Част Ⅰ Водород: Нова стратегия за лечение на бъбречно заболяване

Резюме

1. фон

Водородът е химическо вещество, което все още не е широко използвано в медицината. Въпреки това, последните доказателства показват, че водородът има многостранни фармакологични ефекти като антиоксидантни, противовъзпалителни и антиапоптотични свойства. Провеждат се все повече изследвания за приложението на водорода при различни заболявания, особено тези, засягащи бъбречната система.

2. резюме

Водородът може да се вдишва като газ или течност и може да се прилага орално, интравенозно или локално. Водородът може бързо да навлезе в подорганели като митохондриите и ядрото чрез проста дифузия, произвеждайки реактивни кислородни видове (ROS) и предизвиквайки увреждане на ДНК. Водородът може селективно да поглъща хидроксилния радикал (•OH) и пероксинитрита (ONOO−), но не и други реактивни кислородни радикали с физиологични функции, като перокси анион (O₂−) и водороден пероксид (H₂O₂). Въпреки че регулаторният ефект на водорода върху пътя на сигналната трансдукция е потвърден, специфичният механизъм на неговото влияние върху сигналните молекули остава неизвестен. Въпреки че много проучвания са изследвали терапевтичните и превантивни ефекти на H₂в експериментите с клетки и животни, клиничните изпитвания са малко и все още изостават. В резултат на това са необходими повече клинични изпитвания за изследване на ролята на водорода при бъбречно заболяване, както и ефекта от неговата доза, време и форма върху общата ефикасност. Ще бъдат необходими широкомащабни рандомизирани контролирани клинични изпитвания, преди водородът да може да се използва за лечение на бъбречни заболявания.

3. Ключови послания

Тази статия разглежда механизмите на водорода при лечението на бъбречни заболявания и изследва възможностите за използването му в клиничната практика.

Ключови думи

водород; Заболяване на бъбреците; противовъзпалително; антиоксидант; Клетъчна смърт.

Щракнете тук, за да получитепредимствата на Cistanche

Въведение

Бъбречното заболяване е едно от най-честите заболявания при хората. Често срещаните видове бъбречно заболяване включват остро бъбречно увреждане (AKI), бъбречна фиброза, поликистозна бъбречна болест и бъбречно-клетъчен карцином. Има много възможности за лечение на бъбречни заболявания, включително лекарствена терапия, бъбречна диализа и бъбречна трансплантация. През последните години се обръща все по-голямо внимание на изследванията, използващи водород за лечение на тези заболявания. Водородът проявява силни редуциращи свойства и често се използва като редуциращ агент в химични реакции.

Терапевтичните приложения на H₂са докладвани за първи път през 1975 г., когато размерът на туморите намалява значително, когато мишки албиноси без косми с плоскоклетъчен карцином са били изложени на смес от 2,5 процента кислород и 97,5 процента водород при общо налягане от 8 атмосфери за до 2 седмици [1]. През 2007 г. Ohsawa et al. [2] предложиха за първи път, че водородният газ има антиоксидантни и антиапоптотични свойства, които могат да предпазят мозъка от исхемично-реперфузионни (I/R) наранявания (IRI) и инсулт чрез селективно неутрализиране на хидроксилните радикали. Водородът привлече много внимание поради потенциалния си терапевтичен ефект върху бъбречните заболявания. Много клинични и експериментални модели на бъбречно заболяване, както и натрупването на доказателства в други биомедицински области, показаха, че водородът може да действа като почистващ агент за селективно облекчаване на реактивните кислородни видове (ROS). Вдишването на водороден газ или използването на съдържащ водород воден разтвор може да упражни мощен клетъчен защитен ефект.

В този преглед ще се съсредоточим върху физиологичните роли на водорода при бъбречни заболявания, неговия потенциал като терапевтична стратегия и механизмите, които могат да бъдат замесени в неговите защитни ефекти. Освен това се обсъждат резултатите от скорошни проучвания върху водорода в различни модели на бъбречно заболяване.

Механизми на действие

За да се обяснят напълно превантивните и терапевтични ефекти на H₂Фигури 1 и 2 показват биологичните ефекти на H2 и влиянието му върху клетъчната смърт.

Биологичните ефекти на H₂

1. Антиоксидация

H₂, мощен окислител, може да реагира с нуклеинови киселини без дискриминация. Процесът на разлагане на вещества и освобождаване на енергия в или извън тялото е известен като окисление. Интензивното окисление на вътреклетъчните ROS или свободните радикали причинява оксидативен стрес (OS), състояние на дисбаланс между окисляването и антиоксидантните ефекти в тялото, което се счита за основен фактор за стареенето и появата и прогресията на заболяването. Острата OS, предизвикана от I/R или възпаление, причинява сериозни увреждания на тъканите, а хроничната OS се признава като причинен агент на много бъбречни заболявания. Водородът може да улавя свободните радикали. Водородът селективно редуцира хидроксилните радикали (•OH) и пероксинитрита (ONOO−), които са силни окислители, които реагират безразборно с нуклеинови киселини, липиди и протеини, което води до фрагментация на ДНК, липидна пероксидация и инактивиране на протеини [2]. Потенциалните терапевтични ползи от H₂са описани за първи път през 2007 г. Ohsawa et al. [2] установи, че H₂селективно редуцира •OH и ONOO− в култивирани клетки и изследва дали H₂ намалява окислените форми на биомолекули, участващи в метаболитни окислително-редукционни реакции в безклетъчни анализи. При стайна температура и неутрално рН разтворите, наситени с Н2, не редуцират окислените форми на никотинамид аденин динуклеотид, окислената форма на флавин аденин динуклеотид или окислената форма на цитохром С. По този начин Н₂не повлиява окислително-редукционния метаболизъм или нивата на O₂ −, H₂O₂и NO, всички от които играят важни физиологични роли при ниски концентрации. Като регулаторни сигнални молекули, те участват в много каскади на сигнална трансдукция и регулират биологични процеси като апоптоза, клетъчна пролиферация и диференциация. По този начин H2 има селективни антиоксидантни свойства, които предпазват мозъка от I/R нараняване чрез специфично неутрализиране на •OH и ONOO−, но не и O₂ −, H₂O₂и НЕ [2]. За разлика от много силни редуциращи антиоксиданти, той не засяга основните физиологични процеси на тялото [3]. В допълнение към директното неутрализиране на свободните радикали, водородът може да активира пътя Nrf2/ARE in vivo и in vitro, увеличавайки транскрипцията на низходящи антиоксидантни ензимни гени, като хемоксигеназа 1 (HO-1), и допринасяйки за антиоксиданта дейност [4]. Водородът може също така да увеличи експресията на ендогенна супероксид дисмутаза, каталаза [5] и редуциран глутатион (GSH) [6], всички от които спомагат за намаляване на оксидативното увреждане. Водородът играе различни роли в селективното почистване на ROS, каскадната сигнална трансдукция надолу по веригата и регулирането на антиоксидантната ензимна активност. Следователно проучванията върху антиоксидантните механизми на водорода и неговото влияние върху намаляването на увреждането, дължащо се на OS в бъбреците, осигуряват нова посока за бъдещото лечение на бъбречни заболявания.

2. Имунна система

Основни и клинични проучвания показват, че H₂е важен регулатор с антиоксидантни, противовъзпалителни и антиапоптотични ефекти [7]. з₂показа, че има противовъзпалителен ефект в LPS-активирани макрофаги, според Hong et al. [8], чрез инхибиране на освобождаването на провъзпалителни цитокини и увеличаване на освобождаването на противовъзпалителния цитокин, който може да бъде медииран от HO -1. Впоследствие някои изследователи установиха, че реанимацията с обогатен с водород физиологичен разтвор може значително да подобри увреждането на тъканите и органите, потенциално понижавайки възпалителните реакции и OS чрез инхибиране на експресията и активирането на NF-κB [9]. з₂също е в състояние да инхибира експресията на провъзпалителни цитокини по време на възпаление и да намали ранната свръхекспресия на провъзпалителни цитокини, като интерлевкин (IL)- 1, IL-6, IL-8 , IL-10 и тумор некрозис фактор-алфа (TNF-) в много животински модели [10]. Мрежата от възпалителни медиатори и възпалителни ефекторни клетки и дисбалансът между провъзпалителните цитокини и противовъзпалителните цитокини играят важна роля при появата и прогресията на бъбречните заболявания. По този начин, лечението на възпалителни бъбречни заболявания от гледна точка на провъзпалителни цитокини и противовъзпалителни цитокини може да бъде интересен път за по-нататъшни изследвания на ролята на водорода в регулирането и поддържането на хомеостазата при възпалително бъбречно заболяване.

Диабетната нефропатия (DN) е сериозно усложнение на захарния диабет. Метаболитни нарушения могат да възникнат при DN и да се проявят като локално възпаление на бъбрека, което може да доведе до фиброза и структурно ремоделиране на органа. Следователно справянето с имуномедиираното възпаление е много важно за лечението на DN [11]. При AKI, като инфаркт на бъбречната артерия или медиирано от токсин бъбречно увреждане, имунните клетки в бъбрека се активират. Увредените бъбречни епителни клетки активират пътищата за отговор на стреса, което води до секреция на цитокини и вазоактивни фактори, което води до имунопатологично увреждане [12]. Водородът, от друга страна, може да потисне производството на имунореактивни вещества [13]. Спекулираме, че водородът има бъдеще в имунологичните бъбречни заболявания, тъй като е тясно свързан със значителни антиоксидантни ефекти. Понастоящем обаче няма клинични данни, които да потвърдят това. Необходими са допълнителни изследвания, за да се потвърди тази теория.

Екстракт от цистанче и прах от цистанче

3. Регулиране на ER стрес

Стресът на ендоплазмения ретикулум (ER) възниква, когато патологичният стрес индуцира натрупване на разгънати протеини в ER. Джао и др. [14] наблюдават, че вдишаният водород значително намалява нивата на протеини, свързани със стреса на ER, и облекчава увреждането на тъканите при IRI на миокарда. По-късно беше установено, че сместа от H₂и О₂може да инхибира ER стреса чрез PKR-подобен ER-локализиран eIF2 киназа-еукариотен иницииращ фактор 2 алфа-активиращ транскрипционен фактор 4 (PERK-eIF2 -ATF 4), изискващ инозитол ензим 1-X-box свързващ протеин 1 (IRE 1-XBP1) и ATF 6 пътища. Проучване на връзката между Х₂и ER стрес при плъхове с IRI установиха, че H₂намалява експресията на GRP78 и фактор 2, свързан с рецептора на TNF [15], което показва, че защитните ефекти на H₂на миокарден IRI са свързани с намаляване на ER стреса. По отношение на бъбречните заболявания, изследванията, фокусирани върху влиянието на водорода като низходящ регулатор на ER стреса, са оскъдни; въпреки това смятаме, че това е интересна бъдеща линия на изследване.

4. Контрол на качеството на митохондриите

Уратно-индуцираният път на възпаление при уратна нефропатия включва навлизането на уратни кристали във вътреклетъчните лизозоми, които се разлагат, за да произведат митохондриална ROS, активирайки NLRP3 инфламамозомите [16]. Прекомерното производство на ROS се дължи на освобождаването на калций в ER, което води до митохондриална деполяризация и загуба на потенциал на митохондриалната мембрана. Митохондриалната деполяризация води до освобождаване на повече ROS в митохондриите. Отрицателната регулация на ROS от водород може да помогне за поддържане на митохондриалната функция [13, 17]. Понастоящем регулирането на митохондриалната функция с помощта на водород все още не е докладвано при лечението на бъбречни заболявания, но това може да бъде обещаваща изследователска област.

Herba Cistanche

Ефекти на H₂върху клетъчната смърт

1. Антиапоптоза

Апоптозата е форма на програмирана клетъчна смърт, характеризираща се със свиване на клетките, образуване на апоптотични тела, кариорексис и кондензация на хроматин. Апоптозата може да бъде индуцирана както от ендогенни, така и от екзогенни пътища. з₂играе антиапоптотична роля чрез регулиране нагоре или надолу, свързани с апоптоза фактори. з₂също инхибира експресията на проапоптозните фактори В-клетъчен лимфом- 2-свързан X-протеин (Bax), каспаза-3, -8 и -12, и регулира нагоре антиапоптотичните фактори В-клетъчен лимфом-2 (Bcl-2) ​​и В-клетъчен лимфом-екстра-голям (Bcl-xl) [18]. Установено е, че интраперитонеалното инжектиране на богат на водород разтвор 10 минути преди скелетния мускул в I/R може да намали експресията на апоптотичен протеин Bax и цитохром С (който може да активира експресията на индуцирана от каспаза каскадна реакция) и да увеличи експресията на антиапоптотичен протеин Bcl-2, като по този начин облекчава увреждането на скелетните мускули след реперфузия [19]. Други учени са открили, че интраперитонеалното инжектиране на богат на водород разтвор може значително да повиши степента на преживяемост на кожните клапи, което е свързано с регулирането на пътя ASK-1/JNK и съотношението Bax/Bcl-2 [20]. Въпреки това, точният механизъм на антиапоптотичния ефект на водорода при бъбречно заболяване не е напълно ясен.

2. Автофагия

Автофагията е важен механизъм за поддържане на клетъчната хомеостаза и насърчава използването на енергия [21]. Автофагията има значително влияние върху бъбречната функция и хомеостазата. При изследвания на бъбреците, използващи възрастни животни, е установено, че аутофагията засяга различни видове бъбречни клетки, за да помогне за поддържане на бъбречната патология и хомеостазата [22]. Прекомерната автофагия или стресът, свързан с автофагията, може да влоши възпалителното увреждане на тъканите и органите. Когато протеиновите агрегати станат токсични, аутофагията се активира и след като прекомерната аутофагия причини увреждане на тъканите, аутофагията се блокира. H2 изглежда играе регулаторна роля [7]. Гуан и др. [23] разкри, че H2 е в състояние да подобри бъбречно увреждане, предизвикано от хронична интермитентна хипоксия (CIH), чрез намаляване на ER стреса и активиране на аутофагията чрез инхибиране на OS-зависимото p38 и JNK MAPK активиране. Необходими са обаче допълнителни клинични изпитвания върху животни, за да се изследват по-нататък основните механизми.

ефектите на Cistanche

3. Пироптоза

Дефиницията за пироптоза е предложена за първи път през 2012 г. Тя е придружена от натрупване на реактивен липиден кислород, катализиран от желязо, клетъчна апоптоза, некроза и автофагия [24]. През последните години има доказателства, че пироптозата играе важна роля в появата и развитието на AKI [25, 26], бъбречна фиброза [27], поликистоза на бъбреците [28] и бъбречно-клетъчен карцином [24, 29]. Тъй като има значително припокриване между регулирането на водорода и пътищата на пироптоза, ние предположихме, че водородът може да играе роля в лечението на бъбречни заболявания чрез регулиране на пътищата на пироптоза. Има много малко изследвания по този въпрос, така че може да са необходими допълнителни изследвания, за да се потвърди тази хипотеза.

4. Фероптоза

Фероптозата е морфологично, биохимично и генетично различна от апоптоза, автофагия и различни форми на некроза. Характеризира се със зависимо от желязото натрупване на ROS и липидна пероксидация и може да бъде потиснато от хелатори на желязото, липофилни антиоксиданти и инхибитори на липидната пероксидация [24]. Скорошно проучване [30] показа, че HMGB1 е нов регулатор на фероптоза чрез RAS-JNK/p38 пътя. Ю и др. [31] показват, че лечението с H₂под формата на газ намалява нивата на HMGB1. Следователно ние спекулираме, че H₂може да бъде потенциален лекарствен агент за бъбречни заболявания. Фероптозата е зависима от желязото форма на регулация на ненапоптозната клетъчна смърт, която допринася за увреждане при модели на AKI. HO-1, потенциален източник на вътреклетъчно желязо, е цитопротективен ензим, индуциран от клетъчен стрес.

Благодарение на своите антиапоптотични и противовъзпалителни свойства [32], той има протективен ефект върху AKI. Активността на HO-1 може да се увеличи от водород. Скорошно проучване [32] демонстрира, че бъбречните епителни клетки с дефицит на HO-1- са по-чувствителни към фероптоза, което показва, че свободното желязо, произведено от HO-1, не насърчава самата фероптоза, а HO-1 има анти-ферроптозен ефект. Въпреки че механизмите зад ефекта на водорода върху фероптозата все още не са напълно изяснени, това може да добави нови насоки към търсенето на лечение на бъбречни заболявания.

Препратки

1 Dole M, Wilson FR, Fife WP. Хипербарна водородна терапия: възможно лечение на рак. Наука. 1975; 190 (4210): 152–4.

2 Ohsawa I, Ishikawa M, Takahashi K, Watanabe M, Nishimaki K, Yamagata K и др. Водородът действа като терапевтичен антиоксидант чрез селективно намаляване на цитотоксичните кислородни радикали. Nat Med. 2007; 13 (6): 688–94.

3 Ohta S. Скорошен напредък към водородната медицина: потенциалът на молекулярния водород за превантивни и терапевтични приложения. Curr Pharm Des. 2011; 17 (22): 2241–52.

4 Xie Q, Li XX, Zhang P, Li JC, Cheng Y, Feng YL и др. Водородният газ предпазва от миокардно увреждане, предизвикано от лишаване от серум и глюкоза, в H9c2 клетки чрез активиране на NF-E2-свързания фактор 2/хем оксигеназа 1 сигнален път. Mol Med Rep. 2014; 10 (2): 1143–9.

5 Wang F, Yu G, Liu SY, Li JB, Wang JF, Bo LL и др. Богатият на водород физиологичен разтвор предпазва от бъбречна исхемия/реперфузионно увреждане при плъхове. J Surg Res. 2011; 167 (2): e339–44.

6 Qian L, Cao F, Cui J, Huang Y, Zhou X, Liu S и др. Радиопротективен ефект на водорода в култивирани клетки и мишки. Free Radic Res. 2010 г.; 44 (3): 275–82.

7 Huang CS, Kawamura T, Toyoda Y, Nakao A. Последни постижения в изследванията на водорода като терапевтичен медицински газ. Free Radic Res. 2010 г.; 44 (9): 971–82.

8 Chen HG, Xie KL, Han HZ, Wang WN, Liu DQ, Wang GL и др. Хем оксигеназата-1 медиира противовъзпалителния ефект на молекулярния водород в LPS-стимулирани RAW 264.7 макрофаги. Int J Surg. 2013; 11 (10): 1060–6.

9 Wang X, Yu P, Yang Y, Liu X, Jiang J, Liu D и др. Богатата на водород физиологична реанимация облекчава възпалението, предизвикано от тежки изгаряния, със забавена реанимация. Изгаряния. 2015; 41 (2): 379–85.

10 Liu W, Shan LP, Dong XS, Liu XW, Ma T, Liu Z. Комбинираната ранна течна реанимация и вдишване на водород намалява увреждането на белите дробове и червата. World J Gastroenterol. 2013; 19 (4): 492–502.

11 Zheng Z, Zheng F. Имунни клетки и възпаление при диабетна нефропатия. J Diabetes Res. 2016; 2016: 1841690.

12 Yatim KM, Lakkis FG. Кратко пътешествие през имунната система. Clin J Am Soc Nephrol. 2015; 10 (7): 1274–81.

13 Yang M, Dong Y, He Q, Zhu P, Zhuang Q, Shen J, et al. Водород: нова възможност за лечение на човешки заболявания. Oxid Med Cell Longev. 2020; 2020: 8384742.

14 Zhang Y, Liu Y, Zhang J. Наситеният водороден физиологичен разтвор отслабва индуцираната от ендотоксин белодробна дисфункция. J Surg Res. 2015; 198 (1): 41–9.

15 Huang T, Wang W, Tu C, Yang Z, Bramwell D, Sun X. Богатият на водород физиологичен разтвор намалява исхемично-реперфузионното увреждане в скелетните мускули. J Surg Res. 2015; 194 (2): 471–80.

16 Liu YQ, Liu YF, Ma XM, Xiao YD, Wang YB, Zhang MZ и др. Богатият на водород физиологичен разтвор отслабва кожната исхемия/предизвикана от реперфузия апоптоза чрез регулиране на съотношението Bax/Bcl-2 и пътя на ASK- 1/JNK. J Plast Reconstr Aesthet Surg. 2015;68(7):e147–56.

17 Zhong H, Song R, Pang Q, Liu Y, Zhuang J, Chen Y и др. Пропофолът инхибира parthanatos чрез ROS-ER-калций-митохондриален сигнален път in vivo и in vitro. Клетъчна смърт Dis. 2018; 9 (10): 932.

18 Zhao YS, An JR, Yang S, Guan P, Yu FY, Li W и др. Смес от водород и кислород за подобряване на сърдечната дисфункция и миокардните патологични промени, предизвикани от периодична хипоксия при плъхове. Oxid Med Cell Longev. 2019 г.; 2019:7415212.

19 Gao Y, Yang H, Chi J, Xu Q, Zhao L, Yang W и др. Водородният газ отслабва миокардното исхемично-реперфузионно увреждане независимо от посткондиционирането при плъхове чрез отслабване на индуцираната от стрес аутофагия на ендоплазмения ретикулум. Cell Physiol Biochem. 2017; 43 (4): 1503–14.

20 Isaka Y, Takabatake Y, Takahashi A, Saitoh T, Yoshimori T. Индуцирани от хиперурикемия възпалителни и бъбречни заболявания. Трансплантация на Nephrol Dial. 2016; 31 (6): 890–6.

21 Parzych KR, Klionsky DJ. Преглед на автофагията: морфология, механизъм и регулиране. Антиоксиден редокс сигнал. 2014; 20 (3): 460–73.

22 He L, Livingston MJ, Dong Z. Автофагия при остро бъбречно увреждане и възстановяване. Nephron Clin Pract. 2014; 127 (1–4): 56–60.

23 Guan P, Sun ZM, Luo LF, Zhou J, Yang S, Zhao YS и др. Водородът предпазва от хронична интермитентна бъбречна дисфункция, предизвикана от хипоксия, като насърчава аутофагията и облекчава апоптозата. Life Sci. 2019; 225: 46-54.

24 Dixon SJ, Lemberg KM, Lamprecht MR, Skouta R, Zaitsev EM, Gleason CE, et al. Фероптоза: зависима от желязото форма на неапоптозна клетъчна смърт. клетка. 2012; 149 (5): 1060-72.

25 Friedmann Angeli JP, Schneider M, Proneth B, Tyurina YY, Tyurin VA, Hammond VJ и др. Инактивирането на регулатора на фероптоза Gpx4 предизвиква остра бъбречна недостатъчност при мишки. Nat Cell Biol. 2014; 16 (12): 1180–91.

26 Müller T, Dewitz C, Schmitz J, Schröder AS, Bräsen JH, Stockwell BR, et al. Некроптозата и фероптозата са алтернативни пътища на клетъчна смърт, които действат при остра бъбречна недостатъчност. Cell Mol Life Sci. 2017; 74 (19): 3631–45.

27 Hou W, Xie Y, Song X, Sun X, Lotze MT, Zeh HJ 3rd и др. Автофагията насърчава фероптозата чрез разграждането на феритина. Автофагия. 2016 г.; 12(8):1425–8.

28 Schreiber R, Buchholz B, Kraus A, Schley G, Scholz J, Ousingsawat J, et al. Липидната пероксидация задвижва растежа на бъбречната киста in vitro чрез активирането на TMEM16A. J Am Soc Nephrol. 2019; 30 (2): 228–42.

29 Yang WS, SriRamaratnam R, Welsch ME, Shimada K, Skouta R, Viswanathan VS, et al. Регулиране на смъртта на раковите клетки на фероптоза от GPX4. клетка. 2014; 156 (1–2): 317–31.

30 Ye F, Chai W, Xie M, Yang M, Yu Y, Cao L, et al. HMGB1 регулира индуцираната от еластин фероптоза чрез RAS-JNK/p38 сигнализиране в HL-60/NRAS(Q61L) клетки. Am J Cancer Res. 2019 г.; 9(4):730–9.

31 Yu Y, Yang Y, Yang M, Wang C, Xie K, Yu Y. Водородният газ намалява освобождаването на HMGB1 в белодробните тъкани на септични мишки по Nrf2/HO- 1-зависим път. Int Immunopharmacol. 2019; 69: 11-8.

32 Adedoyin O, Boddu R, Traylor A, Lever JM, Bolisetty S, George JF и др. Хем оксигеназата-1 смекчава фероптозата в клетките на проксималните тубули на бъбреците. Am J Physiol Renal Physiol. 2018 г.; 314 (5): F702–14.

Бо Уанг^aЖуошу Ли^{b, c}Лунфей Мао^dМинги Джао^bБингчанг Янг^eСяову Тао^aЮксианг Ли^a Гуангмин Ин^a

отделение по урология, трета болница Xiangya, Централен южен университет, Чанша, Китай;

bОтделение по педиатрия, Трета болница Xiangya, Централен южен университет, Чанша, Китай;

c Xiangya School of Medicine, Central South University, Changsha, Китай;

d Център за биоинформатика, Колеж по биология, Хунански университет, Чанша, Китай;

Катедрата по реанимация, Централен южен университет, Чанша, Китай