Част 2: Защо билковите екстракти могат да бъдат потенциална антиоксидантна, против стареене, противовъзпалителна и избелваща козмецевтична съставка

Контакт:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

НАТИСНЕТЕ ТУК ЗА ЧАСТ 1

Изводи

Билкови екстрактиот различни растителни материали с различен външен вид, включително цвят и аромат. Сред 16 билкови екстракта, SR съдържа най-значимото ниво както на феноли, така и на флавоноиди, така че SR притежава най-значимата антиоксидантна активност както в DPPH, така и в FRAP анализите (p < 0.05).="" освен="" това="" притежавали="" и="" рд="" и="">антиоксидант activities comparable to those of SR (p >0.05). Освен това SR, RD и PE показаха обещаващоизбелванеефект с най-значимите антитирозиназни активности в сравнение с останалите (p < 0.05).="" въпреки="" това="" билковият="" екстракт="" с="" най-значима="" активност="" против="" стареене="" е="" ep,="" който="" инхибира="" активността="" на="" колагеназата,="" еластазата="" и="" хиалуронидазата="" със="" 78,5="" ±="" 0.0="" процента,="" 69.0="" ±="" 1,4="" процента="" и="" съответно="" 64,2="" ±="" 0.3="" процента.="" освен="" това,="" ма="" и="" мс="" притежават="" най-значимата="" противовъзпалителна="" активност,="" тъй="" като="" инхибират="" секрецията="" на="" il-6="" и="" tnf="" (p=""><0.05). следователно="">билкови екстрактиспоменатите по-горе имат обещаващи благоприятни ефекти върху кожата и биха могли потенциално да се използват в козметиката/козмецевтиченпродукти. Билковите екстракти под формата на водни разтвори могат да се прилагат директно върху кожата като няколко форми на козметични продукти, като тоник, мъгла за лице и серум за лице. Те също могат да бъдат разработени в няколко форми на козметични продукти, включително крем, лосион и гел. За доставката им обаче се предлагат наносистеми за доставкабилкови екстрактив по-дълбок слой на кожата, за да изпълнят своитекозмецевтиченИмоти. Освен това се предлага лиофилизация или отстраняване на разтворителя като допълнителен процес за производство на сух екстракт, който не само дава повече подробности за количеството на извлечения материал, но също така може да се съхранява за по-дълъг период от време.

цистанчетаблетки

За повече информация, моля, щракнете тук

експериментална секция

Растителни материали

Листата на G. extension и M. alba бяха събрани от местна ферма в квартал Mae Rim, Чианг Май, Тайланд, през октомври 2018 г. Пресните листа бяха измити с чешмяна вода и оставени да изсъхнат при стайна температура. Листата се нарязват на малки парченца и се задушават за около 5-10 минути. Впоследствие листата се изпичат при ниска температура в продължение на 15 минути и накрая се изсушават в пещ (UF110, Memert, Германия), настроена на температура от 45 oC в продължение на 3 дни. Освен това, изсушени листа от M. alba са приготвени без процеси на пара или печене. Изсушени цветя на E. purpurea са закупени от местна ферма в Чианг Май, Тайланд. Изсушени листа на A. elatior и G. pentaphyllum са закупени от магазина на Royal Project Foundation в Чианг Май, Тайланд. Изсушени цветове на C. tinctorius, C. morifolium, C. ternatea, H. sabdarifa и J.sambac, сушени листа на P. amaryllifolius, сушени цветове на R. Damascena, сушени листа на S. rebaudiana, изсушен прах от кора на C. verum и изсушени Прах от плодове P.emblica са закупени от местен пазар в Чианг Май, Тайланд. Всички изсушени растителни материали се смилат на фин прах с блендер Moulinex (Moulinex, Париж, Франция) и се съхраняват в запечатани контейнери, както е показано на Фигура 10, до следваща употреба.

Фигура 10. Изсушени билки (a) и изсушени прахове (b) от различни растителни материали

Микроскопски анализ на изсушен растителен материал

Растителните проби бяха идентифицирани и удостоверени от г-жа Wannaree Charoensup, ботаник в Хербариума, Катедра по фармацевтични науки, Факултет по фармация, Университет Чианг Май. Изсушен прах от всеки растителен материал се анализира с помощта на микроскоп Nikon ECLIPSE E200 (Nikon Solutions Co., Ltd., Konan, Япония), свързан с камера Canon EOS750D (Canon Inc., Tochigi, Япония).[54] За приготвяне на предметни стъкла се използват проби за монтиране в разреден глицерол. Микроскопичните характеристики и клетъчните компоненти на всяка проба бяха изследвани и фотографирани с помощта на микроскоп с 400 × увеличения на обектива.

растение цистанчеизбелванеефектвърху кожата доанти-оксидация

Химически материали

L-аскорбинова киселина, коджикова киселина, галова киселина, кверцетин, олеанолова киселина, хиалуронова киселина, реагент Folin–Ciocalteu, липополизахарид (LPS), говежди серумен албумин (BSA), 2,4,6-Tris({{4 }}пиридил)-s-триазин (TPTZ), 2,2'-дифенил-1-пикрилхидразил (DPPH), 3-(4,5-диметил тиазолил-2) { {15}},5-дифенил тетразолиев бромид (MTT), колагеназа от Clostridium histolyticum (EC 3.4.24.3), еластаза от свински панкреас (EC 3.4.4.7), хиалуронидаза от говежди тестис (EC 3.2.1.3.5 ), N-[3-(2-фурил)акрилоил]-Leu-Gly-Pro-Ala (FALGPA), N-сукцинил-Ala-Ala-Ala-p-нитроанилид (AAAPVN), дихидрохлорид тирозиназа от гъби (EC 1.14.18.1), L-3,4 дихидроксифенилаланин (L-DOPA) и L-тирозин са закупени от Sigma Aldrich (St. Louis, MO, USA). Базата Tricine и Tris беше закупена от Fisher Chem Alert (Fair Lawn, NJ, USA). Dulbecco модифицирана орлова среда (DMEM), L-глутамин, RPMI-1640, пеницилин/стрептомицин и трипаново синьо бяха закупени от Invitrogen™ (Grand Island, NY, USA). Солна киселина и оцетна киселина от клас AR бяха закупени от Merck (Дармщат, Германия). Алуминиев хлорид (AlCl3), калциев хлорид (CaCl2), железен хлорид (FeCl2), железен хлорид (FeCl3), железен сулфат (FeSO4), калиев ацетат (CH3CO2K), калиев хлорид (KCl), калиев дихидроген фосфат (KH2PO4), калий персулфат (K2S2O8), натриев ацетат (C2H3NaO2), натриев карбонат (Na2CO3), натриев хлорид (NaCl), натриев хидроксид (NaOH), мононатриев фосфат (NaH2PO4) и динатриев фосфат (Na2HPO4) са закупени от Fisher Chemicals (Loughborough, UK) ). Етанол и диметилсулфоксид (DMSO) от клас AR бяха закупени от Labscan (Дъблин, Ирландия).

Билкова екстракция

Растителните растителни материали се извличат чрез инфузия в преварена вода. Накратко, 1 g от всяко изсушено билково растение на прах се опакова в пакетче чай и се потапя в 50 mL преварена DI вода. След това пакетчето чай се отстранява след 1, 3, 5, 10 и 15 минути инфузия. Вливаният екстракт се оставя да се охлади до стайна температура и се използва в по-нататъшни изследвания.

цистанче билкаекстракт

Определяне на общо фенолно съдържание по метода на Folin–Ciocalteu

Общото фенолно съдържание на всеки билков екстракт беше оценено по метода на Folin-Ciocalteu, базиран на метода на Chaiyana et al., [55] който беше модифициран от метода на Li et al. [56] Галовата киселина беше използвана за установяване стандартна крива. Нивата на фенолното съединение са представени като милиграми еквивалент на галова киселина (GAE) на милилитър отбилкови екстракти. Всички експерименти бяха проведени в три екземпляра.

Определяне на общо съдържание на флавоноиди по метода на алуминиевия хлорид

Общото флавоноидно съдържание на всеки билков екстракт беше оценено чрез метода на алуминиев хлорид, базиран на метода на Do et al. [57] Кверцетинът беше използван за установяване на стандартна крива. Нивата на флавоноиди са представени в милиграми кверцетинов еквивалент (QE) на милилитърбилкови екстракти. Всички експерименти бяха проведени в три екземпляра.

Анализ на 2,2'-дифенил-1-пикрилхидразил реагент (DPPH)

Почистващата активност срещу DPPH радикали (DPPH) на всеки билков екстракт беше оценена с помощта на DPPH анализ, базиран на метод на Chaiyana et al., [55] който беше модифициран от метода на Blois [58]. Почистващата активност се изчислява с помощта на уравнението

процентна активност на почистване={((AB)-(CD))/(AB)} x 100 (1)

където A е UV абсорбцията на DPPH разтвора, B е UV абсорбцията на разтворителите, C е UV абсорбцията на сместа отбилкови екстрактии DPPH разтвор, а D е UV абсорбцията на разтвора на билков екстракт. Положителната контрола беше L-аскорбинова киселина. Всички експерименти бяха проведени в три екземпляра.

Тест за намаляване на антиоксидантната сила на желязо (FRAP).

Редуцирането на желязоантиоксидантмощността на всеки билков екстракт беше оценена с помощта на FRAP анализ, базиран на метод на Chaiyana et al., [55] който беше модифициран от метода на Saeio et al. [59] FeSO4 беше използван за установяване на стандартна крива. Силата на редуциране на желязо е представена като еквивалентен капацитет (EC1), който е количеството FeSO4 еквиваленти на милилитър от пробата. Положителната контрола беше L-аскорбинова киселина. Всички експерименти бяха проведени в три екземпляра.

Определяне на антитирозиназна активност

Инхибиторната активност срещу ензима тирозиназа на всеки билков екстракт беше оценена с помощта на спектрофотометричен анализ, базиран на метод на Laosirisathian et al., [60] който беше модифициран от метода на Pomerantz [61]. Антитирозиназните активности се изчисляват с помощта на уравнението

процент антитирозиназна активност={((AB)-(CD))/(AB)} x 100 (2)

където A е UV абсорбцията на ензима тирозиназа, комбиниран със субстрата, B е UV абсорбцията на разтворителя, C е UV абсорбцията набилкови екстрактикомбиниран с ензим тирозиназа и субстрат, D е UV абсорбцията на разтвора на билковия екстракт. Положителната контрола беше коджикова киселина. Всички експерименти бяха проведени в три екземпляра.

Цистанчееинхибитор на тирозиназата

Определяне на колагеназната инхибиторна активност чрез спектрофотометричен метод

Инхибиторната активност на колагеназата на всеки билков екстракт беше оценена с помощта на спектрофотометричен анализ, базиран на метода на Chaiyana et al. [44] с леки модификации. Първо, 0.16 единици/mL разтвор на колагеназа е комбинация от колагеназа от Clostridium histolyticum, 80 mM NaCl, 2 mM CaCl2 и 50 mM Tricine буфер, pH 7,5. Впоследствие, 200 µL от получения разтвор на колагеназа се прилага към 20 µL от всеки билков екстракт в плоскодънна ямкова плака (Costar, Corning Ltd., Sunderland, UK) и се оставя за 15 минути. Впоследствие 80 µL от 1 mg/mL FALGPA в Tricine буфер, рН 7,5, се прилагат като субстрат за ензимната реакция и се оставят за 20 минути. UV абсорбцията на получената смес се измерва при 340 nm с помощта на многомодов детектор (Beckman CoulterDTX880, Fullerton, СА, САЩ). Инхибиторните активности на колагеназата се изчисляват с помощта на уравнението

процент антиколагеназна активност={((AB)-(CD))/(AB)} x 100 (3)

където A е UV абсорбцията на разтвора на колагеназа, комбиниран с разтвора на FALGPA, B е UV абсорбцията на разтворителите, C е UV абсорбцията набилкови екстрактикомбиниран с колагеназа и разтвор на FALGPA, а D е UV абсорбцията на разтвора на билков екстракт. Положителната контрола беше EGCG. Всички експерименти бяха проведени в три екземпляра.

Определяне на инхибиторната активност на еластазата чрез спектрофотометричен метод

Инхибиторната активност на еластазата на всеки билков екстракт беше оценена с помощта на спектрофотометричен анализ, базиран на метода на Chaiyana et al. [44] Инхибиторните активности на еластазата се изчисляват с помощта на уравнението

процент антиеластазна активност={((AB)-(CD))/(AB)} x 100, (4)

където A е UV абсорбцията на разтвор на еластаза и AAAPVN разтвор, B е UV абсорбцията на разтворителите, C е UV абсорбцията набилкови екстрактикомбиниран с еластаза и разтвор на AAAPVN, а D е UV абсорбцията на разтвора на билков екстракт. EGCG се използва като положителна контрола. Положителната контрола беше EGCG. Всички експерименти бяха проведени в три екземпляра.

Определяне на инхибиторната активност на хиалуронидаза чрез спектрофотометричен метод

Инхибиторната активност на хиалуронидазата на всеки билков екстракт беше оценена с помощта на спектрофотометричен анализ, базиран на метода на Chaiyana et al. [44] Инхибиторните активности на хиалуронидаза се изчисляват с помощта на уравнението

процентна активност на хиалуронидаза={((AB)-(CD))/(AB)} x 100 (5)

където A е UV абсорбцията на разтвор на хиалуронидаза, комбиниран с разтвор на хиалуронова киселина, B е UV абсорбцията на разтворителите, C е UV абсорбцията набилкови екстрактикомбиниран с разтвор на хиалуронидаза и разтвор на хиалуронова киселина, а D е UV абсорбцията на разтвора на билков екстракт. Положителната контрола беше олеанолова киселина. Всички експерименти бяха проведени в три екземпляра.

Определяне на противовъзпалителната активност чрез ензимно-свързан имуносорбентен анализ (ELISA)

Противовъзпалителната активност на всеки билков екстракт беше оценена чрез инхибиторни активности срещу IL-6 и секрецията на TNF въз основа на метод на Chaiyana et al., [44] който беше модифициран от метода на Mueller et. [62] LPS се използва за стимулиране на възпалителния процес в миши моноцитен макрофаг RAW 264.7 клетки (American Type Culture Collection, ATCCTIB-71). Клетката, инкубирана с LPS, служи като контрола на носителя, със 100 процента от секретираните цитокини, докато нетретираните RAW 264.7 клетки служат като отрицателна контрола. МТТ анализът беше използван за оценка на жизнеспособността на клетките RAW 264.7 във връзка с ELISA.[62]Инхибирането на IL-6 и секрецията на TNF беше изчислено с помощта на уравнението

процентно инхибиране на цитокини={((AB)-(CD))/(AB)} x 100 (6)

където А е оптичната плътност набилкови екстрактиот МТТ анализа, В е оптичната плътност на отрицателната контрола от МТТ анализа, С е оптичната плътност на билковите екстракти от ELISA и D е оптичната плътност на контролата на носителя от ELISA. Положителната контрола беше дексаметазон. Всички експерименти бяха проведени в три екземпляра.

Статистически анализ

Всички резултати са представени под формата на средно ± стандартно отклонение (SD). Еднопосочният дисперсионен анализ (ANOVA) беше използван за определяне на статистическата значимост, последван от пост-хок тестовете на Турция, използвайки SPSS 17.0 за Windows (SPSS Inc., Чикаго, Илинойс, САЩ). P < 0.05="" се="" счита="" за="" статистически="">

Препратки

[1] M. Kong, XG Chen, DK Kweon, HJ Park, „Изследвания върху проникването на кожата на наноемулсия на основата на хиалуронова киселина като трансдермален носител“, Carbohydr. Polym. 2011 г., 86, 837-843.

[2] H. Takigawa, H. Nakagawa, M. Kuzukawa, H. ori, G. Imokawa, „Недостатъчното производство на хексадеценова киселина в кожата е свързано отчасти с уязвимостта на пациентите с атопичен дерматит към колонизация от Staphylococcus aureus“, дерматология. 2005, 211, 240-248.

[3] SH Lee, SK Jeong, SK Ahn, „Актуализация на защитната бариерна функция на кожата“, Yonsei Med. J. 2006, 47, 293-306.

[4] F. Bonté, D. Girard, JC Archambault, A. Desmouliere, „Промени в кожата по време на стареенето“, в биохимията и клетъчната биология на стареенето: част II, клинична наука, Springer: Сингапур, 2019 г., 249-280.

[5] AK Langton, HK Graham, CE Griffiths, REB Watson, „Стареенето значително влияе върху биомеханичната функция и структурния състав на кожата“, Exp. Dermatol. 2019, 28, 981-984.

[6] T. Schikowski, A. Hüls, „Замърсяване на въздуха и стареене на кожата“, Curr. Environ. Health Rep. 2020, 1-7.

[7] N. Amberg, C. Fogarassy, ​​„Екологично поведение на потребителите на козметичния пазар“, Ресурси. 2019, 8, 137.

[8] J. Azmir, ISM Zaidul, MM Rahman, „Техники за извличане на биоактивни съединения от растителни материали: преглед, J. Food Eng. 2013, 117, 426-436.

[9] M. Gašperlin, M. Gosenca, „Основни подходи за доставяне на антиоксидантни витамини през кожата за предотвратяване на стареенето на кожата“, експерт. мнение Лекарство Deliv. 2011, 8, 905-919.

[10] SM Salavkar, RA Tamanekar, RB Athawale, „Антиоксиданти при стареене на кожата – бъдещето на дерматологията“, Int. J. Green Pharm. 2011, 5 (3). 161-168.

[11] J. Calleja-Agius, Y. Muscat-Baron, MP Brincat, „Стареене на кожата“, Menopause Int. 2007, 13, 60-64.

[12] GJ Fisher, T.Quan, T. Purohit, Y. Shao, MK Cho, T. He, J. Varani, S. Kang, JJ Voorhees, „Фрагментацията на колагена насърчава оксидативния стрес и повишава матриксната металопротеиназа{{1} } във фибробласти в остаряла човешка кожа', Am. J. Pathol. 2009, 174, 101-114.

[13] AC Weihermann, M. Lorencini, CA Brohem, CM De Carvalho, „Структура на еластин и нейното участие във фотостареенето на кожата, Int. J. Cosmet. Sci. 2017, 39, 241-247.

[14] S. Abhijit, D. Manjushree, „Антихиалуронидаза, антиеластазна активност на Garcinia Indica, Int. J. Ботаника. 2010, 6(3), 299-303.

[15] T. Pillaiyar, M. Manickam, V. Namasivayam, Агенти за избелване на кожата: гледна точка на медицинската химия на тирозиназните инхибитори. J. Enzyme Inhib. Med. Chem. 2017, 32, 403-425.

[16] M. Ashawat, M. Banchhor, S. Saraf, S. Saraf, „Билкова козметика: Тенденции във формулировката за грижа за кожата“ Pharmacogn. Rev. 2009, 3, 82-89.

[17] FN Muanda, R. Soulimani, B. Diop, A. Dicko, „Изследване на химичния състав и биологичните активности на етерично масло и екстракти от Stevia rebaudiana Bertoni leave“, LWT-Food Sci. техн. 2011, 44, 1865-1872.

[18] NG Baydar, H. Baydar, „Фенолни съединения, антирадикална активност и антиоксидантен капацитет на екстракти от маслодайна роза (Rosa damascena Mill.), Ind. Crops Prod. 2013, 41, 375-380.

[19] SM Ghoreishi, A. Hedayati, SO Mousavi, „Извличане на кверцетин от Rosa damascena Mill чрез суперкритичен CO2: Невронна мрежа и моделиране на адаптивна невро-размита интерфейсна система и оптимизиране на повърхността на отговор, J. Supercrit. Течности. 2016, 112, 57-66.

[20] TEA Ardjani, JR Alvarez-Idaboy, „Радикална активност на аналозите на аскорбиновата киселина: Кинетика и механизми“, Theor. Chem. Acc. 2018 г. 137, 69.

[21] L. Panzella, „Естествени фенолни съединения за здравни, хранителни и козметични приложения“ антиоксиданти. 2020, 9, 427.

[22] DS Menamo, DW Ayele, MT Ali, „Зелен синтез, характеризиране и антибактериална активност на медни наночастици с използване на L-аскорбинова киселина като редуциращ агент“, Етиоп. й. наука технолог. 2017, 10, 209-220.

[23] NG Quilantang, SH Ryu, SH Park, JS Byun, JS Chun, JS Lee, J. p. Родригес, YS. Yun, SD Jacinto, S. Lee, „Инхибиторна активност на метанолови екстракти от различни цветни цветя върху алдоза редуктаза и HPLC-UV анализ на кверцетин“, Hortic. Environ. Биотехнология. 2018, 59, 899-907.

[24] SM Sabir, RH Shah, AH Shah, „Общо съдържание на фенолна и аскорбинова киселина и антиоксидантни активности на дванадесет различни екотипа на Phyllanthus emblica от Пакистан“, Chiang Mai J. Sci. 2017, 44, 904-911.

[25] JF Morton, „Ембликата (Phyllanthus emblica L.)“, Econ. Бот. 1960, 14, 119-128.

[26] NN Barthakur, NP Arnold, „Химичен анализ на ембликата (Phyllanthus emblica L.) и нейния потенциал като хранителен източник“, Sci. Хортик. 1991, 47, 99-105.

[27] D. Huang, B. Ou, RL Prior, „Химията зад анализите на антиоксидантния капацитет“, J. Agric. Food Chem. 2005, 53, 1841-1856.

[28] V. Bondet, W. Brand-Williams, CLWT Berset, „Кинетика и механизми на антиоксидантна активност с помощта на DPPH Free Radical Method“, Food Sci. Technol.-Цюрих. 1997, 30, 609-615.

[29] S. Nam, HW Jang, T. Shibamoto, „Антиоксидантна активност на екстракти от чайове, приготвени от лечебни растения, Morus alba L., Camellia sinensis L. и Cudrania tricuspidata, и техните летливи компоненти“, J. Agric. Food Chem. 2012, 60, 9097-9105.[30] J. Harrathi, H. Attia, M. Neffati, „Ефекти на солта върху растежа на издънките и добива и състава на етерично масло в шафран (Carthamus tinctorius L.)“, J. Essent. Oil Res. 2013, 25, 482-487.

[31] A. Mar, AA Mar, PP Thin, „Изследване на фитохимичните съставки в етерично масло от Pandanus amaryllifolious Roxb. Листа и тяхната антибактериална ефикасност“, Yadanabon Univ. Рез. J. 2019, 10, 1-9.

[32] M. Rinnerthaler, J. Bischof, MK Streubel, A. Trost, K. Richter, „Оксидативен стрес в стареещата човешка кожа“, Биомолекули. 2015, 5, 545-589.

[33] NR Perron, JL Brumaghim, „Преглед на антиоксидантните механизми на полифенолни съединения, свързани със свързването на желязото“, Cell Biochem. Biophys. 2009, 53, 75-100.

[34] A. Karadag, B. Ozcelik, S. Saner, „Преглед на методите за определяне на антиоксидантния капацитет“, Food Anal. Методи. 2009, 2, 41-60.

[35] RJ Wang, ML Hu, „Антиоксидантен капацитет на плодови екстракти от пет генотипа на черница с различни анализи и анализ на основните компоненти, Int. J. Food Prop. 2011, 14, 1-8.

[36] S. Mirunalini, M. Krishnaveni, „Терапевтичен потенциал на Phyllanthus emblica (amla): аюрведичното чудо“, J. Basic Clin. Physiol. Pharmacol. 2010, 21, 93-105.

[37] R. Jakmatakul, R. Suttisri, P. Tengamnuay, „Оценка на антитирозиназната и антиоксидантната активност на корен от Raphanus sativus: сравнение между лиофилизиран сок и метанолов екстракт“, Thai J. Pharm. Sci. 2009, 33. 22-30.

[38] SJ Lee, WJ Lee, SE Chang, GY Lee, „Антимеланогенен ефект на ginsenoside Rg3 чрез екстрацелуларен сигнал-регулирано киназа-медиирано инхибиране на свързан с микрофталмия транскрипционен фактор“ J. Ginseng Res. 2015, 39, 238-242