Част 2: Екстрактите от Cistanche Deserticola могат да противодействат на имуносеценцията и да удължат продължителността на живота при мишки, склонни към стареене 8 (SAM-P8)
Mar 12, 2022
Контакт: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Имейл:audrey.hu@wecistanche.com
3.5. Екстракти dfCistanche deserticola(ECD) Насърчаване.
Апоптоза и инхибиране на некроза на лимфоцити в SAM-P8 мишки. Нивата на некроза и апоптоза в кръвните лимфоцитни популации се анализират чрез двойно оцветяване с Анексин V-FITC V/PI. Това разкрива, че делът на некротичните лимфоцити в SAM-P8mic е значително по-висок, отколкото в контролните животни SAM-R1, докато делът на апоптотичните лимфоцити е по-нисък (Фигура 7). Добавянето на диетата на SAM-P8 мишки с три различни дози ECD е в състояние да инхибира нивата на некроза, наблюдавана в популациите на периферни лимфоцити, докато само двете по-високи нива на добавка на ECD предизвикват значителна промяна в нивото на апоптотичните лимфоцити (Фигура 7).
3.6.Екстракти отCistanche deserticola(ECD) Намаляване на провъзпалителния цитокин IL-6 в SAM-P8 мишки.
Като допълнителен индикатор за способността на ECD да повлиява свързаните с възрастта промени в имунната система, ефектът от хранителните добавки с ECD върху нивото на редица цитокини (IFN-, TNF-, IL-2).IL{{4 }}.IL-10, GM-CSF и IL-3) се анализира с помощта на анализ на масив от цитометрични зърна (CBA), който включва оцветяване с белязани с флуоресцентно багрило антитела, съчетани с улавящи цитометрични зърна. Резултатите (Фигура 8) показват, че възпалителният цитокин IL-6 не е повишен при 8-месечни SAM-P8 мишки в сравнение с контролните SAM-R1 мишки на същата възраст, но е значително увеличен, когато в сравнение с6-месечни мишки SAM-R1 (резултатите не са показани). Въпреки това, диетичните добавки с високи и средни дози ECD успяха да доведат до статистически значимо понижение на плазменото ниво на IL-6 (Фигури 8(a) и 8(b),<>
(IFN-, TNF-, IL-2, IL-10, GM-CSF и IL-3) не показват значителни вариации между третирани със SAM-P8, SAM-R1 и ECD групи мишки (данни не е показано).
4. Обсъждане
Имунната защита срещу новоинвазивни микроорганизми или ендогенни туморни клетки зависи от разнообразието на Т-клетъчния репертоар, който от своя страна разчита на генерирането и поддържането на наивни Т-клетки [19]. По време на процеса на стареене е доказано, че разнообразието от Т-клетъчния репертоар се свива драматично поради прогресивното изчерпване на наивните Т-клетки в периферния резервен пул. Смята се, че именно този недостиг на реагиращи наивни Т-клетки е отговорен за податливостта на възрастните хора към инфекция, рак и лошите резултати след ваксинация [20]. Различни интервенции, включително ограничаване на калориите [7], упражнения [21] и добавяне на витамин Е [8], са използвани за успешно попълване на наивни Т клетки и по този начин удължаване на продължителността на живота и намаляване на появата на инфекции и рак сред възрастните хора. В това проучване ние демонстрирахме, че ECD е в състояние да повиши нивото на наивните Т клетки в периферния пул и има съпътстващо удължаване на продължителността на живота и намаляване на честотата на образуване на тумори при мишки с ускорено стареене (ECD терапевтична група срещу SAM-P8 ,0 срещу 1/6). Следователно изглежда разумно да се заключи, че способността на ECD да обърне зависимото от възрастта изчерпване на периферните наивни Т-клетки може да допринесе за неговите известни ефекти при намаляване на свързаните с възрастта заболявания, което произтича от дългосрочни клинични наблюдения.
5. Материали и методи
5.1.Материали.
При нормалния имунен отговор, след задържането и елиминирането на чужд антиген, повечето от клонално разширените Т-клетки претърпяват апоптоза, като само малка част се запазва като Т-клетки на паметта. Следователно, с остаряването на имунокомпетентния организъм, Т-клетките на периферната памет се натрупват в резултат на експозиция през целия живот на чужди антигени, превръщайки наивните Т-клетки в клетки на паметта [22,23]. Редица проучвания предполагат, че дефектите на апоптозата на лимфоцитите при по-възрастни животни и хора също допринасят за разширяването на Т-клетъчното отделение на паметта [24,25]. В допълнение, едно скорошно проучване показа, че изобилието от Т-клетки на периферната памет може да инхибира хомеостатичната пролиферация на наивни Т-клетки [26]. Тези скорошни проучвания също предполагат, че Т-клетките на паметта могат да секретират високи нива на провъзпалителни цитокини, които могат да допринесат за персистиращи възпаления в различни тъкани на възрастните хора. Следователно, намаляването на нивото на Т-клетките на паметта трябва да бъде от полза както за хомеостатичната пролиферация на наивни Т-клетки, така и за облекчаване на излишното възпалително състояние, наблюдавано при по-стари организми. В това проучване е показано, че хранителните добавки с ECD могат да намалят нивото на Т-клетките на периферната памет и да повишат нивата на наивните Т-клетки. В допълнение, добавянето на ECD увеличи апоптозното пространство за нови наивни лимфоцити. Некрозата в периферните лимфоцити, която се индуцира главно от оксидативен стрес при сенилни животни, също беше инхибирана.
Съществуват обширни доказателства, които показват, че стареенето в организма се характеризира не само с имунен дефицит, но и с увеличаване на хроничното възпаление [27]. Провъзпалителният статус се проявява най-ясно в повишен и IL-1 в кръвообращението, съчетан с повишена честота на хронични възпалителни заболявания, свързани със стареенето, като болестта на Алцхаймер, болестта на Паркинсон и атеросклерозата. Една от най-изявените възпалителни цитокинези е IL-6 и неговата плазмена концентрация се увеличава със стареенето и свързаните с възрастта заболявания [18,28,29], а епидемиологичните проучвания предполагат, че IL-6 е добър биомаркер за дълголетие тъй като е тясно свързано със смъртността в групите пациенти в напреднала възраст [30,31]. В съответствие с това, редица терапевтични интервенции, които намаляват концентрацията на IL-6, могат да
Фигура 6: Ефектите на хранителната добавка ECD върху антигена на стволови клетки-1 (Sca-1) в лимфоцитите на периферната кръв на мишки SAM-P8. Осеммесечни мъжки SAM-P8 и контролни SAM-RI мишки бяха разделени на 5 групи. 3-те третирани групи от SAM-P8 животни бяха хранени в продължение на четири седмици с диети, допълнени с ниски (100 mg/kg), средни 500 mg/kg) и високи 250 mg/kg) дози ECD и двете контролни групи животни бяха хранени с същата диета без добавки. След гладуване в продължение на 12 часа периферната кръв се събира от анестезирани животни и се подлага на FACS анализ, както е описано в раздел 5. (a) Представителни FACS графики на различните групи мишки, генерирани чрез стробиране на антиген на стволови клетки-1 (Sca{{ 20}})позитивни клетки.(b) Хистограма, показваща процента на антиген на стволови клетки-1 (Sca-1)позитивни клетки в периферната кръв на различните групи животни. Стълбчетата представляват месото SD(във всяка група,{ {23}}).w*<0.01 sam-p8="" versus="" sam-r1;**=""><0.01 each="" treated="" group="" versus="" sam-p8="" group="" (by="" one-way="" anova="" with="" post="" hoc="">
Фигура 7: Ефектите от диетичната добавка на ECD върху апоптозата и некрозата на лимфоцитите при възрастни SAM-P8 мишки. Осеммесечни мъжки SAM-P8 и контролни SAM-RI мишки бяха разделени на 5 групи. 3-те третирани групи от животни SAM-P8 бяха хранени в продължение на четири седмици с диети, допълнени с ниски (100 mg/kg), средни (500 mg/kg) и високи (2500 mg/kg) дози ECD и двете контролни групи животни бяха хранени с същата диета без добавки. След гладуване в продължение на 12 часа периферната кръв се събира от анестезирани животни и се подлага на FACS анализ, както е описано в Раздел 5. (a) Представителни FACS графики на различните групи мишки, генерирани чрез стробиране върху двойно оцветени кръвни лимфоцити с Анексин V-FITC /PI. (b) Хистограма, показваща процента на апоптотичните лимфоцити (Анексин V-FITC положителни клетки) в периферната кръв на различните групи животни. ( c ) Хистограма, показваща процента на некротични лимфоцити (PI-позитивни клетки) в периферната кръв на различните групи животни. Лентите представляват mear SD (във всяка група,=10)."<0.05 sam-p8=""><0.05each treated="" groupversussam-p8group(by="" one-way="" anova="" with="" post="" hoc="">
Фигура 8: Ефекти на диетичната добавка ECD върху серумното ниво на провъзпалителен цитокин L6 на SAM-P8 мишки. Осеммесечни мъжки SAM-P8 и контролни SAM-RI мишки бяха разделени на 5 групи. 3-те третирани групи от SAM-P8 животни бяха хранени в продължение на четири седмици с диети, допълнени с ниско (100 mg/kg), средно (500 mg/ kg) и високи (2500 mg/kg) дози ECD и двете контролни групи животни са хранени на една и съща диета без добавки. След гладуване в продължение на 12 часа, плазмите бяха събрани и плазмените цитокини в различните групи животни бяха определени чрез имуноанализ с цитометрични топчета, както е описано в Раздел 5. (a) Представителни EACS графики на различните групи мишки, генерирани от gatingonIL-6 масив от цитометрични перли. (b) Хистограма, показваща концентрациите на цитокин IL6 в плазмата на различните групи животни. Стълбчетата представляват средната стойност ± SD (във всяка група,=10).<0.001each treated="" group="" versus="" sam-p8="" group="" (by="" one-way="" anova="" with="" post="" hoc="">
облекчават свързаните с възрастта заболявания [18]. На този фон беше важно, че в това проучване диетичните добавки с ECD успяха да намалят периферните концентрации на IL-6, което означава, че този ефект може да допринесе за основните механизми за намаляване на честотата на свързаните с възрастта заболявания, които са получени чрез дългосрочната употреба на ECD в клиничната практика.
Наред с промените в адаптивния имунен отговор, които настъпват с възрастта, има и големи промени във вродения имунитет с възрастта на организма. Сред тях промените в клетките естествени убийци [18], първата линия от клетъчни компоненти, които осигуряват директен цитотоксичен лизис на туморни клетки и инфектирани с вируси клетки, са обширни, тъй като възрастните хора показват повишена чувствителност както към развитие на тумор, така и към вирусни инфекции [32]. ]. Това проучване показва, че CD3 плюс Ly49 плюс NK клетки присъстват в значително по-ниски нива в сенилни SAM-P8 мишки в сравнение с SAM-R1 контролни животни, което може да е друг основен фактор, отчитащ повишената чувствителност на възрастните мишки към рак и вирусна инфекция. Повишаването на нивото на NK клетките, наблюдавано в това проучване след диетична добавка с ECD, следователно може да бъде от полза за възрастните организми по отношение на повишена резистентност към развитие на тумори и вирусна инфекция. Необходими са обаче допълнителни проучвания, за да се изясни ролята на ефекта на ECD върху NK клетките в възрастни организми.
В заключение, това проучване показа, че лечението на субщама на мишка, склонен към стареене, SAM-P8, с ECD може да предизвика значително обръщане на свързаните с възрастта промени в имуносесенцията. Дефицитите както в популациите на периферните клетки, така и в клетките на далака на наивни Т-клетки и NK клетки бяха намалени, докато нивата на излишни клетки на паметта също бяха намалени. В допълнение, диетичните добавки с ECD успяха да потиснат както некрозите в периферните лимфоцити, така и нивата на провъзпалителния цитокин, IL-6. И накрая, в допълнение към предизвикването на промени в сенилната имунна система, диетичните добавки на ECD значително удължиха продължителността на живота на микрофона senileSAM-P8.
Препратки
[1] Y.Jiang и PF.Tu, „Анализ на химически съставкиЦистанчевидове, "Journal of Chromatography A, vol.1216, no. 11, pp.1970-1979,2009.
[2] Q.Xiong K. Hase Y.Tezuka, T.Tani, T.Namba и SKadota. „Хепатопротективна активност на фенилетаноидите отCistanche deserticola," PlartaMedica, vol.64, no.2, pp.120-125,1998.
[3] „Имунология и стареене в Европа. Производство на 2-ра конференция по основна биология и клинично въздействие на имуносесенцията, март 22-26, 2001 г., Кордоба, Испания, „Експериментална геронтология, том 37, №.{{5} }, стр.183-473,2002.
[4] Г.-Д. Xuan и C.-Q. Лиу, „Изследване наефект на фенилетаноидни гликозиди (PEG) от Cistanche deserticolaНапротив стареенепри възрастни мишки, индуцирани от D-галактоза, "Journal of Chinese Medicinal Materials, vol31, no 9, pp. 1385-1388, 2008.
[5] D.Aw, ABSilva и DBPalmer, „Имуносесенцията, възникващи предизвикателства пред застаряващото население,“ Immwmology, vol.120, no.4, pp.435-446,2007.
