Невроендокринно-имунна функция на Cistanche Deserticola и неговите продукти за варене на оризово вино в модел на плъх, индуциран от глюкокортикоиди-Ⅱ

3.2.4. Имунохистохимия

Невронната апоптоза се контролира от много апоптотични и антиапоптотични гени, главно гена Bax, стимулиращ апоптозата, и антиапоптозните гени от генното семейство Bcl-2. Bcl-2 е локализиран в органели, произвеждащи реактивен кислород, като митохондриите, ендоплазмения ретикулум и ядрените мембрани. Bcl-2 има малко въздействие върху свободните кислородни радикали, но можепредотвратяване на окислителното увреждане на клетките. Bax се транспортира от цитоплазмата към митохондриалната мембрана, променя структурата на митохондриалната мембрана и насърчава освобождаването на цитохром с и индуцирането на апоптоза.

ЕСТЕСТВЕН CISTANCHE TUBULOSA ЗА ПОДОБРЯВАНЕ НА СЕКСУАЛНАТА ФУНКЦИЯ PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Имаше експресия в надбъбречната цитоплазма на Bax и Bcl-2 протеин. Оцветяването показва всички жълти частици. В сравнение с тази на групата BC, средната оптична плътност на протеина Bax в групата MC се повишава значително (P< 0.01). Compared to that of the MC group, the average optical density in the CD-LD and WCD-LD groups decreased significantly (P < 0.01) (Figure 5(a)).

Фигура 5(b) показва, че в сравнение с тази на групата BC, средната оптична плътност на протеина Bcl-2 в групата MC намалява значително (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density in the WCD-HD and CD-HD groups increased significantly (P < 0.01), while those of the WCD-MD and CD-MD groups increased (P < 0.05).

Протеинът каспаза-3 е локализиран главно в цитоплазмата в оригиналната си форма в нормалните тъкани и има ниска експресия. Положителните сигнали са бледожълти или кафеникавожълти. В сравнение с тази на групата BC, експресията на каспаза-3 в групата MC се повишава значително (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the expression of caspase-3 in the WCD-HD and WCD-MD groups increased (P < 0.05) (Figure 5(c)).

В нормалните тъкани експресията на Fas гена е намалена и положителният сигнал за in situ хибридизация е кафеникавожълт. Както е показано на фигура 5 (d), в сравнение с тази на групата BC, средната оптична плътност на Fas протеина в групата MC се увеличава (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density in the WCD-HD and WCD-LD groups improved (P < 0.05) (Figure 5(d)).

Протеинът FasL се намира главно в клетъчната мембрана или цитоплазмата и неговите положителни сигнали са кафяви. В сравнение с тази на групата BC, средната оптична плътност на FasL гена в групата MC се повишава значително (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density of the FasL gene in the WCD-HD, WCD-MD, CDHD, and CD-MD groups increased significantly (P < 0.01) (Figure 5(e)).

Резултатите показаха, че CD и WCD могатиндуцират апоптоза във възпалителни клеткии намалява увреждането на надбъбречните жлези чрез насърчаване на експресията на протеина FasL и свързване с протеина Fas, активиране на протеин каспаза-3 и задействане на каспазна каскада. Ефектът от групата WCD-HD беше най-добър.

3.3. Определяне на имунната функция

3.3.1. Индекс на имунните органи

В сравнение с тези на групата BC, тимусният коефициент и индексът на далака на групата MC намаляват значително (P< 0.01). Compared to the MC group, the WCD-MD group had the greatest difference (P < 0.05). The thymus coefficient was almost back to the normal level. For the spleen index, the WCDMD, WCD-LD, and CD-MD groups showed significant differences compared with that of the MC group (P < 0.01) (see Figure 6). Therefore, WCD and CD treatment could protect the immune organs, and the effects of WCD were better. 

ЕСТЕСТВЕН CISTANCHE TUBULOSA ЗА ПОДОБРЯВАНЕ НА СЕКСУАЛНАТА ФУНКЦИЯ PHGS75% ECH 30% ACT 12%

3.3.2. Откриване на Т-лимфоцитни субгрупи в периферна кръв

Процентът на CD4+ клетки в горния ляв квадрант и CD8+ клетки в десния долен квадрант в BC и всяка лекарствена група е по-висок от този в MC групата. В сравнение с това на групата BC, съотношението на CD4+ThCD8+ намалява значително в групата MC (P< 0.01). Compared to that of the MC group, the ratio of CD4+ThCD8+ increased significantly in the PC group, the WCD group, and the CD-HD group (P < 0.01) (Figure 7).

3.3.3. Определяне на нивото на IL-10, IL-6, IL-2, TNF-Α и IFN-C в серума

Фигура 8 показва, че в сравнение с това на групата на BC, нивото на IL-6, TNF- и IFN-c се повишава значително (P< 0.01). The level of IL-10 and IL-2 decreased in the MC group. Compared to that of the MC group, the level of IL-6, TNF-α, and IFN-c decreased and IL-10 and IL-2 increased in serum in each of the drug groups. The effect of WCD was better than the effect of CD, especially in the WCD-MD group, in which the effect was close to that of the PC group.

3.3.4. Резултати от експеримент за наблюдение с микроскоп на Lymus Tissue

Фигура 9 показва, че в групата с BC присъства голям брой лимфоцити. Лимфоцитите и ретикулоцитите бяха свободно подредени в центъра с разпръснати кръгли или овални тимоцити. Няма некроза, възпалителна клетъчна инфилтрация и необичайни промени.

Групата MC показа голямо количество тъкан от лимфоидна некроза, с нарушено разположение на лимфоцитите и ретикулоцитите в центъра. Кръгли или овални тимоцити изчезнаха, очевидна беше масивна клетъчна дегенерация или некроза и имаше възпалителна клетъчна инфилтрация с абнормни патологични промени.

В CD групите морфологичните характеристики на лимфоцитите се нормализират и подреждането на централните лимфоцити и ретикулоцити е почти нормално. Кръглите или овалните тимоцити са се възстановили, но са останали малък брой дегенеративни или некротични лимфоцити и инфилтриращи възпалителни клетки.

В групите WCD и PC групата морфологичните характеристики на лимфоцитите бяха по-добре ремонтирани. Лимфоцитите и ретикулоцитите в центъра бяха добре подредени, кръглите или овални тимоцити бяха почти нормални, но остана малък брой инфилтриращи и дегенеративни лимфоцити.

3.4. Генна експресия на CaM протеин

Стойността на RQ (CaM иРНК -актинова иРНК) се счита за изследване на експресията на CaM иРНК. RQ на групата BC беше 1. Експресията на CaM mRNA в хипоталамуса в групата MC се увеличи значително (P< 0.01), while the value decreased in the WCD-HD, WCD-MD, WCDLD, and CD-HD groups (P < 0.05) (Figure 10). The expression of CaM mRNA in the hypophysis in the MC group was lower than that in the BC group (P < 0.01). The expression in the WCD-HD, WCD-MD, WCD-LD, CD-HD, and CD-LD groups increased (P < 0.05), and the effect in the WCD groups was better than the effect in the CD groups.

4. Дискусия

Китайската фармакопея [2] записва, че CD и WCD могат да се използват в клиниката като основни видове отвари. След като се запари с оризово вино,против стареене и тонизиращ бъбречно-ян ефектбяха подобрени. Чрез UPLC-QqQ-MS открихме количествените промени в химическата материална база по време на процеса на варене на оризово вино. Иридоидните гликозиди са нестабилни и съдържанието на тези гликозиди намалява, дори става неоткриваемо. Съдържанието на фенилетанол гликозиди също се променя, което може да предизвика промени във фармакодинамиката и клиничния ефект.

ЕСТЕСТВЕН CISTANCHE TUBULOSA ЗА ПОДОБРЯВАНЕ НА СЕКСУАЛНАТА ФУНКЦИЯ PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Класическият модел на бъбречно-ян дефицит беше репликиран чрез подкожно инжектиране на кортикостерон [19]. Предозирането на кортикостерон може да инхибира секрецията на CRH в хипоталамуса. Междувременно секретът на ACTH също беше инхибиран. Нивото на хормона на надбъбречната кора намалява и по този начин функцията на HPA оста е намалена. Хипофункцията на HPA оста е често срещана характеристика на бъбречно-ян дефицит [20]. След това плъховете показват феномен на "изчерпване" и симптомите са в съответствие с тези на дефицит на бъбречен Ян в клиниката.

В групата на MC нивото на CRH, ACTH, T и CORT в серума на плъхове намалява значително (P< 0.01). After being treated by CD and WCD, the content of CRH, ACTH, T, CORT, and cortisol all increased to some degree, and the effect of WCD-MD was the best, almost equal to that in the PC group. These results indicated that the relative hormone balance in the HPA axis had been destroyed in the MC group, CD and WCD could improve the functional recovery of abnormal adrenal axis hormone levels, but the effect of WCD was better.

Модулирането на дела на членовете на семейството Bcl-2 е един от основните механизми, чрез които FasThFasL медиира пътя на рецептора на смъртта, а семейството Bcl-2 регулира митохондриалния път [21]. Факторът, инхибиращ апоптозата Bcl-2 и факторите, предизвикващи апоптоза, като Bax, всички принадлежат към семейството Bcl-2 [22]. Клетъчната апоптоза може да се определи от относителното съотношение на фактори, инхибиращи апоптозата, и фактори, предизвикващи апоптоза [23]. Митохондриите имат функцията на централни контролни точки за много форми на апоптоза [24]. Настоящото проучване показа, че CD-MD и WCD могат да изведат експресията на Bax и да увеличат Bcl-2 доподобряване на бъбречно-ян дефицита. Fas е основният рецептор на смъртта, който индуцира апоптоза чрез лигиране с Fas лиганда (FasL) [25]. Експресията на Fas и FasL в групата MC се увеличи, докато тази експресия се увеличи значително в групата WCD-MD (P< 0.01) compared with the MC group. Both FasThFasL and BaxThBcl-2 systems transduce apoptotic signals to the caspase family [26]. Caspase-3 is one of the pivotal proteinases that initiate cell apoptosis. The activation of caspase-3 indicates that apoptosis enters an irreversible stage [27]. The expression of caspase-3 in the MC group increased and increased significantly in the WCD-HD and WCD-MD groups (P < 0.05).

Дефицитът на имунната функция е една от важните прояви на бъбречно-ян дефицит [28]. В това проучване открихме, че индексът на далака и тимуса на WCD-MD групата се възстановява значително (P< 0.01, P < 0.05). The immune response of the immune system is regulated mainly by the Th subgroups [29]. IL-2 is the growth factor for T cells, secreted by T cells and macrophages, participates in inflammatory regulation, regulates immunity, and increases infection resistance [30]. The level of IL-2 in the MC group decreased (P < 0.01), and after treatment with CD and WCD, the level of IL-2 recovered. IL-6 and TNF-α are proinflammatory cytokines. Increased levels of IL-6 and TNF-α cytokines cause cytokine imbalances and exacerbate inflammation. The levels of IL-6 and TNF-α increased in the MC group, while after treatment, the levels of IL-6 and TNF-α decreased. T cells are divided into CD4 cells and CD8 cells, and the CD4+ThCD8+ ratio can be used as an important index of immune regulation [31]. CD4+ThCD8+ in the MC group decreased (P < 0.01), while in the WCD and CDHD groups increased (P < 0.01).

HPA оста е най-важната регулаторна система, тъй като регулира глюкокортикоидната секреция и ендокринната система за поддържане на секреторната функция на надбъбречната кора [32]. Свръхекспресията на CaM mRNA в тъканта на хипоталамуса е свързана с дефицит на бъбречен Ян. CD и WCD могат да блокират калциевите канали, да инхибират експресията на CaM mRNA в хипоталамуса и да намалят притока на калций, като по този начин намаляват активността на Ca2+·CaM комплекса.

Образуването на бъбречно-ян дефицит е процес на развитие на хронично заболяване. Бъбрекът вече не е чисто анатомично понятие, а е общ термин за невроендокринния имунитет и пикочно-половата система. Невроендокринно-имунната (NEI) мрежа е важна интегрирана регулаторна система [33]. CD и WCD могат да регулират функцията на HPAT оста и да подобрят възстановяването на бъбречно-ян дефицита. Този резултат предоставя експерименталната основа за клиничната превенция и лечение на бъбречно-ян дефицит.

ЕСТЕСТВЕН CISTANCHE TUBULOSA ЗА ПОДОБРЯВАНЕ НА СЕКСУАЛНАТА ФУНКЦИЯ PHGS75% ECH 30% ACT 12%