Разлики в състава и медицинската ефикасност на сурови продукти и вино, обработени на пара продукти от Cistanches Herba Ⅱ
Sep 10, 2024
2.3.3 Откриване на телесно тегло и телесна температура
Плъховете бяха хранени адаптивно в продължение на 1 седмица, записана като 0 ден, и телесно тегло и ректална температура бяха записани; след като инжекцията с хидрокортизон натриев сукцинат е прилагана непрекъснато в продължение на 14 дни, това е записано като 14 ден и са записани телесното тегло и ректалната температура; след успешно моделиране, лечението с лекарството се провежда съгласно схемата на дозиране в продължение на 30 дни, записани като 44 дни, и се записват телесно тегло и ректална температура.
2.3.4 Откриване на честота на спонтанна активност
Броят на дейностите на плъхове в рамките на 5 минути се записва с помощта на мултифункционален рекордер на спонтанната активност на плъх. Плъховете бяха поставени в инструмента за спонтанна активност, първите 3 минути бяха периодът на адаптация и броят на спонтанните дейности на плъховете беше отчетен от записващото устройство през последните 5 минути. Стаята трябва да е тиха, температурата трябва да се поддържа на 18-22 градуса, а влажността трябва да се поддържа на 45%-65%. Броят на спонтанните дейности на 0, 14 и 44 дни беше записан съответно.
2.3.5 Откриване на серумен индекс
След като плъховете бяха анестезирани, кръвта беше събрана от коремната аорта, поставена в коагулационна епруветка и центрофугирана при 2,000 r/min за 15 минути, за да се открие съдържанието на Т, Е2, CREA и BUN в серум.
ВИСОКОКАЧЕСТВЕНА ЦИСТАНКА ЗА БЪБРЕЧНИ БОЛЕСТИ
Поддържаща услуга на Wecistanche
Имейл:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/телефон:+86 15292862950
2.3.6 Изчисляване на органния индекс
След като плъховете бяха анестезирани и кръвта беше събрана, бъбреците, тестисите, епидидимисът, семенните везикули и простатата бяха отстранени, избърсани на сухо с филтърна хартия и масата беше незабавно претеглена. Органният индекс се изчислява на базата на масата на плъха.
Органен индекс=органна маса/телесна маса
2.3.7 Откриване на тъкани
След като тестисите на плъха бяха отстранени, масата беше претеглена и незабавно поставена в хладилник с -80 градуса за замразяване. Преди измерването те бяха извадени, размразени и беше добавен предварително охладен физиологичен разтвор, за да се получи тъканен хомогенат при условия на ледена баня и беше приготвен 10% тъканен хомогенат. Хомогенатът веднага се центрофугира при 5,000 r/min за 10 минути и супернатантата се взема за употреба. Съгласно изискванията на комплекта, методът с хидроксиламин е използван за определяне на съдържанието на SOD в тъканта на тестисите, а методът TBA е използван за определяне на съдържанието на MDA в тъканта на тестисите.
Фиг. 2 Диаграма на общия йонен ток на Cistanches Herba и задушени във вино Cistanches Herba в режим на отрицателни йони
3 резултата
3.1 Разлики в състава на Cistanche deserticola преди и след обработка
3.1.1 Диаграма на общия йонен поток
В това изследване детекторът на масспектрометъра използва режима на йонизация с електроспрей източник на отрицателни йони (ESI−). Фигура 2 показва диаграмата на общия йонен поток на сурови Cistanche deserticola и продукти, задушени с вино, в режим на отрицателни йони. Може да се види, че съставът на пробите от Cistanche deserticola е много сложен и има очевидни разлики между суровите Cistanche deserticola и задушените във вино продукти. В допълнение, чрез търсене в съществуващата база данни и справка със съответната литература за елементен състав и съвпадение на съединенията, бяха идентифицирани общо 45 съединения, както е показано в таблица 3.
Таблица 3 Идентифицирани съединения в проби от Cistanches Herba
3.1.2 Резултати от PCA
PCA диаграмите на сурови Cistanche deserticola и задушени от вино продукти са показани на Фигура 3, които могат да бъдат групирани отделно. Може да се установи, че трябва да има разлики в състава на Cistanche deserticola преди и след обработката.
3.1.3 Резултати от OPLS-DA
След OPLS-DA обработка диаграмата S-Plot е показана на Фигура 4. Двата края на S-образната крива на фигурата представляват характерните маркери с най-голям принос във всяка група. Чрез анализиране на данните за фрагментни йони с VIP стойности, по-големи от 1 в двата края на S-образната крива и сравняване с контролата, бяха идентифицирани четири различни компонента: ехинакозид (tR=8.39 минути, m/z 785. 250 9), вербаскозид (tR=11.51 мин, m/z
623.198 1), изовербаскозид (tR=13.38 минути, m/z623.198 1) и тубулозид В (tR=18.41 минути, m/z 665. 208 7).
ВИСОКОКАЧЕСТВЕН ЛИКОР ОТ ЦИСТАНША ПРИ БЪБРЕЧНИ БОЛЕСТИ
3.2 Резултати от експерименти с животни
3.2.1 Общо наблюдение на състоянието
След моделирането плъховете показаха поредица от симптоми като харесване на топлина и страх от студ, извиване и извиване на гърба, апатичност, матова и разрошена коса, студени крайници, намален апетит, намалено телесно тегло и бистра урина. След прилагане горните симптоми във всяка група са значително подобрени.
3.2.2 Промени в диетата и волевата активност на плъхове след моделиране
След непрекъснато инжектиране на инжекция с хидрокортизон натриев сукцинат в продължение на 14 дни, телесното тегло, броят на доброволните дейности в рамките на 5 минути и приемът на храна, приемът на вода и отделянето на урина на плъхове във всяка група бяха измерени, за да се определи дали моделът на бъбречен ян дефицит на хидрокортизон беше успешно установено. Резултатите са показани в таблица 4. Както е показано в таблица 4, след 14 дни на приложение на хидрокортизон, в сравнение с нормалната група, всички групи показват намаление на телесното тегло, намаляване на приема на храна, увеличаване на приема на вода, увеличаване на отделянето на урина и намаляване на волевата активност и има значителни разлики (P < 0.05). Според описанието на някои синдроми на бъбречен ян дефицит в терминологията на клиничната диагноза и лечение на традиционната китайска медицина: „страх от студ и студени крайници, особено под кръста и коленете, блед или тъмен тен, бистра и продължителна урина, често уриниране при нощ, блед език с бяла козина, слаб пулс и т.н." В комбинация с наблюдението на общото състояние след моделиране, симптомите след моделиране са в съответствие с описанието на дефицита на бъбречен Ян, което показва, че моделирането е успешно.
| не | Съединение | t/min | Режим на йонизация | Молекулярна формула | Теоретична стойност (m/z) | Експериментална стойност (m/z) | Грешка (×10⁻⁶) | Информация за фрагмент (m/z) |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 1 | Гроздова захар | 0.79 | [M–H] | C₆H₁₂O₆ | 179.055 | 179.055 | 0.20 | 97, 89 |
| 2 | Гроздов танин | 0.81 | [M–H] | C₁₅H₁₄O₈ | 331.139 | 331.139 | 1.53 | 295, 313, 311 |
| 3 | Сорбитол | 0.88 | [M–H] | C₁₂H₂₂O₁₁ | 341.108 | 341.108 | 1.50 | 179, 161, 143, 131 |
| 4 | Половин млечна захар | 1.10 | [M–H] | C₆H₁₂O₆ | 181.071 | 181.071 | 2.68 | 163, 101 |
| 5 | Хранително вещество C на растителна основа | 1.20 | [M–H] | C₂₈H₄₃O₁₂ | 561.197 | 561.197 | -0.01 | 543, 461, 399 |
| 6 | Борова захар | 1.21 | [M–H] | C₁₆H₂₀O₈ | 341.123 | 341.124 | 1.63 | 179, 161, 143, 131, 119 |
| 7 | Янтарна киселина | 1.52 | [M–H] | C₄H₄O₄ | 117.018 | 117.019 | 3.40 | 99, 73 |
| 8 | Хранително вещество Б на растителна основа | 2.04 | [M–H] | C₂₈H₃₃O₁₃ | 577.192 | 577.192 | -0.03 | 297, 208, 183, 178, 171, 153 |
| 9 | Чай Флавоноиди | 2.20 | [M–H] | C₇H₆O₆N₂ | 164.071 | 164.072 | 1.00 | 103 |
| 10 | Екстракт от пекинска круша | 3.73 | [M–H] | C₁₄H₁₂O₁₁ | 373.113 | 373.115 | 5.48 | 355, 327, 297 |
| 11 | Екстракт от годжи бери | 4.28 | [M–H] | C₂₀H₂₄O₁₈ | 461.169 | 461.169 | 0.00 | 485, 293, 215, 197, 167 |
| 12 | Екстракт от листа на ананас | 4.74 | [M–H] | C₁₁H₁₂O₇ | 487.145 | 487.146 | 0.88 | 389, 179 |
| 13 | Екстракт от цвят на хибискус | 4.63 | [M–H] | C₂₄H₂₈O₁₀ | 537.197 | 537.197 | 0.00 | 501, 415, 375, 357 |
| 14 | 8- -Хидроксилактон | 5.27 | [M–H] | C₁₂H₂₀O₈ | 241.096 | 241.097 | 0.04 | 213, 189 |
| 15 | Rhizoma Dioscoreae | 6.10 | [M–H] | C₁₈H₂₄O₈ | 361.115 | 361.113 | 2.20 | 309, 163, 137 |
| 16 | Екстракт от сламен цвят | 6.82 | [M–H] | C₁₅H₂₁O₁₀ | 327.108 | 327.109 | 1.00 | 307, 195 |
| 17 | Пчелен прашец | 7.20 | [M–H] | C₁₄H₂₈O₈ | 437.472 | 437.472 | 0.00 | 393, 373, 355 |
| 18 | - Каротин | 7.53 | [M–H] | C₂₉H₄₆O₁₆ | 629.192 | 629.192 | 0.00 | 617, 479, 459, 315, 221 |
| 19 | Лилав сладък картоф | 7.70 | [M–H] | C₁₇H₂₄O₉ | 371.134 | 371.134 | 0.00 | 349, 328 |
| 20 | Екстракт от пекинска круша | 8.02 | [M–H] | C₁₇H₂₄O₉ | 371.134 | 371.134 | 0.00 | 349, 328 |
| 21 | Екстракт от цвят на праскова | 8.09 | [M–H] | C₂₈H₄₀O₁₂ | 561.197 | 561.197 | 0.00 | 543, 461, 399 |
| 22 | Екстракт от женшен | 10.39 | [M–H] | C₈H₁₈O₈ | 799.266 | 799.266 | 0.03 | 417, 439, 543, 561 |
| 23 | Екстракт от чай Oolong | 10.63 | [M–H] | C₂₄H₃₄O₁₆ | 539.149 | 539.149 | 0.10 | 637, 621, 471, 473 |
| 24 | Екстракт от листа на лотос | 11.51 | [M–H] | C₂₇H₃₄O₁₂ | 549.197 | 549.197 | 0.00 | 197, 153, 135 |
| 25 | Екстракт от космати цветя | 11.51 | [M–H] | C₂₉H₄₈O₁₆ | 623.197 | 623.196 | -0.21 | 387, 531 |
| 26 | Екстракт от бамбукови издънки | 11.51 | [M–H] | C₃₇H₄₈O₂₁ | 827.261 | 827.259 | -1.92 | 461, 315, 135, 297, 161 |
| 27 | Екстракт от хризантема | 11.60 | [M–H] | C₂₁H₃₀O₉ | 429.118 | 429.118 | 0.00 | 663, 625, 413 |
| 28 | 6-Ацетил флавон | 12.32 | [M–H] | C₁₈H₁₈O₆ | 345.118 | 345.119 | 0.02 | 301, 281 |
| 29 | Екстракт от плодове Лонган | 13.41 | [M–H] | C₁₈H₁₈O₈ | 417.154 | 417.159 | -0.11 | 165, 119, 327, 129, 27 |
Фиг. 3 Диаграма за анализ на основните компоненти на Cistanches Herba (1) и задушени във вино Cistanches Herba (2)
Фиг. 4 S-графика на Cistanches Herba и задушени във вино Cistanches Herba
Таблица 4 Промени в диетата и автономната активност на плъхове след моделиране (xs ±, n=10)
| Група | Телесно тегло (g) | 24-часов прием на храна (g) | Прием на вода за 24 часа (mL) | 24 часа отделена урина (mL) | 5 минути Преброяване на спонтанната активност |
|---|---|---|---|---|---|
| нормално | 285.14 ± 9.26 | 15.81 ± 2.19 | 20.86 ± 3.59 | 11.09 ± 2.57 | 100.4 ± 14.7 |
| Модел | 226.67 ± 12.14* | 11.92 ± 3.69* | 32.53 ± 4.65* | 15.58 ± 6.38* | 72.7 ± 11.6* |
| PR | 222.89 ± 9.87* | 10.65 ± 4.20* | 31.54 ± 3.55* | 19.36 ± 5.20* | 68.9 ± 18.0* |
| PW | 219.16 ± 10.75* | 12.37 ± 3.42* | 29.11 ± 4.78* | 16.01 ± 3.96* | 62.8 ± 14.9* |
| JK | 230.02 ± 7.95* | 10.22 ± 2.26* | 34.57 ± 5.36* | 19.13 ± 7.57* | 69.3 ± 11.3* |
Бележки:
Сравнение с нормалната група: *P < 0.05.
*P < 0.05 спрямо нормалната група.
Таблица 5 Промени в телесното тегло на плъхове по време на цикъл на дозиране (xs ±, n=10)
| Група | Телесно тегло (g) | 0 d | 14 d | 44 d |
|---|---|---|---|---|
| нормално | 192.12 ± 5.48 | 285.14 ± 9.26 | 430.02 ± 6.14 | |
| Модел | 187.24 ± 4.56* | 226.67 ± 12.14* | 328.33 ± 14.77* | |
| PR | 185.07 ± 5.11 | 222.89 ± 9.87* | 345.25 ± 8.22*# | |
| PW | 183.48 ± 6.44 | 219.16 ± 10.75* | 362.17 ± 7.82*#Δ | |
| JK | 194.13 ± 5.90 | 230.02 ± 7.95* | 356.94 ± 7.47*# |
Бележки:
*P < 0.05 спрямо нормалната група.
*P＜{{0}}.05 спрямо нормална група; #P <0,05 спрямо моделна група; △P<0,05 срещу PRgroup. Същото като по-долу.
3.2.3 Промени в телесното тегло на плъхове
Въз основа на промените в телесното тегло от три пъти на 0, 14 и 44 дни, беше анализиран ефектът от интрамускулното инжектиране на хидрокортизон натриев сукцинат върху телесното тегло на плъхове и възстановяването на телесното тегло на плъхове след лечение с лекарствена интервенция. Резултатите са показани в таблица 5.
От таблица 5 може да се види, че след 1 седмица адаптивно хранене, телесното тегло на плъховете се е увеличило и е относително балансирано. Телесното тегло на плъховете беше (200±20) g. Няма значителна разлика между групите, което показва, че средата на хранене и диетичните условия са подходящи за оцеляването на плъховете. След 14 дни прилагане на хидрокортизон, в сравнение с нормалната група, увеличението на телесното тегло на плъховете в моделната група и всяка лекарствена група беше намалено и имаше значителна разлика (P<0.05). The body weight of the rats in the normal group was
3.2.4 Промени в телесната температура на плъхове
Въз основа на промените на телесната температура от три пъти на 0, 14 и 44 дни, беше анализиран ефектът от интрамускулното инжектиране на инжектиран хидрокортизон натриев сукцинат върху телесната температура на плъхове и възстановяването на телесната температура на плъхове след лекарствена интервенция . Резултатите са показани в таблица 6.
3.2.5 Промени в спонтанните дейности на плъхове
Въз основа на промените в броя на спонтанните активности за 3 дни на 0, 14 и 44 дни, ефектът от интрамускулното инжектиране на хидрокортизон натриев сукцинат върху броя на спонтанните активности при плъхове и възстановяването на броя на спонтанните бяха анализирани активности при плъхове след лечение с лекарствена интервенция. Резултатите Вижте таблица 7.
Може да се види от таблица 7, че 14 дни след инжектирането на хидрокортизон, в сравнение с нормалната група, броят на спонтанните дейности в рамките на 5 минути от всяка друга група намалява значително и има значителна разлика (P<0.05). One month after administration, compared with the model group, the number of spontaneous activities of rats in each Cistanche deserticola administration group increased (P<0.05); compared with the normal group, there was no significant difference in the number of spontaneous activities of rats in each Cistanche deserticola administration group; Compared with the JK group, there was no significant difference in the number of spontaneous activities among the Cistanche deserticola administration groups. It shows that Cistanche deserticola extract can increase the number of spontaneous activities in rats with kidney-yang deficiency, and after 30 days of treatment, the number of spontaneous activities is close to that of normal rats.
3.2.6 Органен индекс
След 30 дни непрекъснато приложение, плъховете се гладуват в продължение на 12 часа и се умъртвяват. Измерено е качеството на органите. Ефектите от индуцирания от хидрокортизон модел на бъбречен дефицит Ян върху органите на плъхове и прилагането на различни екстракти от Cistanche deserticola са наблюдавани от органно ниво. Възстановяване на органи на плъх след приема на лекарството. След прилагане на хидрокортизон телесното тегло на плъховете варира значително и масата на органите също се променя значително. Този експеримент използва индекса на органа като индикатор за разглеждане
Ефектите върху органите са наблюдавани преди и след приложение. Резултатите са показани в таблица 8.
Може да се види от таблица 8, че в сравнение с нормалната група, след интрамускулно инжектиране на хидрокортизон натриев сукцинат при плъхове, органните индекси на бъбреците, тестисите, епидидима и простатата в моделната група намаляват (P<0.05), indicating that hydrocortisone-induced The kidney-yang deficiency model in rats will cause changes in the indexes of the kidneys, testicles, epididymis and prostate, but has little effect on the seminal vesicles.
Като цяло, в сравнение с моделната група, индексите на органите на всяка група на приложение са подобрени, което показва, че суровият Cistanche deserticola, виното Cistanche deserticola и Jingui Shenqi Pills могат да облекчат спада на индекса на органите в модела на бъбречно-ян дефицит.
От гледна точка на всеки орган, в сравнение с моделната група, групата на виното Cistanche deserticola може значително да увеличи органния индекс на бъбрека (P<0.05). Comparing different drug administration groups, the wine Cistanche deserticola group is better than the raw Cistanche deserticola group (P<0.05). ; From the perspective of testicular index, compared with the model group, each administration group can significantly increase the organ index of the testis (P<0.05). Comparing different administration groups, the wine Cistanche deserticola group has a significant advantage over the raw Cistanche deserticola group. (P < 0.05); from the perspective of epididymal index, compared with the model group, each administration group can significantly increase the organ index of the epididymis (P < 0.05); from the perspective of seminal vesicle index, compared with the model group , the wine Cistanche deserticola group can significantly improve the organ index of the seminal vesicles (P<0.05). Comparing different administration groups, the wine Cistanche deserticola group is significantly better than the raw Cistanche deserticola group (P<0.05); from the perspective of the prostate, compared with the model group In comparison, the raw Cistanche deserticola group and the wine Cistanche deserticola group could significantly increase the prostate organ index (P<0.05).
3.2.7 Откриване на показатели за бъбречна функция
BUN и CREA отразяват функцията на бъбреците. CREA в серума е крайният продукт на азотсъдържаща органична материя, а BUN в серума е основният краен продукт на протеиновия метаболизъм. И двете се екскретират главно чрез гломерулна филтрация [10-11]. Когато бъбречната функция е увредена, функцията на гломерулна филтрация намалява и концентрациите и на двете се повишават. Нивата на BUN и CREA в кръвта отразяват състоянието на бъбречната функция: колкото по-високи са нивата им, толкова по-тежко е увреждането на бъбречната функция. В този експеримент съдържанието на BUN и CREA в серум на плъх беше открито, за да се оценят ефектите на всяка група на приложение върху бъбречната функция при плъхове с индуциран от хидрокортизон бъбречен Ян дефицит.
Както може да се види от таблица 9, в сравнение с нормалната група, съдържанието на BUN и CREA в моделната група е повишено и има значителна разлика (P<0.05), indicating that hydrocortisone caused kidney damage to rats. Compared with the model group, the wine Cistanche deserticola and raw Cistanche deserticola groups can reduce the content of CREA (P<0.05), thereby alleviating kidney damage to a certain extent.
3.2.8 Откриване на индикатор за полови хормони
Бъбреците са в основата на вродеността и играят важна роля в човешкия растеж, развитие и жизнени процеси. Традиционната китайска медицина вярва, че бъбреците управляват възпроизводството и връзката между бъбреците и репродуктивната система е много тясна. Все повече и повече изследователи откриват, че пациентите с бъбречно-ян дефицит имат значителни промени в хипоталамо-хипофизно-гонадалната ос, често придружени от симптоми на понижени полови хормони като Т и Е2 [12]. В този експеримент съдържанието на Т и Е2 в серума се измерва, за да се определят ефектите на всяка група на приложение върху половите хормони при плъхове с индуциран от хидрокортизон бъбречен Ян дефицит.
Както може да се види от Таблица 10, в сравнение с нормалната група, съдържанието на Т и Е2 в моделната група намалява (P<0.05), indicating that hydrocortisone can cause a decrease in rat sex hormone levels. Compared with the model group, each administration group was able to significantly increase the levels of T and E2 in serum (P<0.05) and improve the decrease in sex hormones induced by hydrocortisone. Comparing different administration groups, the wine Cistanche deserticola group was better than the raw Cistanche deserticola group (P<0.05). Generally speaking, wine Cistanche deserticola has obvious performance in increasing T and E2 in the serum of rats with kidney yang deficiency, which is consistent with literature reports that phenylethanol glycosides, the main components of wine Cistanche deserticola, have hormone-like effects [13].
3.2.9 Откриване на антиоксидантен индекс
SOD е антиоксидант, който отразява способността на тялото да пречиства свободните радикали, докато MDA е крайният продукт на реакцията на оксидативен стрес и може да отразява степента на оксидативно увреждане на тялото. В този експеримент, съдържанието на SOD и MDA в тестисите беше измерено, за да се определи антиоксидантната активност на всяка група на приложение срещу модела на индуцирана от хидрокортизон бъбречна Ян дефицит.
Както може да се види от таблица 11, в сравнение с нормалната група, съдържанието на SOD в моделната група намалява (P<0.05). After 1 month of administration, compared with the model group, the SOD content in the raw Cistanche deserticola group and the wine Cistanche deserticola group increased. Compared with the normal group, the MDA content in the model group increased (P<0.05), indicating that the testicular tissue of rats with kidney-yang deficiency induced by hydrocortisone was oxidatively damaged. After being given Cistanche deserticola extract or Jingui Shenqi Pill positive medicine, each administration group was able to significantly reduce the content of MDA in testicular tissue and alleviate the oxidative damage caused by hydrocortisone. Taken together, both raw Cistanche deserticola and wine Cistanche deserticola can improve the body's ability to resist oxidative damage and alleviate oxidative damage caused by hydrocortisone.
(1) Групиране: Плъховете получават свободен достъп до вода и диета. След 1 седмица на адаптивно хранене, те бяха разделени на случаен принцип в 5 групи (Таблица 2), с 10 плъха във всяка група, а именно нормална група, моделна група, група на сурови Cistanche deserticola (PR), група на задушени във вино Cistanche deserticola (PW) , и положителна контрола Jinkui Shenqi Pill group (JK). (2) Моделиране: С изключение на нормалната група, останалите четири групи бяха инжектирани с интрамускулно инжектиране на хидрокортизон натриев сукцинат с доза от 20 mg/kg в продължение на 14 последователни дни. Нормалната група беше инжектирана със същата доза нормален физиологичен разтвор. Общото състояние на плъховете във всяка група беше наблюдавано, за да се определи дали показват симптоми като страх от студ, предпочитание към топлина, студени крайници, бистра и дълга урина, свит и извит гръб, матова и разрошена коса и психическа депресия. Едновременно с това се измерва телесното тегло, броят на спонтанните активности, приема на храна, прием на вода, отделяне на урина и други показатели на плъховете във всяка група.
