Изоастилбин инхибира невроналната апоптоза и оксидативен стрес в Arat модел на исхемия-реперфузия Нараняване в мозъка: Участие ofSIRT1/3/6

За повече информация Имейлtina.xiang@wecistanche.com

Абстрактен

Фон.Доказано е, че Изоастилбин (IAB) имаантиоксидантнои анти-апоптотични функции. Скорошно проучване установи, че IAB може да намалиОксидативенударение при болестта на Алцхаймер. Въпреки това, дали антиоксидантната функция на IAB също е защитен при други мозъчни заболявания остава неизвестен.
Цели.За да проучи ролите и основните механизми на IAB в средна церебрална артерия оклусионреперфузия (MCAO/R) при плъхове.
Материали и методи.Мъжки wistar плъхове са били случайно разделени в 5 групи: измамни група, MCAO/R група, и 3 MCAO/R групи, приложени IAB (20 mg/kg, 40 mg/kg или80 mg/kg) веднъж дневно в продължение на 3дни. Размер на инфаркта, модифициран Скор по неврологична тежест (mNSS),Оксидативенударениемаркери, и невронална апоптоза маркери са били използвани за оценка на функцията на IAB.
Резултати.В сравнение с mCAO/R групата, приложението на IAB намалява размера на инфаркта и резултатите от MNSS при Плъхове mMCAO/R. Изоастилбинът също намалява нивото на малондиалдехид (MDA) и засилва активността на каталазата (CAT), супероксид дисмутазата (SoD), и глутатион пероксидаза (GSH-PX). Лечението с изоастилбин атенюира MCAO/R-индуциран невроналапоптозав сравнение с групата НаMCAO/R, както е посочено с резултатите от терминален дезоксинуклеотид трансфераза-медииран X-dUTP ник-енд (TUNEL) и западни blot assays. Изоастилбин също обърна MCAO/R-индуцирана надолу регулиране наSIRT1/3/6 протеин експресия.
Заключения.Тези наблюдения предполагат, че IAB защитава отОксидативенстрес и невронална апоптоза при плъхове след мозъчна исхемия-реперфузия (I/R) нараняване чрез upregulation ofSIRT1/3/6, което показва, че IAB може да бъде обещаващ терапевтичен агент за мозъчно i/R нараняване.
Ключови думи:апоптоза, оксидативен стрес, изоастилбин, фокална церебрална исхемия-реперфузионно нараняване

Фон

Исхемичният и хеморагичният инсулт са сред водещите причини за увреждане и смърт в целия свят.1,2Изхемичен инсулт е причинен от запушване в кръвоносните съдове, като по този начин се излагат целеви органи на риск от клетъчна смърт.3Въпреки че най-ефективното лечение за церебрална исхемия е бързото възстановяване на кръвоснабдяването, тромболитичното терапия може да увеличи размера на инфаркта и да влоши исхемия-реперфузионно (I/R) нараняване в рамките на мозъка.1,4Терефоре, има спешна нужда от разработване на нови лекарства за лечение на мозъчно i/R нараняване.

Исхемия-реперфузионно увреждане в мозъка включва сложна патофизиология, включително появата наОксидативенударение, апоптоза, и аденозин трифосфат (ATP) изчерпване, всички от които могат да доведат до невронално нараняване.5 Реактивни кислородни видове (ROS) се произвеждат по време на исхемия, водещи до невроналниапоптозаи неврологична дисфункция.6 Конкретно NADPH оксидите генерират ROS по време на i/R нараняване, което причиняваОксидативенударение. Този стрес е белязано от повишена липидна пероксидация, намалена каталаза (CAT) и супероксидна дисмутаза (СОТ) активност, и понижено ниво на глутатион (GSH).7–11 Високи нива на ROS иОксидативенударениена свой ред ще предизвика клетъчна смърт чрез митохондриалния апоптотичен път след церебрална I/R нараняване.12 Митохондриална пропускливост преходни пори може да се отвори като следствие от излишното натрупване на ROS, което води до по-ниска митохондриална трансмембранна потенциал и повишено производство на активатори на каспаза като цитохром c, като в крайна сметка инициира каскадата на каскадата на каспазата и води до клетъчна смърт.12 Geng et al. предложи апоптозата на невроналните клетки е поне частично медиирана чрез митохондриалния път на апоптозата при мозъчно i/R нараняване.13 Следователно инхибирането или обръщането на оксидативните стрес и невронална апоптоза са обещаващи нови методи за да се атенюира мозъчното i/R нараняване.

За да проучим механизма, чрез който IAB атенюира i/R-индуцирани щети, ние се съсредоточихме върху каскадата за сигнализация SIRT. Последните проучвания показват защитна роля на SIRT1/3/6 при различни заболявания, включително невронна дегенерация в мозъка, възпаление на кръвоносните съдове, и натрупване на мазнини тялото. Наистина Сметната палата установи, че IAB лечението повишава нивото на изразяване на SIRT по време на I/R нараняване, което показва, че IAB може да предпазва от клетъчнаапоптозачрез upregulating SIRT израз. Взети заедно, нашите резултати предполагат, че IAB е потенциално полезно лечение за клинично мозъчно i/R нараняване.

Цели

Общата ни цел беше да проучим ефектите и основните механизми на IAB при i/R нараняване с помощта на MCAO/R животински модел.

Материали и методи

Животни

Мъжки Wistar плъхове са придобити от Шанхай лабораторна животинска компания (Шанхай, Китай). Плъхове на възраст 60– 90 дни с нормално телесно тегло (200 – 250 g) са били хранени ad libitum храна и вода и се поддържат в последователна среда (25 ±2°C, 40 ±10% относителна влажност, и 12 h лек /тъмен цикъл). Животните бяха обработени, както според насоките за грижа и използване на лабораторни животни на Jiamusi College, Heilongjiang Университет по традиционна китайска медицина, Китай. Комитетът по институционална грижа за животните и употреба на Jiamusi College, Университет по китайска медицина Heilongjiang одобри процедури за животни (одобрение No. 20190815).

Установяване на нараняване на MCAO/R и лечение с IAB

Токсичността на IAB е определена, както е описано по-рано.15 Изоастилбин (Чънду Пурекем-Стандарт Ко, Ltd., Чънду, Китай) е разреден до крайни концентрации от 20 mg/kg, 40 mg/kg, и 80 mg/kg в фосфат-буфериран разтвор (PBS). Животните са рандомизирани в 5 групи: 1. измамници; 2. MCAO/R; 3. Последван MCAO/R с 20 mg/kg IAB; 4. MCAO/R, последвано от 40 mg/kg IAB; и 5. MCAO/R, последвано от 80 mg/kg IAB.

Плъховете са анестезирани с помощта на интраперитонеален (ip.) инжектиране на 50 mg/kg натриев пентобарбитал (Sinopharm Химически реагент, Пекин, Китай). За да се въведе MCAO/R, разкрихме сънните артерии, а именно външната сънна артерия (ЕСП), дясната обща сънна артерия (CCA), и вътрешна сънна артерия (ICA). ЕСП и CCA са били проксимално лигирани. ICA е лигирана с помощта на 0,285 mm монофиламентен конци, вкарани в лумена на ICA за около 18 mm през пън ЕСП за възпрепятстване на средната церебрална артерия (MCA). А ЛазерИзползван е Доплер (USCN KIT INC., Ухан, Китай) да се потвърди, че притокът на кръв е намален до по-малко от 20% на нормалното ниво. Измамнишката група претърпя същата експлоатация; артериите обаче не са били лигирани. След 2 h оклузия, лигираните артерии са реперфусирани и плъховете след това са били пропускливи с IAB (20 mg/kg, 40 mg/kg, или 80 mg/kg) или PBS дневно в продължение на 3 последователни дни. Последно място 72 ч. след MCAO/R, неврологичният капацитет на плъховете беше оценена.

Оценка на обема на мозъчния инфаркт на плъха

След лечението с IAB мозъците бързо се претеглят за измерване на мокреното им тегло. Впоследствие мозъците са дехидратирани при 100°C за 24 h, за да се оцени сухото им тегло. Концентрацията на вода в мозъка е изчислена като: ((мокрено тегло \u2012 сухо тегло)/мокрено тегло) × 100%.

Модифицирана скор по неврологична тежест (mNSS)

Сензорни, моторни, баланс, и рефлексни неврологични функции са оценени 72 h след MCAO операция с помощта на mNSS.17 Тежестта на неврологичните дефицити е класирана мащаб от 0 до 10, като по-висок резултат показва повече тежко увреждане на нервната система.

Измерване на супероксид дисмутаза (СОП), малондиалдехид (MDA), каталаза (CAT), и глутатион пероксидаза (GSH-PX)

След лечението с IAB съдържанието на протеини е определено от мозъчните тъкани. Протеиновата концентрация на кортикалните хомогенати е определена с помощта на комплекти BCA (Beyotime, Шанхай, Китай). The SoD, MDA, CAT, и GSH-PX са открити с помощта на съответните комплекти (каталог No. A003-1, A001-3, A007, и A005; Биоинженерен институт Нанкин Джианченг, Нанкин, Китай). За кратко се събираше супернатантът на кортикалния хомогенат. За СООД, проби са инкубирани с WST-8/ензимен работен разтвор при 37°C в продължение на 30 min. Абсорбцията е измерена при дължина на вълната 450 nm. Една единица за ензимна активност на SoD (U) е определена като количеството необходима проба за постигане на 50% степен на инхибиране на WST-8 формазан багрило. За MDA пробите са смесени с работен разтвор и след това се загрява при 100°C в продължение на 15 мин. Абсорбцията на супернатантата е измерена при дължина на вълната 532 nm. За CAT, пробите са смесени с буфер за откриване на CAT и разтвор на водороден прекис и след това се инкубира при 25°C за 5 min. Абсорбцията е открита при дължина на вълната 520 nm. За GSH-PX пробите са смесени с GSH при 37°C за 5 мин. Абсорбцията на супернатантата е измерена при дължина на вълната 412 nm. Една единица (U) ензимна активност е дефинирано като количеството GSH-PX в 1 mg протеин които катализират консумацията на 1 μmol/L GSH, докато приспадане на ефекта на не-ензимната реакция.

Клемна дезоксинуклеотидил трансфераза dUTP ник край етикетиране (TUNEL) оцветяване

Ипсилатералните мозъчни тъкани на полусферата са изолирани, фиксирани в 4% параформалдехид, и вградени в парафин. Тъкани след това са били нарязани на 5-μm резини и антиген, изложени след 10 мин микровълно отопление в цитратен буфер. Невронална апоптоза е оценена с помощта на tuNEL assay (In Situ Cell Комплект за откриване на смърт; Roche, Penzberg, Германия), според инструкциите на производителя. Накратко, мозъчни шлифове са поставени в ледено-студен 4% параформалдехид за 30 мин и след това, бяха инкубирани в тъмното с TUNEL реакция смес при 37°C за 1 ч. Впоследствие ядрата са оцветени с 6-диамидино-2-фенилиндол (DAPI; Сигма-Олдрих). Пробите са били образни и апоптозата индекс е изчислен като броя на TUNEL-положителните клетки, разделени на общия брой клетки.

Западен блут

Плъх мозъчни тъкани са били лизирани с помощта на радио-имунопреципитация assay (RIPA) буфер (Beyotime, Далиан, Китай). Протеините са подложени на 12–15% натриев додецил сулфат-полиакриламид гел електрофореза (SDS-PAGE) и след това се прехвърля върху поливинилиден флуорид (PVDF) мембрани (Милимор, Билерика, САЩ). Мембраните са блокирани с помощта на 5% мляко без мазнини и инкубирани с първични антитела при 4°C за една нощ. Хрян пероксидаза (HRP)-конюгирани вторични антитела впоследствие са инкубирани при стайна температура за 2 ч. Специфични сигнали на етикетирани протеини са открити с помощта на система за chemiluminescence. Β-актин е използван за нормализиране на нивата на протеин експресия на Bcl-2, Bax и Sirtuin (SIRT1/3/6). Изображенията бяха анализирани с помощта на софтуер ImageJ.

Статистически анализи

Данните са представени като средното ± стандартно отклонение (SD) от 3 независими експеримента. Данни от всеки група бяха потвърдени, че следват нормално разпределение с помощта на теста Шапиро–Уилк. Разликите между групи са анализирани с помощта на еднопосочен анализ на варианса (ANOVA), последвано от пост хок теста на Туки с помощта на Prism v. 8 софтуер (Софтуер GraphPad, Сан Диего, САЩ). Стойност на р< 0.05 indicated="" statistical="" significance.="" a post="" hoc="" power="" analysis="" was="" performed="" using="" g*power="" 3.1.9.7="" software="" (heinrich="" heine="" university,="" düsseldorf,="">

Резултати

Изоастилбин предпазва невроните от нараняване, предизвикано от MCAO/R

За да проучи, ако IAB защитени неврони, подложени на церебрална I/R, концентрацията на вода в мозъка и са анализирани обемът на инфаркта. При контролните животни има не е инфаркт и концентрацията на вода е сравнително ниска (фиг. 1B,C; измамник група). След операция на MCAO/R, наблюдавахме значителни увеличения на размера на инфаркта и концентрация на вода (фиг. 1B, C). Инфаркт и исхемична оток показват, че подходът ни успешно е генерирал i/R модела при плъхове. Интересното е, че когато прилагахме различни концентрации на IAB (20 mg/kg, 40 mg/kg, и 80 mg/kg) непосредствено след нараняване наблюдавахме дозависим възстановяване на инфаркт и исхемичен церебрален оток (фиг. 1Б,В). Този резултат предполага, че IAB предпазва от предизвикано от исхемия мозъчно увреждане. След това изследвахме клеткатаапоптозаизползване на mNSS асея. Както е показано на фиг. измамни експлоатирани плъхове не проявяват очевидни неврологични дефицити, като има предвид, че MCAO/R плъхове показват значително повишени резултати mNSS. В съответствие с морфологичните промени, показани на фиг. значително понижава скорът на MNSS на плъховете MCAO/R (фиг. 1D). Взети заедно, тези резултати предоставят доказателства че IAB има невропротективна функция във Vivo гризач модел на мозъчно i/R нараняване. Като се има предвид, че по-висока Концентрацията на IAB има по-добри защитни ефекти без очевидни нежелани реакции, ние използвахме 80 mg/kg за следните Експерименти.

Изоастилбин атенуати оксидативен стрес при MCAO/R плъхове

За оценка на влиянието на IAB върхуоксидативен стрес, нивата на GHS-PX, MDA, SOD, и CAT са оценени след лечение с IAB. Поради увеличаването на оксидативния стрес, плъхове, подложени на MCAO/R, имат по-високи нива на MDA в сравнение с измамни плъхове. Този ефект е атенюиран от IAB лечение (фиг. 2А). Освен това, CAT, SoD, и GHS-PX нивата са намалели при плъховеТе MCAO/R в сравнение с измамните плъхове (фиг. 2Б, Г). Лечението с IAB е издигнало нивата на CAT, SoD, и GHS-PX в MCAO/R плъхове (фиг. 2B, D), което предполага че IAB защитени срещу мозъчно i/R нараняване чрез атенюиране оксидативен стрес.

Изоастилбин инхибира невроналната апоптоза при MCAO/R плъхове

След това утихнахме tuNEL assay, за да оценим невроналнитеапоптозаслед мозъчно i/R нараняване. Както е изобразено на фиг. е имало повишен брой положителни за TUNEL клетки при плъхове MCAO/R, което е намалено чрез лечение с IAB (фиг. 3А). За да проучите основните механизми на IAB защита, Сметната република провери изразяването на апоптозата протеини Bax и Bcl-2, използвайки западен блут. При плъхове, подложени към MCAO/R, изразът на Bax (про-апоптотичен маркер) е била upregulated, докато тази на Bcl-2 (анти-апоптотичен маркер) е било надолу регулирано, в сравнение с групата на измамни- (фиг. 3Б, В). Въпреки това, Лечението с IAB предотврати MCAO/Rinduced промени (фиг. 3B, C). Тези резултати предполагат, че IAB инхибира невронална апоптоза при MCAO/R плъхове.

Изоастилбин регулира SIRT експресия

След това се стремихме да проучим как IAB предпазва невроните отоксидативен стрес. SIRT, зависим от NAD+ деацетилаза, локализирана главно в митохондриите, е установено, че са свързани с преживяемостта на клетките и апоптозата, клетъчната метаболизма, и отговор на стреса. SIRT може да активира митохондриални сигнали и пътища за насърчаване на митохондриите пролиферация и АТФ генериране. Той също така участва при възпаление, по начин, по който намаляването на SIRT води до повишения на хроничните фактори на възпаление, като NFκB и RelA/p65 дейност.18–20 Интересното е, че няколко проучвания са установили, че SIRT упражнява невронен защитен ефект и атенюира оксидативен стрес в патофизиологията на мозъчното i/R нараняване.21 Тук, ние изследвахме мозъка изразяване на SIRT1/3/6 при плъхове, подложени на MCAO/R. Сметната палата установи, че увреждането на MCAO/R е намалило нивата на протеините на SIRT1/3/6, докато лечението с IAB атенюира тези ефекти (фиг. 4А–Г). Тези данни предполагат, че IAB може да бъде защитен при Плъхове MCAO/R чрез upregulating SIRT1/3/6 израз в защита срещу оксидативен стрес.

Разискване

Концентрацията на ROS се повишава до връх, който потенциално може да индуцират апоптоза или клетъчна некроза.25–28 Има няколко утвърдени маркера за оксидативен стрес. Например MDA, цитотоксична съединение, произведено от липидната пероксидация,29 се увеличава в плъхове кардиомиоцити след I/R щети.30 Антиоксидантните ензими СОД, CAT, и GHS-PX играят важни роли при продухване на супероксиди и предотвратяване на оксидативно увреждане.31,32 Нещо повече, промени в активността на тези ензими също са свързани с оксидативен стрес. Атенюиращ оксидативен стрес е потенциален начин за защита на тъканите от i/R нараняване.

Скорошно проучване демонстрира, че невропротективната ефект на IAB може да се дължи на модулацията на оксидативните ударение. По-конкретно, проучването установи, че IAB инхибира ROS поколение и индуцирана СОТ и GSH-PX да амелиорат оксидативно увреждане при мишка AD модел.15 Въпреки това, ако и как IAB предпазва от i/R нараняване в мозъка, все още не е познат. В настоящото проучване Сметната има доказа, че IAB успешно атенюира мозъчното i/R нараняване, като намалява обема на инфаркта и неврологичните дефицити след MCAO/R Вреда. За да тестваме дали ефектите на IAB се дължат на атенюацията на ROS видове, измервахме няколко маркера на оксидативен стрес. Лечение с изоастилбин след MCAO/R установено, че намалява нивата на MDA, но увеличава CAT, SoD, и GSH-PX активност. Тези резултати предполагат, че базовият механизъм на iAB-медиирана невропротекция срещу I/R нараняване е чрез намаляване на оксидативен стрес.

Наистина церебралната I/R е в състояние да индуцира апоптоза на невроните.33,34 Активирането на про-апоптотични протеини (Bax и Бак) и паралелно инактивиране на анти-апоптотични протеини (като Bcl-2) са настъпили по време на мозъчно i/R нараняване. Двата Bcl-2 и Bax се намират във външната част на митохондриалната мембрана и участват в модулацията на клетъчна апоптоза.35–37 Предишни проучвания показват, че Bcl-2 свръхекспресия блокира невроналната смърт in vitro и in vivo.38Erfani et al. установи, че съотношението Bax/Bcl-2 е повишено по време на мозъчно i/R нараняване, допринася за невронална апоптоза.39 Освен това, Bax upregulation и Bcl-2 надолу регламент са открити при мишки мозъци, подложени на MCAO/R.40 Освен това е установено, че IAB модулира нивата на протеиновата експресия както на Bcl-2, така и на Bax за подобряване на редокса система при мишки с АД, като се посочва антиапоптотичната роля на IAB в това състояние.15 В настоящото проучване показахме, че приложението на IAB намалява I/R-индуцираната невронална апоптоза in vivo чрез downregulating Bax и upregulating Bcl-2. Тези констатации предполагат, че невропротективната способността на IAB е зависима от антиапоптотичната му активност при плъхове. I/R обаче може да доведе и до некроза, която не се медиира от оксидативен стрес.25–28 Това е от голям интерес да проучи дали IAB може да функционира и чрез инхибиране на некроза, за да се атенюира i/R нараняване.

За да изследваме механизма, чрез който IAB атенюира оксидативен стрес, ние се съсредоточихме върху SIRT протеините. Предишен доклад е установил, че свръхекспресията на SIRT3 е инхибирала митохондриалното fission за защита от мозъчно i/R нараняване. Освен това, SIRT6 може да защити мозъка срещу I/R увреждане чрез потискане на оксидативен стрес.2 Тук, открихме, че SIRT1/3/6 е значително надолу регулиран в MCAO/R плъхове, като има предвид, че администрацията на IABincreased израза на SIRTl/3/6. Доколкото ни е известно, това проучване е първото, което демонстрира, че IAB може да увеличи SIRT1/3/6протеинова експресия, за да атенюира оксидативен стрес и невронална апоптоза, предизвикана от мозъчно i/R нараняване.

Ограничения

Има много различни защитни пътища срещу оксидативен стрес. Тук демонстрирахме, че сигналният механизъм на IAB защита е чрез SIRT 1/3/6. Въпреки това, други механизми срещу оксидативен стрес или мозъчно i/R нараняване трябва да бъдат допълнително елуцидирани. По време на i/R нараняване участват както апоптоза, така и некроза; обаче, ние се фокусирахме само върху апоптозата. По този начин ще са необходими допълнителни изследвания за ролята на IAB в некрозата, за да се обясни напълно защитната функция на IAB по време на i/R нараняване.

Заключения

Тук демонстрирахме, че IAB може да облекчи оксидативните стрес и апоптоза на невроните при плъхове, подложени на церебрална I/R. Освен това антиоксидантният стрес и анти-апоптотичните функции на IAB може да възникнат чрез регламента на израза SIRT1/3/6. Взети заедно, нашите данни предполагат, че IAB е кандидат лечение за мозъчно i/R нараняване.

OrCID идентификатори Lifeng An  https://orcid.org/0000-0002-4835-1817 Дандан Жу  https://orcid.org/0000-0001-9119-9956 Син Джан  https://orcid.org/0000-0002-9496-1691 Jingwen Хуанг  https://orcid.org/0000-0001-6449-5362 Гуангбао Лу https://orcid.org/0000-0002-2465-8996

Лайфнг Ан1,B,D, Дандан Жу2,Б, Син Джан2,C, Джингуен Хуанг1,C, Гуангбао Лу1,A,F

1Jiamusi колеж, Heilongjiang университет по китайска медицина, Китай

2Висше училище, Университет по китайска медицина Heilongjiang, Джиамуси, Китай

А – изследователска концепция и дизайн; Б – събиране и/или събиране на данни; В – анализ и тълкуване на данни;

Г – писане на статията; Д – критично преразглеждане на статията; Е – окончателно одобрение на изделието

Препратки

1. Роси DJ, Брейди JD, Mohr C. Астроцит метаболизъм и сигнализация по време на мозъчна исхемия. Нат Невроси. 2007;10(11):1377–1386. doi:10.1038/ nn2004
2. Ribeiro PW, Кола PC, Gatto AR, и др. Връзка между дисфагия, Национални институти на здравето инсулт скала резултат, и предсказатели на пневмония след исхемичен инсулт. J Инсулт Cerebrovasc Dis. 2015; 24(9):2088–2094. doi:10.1016/j.jstrokecerebrovasdis.2015.05.009
3. Hu X, De Silva TM, Чен J, Фараци FM. Церебрална съдова болест и невроваскуларно нараняване при исхемичен инсулт. Circ Res. 2017;120(3):449–471. doi:10.1161/циркресаха.116.308427
4. Табасум Р, Вайбхав К, Шривастава П и др. Перилил алкохол подобрява функционални и хистологични резултати срещу исхемия-реперфузия нараняване чрез атенюация на оксидативен стрес и репресия на COX-2, NOS-2, и NF-κB в средна церебрална артерия оклузия плъхове. ЕУР J Фармакол. 2015;747:190–199. doi:10.1016/j.ejphar.2014.09.015
5. Уудръф TM, Thundyil J, Tang SC, Sobey CG, Тейлър SM, Arumugam телевизия. Патофизиология, лечение, и животински и клетъчни модели на човешки исхемичен инсулт. Мол Невродегенер. 2011;6(1):11. doi:10.1186/1750- 1326-6-11
6. Гонзалес-Родригес PJ, Xiong F, Li Y, Жоу J, Джан L. Фетал хипоксия увеличава уязвимостта на хипоксично-исхемична мозъчна травма при неонатални плъхове: Роля на глюкокортикоидни рецептори. Невробиол Dis. 2014;65:172–179. doi:10.1016/j.nbd.2014.01.020
7. Родриго Р, Фернандез-Гахардо Р, Гутиерес Р и др. Оксидативен стрес и патофизиология на исхемичен инсулт: Роман терапевтични възможности. CNS неврол разстройство наркотици цели.2013;12(5):698–714. doi:10.2174/ 1871527311312050015
8. Джан C, Линг CL, Панг L, и др. Директна макромолекулярна доставка на наркотици до церебрална исхемия област с помощта на неутрофил-медиирана наночастици. Тераностика. 2017;7(13):3260–3275. doi:10.7150/thno.19979
9. Kahles T, Luedike P, Endres M, et al. NADPH оксидаза играе централна роля в увреждане на кръвно - мозъчната бариера при експериментален инсулт. Щрих. 2007;38(11):3000–3006. doi:10.1161/strokeaha.107.489765
10. Чен H, Песен YS, Chan PH. Инхибирането на NADPH оксидаза е невропротективно след исхемия-реперфузия. J Цереб кръвоток метаб. 2009; 29(7):1262–1272. doi:10.1038/jcbfm.2009.47
11. Капур М, Шарма N, Sandhir R, Nehru B. Ефект на NADPH оксидаза инхибитор апоцинин върху исхемия-реперфузия хипокампус нараняване в мозъка на плъх. Биомед Фармакотер. 2018;97:458–472. doi:10.1016/j. биофа.2017.10.123
12. Yu S, Уанг C, Ченг Q, и др. Активен компонент на Achyranthes bidentata полипептиди осигурява невропротекция чрез инхибиране на митохондриална зависим апоптотичен път в култивирани неврони и при животински модели на церебрална исхемия. ПЛОС 1. 2014; 9( 10):e109923. doi:10.1371/journal.pone.0109923
13. Geng HX, Li RP, Li YG, et al. 14,15-EET потиска невроналната апоптоза при исхемия-реперфузия през митохондриалния път. Неврохем ВЕИ.2017;42(10):2841–2849. doi:10.1007/s11064-017-2297-6
14. Du Q, Li L, Jerz G. Пречистване на астилбин и изоастилбин в екстракта от коренище smilax glabra чрез високоскоростна контратекуща хроматография. Й Хроматогр А. 2005;1077(1):98–101. doi:10.1016/j.chroma. 2005.04.072
15. Yu H, Yuan B, Chu Q, Wang C, Bi H. Защитни роли на изоастилбин срещу болестта на Алцхаймер чрез Nrf2-медиирана антиоксидантизация и анти-апоптоза. Int J Mol Med.2019;43(3):1406–1416. doi:10.3892/ijmm. 2019.4058
16. Zhou X, Xu Q, Li JX, Chen T. Структурно преразглеждане на два флаванонол гликозиди от Smilax glabra. Planta Med. 2009;75(6):654–655. дой:10. 1055/s-0029-1185360
17. Моримото J, Ясухара Т, Камеда М и др. Електрическата стимулация засилва мигриращата способност на трансплантираните костномозъчни стромални клетки в исхемичен инсултов модел на гризача. Клетъчен физиол Биохим. 2018; 46(1):57–68. doi:10.1159/000488409
18. Torrens-Mas M, Pons DG, Sastre-Serra J, Oliver J, Roca P. SIRT3 заглушаване сенсибилизира раковите клетки на гърдата до цитотоксични лечения чрез увеличаване на производството на ROS. J Клетъчен Биохим. 2017;118(2):397–406. doi:10.1002/jcb.25653
19. Насир Ф, Арнт Джей Джей, Джонсън СА, Ибда ДЖА. Регулирането на митохондриалния трифункционален протеин модулира ноналкохолно мастно чернодробно заболяване при мишки. J Липид ВЕИ. 2018;59(6):967–973. doi:10.1194/jlr. M080952
20. Torrens-Mas M, Hernández-López R, Оливър J, Roca P, Sastre-Serra J. Sirtuin 3 заглушаване подобрява оксалиплатин ефикасност чрез ацетилиране на MnSOD при рак на дебелото черво. J Клетъчен физиол. 2018;233(8):6067–6076. doi:10.1002/jcp.26443
21. Ернандез-Хименес М, Хуртадо О, Куартеро МИ и др. Безшумен информационен регулатор 1 предпазва мозъка срещу мозъчно исхемично увреждане. Щрих. 2013;44(8):2333–2337. doi:10.1161/strokeaha.113.001715
22. Chen GY, Nuñez G. Стерилно възпаление: усещане и реакция на увреждане. Нат Рев Имунол. 2010;10(12):826–837. doi:10.1038/nri2873
23. Eltzschig HK, Eckle T. Ischemia и реперфузия: От механизъм до превод. Нат Мед. 2011;17(11):1391–1401. doi:10.1038/nm.2507
24. Dziedzic T. Системно възпаление като терапевтична цел при остър исхемичен инсулт. Експерт Rev Neurother.2015;15(5):523–531. doi:10.1586/ 14737175.2015.1035712
25. Yemisci M, Gursoy-Ozdemir Y, Vural A, Can A, Topalkara K, Dalkara T. Pericyte свиване, предизвикано от оксидативно-нитратен стрес нарушава капилярния отлив въпреки успешното отваряне на оклузова церебрална артерия. Нат Мед. 2009;15(9):1031–1037. doi:10.1038/nm.2022
26. Чен Х, Йошиока Н, Ким ГС и др. Оксидативен стрес в исхемично увреждане на мозъка: Механизми на клетъчна смърт и потенциални молекулярни цели за невропротекция. Антиоксид Редокс Сигнал. 2011;14(8):1505–1517. doi:10.1089/ars.2010.3576
27. Olmez I, Ozyurt H. Реактивни кислородни видове и исхемична мозъчносъдова болест. Neurochem Int. 2012;60(2):208–212. doi:10.1016/j. neuint.2011.11.009
28. Guo J, Ченг C, Чен CS и др. Свръхекспресия на Фибулин-5 атенуати исхемия/реперфузионно нараняване след средна церебрална артерия оклузия при плъхове. Мол Невробиол. 2016;53(5):3154–3167. doi:10.1007/s12035- 015-9222-2
29. Qiang M, Xu Y, Lu Y, и др. Автофлуоресценция на MDA-модифицирани протеини като ин витро и ин виво сонда в оксидативен стрес анализ. Белтъчна клетка. 2014;5(6):484–487. doi:10.1007/s13238-014-0052-1
30. Hou S, Джао ММ, Шен ПП и др. Невропротективен ефект на салвианолни киселини срещу церебрална исхемия/реперфузионно нараняване. Int J Mol Sci. 2016;17(7). doi:10.3390/ijms17071190
31. Адибхатла РМ, Хатчър JF. Липидно окисление и пероксидация в ЦНС здраве и заболяване: От молекулярни механизми до терапевтични възможности. Антиоксид Редокс Сигнал. 2010;12(1):125–169. doi:10.1089/ ars.2009.2668
32. Staroń A, Mąkosa G, Koter-Michalak M. Оксидативен стрес при еритроцити от пациенти с ревматоиден артрит. Ревматол Int. 2012; 32(2):331–334. doi:10.1007/s00296-010-1611-2
33. Aşcı S, Demirci S, Aşcı H, Doğuç DK, Онаран İ. Невропротективни ефекти на прегабалин върху церебрална исхемия и реперфузия. Балкан Мед Й. 2016;33(2):221–227. doi:10.5152/balkanmedj.2015.15742
34. Tao T, Li CL, Ян WC и др. Защитни ефекти на пропофол срещу цяла церебрална исхемия/реперфузия нараняване при плъхове чрез инхибирането на апоптоза индуциращ фактор път. Мозъка ВЕИ.2016;1644: 9–14. doi:10.1016/j.brainres.2016.05.006
35. Мартину JC, Юле РЖ. Митохондрии при апоптоза: Членове на семейството на Bcl-2 и митохондриална динамика. Дев Кил. 2011;21(1):92–101. doi:10.1016/j.devcel.2011.06.017
36. Борнер C, Андрюс DW. Апоптотичната пора на митохондриите: Пробиваме ли се или все още останахме? Клетъчната смърт се различава. 2014;21(2):187–191. doi:10.1038/cdd.2013.169
37. Сидики УА, Ахад А, Ахсан Х. Мистерията на BCL2 семейство: Bcl-2 протеини и апоптоза. Актуализация. Арх Токсикол. 2015;89(3):289–317. doi:10.1007/s00204-014-1448-7
38. Maes ME, Шламп CL, Никели RW. BAX до основи: Как генното семейство BCL2 контролира смъртта на клетките на ретината ганглий. Прог Ретин Око ВЕИ. 2017;57:1–25. doi:10.1016/j.preteyeres.2017.01.002
39. Erfani S, Khaksari M, Oryan S, Shamsaei N, Aboutaleb N, Nikbakht F. Nampt/PBEF/visfatin упражнява невропротективни ефекти срещу исхемия/реперфузионно нараняване чрез модулация на съотношение Bax/Bcl-2 и предотвратяване на активирането на каспаза-3. Джей Мол Невроси. 2015;56(1):237–243. doi:10.1007/s12031-014-0486-1

40. Чен Л, Као Дж, Цао Д и др. Защитен ефект на дексмедектомидин

срещу диабетна хипергликемия-изостря церебрална исхемия/реперфузия нараняване: In vivo и ин витро проучване, Life Sdi,2019:235:116553.doi; 10.1016/ilfs.2019116553

41. Джао Х, Луо Y, Чен Л и др. Sirt3 инхибира мозъчната исхемия-реперфузионно нараняване чрез нормализиране на пътя Wnt/β-катенин и блокиране митохондриална fission. Клетъчен стрес Придружители. 2018;23(5):1079–1092. doi:10.1007/s12192-018-0917-y

42. Джан W, Wei R, Джан L, Тан Y, Qian C. Sirtuin 6 защитава мозъка от мозъчна исхемия/реперфузионно нараняване чрез активиране на NRF2. Neuroscience.2017;366:95–104. doi:10.1016/j.neuroscience.2017.09.035