Заден план.остърувреждане на бъбреците(AKI) е често усложнение на декомпенсираната цироза с повишена смъртност. Традиционните биомаркери като серумния креатинин не са чувствителни за откриване на нараняване без функционална промяна. Ние предполагаме, че уринарните екзозоми потенциално носят маркери, които диференцират вида наувреждане на бъбрецитепри пациенти с цироза.

Методи.Това е проспективно, едноцентрово и наблюдателно проучване на възрастни пациенти с цироза. Групите пациенти включват здрави нормални контроли, компенсирана цироза с нормабъбречна функция, декомпенсирана цироза с нормаленбъбречна функция, и декомпенсирана цироза с AKI. Данните бяха извлечени от електронното здравно досие, включително етиология на чернодробно заболяване, MELD резултат, история на декомпенсация, Child-Turcotte-Pugh резултат, история на AKI и експозиции на лекарства. Проби от урина са събрани по време на съгласието. Беше анализирано съдържанието на екзозомен протеин в урината и протеомните данни бяха валидирани чрез имуноблотинг. Статистическият анализ включва частичен дискриминантен анализ на най-малките квадрати, съчетан с променливо значение при идентифицирането на проекцията.

Резултати.Бяха включени осемнадесет пациенти с цироза и шест здрави контролни субекта бяха извлечени от нашето биохранилище. Бяха изолирани екзозоми в урината и бяха идентифицирани 1572 протеина. Малтаза-глюкоамилазата е най-добрият дискриминиращ протеин, потвърден от Western blotting.

Изводи. Пациентите с цироза и AKI имат повишена регулация на дизахаридазата на бъбречната четка, MGAM, в екзозомите на урината, което може да диференцира вида наувреждане на бъбрецитепри цироза; обаче, клиничното значение на това изисква допълнително утвърждаване.

За повече информация моля свържете се с:joanna.jia@wecistanche.com

Остра бъбречна травмада се лекува отцистанче

1. Въведение

остърувреждане на бъбреците(AKI) се среща при приблизително 20 процента от хоспитализираните пациенти с цироза [1, 2]. AKI при хоспитализирани пациенти с цироза често е прогресивна, тежка и независим отрицателен предиктор за смъртност [3]. * Най-честата причина за AKI при цироза е хемодинамичната, представляваща 70 процента от случаите. Острата тубулна некроза (ATN) представлява 30 процента от случаите, а постреналните причини са редки и представляват по-малко от 1 процент от случаите. Хепатореналният синдром (HRS) е хемодинамичен, без да се идентифицираувреждане на бъбрецитеили заболяване и се среща при приблизително 20 процента от пациентите с цироза [4, 5].

Серумният креатинин (Scr) е най-широко използваният биомаркер за оценкабъбречна функцияи идентифицирайтеувреждане на бъбреците. Въпреки това, SCR е неоптимален при пациенти с цироза за Hindawi Critical Care Research and Practice Volume 2019, многобройни причини, включително намалено производство на черен дроб, мускулна загуба с намалени запаси, увеличен обем на разпределение и протеиново-калорично недохранване. Средните стойности на Scr са по-ниски при пациенти с цироза в сравнение с общата популация, което води до забавена диагноза на AKI въз основа на текущата дефиниция на AKI [6]. Освен това Scr е биомаркер набъбречна функцияи не е чувствителен маркер за нараняване. Появиха се нови биомаркери на бъбречно увреждане, за да подобрят откриването на AKI и да помогнат за диференциране на етиологията на AKI.Увреждане на бъбрецитевключително биомаркериувреждане на бъбрецитемолекула-1 (KIM-1), липокалин, свързан с неутрофилна желатиназа (NGAL), интерлевкин-18, белтък, свързващ чернодробни мастни киселини (L-FABP), протеин, свързващ инсулиноподобен растежен фактор -7 (IGFBP-7) ​​и тъканния инхибитор на металопротеиназата-2 (TIMP-2) могат да бъдат повишени преди увеличаването на Scr, повишаващо откриването наувреждане на бъбрецитебез функционална промяна [7]. Проучванията показват, че тези биомаркери могат да диференцират етиологията на AKI [8, 9]. Подобрените биомаркери за откриване и диференциране на AKI представляват важни неудовлетворени клинични нужди при пациенти с цироза.

Екзозомите са нановезикули, които се освобождават от живи клетки като механизъм за междуклетъчна комуникация [10]. Доказано е, че протеиновото съдържание на *e в екзозомите е забележително модифицирано при патологични или стресови състояния [11–13]. Вбъбрек,екзозомите се доставят в урината от всички типове клетки [14, 15] и екзозомите в урината могат потенциално да се разглеждат като биохимичен подпис на субекта. Тъй като екзозомите в урината не се изследват рутинно, те могат да предоставят допълнителна неразпозната информация за протеинови биомаркери на AKI при пациенти с цироза.

Целта на това проучване беше да се оцени протеомиката на екзозомата на урината при пациенти с цироза и AKI в сравнение със здрави индивиди. Ние предположихме, че съдържанието на екзозомен протеин в урината се различава при пациенти с компенсирана или декомпенсирана цироза, страдащи от AKI, в сравнение с нормални здрави контролни субекти. Освен това постулирахме, че различното съдържание на екзозомален протеин в урината би предложило вникване в механизмите наувреждане на бъбрецитепри цироза.

2. Материали и методи

Това е проспективно, едноцентрово и наблюдателно проучване на възрастни пациенти с цироза. Всички пациенти за проучването са били наети от здравната система на UC San Diego между 1 юли 2013 г. и 1 юни 2014 г. и са дали информирано съгласие. Пациентите отговарят на условията за включване, ако са имали диагноза цироза и са били в състояние да предоставят проба от урина. Цирозата се определя чрез чернодробна биопсия, изобразяване на напречно сечение или клинично (чрез идентифициране на събитие на декомпенсация, както е определено от хепатолог). Бяха извлечени данни от електронни здравни досиета, включително демографски, антропометрични, жизнени показатели, коморбидни медицински проблеми, етиология на цироза, усложнения на цироза (асцит, варици, чернодробна енцефалопатия и хепатоцелуларен карцином), история на AKI илихронично бъбречно заболяванеи експозиции на лекарства в рамките на 30 дни след записването. Само пациенти с пълни клинични данни и лабораторни тестове в рамките на 30 дни от записването са отговаряли на условията за включване в това проучване. Пациентите са категоризирани в групи, както следва:

(1) Група 0: нормални здрави контроли

(2) Група 1: компенсирана цироза (Child-Turcotte-Pugh клас A, MELD 10) без анамнеза за AKI и нормалнобъбречна функция

(3) Група 2: декомпенсирана цироза (Child-Turcotte-Pugh клас B или C) без анамнеза за AKI и нормалнобъбречна функция

(4) Група 3: декомпенсирана цироза (Child-Turcotte-Pugh клас B или C) и AKI

нормалнобъбречна функциясе определя като приблизителна GFR > 60 ml/min/1,73 m2 (формула MDRD), без албуминурия и без анамнеза за AKI. AKI се определя съгласно критериите на AKIN: повишение на Scr от 0,3 mg/dl за 48 часа или 50% увеличение на Scr спрямо изходното ниво [16]. Пациенти с AKI бяха наети по време на прием и консултации от болничната хепатологична служба, ако имаха проби от кръв и урина, получени по време на епизода на AKI. Четвъртата група здрави контроли е извлечена от здравословно нормално биохранилище в Центъра за изследване на AKI на UCSD O'Brien в Медицинския факултет на UC San Diego. *работата е одобрена от Институционалния съвет за преглед на Калифорнийския университет в Сан Диего.

2.1. Вземане на проби от урина и обработка за изолиране на екзозоми.

Урината се центрофугира при 3000 × g за 30 минути. РН на супернатантата се регулира до 7, аликвотни части се разделят и се замразяват при -80 градуса С. Екзозомите се приготвят с помощта на утаяване, предизвикано от полиетилен гликол (PEG-) [17]. *e PEG-смесени проби от урина се държат при стайна температура в продължение на 2 часа и се въртят при 10 000 × g в продължение на 30 минути. *e пелетата се ресуспендира в 10 mM Tris с 1 mM EDTA-Na сол. * тази стъпка беше повторена два пъти, за да се отстранят примесите. Едномерна SDS PAGE на екзозомните протеини беше проведена преди трипсинизация в гел, за да се предотврати объркване [18].

2.2. Протеомен анализ.

Гелът се нарязва на 1 mm × 1 mm и се обезцветява 3 пъти с помощта на 100 µL 100 mM амониев бикарбонат за 15 минути, последвано от 100 µL ацетонитрил (ACN) за 15 минути [19 ]. * Супернатантът се лиофилизира и получената пелета се редуцира с 200 µL 100 mM амониев бикарбонат-10 mM DTT и се инкубира при 56 градуса за 30 минути. След отстраняване на течността, парчета гел се добавят към 200 µL 100 mM амониев бикарбонат-55 mM йодоацетамид. * се инкубира при стайна температура за 20 минути на тъмно. *e супернатантата се отстранява и се промива със 100 тМ амониев бикарбонат за 15 минути. *en, 100 µL ACN се добавят за дехидратиране на парчетата гел и разтворът се лиофилизира. След това се добавя леденостуден трипсин (0,01 µg/µL) в 50 mM разтвор на амониев бикарбонат, за да покрие парчетата гел за процеса на смилане и се поставя върху лед за 30 минути. След като рехидратацията приключи, се добавя пресен 50 mM амониев бикарбонат, за да се замени излишъкът. трипсин и се оставя за една нощ при 37 градуса. Екстракцията на пептидите се извършва два пъти чрез добавяне на 50 ul от 0,2 процента мравчена киселина и 5 процента ACN и се разбърква на вортекс за 30 минути при стайна температура. След отстраняване на супернатанта, към пробата се добавят 50 µl 50 процента ACN-0.2 процента мравчена киселина, която се разбърква отново за 30 минути при стайна температура. * супернатантът е отстранен и комбиниран с предишния супернатант от първата екстракция. Пробите бяха анализирани с помощта на Eksigent nano-LC-Ultra® 2D с cHiPLC-nano flex система (Eksigent, AB SCIEX Дъблин, Калифорния, САЩ) в режим на елуиране с капан в комбинация с тандемна масспектроскопия с помощта на QExactive масспектрометър (Thermo Fisher Scientific, San Jose´, Калифорния, САЩ) с йонизация с електроспрей [17].

2.3. Управление на данни.

В анализа е използвана търсачката SEQUEST (софтуер Thermo Scientific Proteome Discoverer, версия 1.4). *e протеинова база данни за триптични пептидни последователности за Homo sapiens от Националния център за биотехнологична информация (NCBI) беше използвана за сравняване на нашите експериментални MS/MS спектри. За идентифициране на пептидни последователности и свързани протеини, ние използвахме публикувани по-рано критерии [17]. За да се оцени статистическата значимост, бяха използвани отделни търсения на цел и примамка и изчисляване на проценти на фалшиви открития (FDRs), базирани на класически резултати. Накрая филтрирахме SEQUESToutput данните, за да присвоим окончателен резултат на протеините. Минималните стойности на корелационния резултат (Xcorr) от 1,5, 2.0, 2,25 и 2,5 бяха избрани съответно за едно-, двойно-, тройно- и квадруполно заредени йони. Публикуваните по-рано параметри бяха използвани, за да се гарантира висока строгост [20], а съотношението на фалшиво положителни пептиди беше по-малко от 3 процента.

2.4. Статистически анализ.

Нормализираният спектрален фактор на изобилие (NSAF) беше използван за изчисляване на относителното изобилие на полипептиди [21]. Лог трансформация и мащабиране на броя на пептидите бяха извършени преди статистическия анализ. Уеб порталът MetaboAnalyst 2.0 беше използван за извършване на t-тест на Student, дискриминантен анализ на частичен най-малък квадрат (PLS-DA) и важност на променливата в проекцията (VIP) с a priori p < 0.="" 05="" [22].="" *e="" съотношението="" на="" индивидуалния="" протеин="" към="" общата="" концентрация="" беше="" оценено="" с="" помощта="" на="" сдвоения="" t-тест="" на="" student="" за="" всяка="" група.="" pls-da="" и="" vip="" бяха="" използвани="" за="" идентифициране="" на="" дискриминиращи="" протеини="" [23].="" избрахме="" протеини="" със="" степен="" на="" фалшиво="" откриване="" (fdr)="" по-малка="" или="" равна="" на="" 10="" процента,="" за="" да="" потвърдим="" с="" помощта="" на="" western="">

2.5. Уестърн имуноблотинг и количествено определяне.

Антитялото срещу MGAM беше закупено от Proteintech Group, Inc., (Чикаго, IL, САЩ) и беше използвано за разделяне на 100 ug протеин от екзозоми на урина на всеки субект. След разделяне, протеините се прехвърлят в нитроцелулозна хартия, блокират се, инкубират се с първично антитяло за една нощ преди промиване с трис-буфериран физиологичен разтвор, инкубират се за 1 час с конюгат на HRP-вторично антитяло и се визуализират чрез развиване, както е описано в предишни публикации от нашата лаборатория [ 24, 25]. Софтуерът ImageJ (NIH) беше използван за количествено определяне на западните имуноблот ленти [24] и начертан (GraphPad Prism, Сан Диего, Калифорния, САЩ).

3. Резултати

3.1. Клинични характеристики на цироза и здрави контролни субекти.

Шест пациенти във всяка група с пълни клинични данни бяха анализирани и сравнени с шест здрави контроли. Демографията и етиологията на чернодробното заболяване са обобщени в таблица 1. Както се очакваше според дизайна на проучването, резултатите по Child Turcotte-Pugh и MELD варират значително между групите пациенти.

3.2. Протеомни анализи на екзозоми на урина от пациенти с цироза и здрави контроли.

Общо във всичките 4 групи бяха идентифицирани 1572 уникални протеина. Имаше 360 протеина, които бяха общи за всички групи. Открихме 83 уникални екзозомални протеина за група 0 (контроли), 250 за група 1, 84 за група 2 и 212 за група 3 (Фигура 1). Освен това проведохме многовариантен PLS-DA върху протеини, което показа ясно разделение между здравата контролна група и различни подгрупи от пациенти с цироза, както е показано на фигура 2. Компенсирани и декомпенсирани субекти с цироза безувреждане на бъбреците(групи 1 и 2) показват значително припокриване, докато субектите с цироза и AKI (група 3) показват ясно разделение от другите субекти с цироза и здрави контролни субекти. Отделна ANOVA на протеини между четирите групи показа, че 126 протеина са значително променени (p < 0.05),="" от="" които="" 13="" са="" достигнали="" граничната="" стойност="" на="" фалшивото="" откриване="" (fdr)=""><10% (table="" 2).="" maltase-glucoamylase="" (mgam)="" was="" the="" top="" discriminant="" protein="" with="" a="" vip="" score="" of="" 4.35="" for="" the="" entire="" study="">

3.3. Протеинът малтаза-глюкоамилаза се повишава при декомпенсирани циротични екзозоми в урината.

Протеомните данни показват по-висока концентрация на MGAM в екзозомите на урината на пациенти с декомпенсирана цироза, със и безувреждане на бъбреците(групи 2 и 3). Това беше единственият най-дискриминиращ протеин сред всичките четири групи с VIP резултат от 4,35 (Фигура 3). Потвърждаващият Western blotting на тези екзозоми демонстрира откриваем протеин само при пациенти с цироза сувреждане на бъбреците(група 3) (Фигура 4).

4. Обсъждане

Проведохме протеомен анализ на съдържанието на екзозома в урината от пациенти с компенсирана цироза, декомпенсирана цироза и декомпенсирана цироза с AKI и ги сравнихме със здрави контроли. Протеомният анализ на уринарните екзозоми при пациенти с цироза идентифицира няколко потенциално важни биомаркера наувреждане на бъбреците, най-вече MGAM, бифункционален ензим. Открихме най-високи концентрации на MGAM в уринарните екзозоми на пациенти с цироза и AKI. Освен това MGAM е повишен при пациенти с цироза, но не до степента, както при тези с AKI. MGAM отсъстваше в здравата контролна група, подчертавайки потенциалната му роля като биомаркер за критично заболяване.

Това проучване има няколко други важни констатации. Първо, доколкото ни е известно, това е първият доклад за описателен анализ на съдържанието на екзозомен протеин в урината при добре характеризирани пациенти с цироза. Второ, това е първото проучване, което отчита повишена тубулна епителна дизахаридаза вциротично-бъбречно уврежданепарадигма. Протеомните данни за екзозомите на урината от 4-те различни групи показват, че регулацията на MGAM в групата с AKI на цироза е стабилна и последователна. Малтазата е основната дизахаридаза в мембраните на бъбречната четка [26, 27], но точната функция на този ензим не е ясно изяснена; въпреки това се предполага възможна роля на свързаните дизахаридази, сукраза-изомалтаза и трехалаза в транспорта на захар [28]. При десет вида бозайници са открити дизахариди, свързани с MGAM, в границата на бъбречната четка [27]. Farquhar и колегите са показали, че малтазата присъства в микровласинките на проксималния извит тубул, вероятно функционирайки в реабсорбцията и транспорта на глюкозата; и този абсорбционен капацитет намалява към по-дисталните части на нефрона [29]. Доказано е, че MGAM присъства в екзозоми и микрочастици в миши модел на неалкохолен стеатохепатит (NASH) [30], честа причина за цироза. Тъй като пациентите с цироза имат няколко основни заболявания, които допринасят за намаляване на Scr, откриването на AKI е проблематично. Освен това етиологията на увреждането често е неизвестна и разграничаването между хепатореналния синдром и други етиологии на AKI е трудно. Освен това, патофизиологията на декомпенсираната цироза с AKI е неясна, тъй като може да отразява хемодинамични промени или възпалителни медиатори в случай на остра или хронична чернодробна недостатъчност [31]. Разсъждавахме, че структурните и функционални промени, които причиняват цирозата и порталната хипертониябъбречна функцияварират по тежест в зависимост от тежестта на цирозата. Тези разлики между компенсираното и декомпенсираното чернодробно заболяване сувреждане на бъбрецитеможе да се разбере чрез изучаване на продуктите надолу по веригата набъбрек, като урина. Като се има предвид специфичният за състоянието на нефроновата клетка товар на екзозомата на урината, ние предположихме, че анализът на екзозомата на урината съдържа ключова информация, която е от значение за диференциацията на AKI при цироза. Този доклад е първата стъпка към тестване на тази хипотеза.

Този дизайн на проучването имаше няколко ограничения. Първо, броят на субектите, анализирани за група, е малък. По-големият размер на извадката може да е повишил допълнително устойчивостта на тези данни и допълнителните протеини може да са достигнали прага на приемлива FDR на<10%. however,="" despite="" this="" small="" sample,="" these="" data="" demonstrating="" mgam="" as="" a="" unique="" exosomal="" protein="" in="" cirrhotic="" patients="" with="" aki="" is="" robust.="" second,="" we="" used="" 1d="" gel="" electrophoresis="" to="" resolve="" the="" exosome="" proteins="" prior="" to="" lc/ms-ms="" analysis="" that="" resulted="" in="" the="" identification="" of="" 1572="" proteins="" overall.="" if="" we="" had="" conducted="" direct="" exosome="" protein="" trypsinization="" instead="" of="" following="" this="" method,="" perhaps="" the="" number="" of="" identified="" proteins="" might="" have="" increased.="" in="" our="" experience,="" exosomes="" are="" packaged="" with="" nonfull="" length="" peptides="" from="" proteolytic="" action="" as="" well="" as="" endogenous="" peptides="" and="" may="" have="" con-founded="" the="" analysis.="" by="" following="" the="" gel="" electrophoresis="" method,="" we="" ensured="" that="" we="" only="" compared="" full-length="" protein="" differences="" between="">

В обобщение, ние характеризирахме разликите в екзозомния протеин на урината при здрави контроли и компенсирани и декомпенсирани цирозни субекти с и без AKI чрез протеомни методи. Работа от групата Knepper показва, че много важни бъбречни протеини (напр. аквапорини, полицистини и подоцин) се отделят в екзозомата на урината [32, 33]. Нашият настоящ доклад добавя MGAM към тази група от функционално важни бъбречни протеини, идентифицирани в екзозомите на урината. Нашите открития предполагат, че MGAM може да разграничи проксималното тубулно увреждане от други видове AKI при пациенти с цироза. Въпреки това, клиничното значение на регулацията на MGAM при пациенти с цироза и AKI трябва да бъде установено в бъдещи проучвания.

Наличност на данни

Клиничните и протеомни данни, използвани в подкрепа на констатациите от това проучване, са ограничени от институционалния прегледен съвет на UCSD, за да се защити поверителността на пациентите.*Данните са достъпни от д-р Линда Аудишу (lawdishu@ucsd.edu) за изследователи, които отговарят на критерии за достъп до поверителни данни.

Конфликт на интереси

Авторите декларират, че нямат конфликт на интереси.

Благодарности

Изследвания, подкрепени от NIH NIDDK UAB/UCSD O'Brien Center Grant DK0793337.

Автор

Линда Аудишу,^1,2 Шърли Цунода,¹ Мишел Пърлман,³ Шантел Кокой-Мондрагон,²Маджид Гасемян,⁴Робърт К. Навио,⁵Хедър М. Патън,³Равиндра Л. Мехта,²Бхавя Виджай,⁶и Сатиш P.Рамачандра Рао ^2,6,7

1UC San Diego Skaggs School of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, Сан Диего, САЩ

2 Лаборатория за биомаркери, Център О'Брайън заОстра бъбречна травмаИзследвания, нефрология-хипертония, Калифорнийски университет в Сан Диего, Катедра по медицина, Сан Диего, САЩ

3UC San Diego, Department of Medicine, Division of Gastroenterology, San Diego, USA

4UC San Diego, Department of Chemistry & Biochemistry, Biomolecular & Proteomics Spectrometry Facility, San Diego, USA

5UC Сан Диего, Катедри по медицина, педиатрия и патология, Сан Диего, САЩ

6I-AIM Biomarkers Laboratory, Re University of Trans-Disciplinary Health Sciences and Technology (TDU), Бангалор, Индия

7UC San Diego, Department of Medicine, Division of Infectious Diseases, San Diego, USA

Кореспонденцията трябва да бъде адресирана до Satish P. Ramachandra Rao; Получено на 30 октомври 2018 г.; Преработен на 31 декември 2018 г.; Приет на 19 февруари 2019 г.; Публикувано на 16 април 2019 г. Академичен редактор: Антонио Артигас

Авторско право © 2019 Linda Awdishu et al. Това е статия с отворен достъп, разпространявана под,което позволява неограничено използване, разпространение и възпроизвеждане във всякакъв носител, при условие че оригиналното произведение е правилно цитирано.

Препратки

[1] F. Fabrizi и P. Messa, „Предизвикателства при лечението на бъбречна недостатъчност преди чернодробна трансплантация,“Клиники в Черен дроб болест, кн. 21, бр. 2, стр. 303–319, 2017 г.

[2] P. Tandon, MT James, JG Abraldes, CJ Karvellas, F. Ye и N. Pannu, „Уместност на новите дефиниции за честотата и прогнозата на остраувреждане на бъбрецитепри хоспитализирани пациенти с цироза: ретроспективно популационно кохортно проучване,"PLoS One, кн. 11, бр. 8, номер на статия e0160394, 2016 г.

[3] JM Belcher, G. Garcia-Tsao, AJ Sanyal et al., „Връзка на AKI със смъртността и усложненията при хоспитализирани пациенти с цироза,“Хепатология, кн. 57, бр. 2, стр. 753–762, 2013 г.

[4] G. Garcia-Tsao, CR Parikh и A. Viola, "Остра бъбречна травмапри цироза",Хепатология, кн. 48, бр. 6, стр. 2064–2077, 2008 г.

[5] R. Moreau и D. Lebrec, „Остра бъбречна недостатъчност при пациенти с цироза: перспективи в ерата на MELD,“Хепатология, кн. 37, бр. 2, стр. 233–243, 2003.

[6] F. Wong, JG O'Leary, KR Reddy и др., „Нова консенсусна дефиниция наостра бъбречна травмапрогнозира точно 30-дневна смъртност при пациенти с цироза с инфекция,"Гастро-ентерология, кн. 145, бр. 6, стр. 1280.e1–1288.e1, 2013 г.

[7] PT Murray, RL Mehta, A. Shaw и др., „Потенциално използване на биомаркери востра бъбречна травма: доклад и резюме на препоръките от 10-ата консенсусна конференция за инициатива за качество на диализата в остра фаза,"БъбрекМеждународен, кн. 85, бр. 3, стр. 513–521, 2014 г.

[8] WK Han, V. Bailly, R. Abichandani, R. Thadhani и JV Bonventre, "Травма на бъбрецитемолекула-1 (KIM-1): нов биомаркер за увреждане на човешки бъбречни проксимални тубули,"Бъбрек Международен, кн. 62, бр. 1, стр. 237–244, 2002.

[9] SG Coca, GN Nadkarni, AX Garg и др., „Първа следоперативна уринаувреждане на бъбрецитебиомаркери и връзка с продължителността на AKI в кохортата TRIBE-AKI,"PLoS One, кн. 11, бр. 8, номер на статия e0161098, 2016 г.

[10] C. Looze, D. Yui, L. Leung и др., „Протеомно профилиране на човешки плазмени екзозоми идентифицира PPARc като свързан с екзозома протеин,"Комуникации за биохимични и биофизични изследвания, кн. 378, бр. 3, стр. 433–438, 2009 г.

[11] J. Conde-Vancells, E. Rodriguez-Suarez, N. Embade, et al., „Характеризиране и цялостно профилиране на протеоми на екзозоми, секретирани от хепатоцити,“Journal of Proteome Research, кн. 7, бр. 12, стр. 5157–5166, 2008 г.

[12] GI Lancaster и MA Febbraio, „Екзозомно-зависим трафик на HSP70,“Вестник по биологична химия, кн. 280, бр. 24, стр. 23349–23355, 2005 г.

[13] GI Lancaster и MA Febbraio, „Механизми на индуцирано от стрес клетъчно освобождаване на HSP72: последици за индуцирано от упражнения увеличение на извънклетъчния HSP72,“Имунология на упражнениятаПреглед, кн. 11, стр. 46–52, 2005.

[14] JPJJ Hegmans, PJ Gerber и BN Lambrecht, "Екзозоми," вФункционална протеомика, кн. 484, стр. 97–109, Humana Press, Ню Йорк, Ню Йорк, САЩ, 2008 г.

[15] R. Zhan, X. Leng, X. Liu, et al., „Протеинът на топлинен шок 70 се секретира от ендотелни клетки по некласически път, включващ екзозоми,“Комуникации за биохимични и биофизични изследвания, кн. 387, бр. 2, стр. 229–233, 2009 г.

[16] RL Mehta, JA Kellum, SV Shah и др., "Остра бъбречна травмамрежа: доклад за инициатива за подобряване на резултатите при остро бъбречно увреждане,"Критичен грижа, кн. 11, бр. 2, стр. R31, 2007 г.

[17] SP Ramachandra Rao, MA Matthias, C. Kokoy-Mon-dragonet al., „Протеомен анализ на екзозоми на урината разкрива отговор на бъбречните тубули към лептоспирална колонизация при експериментално заразени плъхове,“PLoS Пренебрегвани тропически болести, кн. 9, бр. 3, статия e0003640, 2015 г.

[18] HC Christianson, KJ Svensson, TH van Kuppevelt, J.-P. Ли и М. Белтинг, "Екзозомите на раковите клетки зависят от хепарансулфатните протеогликани на клетъчната повърхност за тяхната интернализация

и функционална дейност",Сборник на на Национален академия на науките, кн. 110, бр. 43, стр. 17380–17385, 2013 г.

[19] А. Шевченко, М. Уилм, О. Ворм и М. Ман, „Масово спектрометрично секвениране на протеини от полиакриламидни гелове, оцветени със сребро,“Аналитична химия, кн. 68, бр. 5, стр. 850–858, 1996.

[20] F. Brambilla, F. Lavatelli, D. Di Silvestre, et al., „Профил на белтъчен протеин на човешка мастна тъкан и неговите промени във връзка със системни амилоидози,“Journal of Proteome Research, кн. 12, бр. 12, стр. 5642–5655, 2013 г.

[21] AC Paoletti, TJ Parmely, C. Tomomori-Sato, et al., „Количествен протеомичен анализ на отделни медиаторни комплекси при бозайници, използващи нормализирани фактори на спектрално изобилие,“Сборник на Националната академия на науките, кн. 103, бр. 50, стр. 18928–18933, 2006.

[22] J. Xia, R. Mandal, IV Sinelnikov, D. Broadhurst и

DS Wishart, „MetaboAnalyst 2.0--всеобхватен сървър за анализ на метаболомни данни,“Изследване на нуклеинови киселини, кн. 40, бр. W1, стр. W127–W133, 2012 г.

[23] J. Xia, N. Psychogios, N. Young и DS Wishart, „MetaboAnalyst: уеб сървър за анализ и интерпретация на метаболомни данни,“Изследване на нуклеинови киселини, кн. 37, бр. S2, стр. W652–W660, 2009 г.

[24] SPR Rao, R. Wassell, MA Shaw и K. Sharma, „Профилирането на субпротеоми на човешки мезангиални клетки разкрива ролята на калмодулин в усвояването на глюкоза,“Американски вестникнаФизиология-бъбречна Физиология, кн. 292, бр. 4, стр. F1182–F1189, 2007.

[25] SP Ramachandra Rao, Y. Zhu, T. Ravasi и др., „Пирфенидонът е ренопротективен придиабетно бъбречно заболяване," Вестник на Американското дружество по нефрология, том 20, номер 8, стр. 1765–1775, 2009 г.

[26] U. Reiss и B. Sacktor, "Бъбрекчетка граница мембрана малтаза: пречистване и свойства," Archives of Biochemistry and Biophysics, vol. 209, no. 2, pp. 342-348, 1981.

[27] B. Sacktor, „Трехалаза и транспортирането на глюкоза при бозайницитебъбреки червата," Сборници на Националната академия на науките, том 60, № 3, стр. 1007–1014, 1968 г.

[28] SJ Berger и B. Sacktor, „Изолиране и биохимично характеризиране на границите на четката от заекбъбрек," Вестник по клетъчна биология, кн. 47, бр. 3, стр. 637–645, 1970.

[29] D. Kerjaschki, L. Noronha-Blob, B. Sacktor и

MG Farquhar, „Микродомени с отличителен гликопротеинов състав вбъбрекграница на четката на проксималния тубул,"Вестник по клетъчна биология, кн. 98, бр. 4, стр. 1505–1513, 1984.

[30] D. Povero, A. Eguchi, H. Li et al., „Циркулиращи извънклетъчни везикули със специфичен протеом и чернодробни микроРНК са потенциални биомаркери за чернодробно увреждане при експериментално мастно чернодробно заболяване,“PLoS One, кн. 9, бр. 12, номер на статия e113651, 2014 г.

[31] R. Hernaez, E. Sola`, R. Moreau и P. Gine`s, „Остра или хронична чернодробна недостатъчност: актуализация“,червата, кн. 66, бр. 3, стр. 541–553, 2017.

[32] Т. Писиткун, Р.-Ф. Shen и MA Knepper, „Идентификация и протеомно профилиране на екзозоми в човешка урина,“Сборник на Националната академия на науките, кн. 101, бр. 36, стр. 13368–13373, 2004 г.

[33] PA Gonzales, T. Pisitkun, JD Hoert, et al., „Мащабна протеомика и фосфопротеомика на уринарни екзозоми,“Журнал на на американски общество на Нефрология, кн. 20, бр. 2, стр. 363–379, 2009 г.