Иридоидни и ациклични монотерпенови гликозиди, канканозиди L, M, N, O и P от Cistanche Tubulosa

Cistanche tubulosa(SЧРЕНК) R. WТОЧНО(Orobanchaceae) е многогодишно паразитно растение, растящо върху корените наСалвадораилиКалотрописвид, разпространен в Северна Африка, Арабия и азиатските страни.1) Стъблата на това растение (Kanka-nikujuyou на японски) традиционно се използват залечение на импотентност, стерилитет, лумбаго и телесна слабосткакто и средство за насърчаване на кръвообращението.1,2) По време на нашите проучвания върху биоактивни съставки от стъбла наC. тубулоза, 3-6) по-рано докладвахме за двадесет и четири фенилетаноидни аминогликозиди, включително канканозиди H1, H2, I, J1, J2, K1и К2, и две ацилирани олигозахари от пресни стъбла наC. tubulosa. 5,6) Освен това директорфенилетаноидни гликозиди, ехинакозид, актеозид и изоактеозидУстановено е, че инхибират повишаването на нивата на серумната аспартат аминотрансфераза (AST) и аланин аминотрансфераза (сол) в увредения черен дроб на мишките, предизвикано отD-галактозамин (D-GalN)/ липополизахарид в дози от 25-100 mg/kgper os(p.o.). Изяснени са и структурните изисквания на фенилетаноидните гликозиди за хепатопротективната активност.5) В това продължаващо проучване на съставките в пресните стъбла наC. тубулоза, ние допълнително изолирахме единадесет иридоидни гликозиди, включително канканозиди L (1), M (2) и N (3), седем ациклични монотерпенови гликозиди, включително канканозиди O (4) и P (5), три фенилпропаноида и четири лигнана. Тази статия се занимава с изолирането и изясняването на структурата на пет нови съединения (1-5).

НАТУРАЛНА CISTANCHE TUBULOSA ЗА ОБЛЕКЧАВАНЕ НА СЕКСУАЛНА ДИСФУНКЦИЯ PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Пресни стъбла на C. tubulosa (култивирани в Урумчи, провинция Синдзян, Китай) се екстрахират с метанол под обратен хладник, за да се получи метанолов екстракт (8,36% от пресните стъбла). От метаноловия екстракт се получават фракции, елуирани с H2O и MeOH (съответно 5,63% и 2,73%) чрез колонна хроматография с Diaion HP-20 (H2O→MeOH), както е описано по-горе. 5) Елуираната с MeOH фракция се подложени на SiO2 и ODS колонна хроматография и накрая HPLC за получаване на канканозиди L (1, 0.0026%), M (2, 0.{{27 }}001%), N (3, 0.00{{60}}7%), O (4, 0.0{{90}}2{{105}}%) и P (5, 0 .0002%), 6-дезоксикаталпол3,7) (6, 0.197%), барциозид3,7) (7, { {147}}.0583%), глурозид3,7) (8, 0.0443%), канканозид А3) (9, 22,3 mg, 0,0010%), мусаенозидова киселина3,7) ( 10, 0,0056%), 8- епилоганова киселина 3,8) (11, 0,0023%), 8-епидеоксилоганова киселина 3,7) (12, 0,0004%), генипозидова киселина 3,7) (13, 0,0040% ), канканозид E3) (14, 0,0026%), (2E,6Z)-8-bD-глюкопиранозилокси-2,6-диметил-2,6-октадиенова киселина3 ,9) (15, 31,0 mg, 0,0014%), (2E,6E)-3,7-диметил-8-хидроксиоктадиен-1-ил-ObD-глюкопиранозид10) (16, 0,0082%), 8-хидроксигераниол 8-O-bD-глюкопиранозид11) (17, 0,0044%), бетулалбусид А12) (18, 0,0004%), кониферин13) (19, 0,0002%), сирингин13) ( 20, 0,0015%), синапиков алдехид 4-ObD-глюкопиранозид14) (21, 0,0001%), ( )-пинорезинол ObD-глюкопиранозид4,8,15) (22, 0,0010%), eucommin A16) (23, 0,0002) %), изоеукоммин А17) (24, 0,0010%) и ()-сирингарезинол ObD-глюкопиранозид4,8,18) (25, 0,0044%).

Структури на канканозиди L (1), M (2) и N (3)

Канканозид L (1) се получава като бял прах с отрицателно оптично въртене ([a]D 26 - 45.7 в МеОН). Неговият инфрачервен спектър показва силна абсорбционна лента при 3433 и 1{{20}}80 cm- 1, което предполага гликозидна част. Бомбардирането с бърз атом (FAB)-MS от 1 цикъл в режимите на положителни и отрицателни йони показа квазимолекулни йонни пикове при m/z 371 [M Na] и 347 [M-H]-, съответно, и молекулната формула беше определен като C15H24O9 чрез FABMS измерване с висока разделителна способност. Киселинната хидролиза на 1 с 1,0 М солна киселина (HCl) освобождава D-глюкоза, която се идентифицира чрез HPLC анализ с помощта на оптичен ротационен детектор.3-6) 1H- и 13C-NMR спектрите на 1 (CD3OD, таблици 1, 2), които бяха определени чрез различни ЯМР експерименти,19) показаха сигнали, които могат да бъдат приписани на четири метилена [d 1.43 (1H, br dd, J= около 5, 13 Hz, 4a-H), 1.73 ( 1H, br dd, J= около 12, 14 Hz, 6a-H), 1,85 (1H, m, 4b-H), 1,93 (1H, br dd, J= около 8 , 14 Hz, 6b-H), 3.50 (1H, ddd, J= 2.4, 12.5, 13.0 Hz, 3a-H), 3.83 (1H, br dd, J=

ок. 5, 13 Hz, 3b-H), 3.78, 4.12 (1H всеки, и двата d, J= 13.1 Hz, 10-H2)], два метина [d 2.15 (1H, dd, J=7.2, 8.9 Hz, 9-H) и 2.23 (1H, m, 5-H)], и ацетална група [d 4.81 (1H, d, J{{28) }}.9 Hz, 1-H)] заедно с b-глюкопиранозилна част [d 4.70 (d, J= 7.9 Hz, 1 -H)]. Както е показано на Фиг. 1, експериментът 1 H–1 H корелационна спектроскопия (1 H–1 H COSY) на 1 показва наличието на частични структури, написани с удебелени линии. В експеримента с хетероядрена корелация на множество връзки (HMBC) на 1 бяха наблюдавани корелации на дълги разстояния между следните протони и въглероди (1-H и 3-C, 8-C; {{ 49}}H и 1-C; 7-H и 10-C; 9-H и 10-C; }}H2 и 7-C, 8-C; 1 -H и 1-C), както е показано на Фиг. 1. След това относителната стереоструктура на 1 се характеризира с чувствителност към фазите ядрена спектроскопия за подобряване на Overhauser (фазово-чувствителен NOESY), който показа NOE корелации между следните протонни двойки (1-H и 3aH; 3a-H и 4a-H; 3b-H и 4b-H; 4b-H и 5-H, 5- H и 9-H; 7-H; и 10-H2), както е показано на Фиг. 1. 1H- и 13C-NMR спектрите на 1 се наслагват върху тези на основната иридоидна съставка 6-деоксикаталпол (6), с изключение на сигналите, дължащи се към наситената d-лактолова част. Накрая, хидрогенирането на 6 даде 1, така че стереоструктурата на канканозид L беше изяснена като 3,4- дихидро-6-деоксикаталпол (1).

НАТУРАЛНА CISTANCHE TUBULOSA ЗА ОБЛЕКЧАВАНЕ НА РАЗСТРОЙСТВОТО ОТ ВЪЗБУЖДАНЕТО PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Канканозид М (2) се получава като бял прах с отрицателно оптично въртене ([a]D 26 - 18.7 в МеОН). IR спектърът на 2 показва ивици на поглъщане при 3433, 1736, 1655 и 1076 cm- 1, приписани на хидроксил, d-лактон, олефин и етерни части. FAB-MS спектърът на положителни йони на 2 показва квазимолекулен йонен пик при m/z 353 [M Na] и молекулната формула се определя като C15H22O8 чрез FAB-MS измерване на положителни йони с висока разделителна способност. Киселинна хидролиза на 2 с 1,0 М НС1 освобождава D-глюкоза. 1H- и 13CNMR спектрите на 2 (CD3OD, таблици 1, 2) показват сигнали, които могат да бъдат приписани на четири метилена [d 1.66, 2.11 (1H всеки, и двата m, 4-H2), 2.15, 2.75 (1H всеки, и двете m, 6-H2), 4.29 (1H, ddd, J= 2.8, 8.4, 14.3 Hz, 3b-H), 4.32, 4.51 (1H всеки, и двете d, J{{61 }}.1 Hz, 10-H2), 4.35 (1H, ddd, J= 3.1, 6.7, 14.3 Hz, 3a-H)], два метина [d 2.97 (1H, m, 5-H), 3.82 (1H, br s, 9-H)], олефин [d 5.94 (1H, m, 7-H)] и наситена лактонова група (d С 174.9) заедно с bD-глюкопиранозилна част [d 4.32 (1H, d, J= 7.9 Hz, 1 -H)]. Както е показано на Фиг. 1, експериментът 1 H–1 H COSY на 2 показва наличието на частични структури, изписани с удебелени линии, а в експеримента HMBC са наблюдавани дългосрочни корелации между следните протонни и въглеродни двойки ({{ 103}}H и 1-C; 7-H и 9-H и 8-C; }}H2 и 7-C, 8-C, 9-C; 1 -H и 10-C). Относителната стереоструктура на 2 се характеризира с фазово-чувствителен NOESY експеримент, който показва NOE корелации между следните протонни двойки (3a-H и 4a-H; 3b-H и 4b-H; 4b-H и 5- H; 5-H и 6b-H, 9-H), както е показано на Фиг. 1. Така стереоструктурата на 2 беше изяснена, както е показано.

Канканозид N (3) се изолира като бял прах с отрицателно оптично въртене ([a]D 25 - 24.6 в МеОН). В FAB-MS с положителен йон от 3 се наблюдава квазимолекулен йонен пик при m/z 371 [M Na] . Молекулната формула C16H28O8 се определя чрез FAB-MS измерване с висока разделителна способност. Киселинна хидролиза на 3 с 1.0 M HCl освобождава D-глюкоза. 1H- и 13C-NMR данните (CD3OD, таблици 1, 2) показват сигнали, които могат да бъдат приписани на метил [d 1.07 (3H, d, J= 7.2 Hz, {{ 28}}H3)], четири метилена {d 1.37, 1.87 (1H всеки, и двата m, 7-H2), 1.65, 1.81 (1H всеки, и двата m, 6-H2), [3.65 ( 1H, dd, J= 9.1, 9.8 Hz), 3.90 (1H, dd, J= 5.9, 9.8 Hz), 11-H2] и [3.70 (1H, dd, J= 3.3, 12.0 Hz), 3.88 (1H, m), 3-H2]}, четири метина [d 1.69 (1H, m, 4-H), 1.75 (1H, m, 9-H), 2.06 (1H, m, 8-H), 2.16 (1H, m, 5-H)] и полуацетална група [d 4.67 ( 1H, d, J= 7.4 Hz, 1-H)] заедно с bD-глюкопиранозилна част [d 4.26 (1H, d, J= 7.9 Hz, {{101 }}H)]. Иридоидната структура на 3 беше изяснена чрез 1 H–1 H COSY и HMBC експерименти и относителната стереоструктура беше характеризирана с фазово-чувствителен NOESY експеримент, както е показано на Фиг. 1. Следователно, стереоструктурата на 3 беше изяснена, както е показано.

ЕСТЕСТВЕН CISTANCHE TUBULOSA ЗА РЕШАВАНЕ НА СЕКСУАЛНИ ПРОБЛЕМИ PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Структури на канканозидите O (4) и P (5)

Канканозидите O (4) и P (5), C16H26O8, също бяха получени като бели прахове с отрицателни оптични ротации (4: [a]D 23 - 26.1; 5: [a]D 21 - 32). 7 и двете в МеОН). IR спектрите на 4 и 5 показват ивици на поглъщане при 3433, 1696, 1647 и 1076 cm- 1 за 4 и 3434, 1701, 1647 и 1{ {95}}76 cm- 1 за 5, което се приписва на гликозидни, карбоксилни и олефинови функции. Техните UV спектри показват общ максимум на абсорбция при 217 nm, което показва наличието на a,b-ненаситена карбоксилна киселинна част и в двете. Киселинната хидролиза на 4 и 5 освобождава D-глюкоза, докато чрез ензимната хидролиза с глюкозидаза 4 и 5 дават (2E,6E)-8-хидрокси-2,6-диметил{{37} },6-октадиенова киселина20) (4a) и (2E,6E)-8-хидрокси-3,7- диметил-2,{{ 47}}октадиенова киселина21) (5а), съответно. 1H- и 13C-NMR данни за 4 (CD3OD, таблици 2, 3) показват сигнали, които могат да бъдат приписани на два метила [d 1.71 (3H, br s, 10-H3), 1.81 (3H, d, J{{ 66}}.0 Hz, 9-H3)], три метилена {d 2,19 (2H, br t, J= около 7 Hz, 5-H2), 2,36 (2H, m, 4-H2), [4.24 (1H, dd, J= 7.6, 12.0 Hz), 4.33 (1H, dd, J= 6.2, 12.0 Hz), { {96}}H2]} и два тризаместени олефина [d 5.41 (1H, ddd, J= 1.2, 6.2, 7.6 Hz, 7- H), 6.75 (1H, tq, J{ {111}}.2, 1.0 Hz, 3-H)] заедно с b-Dглюкопиранозилна част [d 4.34 (d, J= 7.8 Hz, 1 -H)]. Чрез сравнение на въглеродни сигнали в 13C-NMR спектъра на 4

с тези на 4а се наблюдава изместване на гликозилиране в 8- позиция (d C 4: 65.5; 4a: 59.4). Позицията на глюкозидната връзка също беше потвърдена от HMBC експерименти, както е показано на фиг. 2. Следователно, стереоструктурата на 4 беше изяснена като (2E,6E)-8-bD-глюкопиранозилокси-2,{{ 16}}диметил-2,6-октадиенова киселина. От друга страна, данните от 1H- и 13C-NMR за 5 (CD3OD, таблици 2, 3) показват наличието на (2E,6E)-8-хидрокси{{30}} ,7-диметил-2,6-октадиенова киселинна част [d 1.70 (3H, br s, 10-H3), 2.14 (3H, br s, 9- H3), 2.24 (2H, m, 4-H2), 2.27 (2H, m, 5-H2), 4.05, 4.20 (1H всеки, и двата br d, J= приблизително. 12 Hz, 8-H2), 5.47 (1H, tq, J= 7.1, 0.9 Hz, 6-H), 5.67 (1H, br s, 1-H )] заедно с bD-глюкопиранозилова част [d 4,23 (d, J= 7.7 Hz, 1 -H)]. Свързването на bD-глюкопиранозилната част в 5 беше изяснено въз основа на HMBC експерименти, както е показано на Фиг. 2. Освен това се наблюдава типично изместване на гликозилирането за сигналите в 8-позиция (d C 5: 75.6; 5a: 68.8). въз основа на гореспоменатите доказателства, стереоструктурата на 5 беше определена като (2E,6E)-8-bD-глюкопиранозилокси-3,7-диметил-2,{{103 }}октадиенова киселина.

Ефекти на съставките върху индуцираната от тумор некротизиращ фактор-a (TNF-a) цитотоксичност в L929 клетки

Известно е, че TNF-a медиира различни увреждания на органи чрез индуцирането на клетъчна апоптоза. В случая с черния дроб, биологичните ефекти на TNF-a са замесени в чернодробно увреждане, предизвикано от чернодробни токсини, исхемия/реперфузия, вирусен хепатит и алкохол.22-24) Следователно TNF-a се счита за важна цел за откриване на противовъзпалителни и хепатопротективни средства. Въз основа на гореспоменатата концепция, ние изследвахме защитните съставки от естествено срещащи се продукти върху TNF-a-индуцирана клетъчна смърт в L929 клетки, TNF-a-чувствителна клетъчна линия.25) Преди това докладвахме

че няколко съставки от Piper chaba, 26-29) Boesenbergia rotunda, 30,31) Punica granatum, 32) Helichrysum arenarium, 33-35) и Sapindus rarak, 36-38) показват инхибиторни ефекти на TNF-a-индуцирана цитотоксичност в L929 клетки. Тъй като фенилетаноидните съставки на C. tubulosa (напрехинакозид, актеозид и изоактеозид, и т.н.) 5) също инхибира тази цитотоксичност, ние допълнително изследвахме съставките на иридоид, фенилпропаноид и лигнан, както е показано в таблица 4. В резултат канканозид А (9, инхибиране: 16,3± 2.0% при 1 00 mM), мусаенозидова киселина (10, 44,7± 8,7%), 8-епигамова киселина (11, 10,7± 0,4%), 8-хидрокси гераниол 8-ObD- Установено е, че глюкопиранозид (17, 21.3± 2.4%) и ()-пинорезинол ObD-глюкопиранозид (22, 22.3± 1.6%) показват значителна активност. Въпреки че активността им е по-слаба от тази на ехинакозид (IC50= 31.1 mM), актеозид (17,8 mM) и изоацетеозид (22,7 mM), основните фенилетаноидни съставки.5)

ЕСТЕСТВЕН CISTANCHE TUBULOSA ЗА ПОДОБРЯВАНЕ НА СЕКСУАЛНАТА ФУНКЦИЯ PHGS75% ECH 30% ACT 12%