Маслинови листа (Olea Europaea L) Екстракт Натоварени липидни наночастици: Оптимизация на параметрите на обработка по кутия-Behnken статистически дизайн, Ин-витро характеризиране, и оценка на анти-оксидант и анти-микробна дейност

Моля, свържете се сoscar.xiao@wecistanche.comза повече информация

Абстрактен:Настоящото проучване има за цел да подготви и оцени твърди липидни наночастици(SLNs) на маслинови стрехи екстракт прах(OLP), които съдържаха много анти-оксидантни и антимикробни агенти като олеуропеин, естествен полифенол. Основен въпрос относно OLP беше нестабилността поради условията на околната среда, а оттам и компрометираната биоактивност. За да се преодолее този проблем, SLNs са проектирани от горещи хомогенни, последвани от ултразвукова техника за защита на лекарството и подобряване на неговата антиоксидантна и антимикробна активност. Липиди като компритол 888ATO и повърхностноактивни вещества като tween 80 са били използвани за разработването и стабилизирането на SLNS и оптимизация е направено от Box-Behnken статистически дизайн(3x3). Оптимизираната партида (F9)показа размер на частиците,ефективност на заплитане,PDI,и zeta потенциал 277.46 nm,80.48%,0.275. и съответно -23,18 mV. Оптимизираната формулировка (F9) проявява модел на устойчиво освобождаване до 24 h с кинетичен за освобождаване от първа поръчка(R²=0,9984) и механизмът на освобождаване на наркотици е установено, че е фикийски дифузионен тип (n=0,441). При проучването за стабилност може да се установи, че формулировката на SlNs е стабилна. Анти-окисляване и анти-микробни изследвания са проведени на оптимизирана формулировка и констатации предполагат, че SLNs показа подобрена радикална продухване дейност и анти-микробна активност срещу Грам-положителен(Staphylococcus aureus)and Грам-отрицателен(Pseudomonas aeruginosa)бактерии. Накрая беше заключено, че разработените SlNs са в състояние да защитят и да бъдат подходящи за доставката на OLP.

Ключови думи:Олеа европаеа, олеуропеин,твърди липидни наночастици, екстракт от маслинови листа,анти-оксидантна активност, анти-микробна активност

Моля, кликнете тук, за да научите повече

1 Въведение

Семейство Dicotyledons Oleaceae се състои от около 30 рода на малолистни растения, включително маслинови дървета и тя има свързани около 600 вида. Oleaceae членове са добре отглеждани в актуални и под-умерени причини на Азия?. Маслиново дърво(Olea europaea) масло, получено от различни части като плодове, листа и т.н. има много ползи за здравето при редовна консумация. Традиционно тя е била използвана като народно лекарство за отстраняване на различни видове февъри и други проблеми, свързани с тялото2).

Екстракт от маслинови листа проявява няколко терапевтични дейности като анти-хипертонични, хипогликемични, антимикробни, хипоурикемични и др. Демонстрирана е и докладвана анти-вирусна активност срещу HIV-I инфек-он. Освен това, олеуропеинът(типичен секоиридоид), получен от маслиновото растение, проявява хипохолестеролемична и хипогликемична активност с мощен анти-оксидант и както и противовъзпалителна активност. Разграждане продукт на олеуропеин т.е. хидрокситирозол също изложени всички по-горе споменават дейности заедно с потенциални свободни радикални продухване действие5.биофлавоноидиАсоциация всички тези терапевтични дейности, засегнати за маслиново растение го прави важен сътрудник в областта на здравеопазването· 4).

В този проект авторите се занимават с анти-микробните и анти-оксидантните свойства на екстракта от маслинови листа. Анти-микробната активност на екстракта от маслини се дължи на р-хидроксибензоена киселина, циклотрисилоксан хексаметил, Циклопедасилоксан октаметил, и Циклопедентасилоксан десметил, ванилик, кафеен, протокатечуинов, спринцовка, галова киселина и др. Други съставки като олеуропеин, кверцетин, тирозол, и олеанолова киселина също са отговорни за анти-микробна активност. Антимикробният потенциал на всички тези вещества е докладван преди това от няколко изследователи срещу бактерии, дрожди, гъбички, вируси, ретровируси, и други паразити,2).

Cistanche може да анти-стареене

Диетичният прием на естествени анти-оксидантни източници като плодове и листа са били придобити много внимание и показва положителен ефект върху здравето на човешките същества. Резултати от много епидемиологични изследвания изследвани, че приемът на богата на полифенол храна намалява честотата на коронарна артериална болест(CHD). CHD като MI(инфаркт на миокарда), IS(исхемичен инсулт) и т.н. са свързани с атеро-склероза". Последните изследвания изследвани, че окислително увреждане е важен етиологичен фактор за напредъка на атеросклерозата, Особено, според оксидативната теория на стреса, оксидативна модификация на липопротеин с ниска плътност(LDL)се смята, че играе ключова роля в развитието на атеросклероза. Ето защо инхибирането на такъв процес се счита за важен терапевтичен подход. Различни важни съставки като Oleuropein (хидрокситирозол, тирозол), вербаскозид(известен също като ac-toeside или Калинин), лигстрозид,апигенин-7-глюкозид,ди-козметичен-7-глюкозид, лутеолин, катехин и др са получени за листата на маслина и проявяващи анти-оксидантна активност, както е съобщено по-рано. Хидрокситирозол е основното маслиново листо олеуропеин, който има патент анти-оксидант свойства).

Освен тази дейност, екстракт от маслинови листа изложени други фармакологични дейности като противовъзпалителни",12),анти-рак8.14), анти-вирусни5),хипогликемичниl4), hypolipidemic17, анти-тромбоцитната агрегация. Агенция като ЕОБХ(Евро-агенция за безопасност на храните)и EMA(Европейска агенция по медицина)дадоха своята оценка на терапевтичната приложимост на екстракторите от маслинови листа. Наред с основната приложимост, продуктите за екстракция на маслинови листа се страдат от проблеми с нестабилност в атмосферни условия(температура, светлина, и кислород), както и биологични условия и оттам проявяват лоша биоактивност20,21).купи cistancheЗа подобряване на стабилността са разработени различни нано-базирани формулировки за изследване на различната активност на екстракта от маслинови листа. Тези формулировки включват нано-емулсия (W/O, както и множество видове)2), комплекси за включване, спрей сухи продукти?4),електростатична екструзия25, Биполярни комплекси), нано-липозоми20, Нано-емулсия, микро-капсулация,PLA наночастици2,и NLCs0.Различни проблеми са свързани с тези формулировки като ниска стойност на добив, времеемка процедура, компрометирана ефективност на запушване, остатъчно замърсяване с разтворител, и висок размер на частиците. Така че, за да се регулират тези недостатъци, липидните наночастици дойдоха в съществуване. Липидните наночастици es-специално твърди липидни наночастици(SLNs)предлагат много предимства като по-добра ефективност на заплитане, контролиран размер на частиците, биологична съвместимост, биоразградимост, и лекота на приготвяне. Освен това, липидите, използвани за приготвянето на SlNs, имат известно синергистично действие върху противовъзпалителното действие заедно с увлекателното лекарство. Към днешна дата не е разработена формулировка, базирана на твърди липидни наночастици(SLNs)за изследване на неговите анти-микробни и анти-оксидантни свойства, както и за подобряване на стабилността на екстракт от маслинов отпуск продукт.

Поради това изследователската работа беше насочена към "развитието на твърди липидни наночастици(SLNs)за маслинови листа (Olea europaea L.) екстракт на прах(OLP). Активните принципи бяха разделени чрез извличането на маслинови листа с помощта на етанол. Разтворителят е отстранен чрез изсушаване, за да се получи сухият прахов продукт. Маслинови листа екстракт мощност(OLP)е включена в SLNs(OLP-SLNs)и оптимизация е направено от експертен софтуер дизайн(Модел 8.0.7.1)с помощта на Box-Behnken дизайн. Три фактора като лекарство(OLP)към липидното съотношение, концентрацията на повърхностноактивни вещества(%, Tween 80), и скоростта на хомогенизация(rpm)бяха взети като независими параметри, и фактори като размер на частиците, ефективност на запушване, и индекс на полидисперсност(PDI)бяха избрани като параметри за де-висулка. Оптимизирана формулировка е оценена за морфологично проучване, DSC проучване, ин-витро освобождаване проучване, и проучване на стабилността. И накрая, бяха оценени антимикробни и антиоксидационни дейности, за да се провери анти-микробният и анти-оксидантният потенциал на развитата формулация на SlNs.

2 Материали и методи

Маслинови листа са получени от местната градина. Пресни листа бяха изсушени и на прах за екстракция. Различни липиди като скъпоценни ATO5, compritol 888 ATO са били набавени от Gattefosse(Германия). Глицерил моностеарат (GMS), палмитинова киселина, стеаринова киселина tween 80 и т.н. са закупени от централна наркокъща ltd(Ню Делхи, Индия).2, 2-Дифенил-1-Picryl хидроксил-хидрат свободни радикали(DPPH)са били набавени от Merck(Darmstadt, Германия). Аскорбинова киселина, калиев дихидрогенфосфат, амониев ацетат, метанол, натриев хидроксид, полоксамер 188, етанол, хранителен агар, и диализа чанта(M.Wt отрязани 12,000 kD)бяха набавени от Сигма Олдрих(Сейнт Луис, САЩ). Всички останали химикали, използвани за изследването, са аналитична степен.

2.1 Екстракция на фенолни компоненти

Пресни листа от маслина бяха изсушени и на прах за бивше сцепление. Активните принципи бяха извлечени от силата с помощта на разтворител(етанол: вода, 4:1 v/v). В колбата за екстракция е взето достатъчно количество прах(250 mg) и разтворителят е добавен(1000 mL)етанол: вода, 4:1 v/)и сместа непрекъснато се възбуди с продължителност 24 ч. След тази стъпка физическата смес се филтрира и разтворителят се изпарява до сухота при 40°C, за да получи праха).

2.2 Подготовка и оптимизация на SlNs: Предварителни

скрининг проучване и предварителна оптимизация на формулировките променливи За избор на подходящ липиден, повърхностноактивен, хомогенизационни скорост & време, времето за ултразвук и т.н., бяха проведени предварителни проучвания. Изборът на подходящ липид зависи от лекарствената разтворимост в липида и подборът на повърхностноактивно средство е в зависимост от разтворимостта на липидите при повърхностноактивно средство.

Съответният липид(100 mg)е разтопен над точките му на топене(около 10°C по-горе)във флакона, последван от учредяването на лекарството(OLP)с непрекъснато разклащане. Появата на светло блед цвят показва крайната точка. Подобни експерименти са извършени за избор на подходящи повърхностноактивни вещества.

2.3 Експериментален дизайн

В настоящото проучване беше приложен BBD на експертен дизайнерски софтуер с три фактора и три нива за целите на оптимизацията. В проучването три фактора като лекарство към липидно съотношение(A,1:3-1:6),концентрация на повърхностноактивни вещества(B,%,1,5-4.5%),и хомогенизация скорост(C,rpm,3000-6000 об/мин,, за два з)са взети като независими параметри и пар-титлата размер(nm, Y1), ефективност на завличане(%,Y2)и PDI (Y3)са взети като зависими параметри. Целта на прилагането на този дизайн беше да се оптимизират горепосочените каза три независими параметъра и да се постигне оптимален размер на частиците, максимална ефективност на заплитане, и най-малко възможно PDI. Данните бяха монтирани в софтуера за експертен дизайн за BBD15). Генерирани са общо 17 партиди с 5 партиди, които имат сходен състав(пет центрови точки)(Таблица 1). Полиномиалното уравнение от втори порядъчен ред е използвано за доказване на влиянието на различни независими параметри върху размера на частиците, ефективността на заклещването, както и PDI.

2.4 Разработване на SlNs

OLP-заредените SlNs бяха подготвени чрез гореща хомогенизация, последвана от метода на ултразвук. Съставът на различни OLP-заредени SLNs партиди е даден в таблица 1. На първо място, липидът(compritol 888 ATO)е разтопен около 10°C от неговата точка на топене и желаното количество OLP е добавено(1:3-1:6 лекарство към липидното съотношение). Междувременно необходимото количество(1,5-4,5%)повърхностноактивно средство се разтваря в дионизирана вода и температурата на тази фаза се поддържа същата като тази на липидната фаза. След това водената фаза е включена в липидната фаза постепенно и е подложена на гореща хомогенизация при пръстен с променлива скорост(об/мин, 3000-6000 об/мин, два з), за да получите разпръскването на slns на курса. Получената емулсия е допусната да

охлажда се и след това се ултразвукова за 10 мин при 100% амплитуда с помощта на ултразвук(Тип сонда, Vibra-Cell'VCX 130; Sonics, CT, САЩ)за получаване на крайната SLNs дисперсия. Дисперсията е събрана в стъклен флакон и се съхранява в хладилник за по-нататъшно проучване. По същия начин, празни SlNs са разработени без API(лекарство).

2.5 Характеризиране на OLP-SLNs

2.5.1 Оценка на размера на частиците, PDI и zeta потенциала

Фотон корелация спектроскопия(PCS)с помощта на zeta sizer машина(Malvern, нано ZS 90, Malvern инструменти, Великобритания)е бил използван за измерване на средния размер на частиците и индекс на полидисперсност(PDI)на различни партиди. Температурата се поддържаше при 25°C, а ъгълът на разсейване беше определен на 90°.цистанчЗа разреждането на оригиналната дисперсия OLP-SLNs е използвана дионизирана вода. Zeta потенциал, който показва повърхностния заряд, е определен с помощта на същия инструмент с якост на електрическото поле около 20 V/cm27

2.5.2 Морфологично проучване

Трансмисионен електронен микроскоп(TEM, Fei електронна оптика, Япония)с помощта на медна решетка покритие въглерод е бил използван за изследване на морфологията и формата на подготвени OLP-заредени SLNs(оптимизирана партида F9). Отрицателно оцветяване с петно от фосфотунгстична киселина(2% масови части в секунда, продължителност 20-30 секунди)е извършено, за да се оцвети пробата OLP-SLNs, последвана от изсушаване при стайна температура. Накрая пробата е била засекана от TEM.

2.5.3 Оценка на ефективността при запиране

Ефективността на заплитане(ЕЕ)е определена чрез изследване на невключеното количество лекарство, присъстващо в дисперсията OLP-SLNs. Техниката за центрофугиране е използвана за тази цел. Измерено количество(10 mL)на OLP-SLNs е взето в центрофужна тръба и се оставя да се утаи с помощта на охлаждаща центрофуга(Remi, Индия)при 12000rpm в продължение на 15 минути. Наличието на невключено лекарство е анализирано от UV-видим спектрофотометър(Модел 1800, Shimadzu . Япония)при 230 nm. Процентът на заплитането на наркотици е определен по следната формула(уравнение 1):

2.5.4 Диференциално сканиране калориметрия(DSC)проучване

Целта на това проучване е да се оцени термично поведение на различни формулировки viz чист OLP, compritol 888 ATO, и оптимизиран OLP-SLNs формулировка(F9)с помощта на диференциално сканиране калориметрия(Mettler, Toledo, САЩ). Всяка проба е опакована в алуминиев тиган и сканирана при температурния диапазон от 20-350°C(скорост 10°C/min)с помощта на празна запечатана тиган като препратка в инертен атмосфера (азот). Бяха получени и интерпретирани криви на DSC. 2.5.5 Проучване за освобождаване на наркотици(%)

Проучването за освобождаване на наркотици на оптимизирана партида(F9)е направено от Франц дифузионна клетка с помощта на диализа мембрана. Преди прилагането на диализната мембрана, тя е разработена чрез лечение на 0,35% w/v разтвор на натриев сулфит при 80°C за 1-2 min, последвано от подкисляване с HSO(0,2%,v/v)и след това се съхранява за 12 h в дестилирана вода. Буфер за физиологичен фосфат (рН 7.4)е попълнен в рецепторното отделение и SLN дисперсия(F9,1 mL)е взета в отделението за донори. Експериментът е извършен при 37±0,5°C с непрекъснато разбъркване(50 об/мин). Аликвоти(1 mL)са взети от рецепторното отделение на предварително определени времеви интервали и количеството лекарство, което присъства във всяка проба, е било открито от UV-видимия спектрофотометър при 230 nm. Подходящият освобождаващ кинетик от оптимизирани SlNs е бил засякъл чрез вместяване на данните за освобождаването в нула, първо, моделът на Higuchi и модела Korsmeyer-Peppas, както е дадена таблицата 2, и стойността на R(Коефициент на корелация)е определена. Моделът с най-висока R-стойност е смятан за оптимизиран модел8).

Тази статия е извлечена от J. Oleo Sci. 70, (10) 1403-1416 (2021)