Изчерпването на макрофагите намалява патологията на заболяването при зависим от фактор H имунен комплекс-медииран гломерулонефрит Ⅱ

3. Резултати

Ние индуцирахме CSS при мишки чрез повтаряща се имунизация с апоферитин от конски далак. Животните генерират активен антиапоферитин IgG хуморален имунитетреакция и отлагане на IgG в гломерулите. Нашите по-ранни проучвания разкриха, че има повишен Mϕинфилтрация в бъбрецитев тази настройка.

3.1. Генната експресия на макрофаги се увеличава в FH-зависими ICGN бъбреци. За да се оцени наличието на Mϕs в FH-зависими ICGN бъбреци, qRT-PCR беше извършен с M2 макрофагови маркери, CD204 (Mϕ рецептор за очистване 1) и CD206 (Mϕ манозен рецептор 1) [21–24]. Експресията на двата гена в бъбрека е значително повишена след лечение с апоферитин при FHKO мишки (Фигура 1), което показва, чеповишено присъствие на макрофаги в бъбреците.

НАТИСНЕТЕ ТУК, ЗА ДА ВЗЕМЕТЕ НАТУРАЛЕН ОРГАНИЧЕН ЕКСТРАКТ ОТ ЦИСТАНША С 25% ЕХИНАКОЗИД И 9% АКТЕОЗИД ЗА БЪБРЕЧНАТА ФУНКЦИЯ

Поддържаща услуга на Wecistanche-най-големият износител на cistanche в Китай:

Имейл:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/телефон:+86 15292862950

Пазарувайте за повече подробности за спецификациите:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

3.2. Промени във времевия курс при лечение с хлодронат при инфилтрация на бъбречни макрофаги при FHKO мишки, третирани с апоферитин. За да определим ефективния метод за намаляване на Mϕs в FH-зависим ICGN, ние изчерпахме Mϕs в fh-/- мишки

Фигура 3: Допълнителни данни. Дадени са профилите на поточна цитометрия на F4/80+ моноцити от контролните и третирани с клодронат мишки. F4/ 80+ клетки са значително намалени, достигайки по-малко от 10% чрез лечение с клодронат. Всяка времева точка n=6.

3.4. Изчерпването на макрофагите намалява гломерулната

Патология при FH-медиирана ICGN. Отлаганията на имунен комплекс в бъбрека и хистопатологичните характеристики на ICGN бяха оценени в края на експеримента. Имунофлуоресцентното оцветяване за C3 и IgG разкрива, че изчерпването на Mϕ не модулира имунните комплекси в тази среда. Представително имунофлуоресцентно оцветяване и хистопатология са показани на Фигура 5. Първичната хистопатологична характеристика е дифузна хиперцелуларност на гломерулните снопчета при fh-/- мишки с CSS е значително намалена при изчерпване на Mϕs.

3.5. Макрофагите модулират цитокините в FH-зависим ICGN.

След като Mϕsинфилтрират бъбрекаи са изложени на възпалителни стимули, те освобождават цитокини. Чрез ELISA ние оценихме циркулиращите в плазмата нива на TNF и IL-6 и mCSF на бъбреците при FHKO мишки, третирани с физиологичен разтвор, апоферитин или апоферитин и клодронат. Циркулиращите нива на IL-6 са много ниски при мишки от див тип и са повишени при FHKO мишки и са намалени при FHKO мишки, третирани с клодронат (Фигура 6). Трите цитокина, TNF, IL-6 и mCSF са значително повишени при мишки, третирани с апоферитин, в сравнение с контролите, третирани с физиологичен разтвор. Изчерпването на Mϕ от клодронат значително ограничава повишаването на цитокините в тази среда

3.6. Макрофагите модулират профибротиката

Молекули и ламинин в FH-зависим ICGN. Веднъжбъбреците развиват заболяване, те са склонни да станат фиброзни. Mϕ участват във фиброзния процес чрез свръхпродуциране на профибротични молекули. PCR в реално време разкри 75% увеличение на експресията на мРНК на трансформиращ растежен фактор-бета1 (TGFbeta1), 100% увеличение на експресията на металопротеиназа-9 (MMP9) и увеличение с 230% на мРНК на ламинин. В съответствие с експресията на иРНК, експресията на ламининов протеин е значително увеличена в fh-/- мишки с CSS, който е намален в отсъствието на Mϕs (Фигура 7).

4. Дискусия

Нашите скорошни проучвания показват, че при липса на FH, мишките развиват дифузнопролиферативен гломерулонефрит(GN) с F4/80+ Mϕs около местата на ИС [10]. Освен това, нашите проучвания показват, че Cd11b−/− fh−/− мишки имат обострени характеристики на гломерулонефрит [26]. Като се има предвид, че наличието на повишени възпалителни M1 макрофаги и тяхното продължително активиране може да причини тъканна патология и тяхната реполяризация в противовъзпалителния фенотип би помогнала за разрешаването на болестната патология, настоящото проучване беше предприето, за да се разбере по-нататък ролята на Mϕs в fh -/- мишки с ICGN. Повишеното присъствие на Mϕs в бъбреците и разрешаването на болестната патология чрез изчерпване на макрофагите по време на FH-медиирана ICGN демонстрират критичната роля на Mϕs в тази среда и следователно те могат да служат като важни терапевтични цели в тази среда.

Фигура 5: Изчерпването на Mϕs намалява гломерулната патология при FH-зависим ICGN. Дадени са представителни изображения на гломерули от третирани с физиологичен разтвор (а), третирани с апоферитин (b) и третирани с апоферитин+клодронат мишки с FH-дефицит. В (A) срезовете са оцветени с C3 (зелено) и IgG (червено), докато (B) показва срезове, оцветени с PAS. Отлаганията на IgG, които бяха увеличени при лечение с апоферитин, останаха непроменени, докато гломерулите изглеждаха по-близки до нормалните при изчерпване на макрофагите.

Липсата на FH води до повишено производство на C5a. C5a се свързва с C5aR1, сигнализирайки Mos към бъбрека, където те се добавят към възпалителната среда. В допълнение, нашите проучвания също показаха, че при тази настройка на прекомерно генериране на C5a, инактивирането на C5a изглежда ограничава заболяването [10]. Активирането на Mos ги кара да се поляризират, но те остават в състояние на континуум [27]. Нашите резултати в това проучване показват, че гломерулното заболяване при CSS е намалено при fh−/− мишки, при които Mϕs са изчерпани в сравнение с fh-/- мишки без изчерпване на макрофаги. По този начин елиминирането на Mϕs алевиирани ICGN в fh−/− мишки намалява болестната патология. Въпреки това, Mϕs също са необходими за процеса на възстановяване и тъй като Mϕs променят състоянията от про- към противовъзпалителни състояния и обратно, ще бъде нашето бъдещо усилие да разберем дали промяната на пейзажа на Mϕs без тяхното изчерпване може да промени патологията на заболяването.

Mϕs играят важна роля в инициирането и поддържането на фиброзата и също така участват в потискането, разрешаването и обръщането на фиброзата [28]. Нашите резултати показват повишена експресия на CD204+ и CD206+ Mϕ маркери, което предполага тяхното повишено присъствие в тази среда. Тъй като тези Mϕs са основен източник на профиброзни молекули, нашите резултати, показващи увеличение на TGF -1, както и MMP9, предполагат, че тези Mϕs могат да допринасят както пряко, така и индиректно за фиброзните процеси в FH-медиирани ICGN чрез различни механизми ( 1,3,8,44). TGF -1 може да промени фиброзата чрез регулиране на цитокини. В допълнение, TGF -1 модулира биосинтезата и експресията на C3 и фактор B в моноцитите [29], а промяната на комплемента в имунните клетки и бъбречните клетки може да улесни тъканната фиброза [30]. Въпреки това, точните взаимодействия между макрофагите и комплемента, включеният механизъм/и, техните роли и разделянето на тъканите трябва да бъдат дешифрирани [31]. Нашите проучвания показват намалена експресия на ламинин в Mϕs-изчерпани мишки в сравнение с Mϕ-достатъчни мишки. За да разберем по-добре как FH регулира фиброзния процес, трябва да идентифицираме специфичните Mϕ подмножества, които присъстват в FH-медиираната ICGN и да изясним приноса на всяка популация от подгрупи. Тези проучвания са важни, тъй като допълнителните терапии са станали клинична реалност. Инхибитори са били и продължават да се разработват срещу различни цели в каскадата на комплемента, които ще блокират стъпките надолу по веригата в пътя(ите) на активиране. Понастоящем един от инхибиторите на комплемента в клинична употреба е анти-C5 антитялото, Eculizumab [32]. Следователно идентифицирането на патогенните компоненти на комплемента в болестта и допълването им с регулирането на популацията на Mϕs не е тривиална точка.

Фигура 7: Отлагане на ламинин вFH-дефицитни бъбрецис ICGN се намалява от изчерпването на Mϕs. (a) qRT-PCR за TGFB, MMP9 и ламинин отбъбречна иРНКизолиран от мишки след 5 седмици физиологичен разтвор и апоферитин и 3 седмици клодронат. Изразът е нормализиран до GAPDH (n=6/група). ( b ) Представителни IF фотомикрографии за оцветяване с ламинин в бъбреците на същите групи мишки. ∗P < 0:01.

В обобщение, тук проучихме ролята на Mϕs в FH-зависимия ICGN модел. Резултатите могат да бъдат приложени и в условия на нерегулирано активиране на комплемента с имунни комплекси, като тези, наблюдавани при различни заболявания, включително лупусен нефрит, IgA нефропатия и мембранна нефропатия. Ние показваме значението както на регулирането на комплемента чрез FH, така и на статуса на Mϕs при заболяването. По този начин фармакологичното насочване на каскадата на комплемента и Mϕs статуса в IC-медиирания GN има потенциално клинично значение.

Препратки

[1] T. Mijovic, A. Zeitouni и I. Colmegna,"Автоимунна сензоневрална загуба на слуха: интерфейсът отология-ревматология," Ревматология, кн. 52, бр. 5, стр. 780–789, 2013. [2] M. Abongwa, KE Baber, RJ Martin и AP Robertson,"Холиномиметичният морантел като блокер на отворените канали на Ascaris suum ACR-16 nAChR," Неврология на безгръбначните, кн. 16, бр. 4, 2016 г.

[3] AS De Vriese, S. Sethi, J. Van Praet, KA Nath и FC Fer venza,"Бъбречно заболяване, причинено от дисрегулация на алтернативния път на комплемента: етиологичен подход," Вестник на Американското дружество по нефрология, кн. 26, бр. 12, стр. 2917– 2929, 2015 г. [4] RJ Quigg,"Комплемент и автоимунни гломерулни заболявания," Актуални насоки в автоимунитета, кн. 7, стр. 165– 180, 2003. 

[5] MC Carroll,"Системата на комплемента в регулацията на адаптивния имунитет," Природна имунология, кн. 5, бр. 10, стр. 981– 986, 2004. [6] MV Carroll и RB Sim,"Допълнение в здравето и болестта," Разширени прегледи за доставка на лекарства, кн. 63, бр. 12, стр. 965–975, 2011. 

[7] M. Noris и G. Remuzzi,"Преглед на активирането и регулирането на комплемента," Семинари по нефрология, кн. 33, бр. 6, стр. 479–492, 2013. 

[8] VP Ferreira, AP Herbert, C. Cortes et al.,"Свързването на фактор Н към комплекс от физиологични полианиони и C3b върху клетките е нарушено при атипичен хемолитичен уремичен синдром," Вестник по имунология, кн. 182, бр. 11, стр. 7009–7018, 2009.

[9] JJ Alexander, MC Pickering, M. Haas, I. Osawe и RJ Quigg,"Факторът на комплемента h ограничава отлагането на имунни комплекси и предотвратява инетвъзпаление и белези в гломерулите на мишки с хронична серумна болест," Вестник на Американското дружество по нефрология, кн. 16, бр. 1, стр. 52–57, 2005.

[10] JJ Alexander, L. Chaves, A. Chang и RJ Quigg,"Рецепторът C5a има ключова роля в гломерулонефрита на имунния комплекс в фактора на комплемента H-deфидревни мишки," Kidney International, кн. 82, бр. 9, стр. 961–968, 2012. 

[11] CV Jakubzick, GJ Randolph и PM Henson,"Моноцит диffеренциация и антиген-представящи функции," Отзиви за природата. Имунология, кн. 17, бр. 6, стр. 349–362, 2017. 

[12] Q. Cao, Y. Wang и DC Harris,"Хетерогенност на макрофагите, фенотипове и роли в бъбрецитефиброза," Kidney International. добавка, кн. 4, бр. 1, стр. 16–19, 2014.

[13] Q. Cao, Y. Wang, XM Wang и др.,"Бъбречните F4/80+ CD11c+ мононуклеарни фагоцити показват фенотипни и функционални характеристики на макрофагите в здравословно състояние и при адриамицинова нефропатия," Вестник на Американското дружество по нефрология, кн. 26, бр. 2, стр. 349–363, 2015.