Част 1: Карбамилиран сортилин, свързан със сърдечно-съдовата калцификация при пациенти с хронично бъбречно заболяване

За контакти: Одри Ху Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Имейл:audrey.hu@wecistanche.com

Част 1: Карбамилиран сортилин, свързан със сърдечно-съдова калцификация при пациенти с хронично бъбречно заболяване

Ключови думи: хронично бъбречно заболяване,сърдечно-съдови, бъбреци

Преводна декларация

Пациенти схронично бъбречно заболяванеса силно податливи на развиващи сеСърдечносъдовиболест.Хронично бъбречно заболяване-специфичниСърдечносъдовирискови фактори са преди всичко неизвестни. Демонстрираме, че циркулиращият сортилин е пост-преводно модифициран чрез карбамилиране при пациенти с намаленабъбрекфункция. Сортилин карбамилиране води до по-висок свързващ афинитет към интерлевкин-6 и насърчава артериална калцификация ex vivo. Освен това карбамилираният сортилин е рисков фактор за наличието и прогресията на калцификацията на коронарната артерия. Резултатите ни сочат карбамилирания сортилин като потенциална терапевтична цел за възпрепятстванеСърдечносъдовикалцификация при пациенти схронично бъбречно заболяване.

Въвеждането

Сортилин, вътреклетъчният рецептор за сортиране, е идентифициран катоСърдечносъдовирисковия фактор в общата популация. Пациенти схрониченбъбрекболестса силно податливи на развитие на сърдечносъдови усложнения като калцификация. Въпреки това, специфичнихрониченбъбрекболест-индуцирани посттранслационни протеинови модификации на сортилин и връзката им сСърдечносъдовикалцификация остават неизвестни. За да проучим това, разгледахме две независимихрониченбъбрекболесткохорти за карбамилиране на циркулиращия сортилин и открити повишени карбамилирани сортилинов лизин остатъци в извънклетъчното владеление на сортилин сбъбрекнамаляване на функцията с помощта на целева масова спектрометрия. Структура анализ прогнозира променен лиганд свързване от карбамилиран sortilin, който е проверен чрез свързване проучвания с помощта на повърхностния плазмон резонанс измерване, показващ повишен афинитет на интерлевкин 6 към ин витро карбамилиран sortilin. По-нататък, карбамилирани sortilin повишена съдова калцификация ин витро и ex vivo, че е ускорено от интерлевкин 6. Образна диагностика чрез масова спектрометрия на човешки калцифицирани артерии разкри in situ карбамилиран сортилин. При пациенти схрониченбъбрекболест, сортилин карбамилиране е свързано с коронарна артериална калцификация, независима от възрастта ибъбрекфункция. Освен това пациентите с карбамилиран сортилин показват значително по-бързата прогресия на калцификацията на коронарните артерии от пациентите без сортилин карбамилиране. По този начин карбамилираният сортилин може да бъде рисков фактор заСърдечносъдовикалцификация и може да допринесе за повишениСърдечносъдовиусложнения при пациенти схрониченбъбрекболест.

Систанчеможе да избегнехрониченбъбрекболест.

Около 1 на 10 души в световен мащаб опитхрониченбъбрекболест.1 Нарушенабъбрекфункция е основен независим рисков фактор заСърдечносъдовизаболеваемост и смъртност и смъртност по всички причини.1,2 Всъщност пациентите схрониченбъбрекболесте много по-вероятно да умрат отСърдечносъдовисъбития, отколкото да се развие диализа-изискваща терминална бъбречна Q14 болест.3 Излишното калциево минерално отлагане в рамките на съдовата тъкан, наблюдавано вхрониченбъбрекболестпациентите допринася главно за повишенатаСърдечносъдовириск.4хрониченбъбрекболестулеснява постпреводнтационната модификация (ПТМ) на протеини.5 ПТМ, от своя страна, са били свързани сСърдечносъдовикалцификация,6 което предполага, че по-доброто разбиране на ПТМ вхрониченбъбрекболест-индуцираните процеси на калцификация биха могли да разкрият нови терапевтични цели. Въпреки това, до сега специфичнихрониченбъбрекболест-свързани протеинови модификации, свързани сСърдечносъдовикалцификацията е неизвестна.

Сортилин е повсеместно изразен член на вакуумния протеин сортиране 10 протеин семейство на вътреклетъчни сортиране рецептори.7 Това е еднопропуск тип I трансмембранен протеин с различни роли в сортиране на протеини, трафик, и клетъчна сигнализация. Като рецептор за ендоцитоза, сортилинът може да задейства интернализацията на лигандите от клетъчната повърхност чрез ендоцитоза и да сортира лигандите между вътреклетъчните отделения, Като транс-Голги мрежа, ендозом, лизозом, и секреторна пътека.8 Предклинични in vivo доказателства предполага важна роля на сортилин в патогенезата на съдови и метаболитни нарушения чрез принос към артериалното възпаление на стената и калцификация, дисрегламентиран липопротеинов метаболизъм, и захарен диабет тип 2, всичкиСърдечносъдовирискови фактори.7 В човешките съдови гладки мускулни клетки (хСМС) вътреклетъчният сортилин регулира натоварването на прокалцифичната протеинова тъкан неспецифична алкална фосфатаза (TNAP) в извънклетъчни везикули, По този начин се дава потенциалът за калцификация, който допринася за образуването на микрокалцификация.9 Ектодомеинът на плазмената мембрана-свързан сортилин може да се пролее и секретира в циркулацията.7 В кохорта от мъже, обитаващи общността, на възраст >50 години, съобщихме за асоциация на високи нива на сортилин серум с аортна калцификация иСърдечносъдовисъбития, което предполага сортилин катоСърдечносъдовирисков фактор в общата популация.10 Роля на сортилин вхрониченбъбрекболест, популация пациенти с подчертано повишаване наСърдечносъдовикалцификация, продължава да не се поддава на елюцитация. Повечето проучвания са се съсредоточили върху функцията на клетъчния сортилин, а не върху изследването на биологичната функция на циркулиращата разтворима форма.7 Следователно, постигането на по-добро разбиране на механистичната връзка между циркулиращия сортилин и регулаторното въздействие на ПТМ вхрониченбъбрекболестще разшири познанията за сортилин вСърдечносъдовикалциране.

Това проучване разпитва хипотезата, че ПТМ на циркулиращия сортилин участва в развитието наСърдечносъдовикалцификация при пациенти схрониченбъбрекболест.

полза от Cistanche: лечение на бъбречни заболявания

МЕТОДИ

Сърдечносъдовии бъбречния резултат вхрониченбъбрекболест2–4 Пациенти–Четвъртата оценка на Homburg (ГРИЖА ЗА HOMe) кохорта

Проучването CARE FOR HOMe е описано по-рано подробно.11 За анализа е използвана подгрупа от 97 пациенти.

Дан-НИКАД 1 кохорта

Дизайнът на изследването на датското проучване на ненинвазивно изследване при коронарна артерия (Dan-NICAD 1) изпитване е описано преди това.12 За анализа, Идентифицирахме подгрупа от 97 записани пациенти с прогнозна скорост на гломерулна филтрация (eGFR) >60 ml/ min и извършихме честотно съвпадение въз основа на възраст, пол, индекс на телесна маса, статус на тютюнопушене, захарен диабет, иСърдечносъдовиболест. Идентификацията е извършена заслепена за нива sortilin.СърдечносъдовиЗадълбочена оценка (CARVIDA) кохорта THE CARVIDA е поддлъбна на германскатаХрониченБъбрекБолестпроучване.13 Са използвани само проби от пациенти с CARVIDA, включени в изпитването в Аахен, Германия (n 1/4 78). Компютърната томографска снимка е извършена на КТ скенер с двоен източник (СВЕТКАВИЦА или сила на дефиницията на SOMATOM; Siemens), както е описано по-рано.14 С медиана на времето за проследяване от 4,4 години, 41 от 78 пациенти са се съгласили или са били на разположение за второ компютърно томографско сканиране по време на второто посещение на CARVIDA през 2019/ q15 2020.

Статистически анализ

Данните от експерименталното проучване са представени като средни SD; n показва броя на независимите експерименти или броя на пациентите. Нормалността е тествана с помощта на теста Shapiro-Wilk, и количествено парцел и варианс разнородност са тествани с помощта на теста Brown-Forsythe. Сдвоен или несдвоен 2-опашат Студентски т-тест с равни или неравни варианти е извършен за сравняване на 2 групи. За сравнение сред 3 групи на лечение е извършен 1- или 2-пътен анализ на варианса, последван от Tukey post hoc за данни с нормално разпределение и равно изменение. Данните с изкривени разпределение са оценени от теста Kruskal-Wallis, последван от теста Dunn post hoc. Данните с неравни варианти са тествани чрез welch анализ на варианс, последван от Dunnett T3 post hoc тест.

В клиничните проучвания непрекъснатите данни се представят като средни SD, когато обикновено се разпределят или като медиана и междуквартилен диапазон за променливи с изкривени разпределение. Категоричните данни се представят като проценти. Пиърсън/Фишър c2 тест е бил използван за изучаване на асоциацията между категорични променливи и несдвигател студент t-тест или Mann-Whitney U тест за непрекъснати променливи. Разликите между 3-те групи са сравнени с помощта на 1-пътен анализ на варианса, последван от теста Sidak post hoc. Най-малко квадратни означава многовариатно коригирани номера на карбамилирани сортилинин остатъци са били изчислени с помощта на генерализирани линейни модели, както е описано по-рано.

Обемът на пресмятане на коронарната артерия (CAC) е трансформиран в трупи (т.е., естествен логаритм, ln; ln[CAC + 1]) за намаляване на криволиченето. Бивариатната корелация е оценена с помощта на Eta (1 номинална променлива и 1 метрична променлива) или коефициенти на корелация на Pearson (ако и двете променливи са били метрични). Промяната в обема на ЦАК годишно е изчислена, както следва: [(CAC проследяване – Изходно ниво на CAC) / време за проследяване в месеци] * 12. Анализ на вариацията с промяна в обема на КСА като зависима променлива и термин с фиксиран ефект за карбамилиране (да срещу не) е използван за анализ на прогресия на CAC. Освен това този модел е коригиран чрез използването на анализ на ковариантността за ковариатите CAC на изходно ниво q18 и променливите. P< 0.05="" was="" considered="" statistically="" significant.="" statistical="" analyses="" were="" performed="" using="" graphpad="" prism="" (prism="" software="" inc.,="" version="" 9)="" or="" spss="" (version="">

Систанчеможе да подобрибъбрекфункции ихрониченбъбрекболест.

РЕЗУЛТАТИ

Карбамилираният сортилин се увеличава сбъбрекспад на функцията

Първоначално оценяваме нивата на серума на сортилин прихрониченбъбрекболестот проучването CARE FOR HOMe11 и са установени повишени нива на сортилин в сравнение със съответстваща контролна група с нормалнабъбрекфункция от изпитването Dan-NICAD 1 (Таблица 1). Циркулиращите протеини са склонни към ПТМ прихрониченбъбрекболестQ20 .5 Затова извършихме подробно картографиране на PTM остатъци от циркулиращ сортилин при участници в проучването CARE FOR HOMe и здрави контролни предмети (Допълнителна таблица S1) с помощта на MALDI-TOF/TOFMS. В сравнение с контролните предмети,хрониченбъбрекболестпациенти са имали 8 от 30 лизин остатъци, които са предимно карбамилирани в извънклетъчната домейн на сортилин (Допълнителна таблица S3 Q21 и допълнителна фигура S1). Представителни MS спектри от контролен субект и пациент схрониченбъбрекболестса илюстрирани на фигури 1а и б. Спецификата на сигнала беше подкрепена от MALDI-TOF/TOF-MS/MS спектри (Допълнителна фигура S2A). Количественото определяне разкрихрониченбъбрекболестзависимо от етапа увеличение на карбамилирания брой на остатъчните вещества (фигура 1в) и интензивността на карбамилираните сортилинови пептиди (фигура 1г). Лизин остатък 205 е също толкова модифициран във всичкихрониченбъбрекболестетапи, като има предвид, че остатъчните вещества 95, 260, и 294 по-често са променяни в напредналихрониченбъбрекболестетапи (фигура 1д).

След това оценихме асоциациите между сортилин карбамилиране и изходни характеристики (Допълнителна таблица S2) в проучването CARE FOR HOMe. Наблюдавахме възрастово зависимо увеличение на остатъците от сортилин карбамилиране (Таблица 2). По-ниска бъбречна функция, въз основа на eGFR въз основа на серумния цистатин с и креатинин (eGFRcys-област), и по-високи урея и N-терминал про-мозъка натриуретичен пептид (NT-proBNP) нива са били свързани с по-високи карбамилирани сортилин остатъци (таблица 2). Асоциациите останаха значителни след корекция за възрастта и пола (таблица 2).хрониченбъбрекболестпациенти под Q22 алдостерон антагонист лекарства показва намалена сортилин карбамилиране (таблица 2), като има предвид, че няма разлика в eGFRcys-област (не, 50.6 23.2 мл/мин на 1.73 м2; да, 43.5 22.9 мл/мин на 1.73 м2; P 1/4 0,236) и урея (не, 68,6 40,1 mg/dl; да, 72,3 40,9 mg/dl; P 1/4 0,729) между пациенти със или без алдостеронови антагонисти. Освен урея, миелопероксидазата може да посреднича протеинова карбамилация приСърдечносъдовизаболяване.19 Въпреки това, Сметната палата не установи връзка между общите нива и активността на миелопероксидаза и сортилин карбамилиране (Допълнителни фигури S3A и B).

лечение на бъбречни заболявания:Систанче

Освен това, ние оценихме наличието на карбамилиран сортилин в човешките феморални артерии, използвайки MS образни снимки. Карбамилираният пептид SEDYGK*NFK* (m/z 1172) е силно присъствал в калцифицирани бедрени артерии отхрониченбъбрекболестпациенти и отсъства в некалцифифицирани феморални артерии (Фигура 1е). MS/MS спектри подкрепи идентифицирането на SEDYGK *NFK* (допълнителна фигура S2B). SEDYGK*NFK* се намира в близост до калцифицирани зони в медия туника (Фигура 1g). За разлика от това, интензивността на масовия сигнал на не-пост-преводно модифициран пептид SEDYGKNFK (m/z 1086) е по-висока в контролните артерии (фигура 1е).

Взети заедно, в сравнение с контролите с нормалнибъбрекфункция, пациенти схрониченбъбрекболестимат по-високи нива на серума на сортилин и проявяват постпреводачен карбамилиран сортилин в циркулацията, които могат да бъдат открити и във васкулатурата.

Карбамилираният сортилин насърчава гладкото калциране на мускулните клетки Предвид констатацията ни, че карбамилираният сортилин е локализиран на калцифицирани области, ние след това оценихме ефекта на сортилин карбамилиране върху съдовата калцификация in vitro и ex vivo. За да определим функционалната значимост на сортилин карбамилацията, предизвикахме ин витро карбамилиране на рекомбинантен сортилин (SortCarb) от урея и засякохме подобен модел на остатъци от карбамил-лизин, както е установено при хората in vivo (Допълнителна фигура S4A и допълнителна таблица S4). In vitro, карбамилиране не променя протеин целостта на SortCarb в сравнение с контрол макет-модификация (SortCo), както е оценено чрез гел електрофореза и западната блут (Допълнителна фигура S4B и C). Нито SortCo, нито SortCarb проявяват цитотоксични ефекти върху hSMCs (Допълнителна фигура S5A). SortCo и SortCarb са еднакво взети от хСМС (Допълнителна фигура S5B). При калциране на хСМС SortCarb индуцира проостеогенните преписи ALPL (þ56%; P 1/4 0,039) и RUNX2 Q23 (þ25%; P 1/4 0.014; Фигура 2а и б), както и тъканна неспецифични алкална фосфатаза активност (þ46%; P 1/4 0.007; Фигура 2в), в сравнение с SortCo. На функционално ниво SortCarb значително увеличена матрична калцификация (Фигура 2г и д). Накрая, при модел ex vivo органна култура SortCarb увеличава калцификацията в аортните пръстени на плъховете (Фигура 2е и ж).

полза от Cistanche: лечение на бъбречни заболявания

За да продължите, щракнете върхуТукза част 2.