Инфузия На Цитотоксичен Т Лимфоцит Антиген 4 Генетични варианти На Остро отхвърляне при пациенти с бъбречна трансплантация: Прецизна медицина Перспектива
Mar 17, 2022
ВъвежданетоНай-ефективното и често лечение за краен етапБъбречна болестЕбъбречна трансплантация. Оцеляването и качеството на живота на пациентите ще бъдат засилени чрез трансплантация. Въпреки всички усилия в областта на трансплантацията, процентът набъбрекотхвърлянето на allograft (AR) все още е високо и предизвикателно [1]. Отхвърлянето на allograft е имунен отговор, който се медиира от Т-клетките и пътищата CTLA-4 са от съществено значение за надолу регулиране на имунната система в настройката на Т клетъчна активация за предотвратяване на автоимунността. Цитотоксични Т лимфоцит свързани протеин 4 (CTLA4) е съществен отрицателен регулатор и инхибитор на Т клетки, които посредничи имунни отговори. Той би се разглеждал като основен компонент на имунната система, който мотивира имунната толерантност [2]. Рискова стратифицираща трансплантация въз основа на базови генетични модификатори и прецизна фармакотерапия или фармакогеномика подход може да подпомогне подобряване на резултатите от трансплантацията [3–5]. Разработването на геномни и други методи за молекулярно профилиране при трансплантацията представлява несравним потенциал за използване на стратегии за прецизна медицина за засилване на резултатите на пациентите [6]. Гените за имунен отговор на реципиентите също могат да окажат въздействие върху резултатите след трансплантацията [7], тъй като някои проучвания показват, че вариантите на CTLA4 са свързани с множество автоимунни заболявания [8–11]. Генът CTLA4 се намира на хромозома 2q33 и е съставен от четири екзона [12]. CTLA4 протеин, член на имуноглобулин суперсемейство, доставя отрицателни сигнали за надолу-регулиране на Т клетъчна пролиферация чрез свързване с B7 молекула на антиген-представящи клетки [13]. Следователно, тя може да бъде подходящ кандидат ген за изучаване на allograft отхвърляне. Съответно проучихме двата по-често срещани варианта, rs231775 (+49A/G) и rs5742909 (-318C/T), на CTLA4, които могат да повлияят на клетъчния повърхностен израз на молекулата CTLA-4. Генетичният вариант RS231775 се намира в рамките на сигналния пептид на молекулата и влияе върху изразяването на изоформата в цяла дължина върху клетъчната мембрана Т [14]. Експресионният модел на CTLA4 протеина е установено, че се променя от генотипи на rs5742909 C/T единичен нуклеотиден полиморфизъм (SNP), който се намира в организатора на CTLA4 [15]. Настоящото проучване има за цел да разбере влиянието на тези две общи SNPs на CTLA4 върху скоростта на AR следбъбречна трансплантацияс минимум четири години последващи действия.
Ключови думи:Бъбречна трансплантация; Отхвърляне на алографт; CTLA4 ген; Прецизно лекарство; Бъбречна болест
CISTANCHE ще подобри бъбречното/бъбречното заболяване
МетодиПациенти.Сто шестдесет и деветбъбречна трансплантацияполучатели, които са били подложени на трансплантация от 2010 до 2014 г. в болница Labbaf Nejad в Техеран, Иран са били включени в това проучване, след като са взели информирано съгласие в писмена форма. Те се състояха от 52 жени и 117 мъже, по-големи от 18 години, и последваха минимум от четиригодишния период след получаване на алографта. Пациентите са aBO кръвна група, съвместима с най-много 3/6 несъответствие. Клинична информация на пациентите по отношение на трансплантацията, Възраст, пол, телесно тегло, имуносупресивна терапия, циклоспорин или такролимус кръвна концентрация, източник на присадка, епизод на отхвърляне, и време до първо отхвърляне е получено от клиничните записи за хоспитализирани стационарни или пациенти, които са посетили извънболничната клиника. Пациентите са класифицирани в две групи алогеннибъбрекполучатели на присадки според ar епизоди: 39 пациенти с остри епизоди на отхвърляне и 130 без признаци на остър опит при отхвърляне. AR е дефиниран чрез клиничнибъбречна функциянедостатъчност, както се наблюдава от повече от 30% повишена серумна концентрация на креатинин, която се възстанови след лечение с имуносупресори независимо от други патологични състояния, като инфекция и запушване на пикочните пътища.
ГенотипизиранеДНК с високо молекулно тегло е изолирана от 5 ml периферна кръв, събрана в епруветки, съдържащи EDTA, чрез класическия метод за осоляване [16] и съхранявана при −20 °C за по-нататъшен анализ. Генотипен анализ на CTLA4 rs5742909 (-318C/ T) и rs231775 (+49A/G) варианти бяха признати по полимераза верига реакция-ограничение фрагмент дължина полиморфизъм (PCR-RFLP) метод. Фрагменти за усилване на PCR, съдържащи 276 базови чифта (bp) за -318C/T и 399 bp за генни варианти +49A/G CTLA4, са извършени в 50 μl крайна реакция, съдържаща 40 ng от геномната ДНК, 1 mM MgCl2, 20 pmol на препращащ грунд (5'-TTCGACGTAACA GCTAAACC-3′) и обратен грунд (5′- CAAATGAAA CCCAGGTAGGAG-3′) за CTLA4 +49A/G и 20 pmol на препращащ грунд (5'-TGGACTGGATGGTTAAGGATG-3′) и 20 pmol на обратен грунд (5'-AGAAGGCACTTGAAT AGAAAGC-3′) за CTLA4 -318C/T. PCR продукти са усвоени съответно с ензимите за ограничаване на Santa и MseI за CTLA4 +49A/G и CTLA4 -318C/T и са разделени с 2% електрофореза с гел агароза.
CISTANCHE ще подобри бъбречната/бъбречната диализа
Статистически анализЧестотата на различните рискови фактори, както и генотиповете на вариантите между пациентите със и без отхвърляне е сравнена с помощта на точните тестове на Chi-Square и Fisher. Независим студент t-тест и Mann–Whitney U тест е бил използван за сравняване на средната (стандартно отклонение (SD)) на непрекъснати фактори между две групи. Асоциациите между вариантите и податливостта към отхвърляне бяха изчислени с помощта на логистични регресионни модели. Потенциалните confounders са били контролирани като коригирани за възраст, пол, и някои биохимични фактори в серума. P-стойност по-малка от 0,05 се счита за значима.
РезултатиНаехме169 пациенти с хроничнабъбречно заболяванеПодложенибъбречна трансплантация. Клиничните и демографските характеристики на пациентите, включени в нашето проучване, са изброени в таблица 1. Средната (SD) възраст от тях е 43,90 (13,08), а 30,18 са жени. Сред тези участници 39 (23,08%) Пациентите с анамнеза за отхвърляне на алографт са получили трансплантации от роднините си малко повече от пациентите, чиито алографти не са отхвърлени (97,37% спрямо 96,39%), но разликата е статистически незначителна (P=0,6). Тези пациенти също са имали значително по-висока анамнеза за хиперлептинемия (92,31% спрямо 0, P<0.0001). moreover,="" the="" history="" of="" hyperlipidemia="">
хипертония сред пациентите с резултати от алографт е повече от тези без (съответно 17,95% спрямо 10% и 51,28% спрямо 43,08). Разликите обаче не са статистически значими (Съответно P=0,1 и P=0,2). От друга страна, разпространението на захарен диабет сред пациентите, които нямат резултат от отхвърлянето, е повече от пациентите, чиито алографти са били отхвърлени (съответно 16,15% спрямо 10,26%), но все пак, той не е бил от значение (P=0,3). Средната стойност на серумния калий е значително по-ниска сред пациентите с отхвърляне от тези без отхвърляне (4,20 спрямо 4,38, P=0,03). Не е наблюдавана значима разлика между пациенти със и без отхвърляне на алографт в случай на средна възраст (43,46 години срещу. 44,43 години, P=0,8), тегло (70,23 kg спрямо 70,99 kg, P=0,7), хемоглобин (13,68 mg/dl спрямо 13,09 mg/dl, P=0,2), хематокрит (39,88 спрямо 40,24, P=0,7) серумен натрий (140,39 mg/dl спрямо 140,44 mg/dl, P=09) и серумен кръвен уреен азот (BUN) (35,18 mg/dl срещу 30,74 mg/dl, P=0,1).
CISTANCHE ще подобри бъбречната/бъбречната болка
Генотипно разпределение на CTLA4 генетични вариантиЧестотата на AG генотип на CTLA4 +49A/G вариант е еднаква както при пациенти със, така и без анамнеза за отхвърляне (38,46%). Никоя от тези групи нямаше хомозиготен генотип. Съотношението на суровите коефициенти между AG генотипа и податливостта към отхвърляне е едно (P=1). Това не е променено след корекция за възраст, пол, серумен креатинин, и серумен калий и също не е бил от значение (OR=1.06, P=0.9). Ето защо този вариант нямаше връзка с отхвърлянето на allograft. За вариант CTLA4 -318C/T, както CT, така и TT честотите сред пациентите, чиито трансплантации са били отхвърлени, са по-ниски от пациентите с нормалните резултати. Въпреки че това не е статистически значим (12,82% спрямо 18,46% и 0 спрямо 1,54%, P=0,7). Съотношението на коефициентите между CT генотипа и отхвърлянето е 0,64, но, корекцията за горните потенциални объркващи, променя асоциацията на 1,78. Означава, че КТ генотип, увеличаване на шансовете за отхвърляне към 78% в сравнение с CC генотип, въпреки че тази асоциация не е статистически значима (OR=1.78, P=0.2). В сравнение с CC генотипа като референция, ТТ генотип предизвика 29% увеличение на шансовете за отхвърляне. Тази асоциация обаче не е значима (OR=1,29, P=1). Следователно нито КТ, нито ТТ са имали положителен ефект върху чувствителността към отхвърляне на алографт и не могат да се считат за рискови фактори за неблагоприятни резултати след трансплантацията (таблица 2).
Алеле честота на CTLA4 вариантиЧестотата на G allele е еднаква сред пациентите със и без отхвърляне на алографт (19%). Съотношението на коефициентите между този алел и отхвърлянето беше неутрално. Следователно не е наблюдавана значима асоциация между G алел и податливост към отхвърляне (OR=1, P=1). Честотата на Т алела сред пациентите, чиито трансплантации са отхвърлени, е по-ниска от тази на пациентите без отхвърляне, обаче, това не е статистически значимо (7% спрямо 11%, P=0,3). Въпреки че Т алел показва 43% намаление на риска от отхвърляне, статистическите тестове показват, че асоциацията не е значима (OR=0,57, P=0,2) (Таблица 3). По този начин този алел не е бил защитен фактор за отхвърляне на allograft.
Чувствителността на CTLA4 +49A/G вариант при прогнозиране на необичайните резултати от алографта е много ниска (38%). Той посочи, че този вариант може да открие само 38% от пациентите, податливи на отхвърляне. Този вариант имаше и специфичност от 61%. Означава, че този вариант може да открие 61% от пациентите при трансплантация с нормални резултати. Съответните цифри за вариантите CTLA4 -318C/T са 13% и 80% (Смокини. 1, 2, 3, и 4). Както е илюстрирано в таблица 4, въпреки че чувствителността на този вариант при прогнозиране на отхвърлянето е много ниска, тя има сравнително висока точност при диагностицирането на нормалните резултати от алографта поради ниска фалшива позитивност. Горните оценки показват, че CTLA4 +49A/G и CTLA4 -318C/T не са подходящи за скрининг на пациенти, податливи на отхвърляне.
Дискусия Няколко проучвания са доказали, че генетичната вариация в имунорегулаторните молекули е свързана с резултата от трансплантацията на твърди органи [17, 18]. Наблюдавани са варианти на CTLA4, костимулаторен рецептор, който контролира активирането на Т клетките,бъбречна трансплантацияв някои проучвания [11, 19–22]. Няколко SNPs и множество клинични резултати отбъбречна трансплантацияучастваха. Най-разпространения неблагоприятен резултат отбъбречна трансплантацияе AR. Непоследователна връзка на остро отхвърляне и бъбречни алографт резултати са наблюдавани в различни етнически групи [11, 14, 22, 23]. Резултатите от настоящото проучване показват, че нито една от генетичните вариации на CTLA4 не е свързана с податливост къмбъбречна трансплантацияостро отхвърляне.
В предишни проучвания върху кавказките и американските популации е установено, че CTLA4 rs231775 A/A генотип предпазва пациента от получаване на остро отхвърляне. Освен това средната преживяемост на присадката за получателите наБъбречнаи чернодробна трансплантация с ГГ генотипа на rs231775A/G значително намалява при сравнение с Генотиповете AA и A/G [19, 24]. В това проучване генотипът на GG на rs231775 SNP не се наблюдава сред пациентите със и без AR епизоди. Тези резултати са несъответствителни с предишната констатация, че докладвани rs231775 G алел може да намали отрицателния ефект на CTLA4 на Т клетъчно медиирана имунни отговори [25]. Krichen et al. (2009) съобщава за намаляване на честотата rs231775 CTLA4 A алел сред пациентите с остра загуба на алографт, в сравнение с пациенти с епизод, които не са ar [26]. Тези резултати са в контраст с наблюденията ни. Не открихме никаква асоциация между AR и този алел, което предполага, че този SNP на гена CTLA4 не е бил свързан с AR в ирански проби. Gendzekhadze et al. през 2006 г. установява статистически значима асоциация между наличието на генотип CTLA-4 +49 AA и защитата от остро отхвърляне при пациенти с трансплантация, които са получилибъбрекот жив свързан донор и също така те са намерили асоциация между ГГ генотип и остро събитие за отхвърляне [22]. Не са открити такива асоциации в група пациенти с трансплантации, които изучавахме. Проучване през 2010 г., съобщава подобни резултати, които не показват никаква асоциация между +49A / G SNP и остро отхвърляне. Въпреки това те
установи асоциация между вариант +49A/G и забавената функция на присадката [20]. Wiśniewski et al. през 2006 г. съобщава, че -318C/T SNP в гена CTLA-4, предпазва от остро отхвърляне набъбрекПрисадки. Честотата на ТТ генотип на този вариант е три пъти по-малка сред пациентите с AR в сравнение с група, която не е ar [11]. В доклад от Китай са наблюдавани несъгласувани резултати с резултатите от настоящото проучване за честотата на Т алела сред пациентите с АР [14]. През 2006 г. Gorge et al. наблюдава и повишена честота на Т алела на -318C/T CTLA4 сред пациентите без остро отхвърляне. Следователно ефектът от варианта -318C/T може да не е един и същ в различните етнически групи [19]. Също така, етническата фонова информация на пациентите не е била налична. Тя трябва да бъде оценена за бъдещи изследвания на генетичното асоцииране. Въпреки че настоящите резултати не можаха да въведат изследваните генетични варианти като биомаркери поради ограниченията на изследването, изглежда, че вероятно бихме могли да постигнем по-реалистични резултати чрез увеличаване на размера на извадката.
ИзводНашите констатации разкриха, че rs231775 (+49A/G) и rs5742909 (-318C/T) CTLA4 генетични варианти не са свързани с остро отхвърляне в иранската популация, които са преминалибъбречна трансплантация. Така че тези варианти не могат да се считат за рискови фактори за остро отхвърляне на алографт на иранскибъбречна трансплантацияПолучатели. Независимо от това би било необходимо да потвърдим резултатите си в голямо кохортно проучване с по-точно наблюдение на пациентите и също така да се обмислят различни гени. Но всъщност прецизната медицина, която включва известната генетична информация в клиничната практика, за да персонализира грижите забъбречна трансплантацияполучатели, е разумно търсене, което е на хоризонта, като се има предвид ниската цена на генетичните тестове и подобрения в молекулярната диагностика.
