай) за 20 минути при 37 градуса. След двукратно промиване с JC-1 буфер, пробите бяха ресуспендирани с 300 ul JC-1 буфер и анализирани чрез поточна цитометрия (BD FACSCalibur, САЩ).

Анализ на клетъчния цикъл

H22 клетките се инокулират в 60 mm чаши за култура и се третират с различни концентрации на CTPG (0, 100,200, 300 и 400 ug/ml) или 0,3 процента DMSO за 24 часа . Всички клетки бяха събрани и промити два пъти с PBS. Клетките се фиксират в 70 процента леденостуден етанол при -20 градуса за 2 часа и се промиват два пъти с PBS, след което се суспендират повторно в 300 ul буфер за оцветяване с пропидиев йодид/РНКаза (BD Biosciences). След 10 минути при стайна температура, пробите бяха събрани чрез поточна цитометрия (BD FACSCalibur, САЩ) и разпределението на клетъчния цикъл беше анализирано със софтуера ModFit LT 3.0.

фенилетаноидни гликозидивCistanche tubulosa

Оцветяване Hoechst 33,258

Морфологичните промени на клетъчните ядра на H22 бяха анализирани чрез мембранно пропускливо ДНК-свързващо багрило Hoechst 33,258 оцветяване. H22 клетки се посяват в 6-ямкова плака при концентрация от 1 × 105 клетки/ямка в 2 ml среда. След 60 процента ~ 70 процента сливане, клетките бяха третирани с CTPG(Cistanche tubulosa фенилетаноидни гликозиди)(0, 100, 200, 300 и 400 ug/ml) за 24 часа. Клетките се събират и фиксират с 4 процента леденостуден параформалдехид при 4 градуса за 10 минути. След промиване с PBS, клетките се оцветяват с Hoechst 33,258 (Beyotime, Китай) при 4 градуса за 10 минути. Пробите се наблюдават с обърнат флуоресцентен микроскоп (Nikon Eclipse Ti-E, Япония).

Western blot

Анти-каспаза-3, анти-разцепена каспаза-3, анти-Bcl-2 и анти-Bax бяха закупени от Beyotime Biotech Co., Ltd. (Шанхай, Китай). Анти-каспаза-7, анти-разцепена-каспаза-7,анти-каспаза-8, анти-разцепена-каспаза-8, анти-каспаза-9, анти разцепена каспаза-9, анти-PARP, анти-разцепен PARP, антимиши IgG-HRP и анти-заешки IgG-HRP са закупени от Cell Signaling Technology. Анти- -актинът е закупен от Beijing ComWin Biotech Co., Ltd. (Пекин, Китай).

H22 клетки бяха третирани с различни концентрации на CTPG(Cistanche tubulosa фенилетаноидни гликозиди)({{0}}, 100, 200, 300 и 400 ug/ml) или 0,3 процента DMSO за 24 часа. Клетките бяха събрани и лизирани с разтвор за клетъчен лизис RIPA (Beijing ComWin Biotech Co., Ltd) в продължение на 30 минути върху лед. Пробите се центрофугират (12,000 g за 15 минути при 4 градуса), за да се съберат супернатантите и протеиновите концентрации се измерват с BCA комплект (Thermo Fisher Scientific, САЩ). Еднакво количество протеин във всяка проба се изолира чрез 12 процента SDS-PAGE и се прехвърля към PVDF мембрани (Biosharp, Китай). След блокиране с TBST буфер, съдържащ 5 процента обезмаслено мляко, мембраните се инкубират съответно със съответните първични антитела и вторични антитела, конюгирани с пероксидаза от хрян (HRP). След промиване с TBST, целевите протеини бяха открити чрез ECL комплект за анализ (Beyotime, Китай).

Декларация за животните и етиката

Мъжки мишки Kunming на възраст 6-8 седмици бяха закупени от Animal Laboratory Center, Xinjiang Medical University (Urumqi, Xinjiang, Китай). Мишките се държат в стандартно съоръжение за животни с контролирана температура и светлинен цикъл на университета Синдзян. Всички проучвания върху животни са проведени съгласно насоките на Комитета за грижа и използване на животните към университета Синдзян. Протоколът беше одобрен от Комитета по етика на експериментите с животни на Синдзянската ключова лаборатория за биологични ресурси и генно инженерство (BRGE-AE001), Синдзянския университет.

Изследване на туморни мишки

За индуциране на туморен миши модел, мъжки Kunming мишки бяха инжектирани подкожно с 1 × 106 H22 клетки в 100 ul PBS в десния хълбок. След 3 дни мишките бяха разделени на случаен принцип в 3 групи (7 мишки/група). Контролната група беше инжектирана с 0,1 ml DMSO подкожно около тумора. Групите CTPG-200 и CTPG-400 бяха инжектирани подкожно с 200 или 400 mg/kg CTPG(Cistanche tubulosa фенилетаноидни гликозиди)в 0.1 ml DMSO около тумора. Мишките се третират на всеки 2 дни до 21 дни. Размерите на тумора се измерват с помощта на дебеломер до 25 дни и обемът на тумора се изчислява по формулата: обем на тумора (mm3)=(дължина × ширина 2)/2. След 25 дни оцеляването на туморни мишки се наблюдава всеки ден до края на това изследване.

Статистически анализ

Статистическата значимост се изчислява чрез еднопосочен анализ на дисперсията между лекуваните и контролните групи. Всички данни бяха изразени като средно ± стандартно отклонение (SD). p < 0.05="" се="" счита="" за="" статистически="">

Резултати

CTPG(Cistanche tubulosa фенилетаноидни гликозиди)намалява жизнеспособността на H22 клетки in vitro

За да се изследва антитуморният ефект на CTPG(Cistanche tubulosa фенилетаноидни гликозиди)върху HCC, H22 клетки бяха третирани с различни концентрации на CTPG (0, 100, 200, 300 и 400 ug/ml) in vitro. След 24 часа морфологията на H22 клетките се наблюдава с помощта на обърнат микроскоп. Открихме, че морфологията на H22 клетките е драматично променена от лечението с CTPG. С увеличаване на концентрацията на CTPG, клетките стават малки и кръгли и броят на клетките също е силно намален (фиг. 1а). МТТ анализът се използва за анализиране на жизнеспособността на H22 клетки след лечение с CTPG за 24, 48 и 72 часа, съответно. CTPG(Cistanche tubulosa фенилетаноидни гликозиди)значително намалява жизнеспособността на H22 клетките в зависимост от дозата и времето (фиг. 1b). CTPG(Cistanche tubulosa фенилетаноидни гликозиди)при 300 ug/ml се достига до най-добра инхибиторна скорост (фиг. 1с). Стойностите на IC50 на CTPG за H22 клетки са 236 ug/ml на 24 h и 169.8 ug/ml на 48 h.

CTPG(Cistanche tubulosa фенилетаноидни гликозиди)индуцирана апоптоза в Н22 клетки

За да се изследва дали намалената жизнеспособност на H22 клетките е медиирана от индуцирането наапоптоза, H22 клетки бяха третирани с различни концентрации на CTPG (0,100, 200, 300 и 400 ug/ml) в продължение на 24 часа и оцветени с PI и Анексин V. Резултатите от поточната цитометрия показаха, че CTPG(Cistanche tubulosa фенилетаноидни гликозиди)значително предизвиканиапоптозана H22 клетки (включително ранни и късниапоптоза) по дозозависим начин (фиг. 2а). Въпреки че високата доза CTPG(Cistanche tubulosa фенилетаноидни гликозиди)също значително повишена некроза на H22 клетки, некрозата играе второстепенна роля в инхибирането на растежа на H22 клетки поради по-ниския си дял (8,3 процента) в сравнение с този наапоптоза(52,6 процента). Освен това, общите протеини на Н22 клетки бяха изолирани след CTPG(Cistanche tubulosa фенилетаноидни гликозиди)лечение и експресиите на антиапоптотичен В клетъчен лимфом 2 (Bcl-2) и проапоптотичен BCL-2-свързан X протеин (Bax) бяха открити чрез Western blot. Данните от сканирането в скала на сивото показват, че нивата на експресия на Bax и Bcl-2 са увеличени и съответно намалени. Съотношението Bax/Bcl-2 беше значително увеличено (фиг. 2b). Тези резултати предполагат, че CTPG индуцираапоптозав Н22 клетки.

CTPG(Cistanche tubulosa фенилетаноидни гликозиди)индуцира хромозомна кондензация и спиране на клетъчния цикъл в H22 клетки

Съобщава се, че увреждането на ДНК и спирането на клетъчния цикъл, предизвикано от лекарства, може да инхибира растежа на туморните клетки и да причиниапоптозав туморни клетки [17, 18]. За откриване на морфологията на ядрата в H22 клетки след CTPG(Cistanche tubulosa фенилетаноидни гликозиди)третиране в продължение на 24 часа, H22 клетките се оцветяват с Hoechst 33,342 и се наблюдават с помощта на обърната флуоресцентна микроскопия. CTPG(Cistanche tubulosa фенилетаноидни гликозиди)третираните клетки показват зависимо от дозата увеличение на ярко кондензиран хроматин на ядрата, докато нетретираните клетки показват хомогенно оцветени ядра (фиг. 3а). Разпределението на клетъчния цикъл в H22 клетки беше допълнително анализирано чрез PI оцветяване след третиране с CTPG в продължение на 24 часа. Както е показано на фиг. 3b, CTPG(Cistanche tubulosa фенилетаноидни гликозиди)лечението значително повишава дела на G0/G1- и G2/M-фазовите клетки и значително намалява дела на S-фазовите клетки, което предполага, че CTPG(Cistanche tubulosa фенилетаноидни гликозиди)индуцира спиране на G0/G1 и G2/M фаза в H22 клетки. Високата доза CTPG също значително повишава дела на суб-G1 клетките.

CTPG(Cistanche tubulosa фенилетаноидни гликозиди)намален потенциал на митохондриалната мембрана и повишено освобождаване на цитохром c

митохондриално-зависимият път играе важна роля в индуцирането наапоптоза[19, 20]. Промените в потенциала на митохондриалната мембрана (Δψm) могат да бъдат

наблюдаван чрез JC-1 оцветяване поради JC-1 агрегат (червена флуоресценция) може да се разпадне в мономер (зелена флуоресценция) с намаляване на Δψm [21]. След CTPG(Cistanche tubulosa фенилетаноидни гликозиди)третиране за 24 часа, H22 клетките се оцветяват с JC-1 багрило. Данните от поточната цитометрия показват, че червената флуоресценция в канала FL-2 и зелената флуоресценция в канала FL-1 са значително намалени и повишени при CTPG(Cistanche tubulosa фенилетаноидни гликозиди)лечение. Делът на PE−FITC плюс клетки беше значително увеличен (Фиг. 4а), което предполага, че CTPG(Cistanche tubulosa фенилетаноидни гликозиди)намалява Δψm в H22 клетки. Това е в съответствие с повишеното съотношение Bax/Bcl-2. Следователно, ние наблюдавахме освобождаването на цитохром с беше значително повишено при CTPG(Cistanche tubulosa фенилетаноидни гликозиди)лечение (фиг. 4b). Тези резултати показват, че CTPG може частично да индуцираапоптозав клетки H22 чрез митохондриално зависим (вътрешен) път.

CTPG активира каспазния път и предотвратява възстановяването на ДНК

След това, активирането на каспаза, индуцирано от CTPG(Cistanche tubulosa фенилетаноидни гликозиди)чрез външни и вътрешни сигнални пътища беше анализиран. След CTPG(Cistanche tubulosa фенилетаноидни гликозиди)третиране за 24 часа, общите протеини бяха изолирани от H22 клетки и нивата на про- и разцепените каспази бяха открити чрез Western blot. В сравнение с нетретираната или DMSO контрола, CTPG(Cistanche tubulosa фенилетаноидни гликозиди)лечението значително повишава не само нивото на разцепената каспаза-8 (външен път), но и нивото на разцепената каспаза-9 (вътрешен път) (фиг. 5). Последователно активираната каспаза-8 и -9 разцепват про-каспазата-3 и -7 надолу по веригата, които се наблюдават на фиг. 5. Активираната каспаза-3 разцепва ДНК възстановяващ ензим на поли (ADP-рибоза) полимераза (PARP) за предотвратяване на възстановяването на ДНК и натрупването на увреждане на ДНК, както се наблюдава на Фиг. 3а. Тези резултати показват, че CTPG(Cistanche tubulosa фенилетаноидни гликозиди)индуциранапоптозав H22 клетки чрез външни и вътрешни сигнални пътища.

CTPG(Cistanche tubulosa фенилетаноидни гликозиди)потиска растежа на H22 HCC in vivo и подобрява степента на преживяемост на туморни мишки

И накрая, антитуморният ефект на CTPG(Cistanche tubulosa фенилетаноидни гликозиди)върху HCC беше оценен в туморен миши модел, който беше установен чрез подкожно инжектиране на H22 клетки. След 3 дни инжектиране на H22 клетки, туморните мишки бяха третирани с CTPG(Cistanche tubulosa фенилетаноидни гликозиди)8 пъти. Телесното тегло на мишките и размерите на тумора се наблюдават в посочени времеви точки. Както е показано на Фиг. 6а, телесното тегло на мишките във всяка група няма значителна разлика, което предполага, че избраните дози на CTPG(Cistanche tubulosa фенилетаноидни гликозиди)нямат очевидни странични ефекти. Интересно е, че туморният растеж при мишки, третирани както с 200 mg/kg, така и с 400 mg/kg CTPG, е значително инхибиран (фиг. 6b). Освен това двете дози CTPG(Cistanche tubulosa фенилетаноидни гликозиди)лечението значително подобрява преживяемостта на туморни мишки (3/7, 3/7) в сравнение с контролната група (0/7) в края на експеримента (фиг. 6b). Ние също така открихме, че CTPG значително повишава пролиферацията на спленоцити, изолирани от мъжки мишки Kunming по дозозависим начин (фиг. 6c), което предполага, че CTPG(Cistanche tubulosa фенилетаноидни гликозиди)има имуностимулиращ ефект.

Дискусия

TCM се използва за лечение на различни заболявания, включително рак в продължение на дълга история. Съобщава се, че TCM може да предизвикаапоптозав различни видове туморни клетки чрез външни (медиирани от рецептор на смъртта) и вътрешни (зависими от митохондриите) сигнални пътища за упражняване на антитуморни ефекти [22–25]. Двата пътя могат да активират съответно каспаза -8 и -9 [24, 26]. Тук открихме, че CTPG(Cistanche tubulosa фенилетаноидни гликозиди)значително потиска растежа на H22 клетки чрез индуциране на апоптоза и спиране на клетъчния цикъл. Нивата на разцепената каспаза -8 и -9 бяха значително повишени от CTPG(Cistanche tubulosa фенилетаноидни гликозиди)лечение, което предполага, че както външните, така и вътрешните сигнални пътища са включени в индуцирането наапоптоза. Предишното ни проучване показа, че CTPG(Cistanche tubulosa фенилетаноидни гликозиди)индуцира апоптоза в клетките на меланома B16-F10 чрез зависим от митохондриите път, който повишава нивото на разцепената каспаза-9, но не и каспаза-8 [16]. CTPG(Cistanche tubulosa фенилетаноидни гликозиди)може да активира различни сигнални пътища в различни видове туморни клетки.

Целостта на митохондриалната мембрана е строго регулирана от членовете на семейството на протеини BCL-2, включително Bax и Bcl-2 [27, 28]. Съотношението на Bax към Bcl-2 играе критична роля в зависимата от митохондриитеапоптозапът [29]. В H22 клетки, третирани с CTPG(Cistanche tubulosa фенилетаноидни гликозиди), съотношението Bax/Bcl-2 беше значително повишено, което може да причини намаляването на Δψm и освобождаването на цитохром c, наблюдавани в това проучване. Вследствие на това про-каспаза-9 беше разцепена и активирана. И накрая, инициаторите на активната каспаза-8 и -9 активираха екзекутора на каспаза-3, за да разцепи PARP, за да предотврати възстановяването на ДНК. Взети заедно, тези резултати предполагат, че CTPG индуцираапоптозав H22 клетки чрез външни и вътрешни сигнални пътища. В модел на туморна мишка, CTPG значително потиска растежа на H22 HCC и значително подобрява преживяемостта на туморни мишки. Интересното е, че CTPG(Cistanche tubulosa фенилетаноидни гликозиди)зависимо от дозата насърчава пролиферацията на спленоцити от мишки Kunming, което е в съответствие с нашето предишно проучване [16]. Тези резултати предполагат, че CTPG може да потисне растежа на H22 HCC при мишки както чрез директен антитуморен ефект, така и чрез непряко имунно усилване.

Cistanche tululosaпродукти

Изводи

CTPG(Cistanche tubulosa фенилетаноидни гликозиди)потиска растежа на H22 клетки както in vitro, така и in vivo и индуцираапоптозав H22 клетки чрез външни и вътрешни сигнални пътища. Тези данни показват, че CTPG(Cistanche tubulosa фенилетаноидни гликозиди)може да бъде потенциален кандидат за лечение на HCC.

Съкращения

Bax: BCL-2-свързан X протеин; Bcl-2: В-клетъчен лимфом 2; CTPG:Cistanche tubulosa фенилетаноидни гликозиди; HCC: хепатоцелуларен карцином; HRP: пероксидаза от хрян; МТТ: 3-(4, 5-диметилтиазол-2-ил)-2, 5-дифенилтетразолиев бромид; PARP: ензим за възстановяване на ДНК на поли (ADP-рибоза) полимераза; TCM: традиционна китайска медицина; Δψm: потенциал на митохондриалната мембрана

Финансиране

Тази работа беше подкрепена от Проекта за въвеждане на таланти на високо ниво на Синдзян-Уйгурския автономен регион към JL, безвъзмездната помощ на Китайската национална фондация за естествени науки (31460241) към JL и Докторския стартов фонд на университета в Синдзян (BS160261 до XW и BS150236 до YL).

Наличие на данни и материали

Необработените данни за това проучване са достъпни при разумна заявка до съответния автор.

Авторски принос

JL и JL проектираха експериментите. PY, JL, AA и YY извършиха експериментите. LX, XW и YL анализираха данните. PY, JL и JL са написали ръкописа. Всички автори допринесоха и одобриха окончателния ръкопис.

Етично одобрение

Изследването върху животни е одобрено от Комитета по етика на експериментите с животни на Синдзянската ключова лаборатория за биологични ресурси и генно инженерство, Синдзянския университет

Конкуриращи се интереси

Авторите декларират, че нямат конкурентни интереси.

Бележка на издателя

Springer Nature остава неутрален по отношение на претенции за юрисдикция в публикувани карти и институционални връзки.

Подробности за автора

¹Ключова лаборатория за биологични ресурси и генно инженерство в Синдзян, Колеж по наука за живота и технологии, Университет Синдзян, 666 Shengli Road, Урумчи, Синдзян 830046, Китай.²College of Life Science, Xinjiang Normal University, 102 Xinyi Road, Urumqi 830054, Xinjiang, Китай.³Свързана болница за тумори на Медицинския университет в Синдзян, Урумчи 830011, Китай.

Cistanche tululosaпродукти

От: 'Cistanche tubulosa фенилетаноидни гликозидипредизвиквамапоптозав H22 клетки на хепатоцелуларен карцином чрез външни и вътрешни сигнални пътища“ от Pengfei Yuan1 et al

---Юан и др. BMC допълваща и алтернативна медицина (2018) 18:275 https://doi.org/10.1186/s12906-018-2201-1

Препратки

1. Global Burden of Disease Cancer Collaboration, Fitzmaurice C, Allen C, Barber RM, Barregard L, Bhutta ZA, Brenner H, Dicker DJ, Chimed-Orchid O, Dandona R, et al. Глобална, регионална и национална заболеваемост от рак, смъртност, години загубен живот, години, прекарани с увреждания, и коригирани години живот за 32 групи ракови заболявания, 1990 до 2015 г.: систематичен анализ за изследване на глобалното бреме на болестта. JAMA Oncol. 2017; 3: 524-48.

2. Chen W, Zheng R, Baade PD, Zhang S, Zeng H, Bray F, Jemal A, Yu XQ, He J. Статистика за рака в Китай, 2015 г. CA Cancer J Clin. 2016; 66: 115–32.3. Европейска асоциация за изследване на черния дроб, Европейска организация за изследване и лечение на рак. Насоки за клинична практика на EASL-EORTC: лечение на хепатоцелуларен карцином. JHepatol. 2012; 56: 908-43.

4. Roayaie S, Obeidat K, Sposito C, Mariani L, Bhoori S, Pellegrinelli A, Labow D, Llovet JM, Schwartz M, Mazzaferro V. Резекция на хепатоцелуларен рак По-малко или равно на 2 cm: резултати от два западни центъра. Хепатология. 2013; 57: 1426-35.

5. Ting CT, Cheng YY, Tsai TH. Взаимодействие билка-лекарство между традиционната хепатопротективна формулировка и сорафениб върху хепатотоксичността, хистопатологията и фармакокинетиката при плъхове. Молекули. 2017;22:E1034.

6. Llovet JM, Ricci S, Mazzaferro V, Hilgard P, Gane E, Blanc JF, de Oliveira AC, Santoro A, Raoul JL, Forner A, et al. Сорафениб при напреднал хепатоцелуларен карцином. N Engl J Med. 2008; 359: 378-90.

7. Cheng AL, Kang YK, Chen Z, Tsao CJ, Qin S, Kim JS, Luo R, Feng J, Ye S, Yang TS и др. Ефикасност и безопасност на сорафениб при пациенти в Азиатско-тихоокеанския регион с напреднал хепатоцелуларен карцином: фаза III рандомизирано, двойно-сляпо, плацебо-контролирано проучване. Lancet Oncol. 2009; 10: 25-34.

8. Shi Z, Song T, Wan Y, Xie J, Yan Y, Shi K, Du Y, Shang L. Систематичен преглед и мета-анализ на традиционни китайски лекарства за насекоми комбинирана химиотерапия за нехирургична терапия на хепатоцелуларен карцином. Sci Rep.2017;7:4355.

9. Yang Z, Liao X, Lu Y, Xu Q, Tang B, Chen X, Yu Y. Допълнителна терапия с традиционна китайска медицина подобрява резултатите и намалява нежеланите събития при хепатоцелуларен карцином: мета-анализ на рандомизирани контролирани проучвания. Базирано на доказателства допълнение Alternat Med. 2017; 2017: 3428253.

10. Lin LW, Hsieh MT, Tsai FH, Wang WH, Wu CR. Антиноцицептивна и противовъзпалителна активност, причинена от Cistanche deserticola при гризачи. J Ethnopharmacol. 2002; 83: 177–82.

11. Wu CR, Lin HC, Su MH. Обръщане чрез водни екстракти отCistanche tubulosaот поведенчески дефицити в модел на плъх, подобен на болестта на Алцхаймер: значение за отлагането на амилоид и функцията на централния невротрансмитер. BMC Complement Altern Med. 2014;14:202.

12. Jiang Y, Tu PF. Анализ на химичните съставки във видовете Cistanche. JChromatogr A. 2009; 1216: 1970–9.

13. Morikawa T, Pan Y, Ninomiya K, Imura K, Matsuda H, Yoshikawa M, Yuan D, Muraoka O. Ацилирани фенилетаноидни олиго гликозиди с хепатопротективна активност от пустинно растениеCistanche tubulosa.Bioorg Med Chem. 2010 г.; 18: 1882-90.

14. Nan ZD, Zeng KW, Shi SP, Zhao MB, Jiang Y, Tu PF.Фенилетаноидни гликозидис противовъзпалителни действия от стъблата на Cistanche deserticola, култивирани в пустинята Тарим. Fitoterapia.2013; 89: 167–74.

15. Deng M, Zhao J, Tu P, Jiang Y, Li Z, Wang Y. Echinacoside възстановява невронните клетки SHSY5Y от индуцирани от TNFапоптоза. Eur J Pharmacol. 2004; 505: 11-8.

16. Li J, Li J, Aipire A, Gao L, Huo S, Luo J, Zhang F.Фенилетаноидни гликозидиотCistanche tubulosaинхибира растежа на B{0}}F10 клетки както in vitro, така и in vivo чрез индуциране наапоптозачрез зависим от митохондриите път. J Рак. 2016; 7: 1877–87.

17. Shang HS, Chang CH, Chou YR, Yeh MY, Au MK, Lu HF, Chu YL, Chou HM, Chou HC, Shih YL и др. Куркуминът причинява увреждане на ДНК и засяга експресията на свързания протеин в HeLa човешки ракови клетки на маточната шийка. Oncol Rep. 2016; 36: 2207–15.

18. Wang R, Zhang Q, Peng X, Zhou C, Zhong Y, Chen X, Qiu Y, Jin M, Gong M, Kong D. Stellettin B индуцира арест на G1,апоптоза, и аутофагия в човешки недребноклетъчен рак на белия дроб A549 клетки чрез блокиране на PI3K/Akt/mTOR пътя. Sci Rep. 2016; 6: 27071.

19. Sinha K, Das J, Pal PB, Sil PC. Оксидативен стрес: зависимите от митохондриите и независимите от митохондриите пътища наапоптоза. Arch Toxicol. 2013; 87:1157-80.

20. Zhang YS, Shen Q, Li J. Традиционна китайска медицина, насочена към апоптотични механизми за лечение на рак на хранопровода. Acta Pharmacol Sin. 2016 г.; 37: 295-302.

21. Chong ZZ, Lin SH, Li F, Maiese K. Инхибиторът на сиртуин никотинамид подобрява оцеляването на невронните клетки по време на остро аноксично увреждане чрез AKT, BAD, PARP и свързани с митохондриите "анти-апоптотични" пътища. Curr Neurovasc Res. 2005; 2: 271–85.

22. Hu B, Wang SS, Du Q. Традиционна китайска медицина за превенция и лечение на хепатокарцином: от пейката до леглото. World J Hepatol. 2015; 7: 1209–32.

23. Hu B, An HM, Wang SS, Chen JJ, Xu L. Превантивни и терапевтични ефекти на китайски билкови съединения срещу хепатоцелуларен карцином. Молекули. 2016; 21: 142.

24. Xu H, Zhao X, Liu X, Xu P, Zhang K, Lin X. Антитуморни ефекти на традиционната китайска медицина, насочени към клетъчния апоптотичен път. Drug Des Devel Ther. 2015; 9: 2735-44.

25. Li-Weber M. Насочванеапоптозапътища при рак от китайската медицина. Рак Lett. 2013; 332: 304-12.

26. Xu G, Shi Y.апоптозасигнални пътища и лимфоцитна хомеостаза. Cell Res. 2007; 17: 759-71.

27. Tait SW, Green DR. Митохондрии и клетъчна смърт: пермеабилизация на външната мембрана и извън нея. Nat Rev Mol Cell Biol. 2010; 11: 621-32.

28. Galluzzi L, Kepp O, Kroemer G. Митохондрии: главни регулатори на сигнализация за опасност. Nat Rev Mol Cell Biol. 2012; 13: 780-8.

29. Martinou JC, Youle RJ. Митохондриите вапоптоза: Bcl-2 членове на семейството и митохондриална динамика. Dev Cell. 2011; 21: 92-101.