ЧАСТ ЕДНО Фенилетанол гликозиди предпазват миокардната хипертрофия, предизвикана от абдоминално аортно свиване чрез ЕСЕ-1 инхибиране на деметилацията и PI3K/PKB/eNOS подобрение на пътя

За контакти: Одри Ху Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Имейл:audrey.hu@wecistanche.com

Фен на Qiong-Ling,1 Цзя-Уей Уанг,1 Ши-Лай Джан, & др.

Фенилетаноилд гликозиди (ЦХР)са основната материална основа на фармакологичната активност приЦистанче тубулозаи имат разнообразни фармакологични ефекти. Не е ясно обаче дали ЦХР(Фенилетаноилд гликозиди от цистанш) имат амелиоративен ефект върху индуцираната от натиск миокардна хипертрофия. В това проучване мъжките SD плъхове с тегло (200 ± 20) g са установени модели на сърдечна хипертрофия чрез абдоминална аортна коарктация (AAC). След операцията плъховете са с пропуск със съответното лекарство в продължение на 6 седмици (ЦХГ(Фенилетаноилд гликозиди от цистанш) 125, 250, и 500 mg/kg/d и валсартан 8,3 mg/kg/d). Ехокардиография, индекс на телесното тегло на сърцето (HWI), напречно сечение област на кардиомиоцити (CSCA), фиброза област, плазмен ендотелин 1 (ET-1), и проинфламаторни фактори нива са открити. Резултатите ни показаха, че различните ЦХР(Фенилетаноилд гликозиди)дозировка намалява дебелината на лявата камерна задна стена (LVPWT), левокамерен краен диастолен диаметър (LVED), HWI, CSCA, област на фиброза, ET-1, Проинфламаторни фактори, артериален натриуретичен пептид (ANP), мозъчен натриуретичен пептид (BNP), ендотелин конвертиращ ензим 1(ECE-1) нивата на ИКЕ-1) mRNA нива, циклооксигеназа 2 (COX-2), нивата на протеини от групата с висока подвижност 1 (HMGB-1), и ниво на деметилиране на ECE-1, като същевременно се повишават левокамерните фракции на изтласкване (LVEF), левокамерно фракционно скъсяване (LVFS), фосфорилиран фосфатидилинозитол 3-киназа (p-PI3K), фосфорилиран протеин киназа B (p-PKB), и фосфорилиран ендотелен азотен оксид синтетаза (p-eNOS). -д индекси на ЦХГ(Фенилетаноилд гликозиди от цистанш) 250 и 500 mg/kg група са значително различни от Групата на AAC; сравнение с групата на валсартан (AV), индексите на CPhGs 500 mg/kg група не са значително различни. В заключение ЦХР(Фенилетаноилд гликозиди от цистанш) амелиорирани хипертрофия на миокарда плъхове от AAC, които могат да бъдат свързани с ECE- 1 инхибиране на деметилиране и PI3K/PKB/eNOS подобрение.

2. Материали и методи

2.1.Животни.

70 мъжки SPF SD плъхове тежаха 200 ± 20 g (10 на група) бяха предоставени от Експерименталния животински център на Xinjiang Медицински университет (Urumqi, Китай). Номерът на лиценза за производство на животни беше SYXK(XIN)2016-0003 и номерът на сертификата беше SCXK(XIN)2016-002. -e проучване е одобрен от Комитета по етика на животните на Първата афифинимирани болница на Xinjiang Медицински университет (одобрение номер 20180223-183). -ey бяха поддържани със свободен достъп до вода и храна в пластмасови клетки и се отглеждаха в 12 ч лек/тъмен цикъл при температура 22 ± 2°C и влажност от 45–55% в нашия Експериментален животински център.

2.2. Материали.

ЦХР(Фенилетаноилд гликозиди от цистанш) , чието съдържание на ехинацея е повече от 40%, а acteoside е повече от 16%, Закупен е от Хетиан Ди Чен Медицинска Биотехнологии Ко, ООД Валсартан е закупен от Пекин Novartis Pharma Co., Ltd. Карбоксиметилцелулоза натрий (CMC-Na) е предоставена от Xian Zhengtian фармацевтични аксесоари Co., Ltd. И ЦХГ са разтворени в 0,5% CMC-Na.

Фенилетаноилд гликозиди от цистанш

2.3. Коремна аортна коарктация (AAC).

След като са анестезирани от 2,5% пентобарбитал натрий (2,5 мл/кг) (Merck, Darmstadt City, Хесен, Германия), плъховете са обръснали и поддържани топли на подложки за отопление. -bg коремната кухина на плъха беше отворена за 2 см в средата на корема в стерилна среда, коремните вътрешност бяха избутани на дясната страна, а коремната аорта беше напълно изложена на 0,5 см над дясната бъбречна артерия. No 8 игла е бил лигиран с номер 2 тел успоредно с коремната кухина се зашива [18]. Коремните аорта на плъховете в групата на измамните са разделени без лигиране и няма контролна група за операцията. -e ден след операцията AC 125 mg/kg, AC 250 mg/kg, и AC 500 mg/kg са хранени с ЦХГ(Фенилетаноилд гликозиди от цистанш)от гавра; AV група са били хранени с валсартан от гавра; и контролна група, Група AAC, и групата на измамниците не са били хранени с ЦХГ или валсартан, веднъж дневно в продължение на 42 последователни дни. Лекарствената доза е определена въз основа на предишни препратки и предварителни експерименти [8].

2.4. Ехокардиография.

Шест седмици след AAC плъховете са анестезирани с 2,5% пентобарбитал натрий и извършват ехокардиографията (Philips HD11 XE, Амстердам, Нидерландия). LVPWT, LVED, LVEF, и LVFS бяха измерени четири пъти, за да се изчислят средните стойности като крайни показатели.

2.5. Индекс на сърдечната категория (HWI).

След ехокардиография плъховете са изпълнени чрез събиране на кръв от коремната аорта. -д сърцата на плъховете бяха отстранени от гърдите и претеглени, след като бяха измити от нормален физиологичен разтвор (4°C) 3 пъти и се изцедиха с чиста филтърна хартия. -e HWI е изчислено чрез следната формула: HWI телесно тегло на сърцето. (1)

2.6. Хематоксилин-Еозин и Масон оцветяване.

-e миокард от лявата камерна е фиксиран с 4% параформалдехид, вграден в парафин, кръстосан с дебелина на участъка 4 μm, изсушен във фурна при 60°C в продължение на 2 часа, и след това оцветен с хематоксилин-еозин или Masson (Solaibio, Пекин, Китай). -e структура на миокарда е наблюдавана с обърнат фазово-контрастен микроскоп (Leica, Франкфурт, Германия). Софтуерът image J е използван за изчисляване на областта CSAC и фиброзата.

2.7. Ензимно свързан имунен сорбент асай (ELISA).

Коремната аортна кръв е извлечена от плъхове и е поставена в антикоагулационна тръба за 2 h при стайна температура и след това се центрофугира при 3000 r / min скорост. -e супернатант се абсорбира с пипети (Епендорф, Хамбург, Германия) и се съхранява при 80°C за тестване. Плазма ET-1, интерлевкин 1β(IL-1β), интерлевкин 6 (IL-6), тумор некроза фактор α Доказателства базирани допълващи и алтернативна медицина

(TNF-α) (Bioss, Пекин, Китай), и циклооксигеназа 1 (COX-1) (Кузабио, Ухан, Китай) нива на плъхове са били открити според ELISA кит инструкции.

2.8. Специфични за метилиране PCR.

ДНК е извлечена от лявата камерна миокардна тъкан на плъхове чрез комплект за екстракция на ДНК (Tiangen Biotech, Пекин, Китай). -e стойност на абсорбция (Стойност А) е равна на OD260/OD280 (1,8∼1,9). 20 μl геномна ДНК (500 pg-1 μg) е модифицирана със сулфурова киселина чрез Метилиране-Златен комплект (ZYMO, Orange County, CA, САЩ). -e MSP реакция система е 25 μL, включително 3.0 μL на сулфит модифициран ДНК шаблон, 2,5 μL от 10 × буфер, 2,5 μL от 2,5 mm dNTPs, 1,0 μL от 10 μm грунд, 0,1 μL ДНК полимераза Hotstar Taq (Биотехнологии TAKARA), и 14,9 μL ddH2O. -ere са били общо 45 цикъла: денатурация при 95°C, анелиране при 55°C, и удължаване при 72°C за 30 сек. След PCR 5 μL продукт е разделен с 2% агароза гел електрофореза. -e ДНК е третирана от M. Sssl метилтрансфераза (Ню Ингланд Biolabs, Ipswich, MA, САЩ) е бил използван като положителен контрол на метилиране, и ДНК на нормалната контролна група е бил използван като положителен контрол на деметилиране. Накрая гелът от агароза е сниман и анализиран от система за образна диагностика на гел Bio-Rad. -e ниво на деметилиране е изчислено чрез следната формула:

Всички грундове, проектирани в Methprimer (Приложни биосистеми, MA, САЩ) и синтезирани от Sangon Biotech (Шанхай, Китай) са изброени в таблица 1.

2.10. Уестърн Блот.

Протеините са извлечени от левия камерен миокард с Ripa Buffer (Научен) и протеазния инхибитор е добавен. Концентрацията на протеини е определена по метода на BCA (Solarbio, Пекин, Китай). Протеините са приемани при 50 μg и денатурирани при 100° C за 5 мин. Протеините са разделени от натриев додецил сулфат-полиакриламид гел електрофореза (SDS-PAGE, Beyotime, Шанхай, Китай) и след това се прехвърлят в мембрана на поливинилиден флуорид (PVDF) чрез електрофоретично оборудване (Bio-Rad, CA, САЩ). След като са блокирани с 3% BSA за 2 часа при стайна температура, мембраните са инкубирани с антитяло против PI3K, антифосфо-PI3K антитяло, антиеНОС антитяло, антифосфо-еНОС (1:1000, Bioss, Пекин, Китай), анти-COX-2 антитяло, анти-HMGB-1 антитяло (1: 1000, Proteintech, Чикаго, IL, САЩ), и анти-ECE-1 антитяло (1: 2000, Сигнална антитяло, College Park, MD, САЩ), първични антитела за една нощ при 4°C. На следващия ден, след като са били измити с TBST 3 пъти, мембраните са инкубирани с HRP-обозначени коза анти-заек IgG (1: 25000, 1 h, Zhongshanjinqiao, Шанхай, Китай) при стайна температура. След като са измити с TBST 3 пъти, мембраните са визуализирани от Pierce™ ECL Western Blotting Substrate и са образни с помощта на FluorChem E Imaging System (Protein Simple, САЩ), които са нормализирани да β-актин като вътрешен контрол.

Ползата от Фенилетаноилд гликозиди от цистанш

полза за cistanche

3. Резултати

3.1. ЦХР(Фенилетаноилд гликозиди от цистанш) Подобрена сърдечна функция при плъхове след AAC.

-e плъхове са получили гаврак от деня след AAC. -e положителна контролна група (AV) е дадена гавра с валсартан 8,3 mg/kg/d, а на cPhGs групата (AC) е даден гавра съответно с CPhGs 125, 250, и 500 mg/kg/d. След шест седмици непрекъснато дозиране, плъховете са извършили ехокардиография под 2.5% натриев пентобарбитал анестезия. Два плъха умряха след AAC: един в групата модел почина на третия ден след AAC от белодробен оток; друг в AC 500 mg/kg умира в деня след операцията, за която се предполага, че е причинена от хирургичен стрес. Както е показано на фигура 2, в сравнение с групата на измамници, LVED, LVEF, и LVFS в групата на AAC са намалели значително, но LVPWT в групата на AAC е увеличен значително. В сравнение с групата на AAC, LVED, LVEF, и LVFS са увеличени и LVPWT е намален в различна степен във всяка група на дозата AC; за LVPWT, значителна промяна не е намерена в AC 125 mg/kg група, но е намерена в групи ac 250 и 500 mg/kg. В сравнение с AV групата, LVPWT и LVED в AC 125 mg/kg група са наблюдавани значителна разлика, докато LVPWT, LVED, LVFS, и LVFS в AC 250 и 500 mg/kg групи не са.

3.2. ЦХР(Фенилетаноилд гликозиди от цистанш) Намалена HWI, CSAC, и фиброза област при плъхове след AAC.

-bg претеглихме сърцето на всеки плъх, за да изчислим HWI и взехме миокардната тъкан за he и Masson оцветяване, за да наблюдаваме промените на областта на напречното сечение (CSAC) и областта на фиброзата в кардиомиоцитите. Както е показано на фигури 3, буква а , 3, буква г и 3, буква д , в сравнение с групата на измамника, телесното тегло на сърцето (HW) и HWI в групата на AAC са намалени значително; в сравнение с групата на AAC, HW и HWI в групите AC250 и 500 mg/kg са намалени значително; сравнение с AV група, HW и HWI са увеличени значително в AC 125 mg/kg група, но не са в групи с ПРОМЕНЛИВ ТОК 250 и 500 mg/kg. Във фигури 3, буква б и член 3, буква е ), в сравнение с групата на измамните, резултатите от оцветяването на Masson показват, че областта на фиброзата в групата на AAC е увеличена значително. За областта на фиброзата е установено значително намаляване на AC 125, 250, и 500 mg/kg групи, когато в сравнение с групата на AAC, докато значително увеличение на AC 125 и 250 mg/kg групи и значително намаляване на AC 500 mg/kg група са открити в сравнение с AV група. На фигури 3, буква в) и 3, буква ж) резултатите от оцветяването на HE показаха, че CSAC в групата на AAC е увеличен значително в сравнение с това в групата на измамниците; в сравнение с групата на AAC, CSAC в групите AC 250 и 500 mg/kg е намален значително; сравнение с тази в AV група, обаче, CSAC е увеличена значително при групи с променлив ток 125 и 250 mg/kg, и не е намерена значима разлика в групата на AC 500 mg/kg

3.3. ЦХР(Фенилетаноилд гликозиди от цистанш) Намалени mRNA нива на Миокардна хипертрофия Гени в Миокардна тъкан на плъхове след AAC.

ANP, BNP, и миозин тежка верига β (β-MHC) са важни сърдечни хипертрофия фактори [19, 20]. Засякохме нивата на относително изразяване на тези три сърдечни хипертрофия гена в миокардните тъкани. Както е показано на фигура 4, в сравнение с групата на измамника, нивата на относителния израз на ANP, BNP, и β-MHC mRNA в групата на AAC са увеличени значително; въпреки това, в сравнение с групата на AAC, нивата на относителния израз на трите миокардни хипертрофия гени в AC 250 Базирани на доказателства допълващи и алтернативна медицина 5.

Ползата от Фенилетаноилд гликозиди от цистанш