Монотерпенови съставки от Cistanche Tubulosa—Химични структури на канканозиди A—E и канканол—

Контакт: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Имейл:audrey.hu@wecistanche.com

Haihui XIE, Toshio MORIKAWA, Hisashi MATSUDA, Seikou NAKAMURA, Osamu MURAOKA и Masayuki YOSHIKAWA

Резюме

Бяха изолирани четири нови иридоидни гликозида, канканозиди А (1), В (2), С (3) и D (4), хлориран иридоид, канканол (5), и ацикличен монотерпенов гликозид, канканозид Е (6). от метанолов екстракт от изсушени стъбла на Cistanche tubulosa (SCHRENK) R. WIGHT (Orobanchaceae) заедно с 16 известни съединения. Структурите на тези нови съединения (1—6) са определени въз основа на химически и физикохимични доказателства.

Ключови думи:Cistanche tubulosa; канканозид; канканол; иридоид; монотерпен; Orobanchaceae

Cistanche tubulosa(SCHRENK) R. WIGHT (Orobanchaceae)е многогодишно паразитно растение, растящо върху корените на видовете Salvadora или Calotropis и разпространено в Северна Африка, Арабия и азиатските страни.1) Стъблата на това растение (Kanka-nikujuyou на японски) се използват традиционно за лечение на импотентност, стерилитет , лумбаго и телесна слабост.2) Преди това няколко иридоиди, монотерпеноиди, фенилетаноиди и лигнани бяха изолирани от китайски и пакистански C. tubulosa. 1,3–7) В хода на нашите серийни проучвания върху биоактивни съставки от китайски природни лекарства, 8–18) четири нови иридоидни гликозида, канканозиди A (1), B (2), C (3) и D (4). ), хлориран иридоид, канканол (5) и ацикличен монотерпенов гликозид, канканозид Е (6), са изолирани от метаноловия екстракт на това билково лекарство заедно с 16 известни съединения, включително 12 монотерпени (7-18). Тази статия се занимава с изолирането и изясняването на структурата на нови монотерпенови съставки (1—6).

Cistanche tubulosa

Метаноловият екстракт от изсушени стръкове наCistanche tubulosa(26,8 процента от това билково лекарство) се подлага на колонна хроматография със силикагел с нормална фаза и обърната фаза и повторна HPLC, за да се получат канканозиди А (1, 0.0{{10 }}54 процента ), B(2, 0.030 процента ), C (3, 0.00 27 процента ) и D (4, {{40}}.0015 процента ), канканол (5, 0.0{ {66}}34 процента ) и канканозид Е (6, 0.{027 процента ) заедно с мусаенозидова киселина19) (7, 0.020 процента ) , генипозидова киселина19) (8, 0,030 процента), 8-епилоганова киселина7) (9, 0,033 процента), глурозид19) (10, 0,14 процента), антириид20) (11, 0,0079 процента), аджугол19) (12, 0,011 процент), барциозид19) (13, 0,21 процента), 6-деоксикаталпол19) (14, 0,11 процента), аргиол21) (15, 0,0030 процента), цистанин22,23) (16, 0,0040 процента), цис-тахлорин22) ( 17, 0,0035 процента), (2E,6Z)-8-bD-глюкопиранозилокси-2,6-диметил-2,6-октадиенова киселина24) (18, 0,0028 процента ), D манитол25) (4,19 p ercent), уридин25) (0,0069 процента), (3R)-3-хидрокси-2- пиролидинон26,27) (0,0020 процента) и (3R)-3-хидрокси-1-метил{ {97}}пиролидинон27) (0,0059 процента).

Структура на канканозид А (1) Канканозид А (1) се получава като аморфен прах и показва отрицателно оптично въртене ([a]D 25 107,4 градуса в МеОН). IR спектърът на 1 показва абсорбционна лента при 1647 cm 1, която се приписва на олефиновата функция в допълнение към силните абсорбционни ленти при 341 0 и 1076 cm 1, предполагащи гликозидна част. При бомбардиране с положителни и отрицателни йони с бързи атоми (FAB)-MS от 1 се наблюдават квазимолекулни йонни пикове при m/z 369 (M Na) и 345 (MH) и FAB-MS анализ с висока разделителна способност разкрива молекулярната формула 1 да бъде C16H26O8. Киселинната хидролиза на 1 с 1,0 М солна киселина (HCl) освобождава D-глюкоза, която се идентифицира чрез HPLC анализ с помощта на оптичен ротационен детектор. 8,10—12,15—18) 1H-(CD3OD, Таблица 1) и 13C-NMR (Таблица 2) спектри на 1, които са приписани от различни ЯМР експерименти,28) показват сигнали, които могат да бъдат приписани на два метила [d 1.31 (s, 10-H3), 1.51 (br s, {{47} }H3)], два метилена [d 1,49, 2,02 (и двата m, 6a- и 6b-H), 1,64, 1,67 (и двата m, 7b- и 7a-H)], два метина [d 2,21 (dd, J 2,7) , 9,5 Hz, 9-H), 2,71 (m, 5-H)] и a,b-ненаситена ацетална група [d 5,33 (d, J 2,7 Hz, 1-H ), 5.95 (br s, 3-H)] заедно с b-глюкопиранозилна част [d 4.62 (d, J 7.9 Hz, 1 -H)]. Както е показано на Фиг. 1, експериментът 1 H–1 H корелационна спектроскопия (1 H–1 H COSY) на 1 показва наличието на частични структури, написани с удебелени линии. В експеримента с хетероядрени корелации на множество връзки (HMBC) на 1 бяха наблюдавани корелации на дълги разстояния между следните протони и въглероди (3-H, 1 -H и 1-C; 11- H3 и 3-C; 3-H, 5-H, 6-H2, 9-H, 11-H3 и 4- C ; 11-H3 и 5-C; 10-H3 и 7-C; 1-H, 7-H2, 9-H, 10-H3 и 8-C; 10-H3 и 9-C; 7-H2 и 10-C), както е показано на фиг. 1. Ензимната хидролиза на 1 с b-глюкозидаза дава агликон, канкагенин а (1а), както е показано на Фиг. 3. Сравнението на 13C NMR спектъра за 1 с тези за 1а разкрива изместването на гликозилирането около позицията 1- в 1 [1: dC 94,1 (1-C), 134,6 (3-C), 53,3 (9-C); 1a: dC 92.9 (1-C), 135.3 (3-C), 54.7 (9-C)]. По този начин, свързаността на bD-глюкопиранозилната част в 1 също беше изяснена, че е на 1-позиция на 1а. След това относителната стереоструктура на 1 се характеризира с ядрена спектроскопия за подобряване на Overhauser (NOESY), която показва NOE корелации между следните протонни двойки (1-H и 10-H3; 3-H и 11-H3; 5-H и 6b-H, 9-H; 6b-H и 7b-H; 7a-H и 10-H3; 7b-H и {{ 190}}H), както е показано на Фиг. 2. Накрая, абсолютната конфигурация на 1-позицията в 1 беше определена чрез прилагане на правилото за 13C NMR гликозилиране на отместване на 1,1-дизахарид,29), което беше установено за прилагане към полуацеталните съединения.30,31) Стереоструктурата на 1-позиция в 1 беше потвърдена, че се поддържа в 1a чрез сравнение на 1H-NMR анализ, включително експеримента NOESY. Установено е, че стойностите на отместване на гликозилирането [Dd 1,2 ppm (1 -C) и 0,9 ppm (1- C), в пиридин-d5] са характерни за комбинацията R, Rhemiacetal, което съответства на абсолютната стереоструктура на 1 както е показано на Фиг. 3. Следователно, абсолютната конфигурация в 1-позиция на 1 беше определена като S конфигурация и абсолютната стереоструктура на 1 беше изяснена, както е показано.

Структури на канканозиди В (2) и С (3) Канканозид В (2) също бяха изолирани като аморфен прах с отрицателно оптично въртене ([a]D 26 118,7 градуса в МеОН). IR спектърът на 2 показва ивици на поглъщане при 3410, 1647 и 1{{5{{80}}}}85 cm 1, приписани на хидроксилни, олефинови и етерни функции. Молекулната формула C15H24O10 на 2 се определя от квазимолекулните йонни пикове в FAB-MS с положителни йони и чрез FAB-MS с висока разделителна способност. Киселинна хидролиза на 2 с 1,0 М HCl освобождава D-глюкоза, която се идентифицира чрез HPLC анализ с помощта на оптичен ротационен детектор. 8,10—12,15—18) 1H-(CD3OD, Таблица 1) и 13C-NMR Таблица 2) спектри28) на 2 показва сигнали, които могат да бъдат приписани на два метилена [d 1,40 (DDD, J 5,2, 7,3, 13,5 Hz, 6a-H), 2,52 (DDD, J 7,0, 9,2, 13,5 Hz, 6b-H), 3,85 , 3,99 (и двата d, J 11,9 Hz, 10-H2)], четири метина [d 2,21 (dd, J 6,4, 8,6 Hz, 9-H), 2,83 (m, 5- H), 4,02 (dd, J 5,2, 7,0 Hz, 7-H), 5,49 (d, J 6,4 Hz, 1-H)] и двойка цизолефифин [d 4,95 (dd, J 4,0) , 6.1 Hz, 4-H), 6.22 (dd, J 1.8, 6.1 Hz, 3-H)], заедно с b-глюкопиранозилна част [d 4.72 (d, J 7.9 Hz, 1 - H)]. Протонните и въглеродните сигнали в 1H- и 13C-NMR данните от 2 са подобни на тези на 6-дезоксикаталпол (14), с изключение на сигналите, дължащи се на 7- и 8- позиции. Както е показано на Фиг. 1, експериментът 1 H–1 H COSY на 2 показва наличието на частични структури, изписани с удебелени линии, а в експеримента HMBC са наблюдавани дългосрочни корелации между следните протонни и въглеродни двойки ({{ 122}}H, 1 -H и 1-C; 1-H и 3-C; 10-H2 и 7- C; 1-H , 7-H, 9-H, 10-H2 и 8-C; 7-H, 10-H2 и 9-C ; 7-H и 10-C). Относителната стереоструктура на 2 се характеризира с експеримента NOESY, който показва NOE корелации между следните протонни двойки (1-H и 10-H2; 3- H и 4-H; 5-H и 6b-H, 9-H; 6b-H и 7-H; 7-H и 9-H), както е показано на Фиг. 2. Накрая, алкална обработка на 14 с 5 процента воден разтвор на калиев хидроксид (КОН) дава 2 и 19, 32), така че стереоструктурата на 2 се изяснява.

Канканозид С (3) се изолира като аморфен прах с отрицателно оптично въртене ([a]D 26 34.0 степен в МеОН). В FAB-MS с отрицателни йони от 3 се наблюдават двойка изотопни квазимолекулни йонни пикове при m/z 399 и 401 (MH). Молекулната формула на 3 беше определена като C15H25ClO10 чрез FAB-MS измерване с висока разделителна способност. Киселинна хидролиза на 3 с 1,0 М HCl освобождава D-глюкоза, която се идентифицира чрез HPLC анализ с помощта на оптичен ротационен детектор. Таблица 2) спектри28) на 3 показва сигнали, които могат да бъдат приписани на три метилена [d 1,70 (br dd, J около 3, 13 Hz, 4a-H), 2,70 (br dd, J около 6, 13 Hz, 4b-H) , 1.68 (br d, J около 13 Hz, 6a H), 2.44 (m, 6b-H), 4.01, 4.04 (и двете d, J 11.3 Hz, 10-H2)], пет метина [d 2.47 (dd, J 2.5, 7.9 Hz, 9-H), 2.61 (m, 5- H), 3.94 (br s, 7-H), 5.10 (br d, J около. 3 Hz, 3-H), 5.48 (d, J 2.5 Hz, 1-H)], и b-глюкопиранозилна част [d 4.60 (d, J 8.0 Hz, 1 -H)]. Протонните и въглеродните сигнали в 1H- и 13C-NMR спектрите на 3 се наслагват върху тези на 2, с изключение на сигналите, дължащи се на позициите 3- и 4-. Позициите на bD-глюкопиранозил и хлорна функция в 3 бяха изяснени от H–H COSY и HMBC експериментите, както е показано на Фиг. 1. Следователно, планарната структура на 3 беше конструирана така, че да бъде както е показано. Относителната стереоструктура на 3 е определена чрез експеримент NOESY, в който се наблюдават NOE корелации между следните протонни двойки (1-H и 3-H, 10-H2; 3- H и 4a-H; 4b-H и 5- H; 5-H и 6b-H, 9-H; 6b-H и 7-H; {{121} }H и 9-H), както е показано на фиг. 2.

Структури на канканозид D (4) и канканол (5) Канканозид D (4) се изолира като аморфен прах с отрицателно оптично въртене ([a]D 25 30.6 градуса в МеОН). IR спектърът на 4 показва абсорбционна лента при 1655 cm 1, която се приписва на олефинова функция и силни абсорбционни ленти при 3410 и 1078 cm 1, предполагащи неговата гликозидна структура. В FAB-MS с положителен йон от 4 се наблюдава квазимолекулен йонен пик при m/z 341 (M Na). Молекулната формула C15H26O7 на 4 се определя чрез FAB-MS измерване с висока разделителна способност. Киселинна хидролиза на 4 с 1,0 М НС1 освобождава D-глюкоза, 8,10—12,15—18), докато (R)-закръгленост (4а) 33,34) се получава чрез ензимна хидролиза на 4 с b-глюкозидаза. 1H-NMR (Таблица 3, CD3OD) и 13C-NMR (Таблица 4) спектри28) на 4 показват сигнали, които могат да бъдат приписани на метил [d 1.69 (s, 10-H3)], три метилена [d 1.41, 2,06 (и двата m, 4-H2), 1,51, 2,01 (и двата m, 6a- и 6b-H), 2,23 (br dd, J около 8, 15 Hz, 7a-H), 2,37 (br dd , J около 8, 15 Hz, 7b-H)], метин [d 2,90 (m, 5-H)] и два метилена, носещи кислородна функционална група {d [3,56 (DDD, J 2,8, 7,4) , 13.2 Hz), 3.97 (DDD, J 4.9, 8.0, 13.2 Hz), 3-H2], 4.04, 4.18 (и двете d, J 12.2 Hz, 1-H2)} заедно с b- глюкопиранозилова част [d 4.25 (d, J 7.7 Hz, 1 -H)]. Позицията на bD-глюкопиранозилната част в 4 беше изяснена от HMBC експеримента като 3-позиция (фиг. 1). Въз основа на тези доказателства, абсолютната стереоструктура на 4 беше определена като показаната.

Канканол (5) се получава като аморфен прах с положително оптично въртене ([a]D 25 11.1 градуса). Химическата йонизация (CI)-MS на 5 показа двойка изотопни йонни пикове при m/z 221 и 223, дължащи се на квазимолекулен йон (МН). Измерването на CI-MS с висока разделителна способност от 5 разкрива, че молекулната формула е C9H13ClO4. 1H-NMR (Таблица 1, CD3OD) и 13C-NMR (Таблица 2) спектри28) на 5 показват наличието на следните функции: три метилена [d 1.60 (DDD, J 2.5, 5.5, 13.1 Hz, 4a-H), 1,80 (br dd, J приблизително 3, 13 Hz, 4b H), 1,83 (br d, J приблизително 12 Hz, 6a-H), 2,57 (m, 6b-H), 3,75 , 3.88 (и двата d, J 9.2 Hz, 10-H2)], пет метина [d 2.76 (dd, J 4.3, 8.0 Hz, 9-H), 2.50 (m, 5- H), 3,80 (br s, 7-H), 5,17 (br d, J около 3 Hz, 3-H), 5,26 (d, J 4,3 Hz, 1-H) ]. Планарната структура на 5 беше потвърдена от 1 H–1 H COSY и HMBC експерименти. Това означава, че експериментът 1 H–1 H COSY върху 5 показва наличието на частични структури, написани с удебелени линии, а в експеримента HMBC са наблюдавани корелации на дълги разстояния, както е показано на Фиг. 1. Относителната стереоструктура на 5 е определен от експеримента NOESY, в който се наблюдават NOE корелации между следните протонни двойки (1-H и 9-H; 3-H и 4a-H; 4b-H и {{ 93}} H; 5-H и 6b-H, 9-H; 6b-H и 7-H; 7-H и 9-H), както е показано на Фиг. 2. Чрез сравнение на 1H- и 13C-NMR данните за 5 с тези за 14а, което е получено чрез третиране на 14 с 5 процента воден разтвор на HCl, както е показано на Диаграма 1,35) позицията на хлора група в 5 беше поддържана като 3-позиция. Освен това, ацетилирането на 5 с оцетен анхидрид (Ac2O) и пиридин дава 3,7-оксид (5а), докато 14а дава диацетат (14b) при същите условия на ацетилиране. Това доказателство също ни накара да потвърдим, че позицията на хлорната функция е 3b-позиция (Диаграма 3). Следователно, стереоструктурата на 5 беше определена като показаната.

Структура на канканозид Е (6) Канканозид Е (6) се изолира като аморфен прах с отрицателно оптично въртене ([a]D 25 20.0 степен в МеОН). IR спектърът на 6 показва абсорбционни ивици при 3410, 1647, 1085 cm 1, приписани на гликозидни и карбонилни функции, докато неговият UV спектър показва максимум на абсорбция при 211 nm (log e 4.63), което показва наличието на b-ненаситена карбоксилна киселина. Молекулната формула C16H28O8 от 6 се характеризира чрез FAB-MS с положителни и отрицателни йони и чрез измерване на MS с висока разделителна способност. Киселинна хидролиза на 6 освобождава D-глюкоза,8,10—12,15—18), докато (2E,6R)-8-хидрокси-2,6-диметил- 2-октанова киселина (6а) 36) се получава чрез ензимна хидролиза на 6 с b-глюкозидаза. 1H-NMR (Таблица 3, CD3OD) и 13C-NMR (Таблица 4) спектри28) на 6 показват наличието на (2E,6R)-8-хидрокси-2,6- остатък на диметил-2-октанова киселина [d 0.95 (d, J 6.4 Hz, 10-H3), 1.30, 1.48 (и двете m, 5-H2), 1.45, 1.70 (и двете m, { {70}}Н2), 1,65 (m, 6-Н), 1,81 (s, 9-Н3), 2,22 (2Н, m, 4-Н2), 3,61, 3,94 (и двете m, 8-H2), 6.78 (dd, J 1.2, 7.3 Hz, 3-H)] заедно с bD-глюкопиранозилна част [d 4.26 (d, J 7.6 Hz, 1 -H)] . Чрез сравнение на въглеродните сигнали в 13C-NMR спектъра на 6 с тези на 6а, изместването на гликозилирането се наблюдава около 8-позицията на 6. Позицията на глюкозидната връзка също се потвърждава от HMBC експерименти, както е показано в Фиг. 1. Следователно, абсолютната стереоструктура на 6 беше изяснена като (2E,6R)-8-b-D-глюкопиранозилокси-2,6-диметил-2-октанова киселина.

полза от екстракт от цистанче

Експериментален

Използвани са следните инструменти за получаване на физически данни: специфични ротации, цифров поляриметър Horiba SEPA-300 (l 5 cm); UV спектри, Shimadzu UV-1600 спектрометър; IR спектри, Shimadzu FTIR-8100 спектрометър; EI-MS, CI-MS и CI-MS с висока разделителна способност, JEOL JMS-GCMATE масспектрометър; FAB-MS и MS с висока разделителна способност, масспектрометър JEOL JMS-SX 102A; 1H-NMR спектър, спектрометри JEOL EX-270 (270 MHz) и JNM-LA500 (500 MHz); 13C-NMR спектри, спектрометри JEOL EX-270 (68 MHz) и JNM-LA500 (125 MHz) с тетраметилсилан като вътрешен стандарт; и HPLC детектор, Shimadzu RID-6A индекс на пречупване и SPD- 10Avp UV-VIS детектори. HPLC колона, YMC-Pack ODS-A (250 4.6 mm id) и (250 20 mm id) колони бяха използвани съответно за аналитични и препаративни цели.

За хроматография бяха използвани следните експериментални условия: колонна хроматография със силикагел с обикновена фаза, силикагел BW-200 (Fuji Silysia Chemical, Ltd., Aichi, Япония, 15{{10}}—35 0 мрежа); колонна хроматография със силикагел с обратна фаза, Chromatorex ODS DM1020T (Fuji Silysia Chemical, Ltd., Aichi, Япония, 100-200 mesh); TLC, предварително покрити TLC плаки със силикагел 60F254 (Merck, 0,25 mm) (обикновена фаза) и силикагел RP- 18 F254S (Merck, 0,25 mm) (обратна фаза); HPTLC с обратна фаза, предварително покрити плаки за TLC със силикагел RP-18 WF254S (Merck, 0,25 mm); и откриването се постига чрез пръскане с 1% Ce(SO4)2–10% воден H2SO4, последвано от нагряване.

Растителен материал

Изсушени стъбла на Cistanche tubulosa (SCHRENK) R. WIGHT бяха закупени в Урумчи, провинция Синдзян, Китай през януари 2005 г. чрез Eishin Trading Co., Ltd. Осака, Япония, и ботаническата идентификация беше извършена от професор Jia Xiaoguang в Синдзянския институт по традиционен китайски език и етнологични лекарства. Ваучерен екземпляр (2005.01. Xinjiang-01) от това растение се съхранява в нашата лаборатория.

Извличане и изолиране

Изсушени стъбла на C. tubulosa (5.0 kg) се стрити на прах и се екстрахират три пъти с метанол под обратен хладник в продължение на 3 часа. Изпаряването на разтворителя при понижено налягане осигурява метаноловия екстракт (1340 g, 26,8 процента от това билково лекарство). Метаноловият екстракт (160 g) се подлага на колонна хроматография със силикагел с нормална фаза [3,2 kg, CHCl3–MeOH–H2O (10 : 3 : 1→7 : 3 : 1, по-ниска слой→6 : 4 : 1)МеОН] за получаване на шест фракции [Fr. 1 (5.{04 g), Fr. 2 (9,84 g), Fr. 3 (7,80 g), Fr. 4 (13,28 g), Fr. 5 (113,6{{104}} g) и Fr. 6 (7,61 g)]. Фракция 1 (5.00 g) се отделя чрез колонна хроматография със силикагел с обърната фаза [150 g, MeOH–H2O (40 6: 60→ 5{{ 162}} : 50→60 : 40, v/v)→MeOH] за получаване на пет фракции [Fr. {{50}} (83{{2{01}} mg), Fr. 1-2 (590 mg), Fr. 1-3 (180 mg), Fr. 1-4 (124 mg) и Fr. 1-5 (3200 mg)]. о. {{60}} (830 mg) се разделя допълнително чрез HPLC [MeOH–H2O (10 : 90, v/v)], за да се получи канканол (5, 20 mg, 0,0034 процента), аргиол (15, 18 mg, 0,0030 процента), цистанин (16, 24 mg, 0,0040 процента) и Fr. 1-1-2 (62 mg), което беше допълнително разделено чрез HPLC [MeOH–H2O (2 : 98, v/v)], за да се получи (3R)-3-хидрокси-2-пиролидинон (0,0020 процента ) и (3R)-3-хидрокси-1-метил-2-пиролидинон (0,0059 процента). о. 1-2 (590 mg) се пречиства чрез HPLC [MeOH–H2O (35 : 65, v/v) и CH3CN– H2O (20 : 80, v/v)], за да се получи цистанхлорин (17, 21 mg, 0,0035 процент). Фракция 2 (9,72 g) се подлага на колонна хроматография със силикагел с обърната фаза [290 g, MeOH–H2O (20 : 80→30 : 70→40 : 60→60 : 40, v/v)→MeOH] до достигане на седем фракции [фр. 2-1 (1986 mg), Fr. 2-2 (1563 mg), Fr. 2-3 (3931 mg), Fr. 2-4 (375 mg), Fr. 2-5 (486 mg), Fr. 2-6 (460 mg) и Fr. 2-7 (336 mg)]. о. 2-1 (466 mg) се разделя чрез HPLC [MeOH–H2O (5 : 95, v/v)], за да се получи уридин (0,0069 процента). о. 2-2 (535 mg) се разделя чрез HPLC [MeOH–H2O (10 : 90, v/v)], за да се получи антириид (11, 15 mg, 0,0079 процента) и 6-дезоксикаталпол (14, 214 mg, 0,11 процента). о. 2-3 (535 mg) се разделя чрез HPLC [MeOH–H2O (20 : 80, v/v)], за да се получат глурозид (10, 110 mg, 0,14 процента) и барциозид (13, 164 mg, 0,21 процента) . о. 2-4 (375 mg) се разделя чрез HPLC [MeOH–H2O (30 : 70, v/v)], за да се получат канканозиди A (1, 32 mg, 0,0054 процента) и D (4, 9 mg, 0,0015 процента) ). о. 2-6 (460 mg) се разделя допълнително чрез HPLC [MeOH–H2O (45 : 55, v/v)], за да се получи канканозид Е (6, 161 mg, 0,027 процента) и (2E, 6Z){{192 }}bD-глюкопиранозилокси-2,6-диметил-2,6-октадиенова киселина (18, 17 mg, 0,0028 процента). Фракция 3 (7,60 g) се подлага на колонна хроматография със силикагел с обърната фаза [230 g, MeOH–H2O (20 : 80→40 : 60→50 : 50→ 60 : 40, v/v)→MeOH], за да се получи пет фракции [Fr. 3-1 (2652 mg), Fr. 3-2 (593 mg), Fr. 3-3 (3610 mg), Fr. 3-4 (190 mg) и Fr. 3-5 (336 mg)]. о. 3-1 (480 mg) се пречиства чрез HPLC [MeOH–H2O (10 : 90, v/v)] до получаване на канканозид В (2, 19 mg, 0,018 процента), генипозидова киселина (8, 32 mg, 0,030) процент ) и аджугол (12, 12 mg, 0,011 процента). Фракция 4 (13.10 g) се подлага на колонна хроматография със силикагел с обърната фаза [390 g, MeOH–H2O (10: 90→20: 80→30: 70→40: 60→50: 50, v/v)→ MeOH], за да се получат седем фракции [Fr. 4-1 (6114 mg), Fr. 4-2 (430 mg), Fr. 4-3 (1058 mg), Fr. 4-4 (170 mg), Fr. 4-5 (2595 mg), Fr. 4-6 (1635 mg) и Fr. 4-7 (1064 mg)]. о. 4-2 (430 mg) се разделя допълнително чрез HPLC [MeOH–H2O (5 : 95, v/v)], за да се получат 2 (70 mg, 0,012 процента) и канканозид С (3, 16 mg, 0,0027 процента) . о. 4-6 (1058 mg) също се разделя чрез HPLC [MeOH–H2O (15 : 85, v/v)] за получаване на мусаенозидова киселина (7, 116 mg, 0,020 процента) и 8-епилоганова киселина (9, 193 mg, 0,033 процента). Фракция 5 (15.15 g) се подлага на колонна хроматография със силикагел с обърната фаза [455 g, MeOH–H2O (0: 100→10: 90→ 20: 80→40: 60→50: 50, v/v)→MeOH ], за да даде седем дроби [Fr. 5-1 (9311 mg), Fr. 5-2 (1114 mg), Fr. 5-3 (306 mg), Fr. 5-4 (347 mg), Fr. 5-5 (1620 mg), Fr. 5-6 (1453 mg) и Fr. 5-7 (1106 mg)]. о. 5-1 (9311 mg) кристализира от МеОН, за да се получи D-манитол (3337 mg, 4,19 процента).

Известните съединения (7—18) са идентифицирани чрез сравнение на техните физически данни ([a]D, IR, 1H-NMR, 13C-NMR, MS) с отчетените стойности 1,7,19—24,26,27) или тези на търговски проби. 25) Канканозид A (1): аморфен прах, [a]D 25 107,4 степен (с 1,50, МеОН). FAB-MS с положителни йони с висока разделителна способност: Изчислено за C16H26O8Na (M Na) 369.1525; Намерено 369.1522. IR (KBr): 3410, 2940, 1647, 1076 cm'. 1H-NMR (500 MHz, CD3OD и пиридин-d5) d: дадено в таблица 1. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD и пиридин-d5) d C: дадено в таблица 2. FAB-MS с положителни йони: m /z 369 (M Na). FAB-MS с отрицателни йони: m/z 345 (MH).

Канканозид B (2): аморфен прах, [a]D 26 118,7 градуса (c 0.10, МеОН). FAB-MS с положителни йони с висока разделителна способност: Изчислено за C15H24O10Na (M Na) 387.1267; Намерено 387.1261. IR (KBr): 3410, 2940, 1647, 1085 cm'. 'H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: дадено в Таблица 1. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) d C: дадено в Таблица 2. FAB-MS с положителни йони: m/z 387 (M Na). FAB-MS с отрицателни йони: m/z 363 (MH).

Канканозид C (3): аморфен прах, [a]D 26 34.0 степен (c 1.00, MeOH). FAB-MS с висока разделителна способност с отрицателни йони: Изчислено за C15H24ClO10 (MH) 399.1058; Намерено 399.1077. IR (KBr): 3410, 2964, 1159, 1078, 1048, 949 cm'. 'H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: дадено в Таблица 1. 13C NMR (125 MHz, CD3OD) d C: дадено в Таблица 2. FAB-MS с отрицателни йони: m/z 399, 401 (MH).

Канканозид D (4): Аморфен прах, [a]D 25 30.6 градуса (c 0,50, МеОН). FAB-MS с положителни йони с висока разделителна способност: Изчислено за C15H26O7Na (M Na) 341.1204; Намерено 341.1210. IR (KBr): 3410, 2940, 1655, 1078, 1040 cm'. 'H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: дадено в Таблица 3. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) d C: дадено в Таблица 4. FAB-MS с положителни йони: m/z 341 (M Na). FAB-MS с отрицателни йони: m/z 317 (MH).

Канканол (5): Аморфен прах, [a]D 25 11.1 градуса (c 1.40, МеОН). CI-MS с висока разделителна способност: Изчислено за C9H14ClO4 (MH) 221.0580; Намерено 221.0582. IR (KBr): 3399, 3004, 1165, 1096, 1059, 1048, 955 cm'. 'H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: дадено в Таблица 1. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) d C: дадено в Таблица 2. CI-MS m/z (проценти): 221 (MH) (5 ), 223 (М-Н) (2), 185 (88), 167 (100), 149 (71) и 57 (49).

Канканозид Е (6): аморфен прах, [a]D 25 20.0 градуса (c 2.00, MeOH). FAB-MS с положителни йони с висока разделителна способност: Изчислено за C16H28O8Na (M Na) 371.1682; Намерено 371.1690. UV [МеОН, nm (log e)]: 215 (4.16). IR (KBr): 3410, 2940, 1647, 1085, 1043 cm'. 'H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: дадено в Таблица 3. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) d C: дадено в Таблица 4. FAB-MS с положителни йони: m/z 371 (M Na). FAB-MS с отрицателни йони: m/z 347 (MH).

полза от екстракт от цистанче

Киселинна хидролиза на 1—4 и 6 с 1 М HCl

Разтвор на 1—4 или 6 (всеки 1,5 mg) в 1 М НС1 (0.5 ml) се нагрява под обратен хладник в продължение на 3 часа. След охлаждане реакционната смес се излива в ледена вода и се неутрализира с Amberlite IRA-400 (OH форма) и смолата се отстранява чрез филтруване. След това филтратът се екстрахира с EtOAc. Водният слой се подлага на HPLC анализ при следните условия: HPLC колона, Ka сензор LC NH{{10}}, 4.6 mm id 250 mm (Tokyo Kasei Co., Ltd., Токио, Япония); откриване, оптична ротация [Shodex OR-2 (Showa Denko Co., Ltd., Токио, Япония)]; подвижна фаза, CH3CN–H2O (75: 25, v/v); скорост на събиране 0,8 ml/min; температура на колоната, стайна температура. Идентифицирането на D-глюкоза, налична във водния слой, беше извършено чрез сравнение на нейното време на задържане и оптично въртене с тези на автентична проба: tR 12,3 минути (положително оптично въртене)

Ензимна хидролиза на 1, 4 и 6 с b-глюкозидаза

Разтвор на 1 (7,7 mg) във H2O (1,5 ml) се третира с b-глюкозидаза (5.0 mg, от бадем, Oriental Yeast Co., Токио, Япония) и разтворът се разбърква при 37 градуса за 3 дни След като EtOH се добави към реакционната смес, разтворителят се отстранява при понижено налягане и остатъкът се пречиства чрез HPLC [MeOH–H2O (55: 45, v/v)], за да се получи канкагенин а (1а, 2,3 mg, 56 процента) . Чрез подобна процедура, (R)-ротундиол33,34) (4a, 1,2 mg, 69 процента) и (2E,6R)-8-хидрокси-2,6-диметил{{30} }октанова киселина36) (6а, 6,8 mg, 62 процента) се получават съответно от 4 (3,5 mg) и 6 (20,4 mg).

Канкагенин а (1а): Бял прах, [a]D 25 18,4 градуса (c 0.20, МеОН). EI-MS с висока разделителна способност: Изчислено за C10H16O3 (M) 184.1099; Намерено 184.1106. IR (KBr): 3410, 2940, 1684 cm'. 'H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: дадено в таблица 1. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) d C: дадено в таблица 2. EI MS: m/z (проценти): 184 (M, 37) , 95 (100).

Алкално третиране на 14 с 5 процента воден КОН

Разтвор на 14 (23.0 mg) в 5 процента воден КОН (1.0 ml) се разбърква при 80 градуса в продължение на 2 часа. Реакционната смес се неутрализира с Amberlite HCR-W2 (H форма). Отстраняването на разтворителя от филтрата при понижено налягане дава остатък, който се пречиства чрез HPLC [MeOH–H2O (5: 95, v/v)] до получаване на 2 (4,0 mg, 16 процента) и 1932) (10,5 mg , 43 процента).

Киселинно третиране на 14 с 5 процента воден разтвор на НС1

Разтвор на 14 (25.0 mg) в 5 процента воден НС1 (2.0 ml) се разбърква при стайна температура в продължение на 3 часа. Реакционната смес се излива в ледена вода и цялата реакционна смес се екстрахира с EtOAc. EtOAc екстрактът се промива последователно с наситен воден разтвор на NaHC03 и солев разтвор, след това се суши над безводен MgS04 прах и се филтрува. Отстраняването на разтворителя от филтрата при понижено налягане дава остатък, който се разделя чрез HPLC [MeOH–H2O (20: 80, v/v)], за да се получи 14a (4,0 mg, 25 процента).

14a

Бял прах, [a]D 20 21,5 градуса (c 0,30, МеОН). CI-MS с висока разделителна способност: Изчислено за C9H14ClO4 (MH) 221.0580; Намерено 221.0587. IR (KBr): 3410, 2962, 1365, 1152, 1055, 945 cm'. 'H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: дадено в таблица 1. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) d C: дадено в таблица 2. CI-MS: m/z (проценти): 221 (MH) ( 7), 223 (MH) (3), 203 (M H2O) (97), 205 (M H2O) (33), 185 (7), 167 (12), 159 (32), 121 (27), 110 (48), 95 (64), 85 (100), 67 (56) и 57 (65).

Ацетилиране на 5 и 14а

Разтвор на 5 (2,5 mg) в пиридин (0.5 ml) се третира с оцетен анхидрид (Ac2O, 0.4 ml) и сместа се разбърква при стайна температура в продължение на 12 часа. Реакционната смес се излива в ледена вода и цялата реакционна смес се екстрахира с EtOAc. EtOAc екстрактът се промива последователно с 5 процента воден разтвор на НС1, наситен воден разтвор на NaHC03 и солев разтвор, след което се изсушава над безводен MgS04 прах и се филтрува. Отстраняването на разтворителя от филтрата при понижено налягане дава остатък, който се пречиства чрез HPLC [MeOH–H2O (35: 65, v/v)], за да се получи 5a (2.3 mg, 77 процента). Чрез подобна процедура, 14b (2,7 mg, 87 процента) също беше получено и пречистено чрез HPLC [MeOH–H2O (55: 45, v/v)] от 14a (2,1 mg).

5a

Бял прах, [a]D 20 1,8 градуса (c 0,18, МеОН). CI MS с висока разделителна способност: Изчислено за C11H15O5 (MH) 227.0919; Намерено 227.0925. IR (KBr): 2962, 1734, 1374, 1258, 1237, 1169, 1103, 1053, 947 cm'. 'H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: дадено в таблица 1. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) d C: дадено в таблица 2. CI-MS m/z (проценти): 227 (MH) (28 ), 209 (M H2O) (4), 184 (3), 166 (45), 149 (22), 138 (38), 122 (44), 94 (31), 85 (100) и 57 (34 ).

14b

Бял прах, [a]D 20 23,7 градуса (c 0,06, МеОН). CI-MS с висока разделителна способност: Изчислено за C13H18ClO6 (MH) 305.0792; Намерено 305.0790. IR (KBr): 1744, 1376, 1243, 1231, 1001, 941 cm'. 'H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: дадено в Таблица 1. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) d C: дадено в Таблица 2. CI-MS: m/z (проценти): 305 (MH) ( 2), 307 (MH) (1), 263 (MH C2H3O) (6), 265 (MH C2H3O) (3), 245 (30), 203 (8), 185 (100), 167 (7), 149 (33), 121 (26), 95 (15), 85 (37) и 57 (93).

Благодарности

Това изследване беше подкрепено от 21-вата програма на COE, проект за академична граница и безвъзмездна помощ за научни изследвания от Министерството на образованието, културата, спорта, науката и технологиите на Япония. Авторите благодарят на професор Xiaoguang Jia в Синдзянския институт по традиционна китайска и етнологична медицина в Урумчи, Китай, за идентифицирането на растителен материал.

цистанче полза

Литература и бележки

1) Kobayashi H., Oguchi H., Takizawa N., Miyase T., Ueno A., Usmanghani K., Ahmad M., Chem. Pharm. Bull., 35, 3309—3314 (1987).

2) Xinjiang Science and Technology Press, „Техники за култивиране на основни лечебни растения в Синдзян“, Изд. Синдзянски институт по традиционна китайска и етноложка медицина, 2004 г., стр. 84—88.

3) Du N., Zhou P., Wang J., Liu C., Li W., Zhongguo Yaoke Daxue Xue bao, 24, 46-48 (1993).

4) Xue D., Zhongguo Zhongyao Zazhi, 22, 170—171 (1997).

5) Song Z., Mo S., Chen Y., Tu P., Li W., Zhao Y., Zheng J., Zhongguo Zhongyao Zazhi, 25, 728—730 (2000).

6) Song Z., Tu P., Zhao Y., Zheng J., Zhongcaoyao, 31, 808—810 (2000).

7) Yoshizawa F., Deyama T., Takizawa N., Usmanghani K., Ahmad M., Chem. Pharm. Бюл., 38, 1927—1930 (1990).

8) Matsuda H., Morikawa T., Tao J., Ueda K., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Бюл., 50, 208—215 (2002).

9) Морикава Т., Мацуда Х., Тогучида И., Уеда К., Йошикава М., J. Nat. Prod., 65, 1468-1474 (2002).

10) Тао Дж., Морикава Т., Тогучида И., Андо С., Мацуда Х., Йошикава М., Bioorg. Med. Chem., 10, 4005-4012 (2002).

11) Морикава Т., Тао Дж., Андо С., Мацуда Х., Йошикава М., J. Nat. Prod., 66, 638—645 (2003).

12) Тао Дж., Морикава Т., Андо С., Мацуда Х., Йошикава М., Chem. Pharm. Bull., 51, 654—662 (2003).

13) Matsuda H., Morikawa T., Xie H., Yoshikawa M., Planta Med., 70, 847-855 (2004).

14) Sun B., Morikawa T., Matsuda H., Tewtrakul S., Harima S., Yoshikawa M., J. Nat. Prod., 67, 1464—1469 (2004).

15) Morikawa T., Sun B., Matsuda H., Wu LJ, Harima S., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Bull., 52, 1194—1199 (2004).

16) Xie H., Wang T., Matsuda H., Morikawa T., Yoshikawa M., Tani T., Chem. Pharm. Bull., 53, 1416—1422 (2005).

17) Морикава Т., Сие Х., Мацуда Х., Йошикава М., J. Nat. Прод., 69 (2006) под печат.

18) Morikawa T., Xie H., Matsuda H., Wang T., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Бюл., 54, 506—513 (2006).

19) Кобаяши Х., Карасава Х., Миясе Т., Фукушима С., Chem. Pharm. Bull., 33, 3645-3650 (1985).

20) Оцука Х., Фитохимия, 33, 617—622 (1993).

21) Zhao W., Yang G., Xu R., Qin G., Phytochemistry, 41, 1553—1555 (1996).

22) Кобаяши Х., Карасава Х., Миясе Т., Фукушима С., Chem. Pharm. Bull., 32, 1729—1734 (1984).

23) Xu Z., Yang S., Yang J., Lu R., Zhongcaoyao, 30, 244—246 (1999).

24) Wang SJ, Pei YH, Hua HM, Чин. Chem. Lett., 12, 343—344 (2001).

25) Тези известни съединения бяха идентифицирани чрез сравняване на техните физически данни с проби, получени в търговската мрежа.

26) Pires R., Burger K., Tetrahedron, 53, 9213—9218 (1997).

27) Камал А., Рамана KV, Рамана AV, Babu AH, Тетраедър: Асиметрия, 14, 2587—2594 (2003).

28) 1H- и 13C-NMR спектрите на 1—6 и свързани съединения (19, 1a, 5a, 14a, 14b) бяха определени с помощта на усилване без изкривяване чрез поляризационен трансфер (DEPT), корелационна спектроскопия с двоен квантов филтър ( DQF COSY), експерименти с хетероядрена множествена квантова кохерентност (HMQC) и хетероядрена множествена връзка (HMBC).

29) Nishizawa M., Kodama S., Yamase Y., Kayano K., Hatakeyama S., Ya mada H., Chem. Pharm. Bull., 42, 982—984 (1994).

30) Yoshikawa M., Ueda T., Matsuda H., Yamahara J., Murakami N., Chem. Pharm. Bull., 42, 1691—1693 (1994).

31) Matsuda H., Shimoda H., Uemura T., Ueda T., Yamahara J., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Bull., 47, 1753—1758 (1999).

32) Damtoft S., Jensen SR, Nielsen BJ, Phytochemistry, 24, 2281-2283 (1985).

33) Уатанабе К., Такада Й., Мацуо Н., Нишимура Х., Biosci. Биотехнология. Biochem., 59, 1979—1980 (1995).

34) Takikawa H., Yamazaki Y., Mori K., Eur. J. Org. Chem., 229-232 (1998).

35) Kitagawa I., Fukuda Y., Taniyama T., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Bull., 39, 1171—1176 (1991).

36) Ямагучи К., Шинохара С., Коджима С., Содеока М., Цуджи Т., Biosci. Биотехнология. Biochem., 63, 731-735 (1999).