Модели на експресия на Arc MRNA в мозъка на плъх след двойно припомняне на социално придобита информация, основана на страха и възнаграждението (2)

Дъга в припомнянето на преки и социално придобити страхови асоциации.

Нашата способност да интерпретираме нашите открития по отношение на нашите плъхове, подложени на припомняне на страх, придобит чрез директно обучение, е значително подпомогната от това колко добре е характеризирана системата, която е в основата на ученето и припомнянето на страха. Редица от областите, които изследвахме, са включени в обучението за страх или изчезване (последното от които бихме предположили, че е инициирано в демонстратори, тъй като те са били подложени на неподсилено CS представяне по време на FCbP), по-специално ACC, PLC и ILC30–32 ,37. Въпреки че е наличен малко по-малък набор от изследвания по отношение на невронните механизми на социалния страх, предложените модели на научаване на социален страх постулират, че подобни системи са в основата на социалното и директното научаване на страха28. Нашите констатации не показват цялостна роля на ACC, PLC или ILC нито в припомнянето на социално придобита асоциация на страх, нито в пряко придобита асоциация на страх (въпреки че вижте също „Дискусия“ на половите различия в активността на PLC по-долу). Въпреки това, както беше описано в предишния раздел, това вероятно просто показва, че Arc не служи като надежден индикатор за активност в този случай. Изследването на тези области след придобиването на страх вероятно ще разкаже различна история. Трудно изрично изследване на активността на Arc след припомняне на страха е ограничено, има някои минали изследвания, от които да се черпи. Chia и Otto35 установиха, че при кондициониране на следи от страх плъховете имат значително по-висока експресия на Arc протеин както в дорзалния, така и в вентралния хипокампус в сравнение с некондиционираните контроли. Трябва да се отбележи, че Arc беше количествено определен чрез Western Blot анализ на хомогенизирания вентрален и дорзален хипокампус в този експеримент, така че не беше налична точна локализация на хипокампалната активност. Тези констатации вероятно показват, че както при STFP, транскрипцията на Arc може да бъде индуцирана в определени области на хипокампуса в 48-h времева точка за припомняне за сигнализиран спомен за страх. Нашите нулеви резултати също може потенциално да се дължат на неуспешно припомняне от страна на наблюдателите, тъй като за разлика от предишни проучвания в нашата лаборатория12–14,26 не видяхме по-високо замразяване на CS при наблюдатели в сравнение с контролите. Не е ясно дали това действително се дължи на неуспешно извикване на наблюдателите или на нашата единична процедура за извикване на CS и предварителното излагане на контролите на CS.

Какво прави cistanche-Подобряване на паметта

Потенциална роля на вентралната орбитофронтална кора при припомняне на социално придобита информация.

В забележително проучване Lesburguères et al.24. са в състояние да демонстрират, че докато активността на дорзалния хипокамп (dHPC) е необходима за придобиването и краткосрочното извикване на придобит STFP, STFP паметта в крайна сметка е прехвърлена в OFC за дългосрочно съхранение. Освен това Lesburguères et al. са в състояние да демонстрират, че маркирането на неврони в орбитофронталния кортекс по време на придобиване на STFP е необходимо за дългосрочно съхранение на социално предавани хранителни предпочитания и че намесата в активността на OFC след придобиването влошава извикването на паметта 30 дни след придобиването (въпреки че вижте също38). Тези открития предполагат комуникация между dHPC и OFC в първите дни или седмици след придобиването на STFP и текуща реорганизация на OFC в този момент, за да се приспособи към дългосрочното съхранение на STFP паметта. Въпреки че липсата на цялостни разлики във вентралната или латералната експресия на OFC Arc между демонстратори, контроли и наблюдатели в това проучване би оспорила това тълкуване, ние открихме значителна отрицателна корелация между нашата комбинирана мярка за цялостно представяне на социално обучение и клетки, експресиращи двойна дъга в ЛОС. Освен това, тази корелация не се наблюдава между подобен показател, образуван за демонстратори въз основа на изпълнението на теста за избор и замразяването на CS. Тъй като разчитането на социално придобита информация може да се разглежда като избор между потенциално ненадеждна социална информация и опасностите от учене чрез директен опит, тази очевидна инхибираща роля на гласа в изразяването на социално придобита информация може да бъде свързана с по-широката роля на OFC в стойността базирано на вземане на решения39–42.

Експеримент Cistanche deserticola

Половите разлики в транскрипцията на Arc.

няколко статистически и методологични причини. Първо, нашият понякога нисък размер на извадката за женски, с размер на групата за комбинации пол/състояние, вариращи от n=2 до n=9 след отстраняване на плъхове без достатъчно жизнеспособни секции (въпреки че по-специално, n<5 was only present for female Controls in the vOFC and lOFC and female Demonstrators and Observers in the lOFC, see Table S5 for specific group sizes). Additionally, our lack of entirely undisturbed controls means that we have no way to determine whether these sex differences are the result of baseline or task-specific differences in Arc mRNA production. Finally, because the pre-in situ PFA wash was not introduced until all female sections had been processed, this difference in tissue processing might have affected the overall stain. That said, if this were the case, we might expect to see a broader and more consistent effect of sex across regions and types of Arc expression (nuclear, cytoplasmic, and dual). As it is, 18 regions/cellular areas of Arc expression combinations are examined, and only 10 display a significant overall effect of sex. Furthermore, this effect is not uniform in its direction, with males displaying greater overall Arc expression in 5 cases and females displaying greater expression in the other 5. Regardless, we feel that our findings here should serve only to inform possible future research into sex differences in Arc expression. As it is, the limitation of the current study would make drawing definitive conclusions regarding sex effects on Arc expression inappropriate. This should be kept in mind in reading the following discussion.

Въпреки че има малко изследвания на половите разлики в експресията на Arc, има някои констатации, които показват, че женските плъхове изразяват повече Arc в определени области на дорзалния хипокампус след многократно излагане на относително обогатена среда43, въпреки че също е наблюдавана тенденция в обратната посока наблюдавани при плъхове, тествани без предварителна поведенческа интервенция43. Нашите открития може да показват, че половите разлики в транскрипцията на Arc са налице след определени общи поведенчески задачи или преживявания. В областта CG1 на ACC открихме, че мъжете, като цяло, имат повече активни клетки и в двете времеви точки, вероятно поради по-висока изходна Arct-транскрипция в ACC на мъже или повишена транскрипция след контекстни промени/повторно излагане (домашна клетка → STFP стая за тестване → камера за кондициониране), тъй като има известни доказателства — макар и ограничени — за ролята на ACC в дългосрочното извикване на контекстуални спомени44. Мъжките плъхове също показват по-висок брой ядрени и двойни дъги в ILC. Това може да се обясни с ролята на ILC в изчезването и инхибирането на страха 31, 45, 46 и наблюдаваните увреждания в инхибирането и изчезването на научения страх при жените 47–49. Ако случаят е такъв, това наистина повдига въпроса защо не са наблюдавани общи разлики между нашите контролни, наблюдателни и демонстрационни плъхове, ако експресията на Arc се задейства от инфралимбична активност, предизвикана от CS.

Женските показаха по-високи нива на експресия на Arc за всички преброявания във vCA3. Разликата в ядрения брой потенциално може да е резултат от по-голямо активиране след излагане на CS или повторно излагане на камерата за кондициониране при жените, докато по-високите нива на експресия на цитоплазмената дъга във vCA3 след хранителната задача може да показват полови различия в ролята на Arc във vCA3 или разпознаването на „позната“ храна (дори за Наблюдателите миризмата би била позната поради предишното им взаимодействие с Демонстратора) или възнаграждение/общи консумативни процеси. Тази женска също показа значително по-високо двойно маркиране във vCA3 - въпреки че този ефект беше малък - може също да показва генерализирани увеличения на транскрипцията на vCA3 Arc при жените. Женските плъхове също показват по-висока ядрена Arc транскрипция във vOFC и по-високи двойни нива на Arc иРНК в lOFC, въпреки че тези резултати са по-трудни за интерпретиране поради ниския брой женски контролни плъхове, чиято мозъчна тъкан е била достатъчно непокътната, за да се вземат OFC преброявания (n=2 и 3 съответно за страничната и вентралната OFC). Данните от наличните контролни плъхове показват възможно медиирано от пола увеличение на производството на OFC Arc mRNA, но е също толкова възможно този ефект да не продължи с по-високо n. По-специално, някои предишни изследвания показват структурни разлики в OFC и функционални разлики в OFC-медиирано поведение между женски и мъжки гризачи 50–52.

Екстракт от цистанче на прах

Вероятно нашите най-интересни полови разлики в Arc mRNA бяха открити в PLC. Освен това, мъжките показаха като цяло по-висок брой клетки, експресиращи Arc в цитоплазмата и както в цитоплазмата, така и в ядрото (двойно експресиращи), отколкото женските. Ние също така открихме, че докато мъжете Демонстратори и Наблюдатели не показаха увеличения на Arc транскрипцията спрямо контролите в момента на припомняне на страха, жените Демонстратори показаха значително по-висока ядрена Arc транскрипция от контролите, докато жените Наблюдатели попадаха по средата между двете. Този сексуален ефект може да се дължи на гореспоменатите дефицити, наблюдавани в наученото инхибиране и изчезване на страх, които се наблюдават при жени 47-49, тъй като минали изследвания предполагат, че PLC е критично включен в стимулирането на поведението на страх 45,53,54. Освен това, няколко проучвания показват разликите в PLC сигнализирането и структурата като потенциални движещи фактори за тези специфични за пола увреждания при инхибиране и изчезване на страха 55–58. Въпреки че не открихме значителна разлика в поведението на замръзване при жените и мъжете, регулирането на Arc иРНК в отговор на неподсилен страх, свързан със CS при конкретно женски демонстратори, може да е показателно за диференциално невронно преструктуриране в PLC, което в крайна сметка може да доведе до полови различия в изразяването на страха.

Изводи

Въпреки че констатациите от това проучване не разшириха разбирането ни за мозъчните механизми, участващи в извличането на социално придобити спомени, колкото се надявахме, нашите резултати предоставят някои потенциални прозрения за половите различия в изразяването на Arc, както и за ролята (или липса на такова) на Arc при извикване на дългосрочна памет. Нашите констатации предполагат, че – поне в префронталния кортекс и vCA3 – индукцията на мозъчна активност чрез припомняне на социално придобита информация не изглежда достатъчна, за да предизвика увеличаване на експресията на Arc спрямо тези, причинени само от процедурата на тестване. Въпреки това, валидността на този извод със сигурност е поставена под въпрос от неубедителните резултати от нашите поведенчески тестове, тъй като лошото запазване на социално придобитата информация може да бъде виновно за тази липса на ефект. Ние теоретизираме, че това може да се дължи на това, че минималното невронно преструктуриране се задейства, когато възникне припомняне преди консолидацията на системите. Допълнителни изследвания на ролята на протеина Arc в процесите на припомняне на социалното обучение все още са оправдани, като се има предвид, че нашите поведенчески резултати не демонстрират социално обучение при плъхове наблюдатели. Бъдещите изследвания, изследващи припокриването в невронните механизми, управляващи различни форми на социално обучение, също могат да се възползват от включването на животни, подложени на процедури за придобиване и животни, подложени на процедури за дистанционно извикване, тъй като тези времеви точки може да са по-склонни да предизвикат промени в пластичността и по този начин промени в експресията на Arc .

Добавка Cistanche близо до мен-Подобряване на паметта

Щракнете тук, за да видите продуктите Cistanche Improve Memory

【Попитайте за повече】 Имейл:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Методи

Предмети. Субектите са мъжки и женски плъхове Sprague–Dawley, отглеждани вътрешно в Центъра за животински ресурси на Тексаския университет в Остин. Седем двойки за размножаване дадоха субектите за Кохорта 1 (n=27 женски, n=36 мъжки), а осем двойки за размножаване дадоха субектите за Кохорта 2 (n=27 мъжки, без женски). Женските разплодни плъхове са Sprague-Dawley плъхове (между 215 и 260 g при пристигането), получени от Charles-Rivers (Wilmington, MA, USA), докато мъжките разплодни плъхове са Sprague-Dawley плъхове (между 230 и 300 g при пристигането), получени от Harlan (сега Envigo) (Хюстън, Тексас, САЩ). Всички плъхове бяха настанени с партньор от противоположния пол в клетка, докато женската покаже ясни признаци на бременност, в който момент женските бяха настанени поотделно. Кученцата бяха отбити в триади от еднополови братя и сестри на следродилния ден 21 (P21), за да се осигури научаване на социален страх26. Резервни малки бяха отбити в триади или диади с несвързани плъхове и използвани в други експерименти в Тексаския университет в Остин. Женски малки от нашата втора кохорта котило бяха използвани в други експерименти. Малките бяха оставени да узреят с минимални смущения, освен рутинните животновъдни процедури (напр. смяна на клетката), докато започнат процедурите за привикване (женски триади) или процедури за оценка на доминирането (мъжки триади) (процедурите за доминиране и резултатите са описани подробно в допълнителните материали). Кохорта 1 плъхове започнаха процедури на възраст между P106–P112 дни, а кохорта 2 плъхове започнаха между P99–P118 дни. Всички субекти бяха държани на 12-h обратен цикъл тъмно-светло с изключено осветление в 15:00 часа. Всички експериментални процедури бяха завършени по време на тъмния цикъл на субектите под червена светлина. Всички части от този експеримент бяха проведени в съответствие с Ръководството за грижа и използване на експериментални животни на Националния институт по здравеопазване и бяха одобрени за използване от Комитета за грижа и използване на животните към Тексаския университет в Остин.

Апарати и стимули. Обуславяне на страха. Всички процедури за кондициониране на страха и чрез прокси процедури за кондициониране на страх бяха завършени в стандартни камери за кондициониране (30,48 cm × 25,4 cm × 30,48 cm), изградени от прозрачни стени от плексиглас отпред и отзад, две стоманени стени отстрани и таван от плексиглас с дупка в центъра. Подовата настилка на камерата беше редица от пръти от неръждаема стомана, свързани към генератор на удари (Coulbourn Instruments, Allentown, PA). Всички камери бяха затворени в кутии за акустична изолация (Coulbourn Instruments) и осветени с вътрешна червена светлина. Поведението беше записано от камери със затворена верига (Panasonic™ WV-BP334), монтирани над камерите за кондициониране с лещи, поставени през отвора в плексигласовия таван. Камерите бяха напълно избърсани със 70 процента алкохолен разтвор между всеки субект. Цялото доставяне на стимул се контролира с помощта на софтуера Freeze Frame (Coulbourn Instruments). CS беше 20 стоуна (5 kHz, 80 dB) и, при процедури с множество CS презентации, променлив междупробен интервал (ITI) средно 180 s. Безусловният стимул (US) беше удар от 1 mA с продължителност 500 ms и прекратен едновременно с условния стимул.

Социално предаване на хранителните предпочитания. Всички STFP процедури се провеждат в стая, съседна на стаята, съдържаща камерите за кондициониране. Нови диети бяха съставени чрез смесване на 100 g прахообразна храна за гризачи 5LL2 Purina с 1 g смляна канела на McCormick (диета Cin) или 2 g какао на прах Hershey (диета Co). Обикновената диета, която беше дадена на всички плъхове по време на периода на ограничение на храната и на контролните плъхове в последния ден от експерименталните процедури, беше неподправена прахообразна храна за гризачи 5LL2 Purina. Всички прахообразни храни - както по време на ограничаване на храната, така и при експериментални процедури - бяха представени във висящи чаши за храна, които бяха направени от 4 унции. стъклени буркани и 12-калибарна стоманена тел. Чашите с храна бяха изплакнати и след това избърсани със 70% разтвор на етанол, преди да бъдат измити старателно със сапун и вода между всяка употреба. Всички фази на завършване на експерименталните процедури на STFP се провеждат в стандартни клетки за плъхове (26,7 cm × 48,3 cm × 20,3 cm), като всеки плъх получава нова клетка. Фазата на взаимодействие (фаза на придобиване на STFP) се проведе в голям пластмасов кош (50,5 cm × 39,4 cm × 37,5 cm) с постелки от дървени стърготини, които бяха заменени между всяка група. Пластмасовите контейнери бяха избърсвани старателно с Windex между всяка сесия.

Преглед на експерименталния дизайн и процедурите за социално обучение.

(Вижте Фиг. 2 за графичен преглед).

Всички плъхове бяха с ограничена храна за пет дни и свикнаха с боравене и стая, където ще се провеждат STFP процедурите за четири дни непосредствено преди ден 1 от експерименталните процедури. Докато процедурите за привикване приключиха преди ден 1 от експерименталните процедури, ограничението на храната продължи до края на експеримента. Един плъх от всяка триада беше определен за едно от трите условия: Демонстратор, Наблюдател или Контрол. Мъжките триади от кохорта 2 бяха оценени за доминиране и всички показаха ясна йерархия и бяха назначени така, че доминиращият плъх беше Демонстраторът, а подчинен беше Наблюдателят, за да се подобри социалното предаване на страха13. Индивидуалните триади бяха допълнително разделени на случаен принцип на групи, където Демонстраторът и Наблюдателят ще получат тест за избор при припомняне на STFP (Избор) и групи, където ще получат само демонстрираната храна (Cin).

На първия ден от експерименталната процедура, плъхове, определени в състояние на демонстратор, бяха преместени в камери за кондициониране на страха и им беше позволено да привикнат за 10 минути, преди да бъдат изложени на 3 CSs, които завършваха едновременно с болезнен шок (вижте "Апаратура и стимули" за специфика). След процедурите за обуславяне на страха, Демдемонстрантите бяха преместени обратно в първоначалната си домашна клетка. На ден 2 от експерименталните процедури, 24 часа след кондиционирането на страха, демонстраторите бяха върнати в камерите за кондициониране с техния партньор в клетката, определен за състояние на наблюдател и подложени на процедурата FCbP (фиг. 2). Непосредствено след процедурата FCbP, плъховете наблюдатели бяха върнати в домашната им клетка, докато демонстраторите бяха преместени в съседна стая и им беше даден 1 час да консумират храна на прах, ароматизирана с канела. След като измина един час, наблюдателите бяха преместени в кошче за взаимодействие с техните демонстранти и им беше позволено да взаимодействат с тях в продължение на 30 минути, за да позволят придобиването на социално предавано предпочитание към храната. Предишни изследвания от нашата лаборатория потвърдиха тези времеви точки като достатъчни за STFP предаване33. След това плъховете наблюдатели бяха върнати в домашната им клетка, докато плъховете демонстратори бяха преместени в отделни помещения, за да се предотврати по-нататъшно предаване на STFP към наблюдателя или контрола. На ден 3 от експерименталните процедури, контролните плъхове бяха преместени сами в камери за кондициониране и след 10 минути привикване към камерата бяха представени три 20 s CSs без придружаващ шок. Това беше направено в отделен ден, за да се сведе до минимум възможността за задържане на алармени феромони - за които е известно, че се освобождават от плъхове в отговор на заплашителни стимули и засягат специфичното обучение59 - все още присъстващи в камерата.

В последния ден от експеримента, ден 4, беше инициирано припомняне както за социално предаваните хранителни предпочитания, така и за обуславянето на страха/обуславянето на страх чрез прокси спомени. На всички наблюдатели и демонстратори от триади, присвоени на условието за избор, беше разрешен 10 минути ad libitum достъп както до диети с канела, така и до какао, докато на наблюдатели и демонстратори от триади, присвоени към условието Cin, беше даден 10 минути ad libitum достъп до диета с канела- само. Във всички триади, на контролните плъхове беше даден 10 минути ad libitum достъп до обикновена храна на прах. Веднага след това плъховете бяха върнати в домашната им клетка и оставени необезпокоявани за период от 10- минути, преди да бъдат преместени обратно в лабораторното пространство и поставени в камерите за кондициониране. След това на всички плъхове беше даден 3-минутен период на привикване към камерата, преди да им бъде даден един 20 s CS. 5 минути след края на CS, всички плъхове бяха евтаназирани чрез инжектиране на разтвор на пентобарбитал и фенитоин (Euthasol; Virbac Animal Health) и перфузирани. Техните мозъци по-късно бяха обработени за експресия на Arc mRNA. Като се има предвид времевият ход на нашата крайна процедура и известната времева рамка на миграция на Arc mRNA28, увеличаването на цитоплазмената експресия на Arc mRNA би се дължало на STFP процедури за извикване, докато ядрената експресия би се дължала на FC/FCbP процедури за извикване, като клетките, показващи двойно активиране, имат е активиран и в двата времеви интервала (вижте Фиг. 1; също вижте „Анализ на тъканите“ за подробности относно обработката и обработката на тъканите).

Пустинна жива цистанче

Процедури.

Привикване и ограничаване на храната. Цялото привикване става точно преди първия ден от експерименталните процедури. Привикването се състои в това, че всяка клетка с плъхове се премества в стаята, в която ще се провеждат всички експериментални процедури на STFP, и им се оставя да привикнат към стаята за 15 минути. По време на този период всеки плъх беше взет и обработен от експериментатора, който щеше да работи в продължение на 2 минути, за да ги привикне към боравене и този индивид. Всички процедури за привикване се провеждат в тъмна стая под червена светлина и всички плъхове получават 4 дни привикване. Ограничаването на храната започва ден преди началото на привикването и продължава до края на експеримента. В началото на ограничаването на храната пелетите храна, които всички субекти са яли, са извадени от клетката. Впоследствие на всички клетки беше даден ежедневен ad libitum достъп до висящ буркан, пълен с обикновена прахообразна диета Purina 5LL2 в домашната им клетка за 1 час. Плъховете се претеглят ежедневно, като се започне от началото на ограничението на храната до края на експеримента, за да се гарантира, че няма необичайна загуба на тегло.

Поведенческо точкуване.

Цялото поведенческо оценяване за този експеримент беше завършено с помощта на интерактивния софтуер за изследване на поведението (BORIS)60.

Страхът обуславя точкуване чрез прокси социални контакти. Предишни изследвания от нашата лаборатория показват, че има силна връзка между количеството страх, демонстрирано от наблюдателите при теста за дългосрочна памет, и времето, прекарано във взаимодействие с техния демонстратор по време на CS при мъжете13 и след CS при жените14,26. Като такива, видеоклипове от фазата на социално придобиване на обуславяне на страха чрез прокси бяха оценени за социално взаимодействие между Наблюдателя и Демонстратора за всеки 20-s период по време на CS презентацията и 20-s период непосредствено след всеки CS презентация за предоставяне на вторичен индекс на придобиване на страх. Социалният контакт беше отбелязан, когато плъхове наблюдатели и демонстратори осъществиха контакт, различен от мимоходом по време на периода на сигнал (по време на CS контакт) или през 20-те секунди след CS (след CS контакт). Беше изчислен процентът на всеки точкуващ период, прекаран в контакт с Демонстратора. Данните за процента на контакт по време на периода на сигнал за мъже и данни за процента на контакт непосредствено след периода на сигнал за жени бяха изтеглени и комбинирани в една мярка за „подходящ контакт“, която да се използва във всички окончателни статистически анализи.

Точкуване на теста за избор. Видеоклиповете на теста за избор за иницииране на припомняне на социално предавано хранително предпочитание бяха оценени за времето, което даден плъх е прекарал във взаимодействие с чаша с храна въз основа на това дали съдържа демонстрираната/вече консумирана диета (диета Cin) или нова диета (diet Co). Това беше направено като потенциална вторична мярка за хранителни предпочитания, тъй като очаквахме, че поради необичайно краткия тест за избор (10 минути) по необходимост може да не сме в състояние да открием предпочитания въз основа на изяденото количество. Взаимодействието с чашата с храна се оценява за всеки път, когато плъхът е бил физически в контакт с и не се е отдалечавал активно от чашата (т.е. предни лапи в контакт с буркана, глава вътре в буркана, катерене на върха на буркана или активно хранене от буркана). За статистически анализ изчислихме процента на времето, прекарано във взаимодействие с чаша, съдържаща дадена диета, въз основа на общото време, прекарано във взаимодействие с която и да е чаша (напр. за диета Cin, Процентно време= TimeDiet Cin/ (TimeDiet Co плюс TimeDiet Cin)). Пълната 10-минутна тестова сесия за избор беше оценена за всички плъхове, които са преминали през нея.

Тъканен анализ.

За да се сведе до минимум разграждането на иРНК от рибонуклеаза (RNase), цялото оборудване и повърхности, използвани по време на подготовката и обработката на мозъка, се дезинфекцират редовно или с RNase AWAY™ (Termo Scientity; Waltham, MA, USA) или RNAseZap™ (Ambion; Grand Island, NY , САЩ).

Подготовка на мозъка. Непосредствено след евтаназията, субектите са перфузирани интракардиално с помощта на 4% разтвор на параформалдехид (PFA). След това мозъците бяха отстранени и потопени в 4% PFA, за да се позволи постфиксация за 24-48 часа. След завършване на постфиксацията мозъците се прехвърлят в разтвор от 30 процента захароза във фосфатно буфериран физиологичен разтвор за криопротекция. След като мозъците са потънали на дъното на флакона, което показва достатъчно усвояване на захароза за криопротекция, те са бързо замразени в прахообразен сух лед и са преместени във фризер при –80 градуса за съхранение до разделяне. След това мозъците се нарязват коронарно върху плъзгащ се микротом с дебелина 30 µm на шест серии (така че следващите срезове в една серия са на разстояние 180 µm) и веднага се монтират и оставят да изсъхнат на въздух, преди да бъдат поставени във вакуумна камера с гъби за овлажняване, където са били оставя се да изсъхне напълно за 24 часа. Само хипокампални участъци (приблизително -3,2 до -5,2 от брегма) или префронтални региони (приблизително плюс 3,7 до плюс 1,4 от брегма), съдържащи областите на интерес, бяха нарязани и обработени. След това монтираните секции се поставят в запечатана без РНКаза слайд кутия и се съхраняват при – 80 градуса до обработката.

Обработка на тъкани. Всички процедури бяха модифицирани от протоколите, използвани в Lee et al.61 и Petrovich et al.62. Преди тъканната обработка беше конструирана cRNA сонда за Arc mRNA, започвайки с плазмид, съдържащ cDNA с пълна дължина (~3.0 kbp) от Arc транскрипта. За да се създаде сондата, ДНК първо се нарязва чрез смесване на плазмида с 10 × буфер за смилане (NEBufer; Biolabs; Ipswich, MA, САЩ), 10 × EcoRI рестрикционен ензим (Biolabs) и пречистена вода без нуклеаза, преди да бъде инкубира се при 37 градуса за 2 часа. Правилното нарязване на ДНК се проверява с помощта на електрофореза, след което ДНК се пречиства за една нощ в етанол. След пречистване, ДНК утайката се центрофугира в центрофуга, промива се в EtOH, изсушава се напълно и се ресуспендира в ТЕ буфер. За да се провери дали ДНК е правилно линеаризирана, да се изчисли концентрацията на Arc и да се провери дали няма замърсители, проба от ДНК беше тествана чрез спектрофотометрия (Nanodrop Lite; Thermo Scientific, Waltham, MA, USA). Маркираната с дигоксигенин (DIG) проба се транскрибира чрез комбиниране на линеаризираната ДНК с вода без РНКаза, 10 × транскрипционен буфер (Ambion), РНКазен блок (Ambion), смес за маркиране на DIG РНК (Roche Applied Science; Indianapolis, IN, USA) и Т7 РНК полимераза (Ambion) преди инкубиране на разтвора при 37 градуса за 2 часа. Накрая, сондата се разрежда във вода без нуклеаза и се пречиства в мини Quick-Spin колона (Roche).

След като cRNA сондата е конструирана, предметни стъкла, съдържащи тъкан от мъжки плъхове, се потапят за 40 минути в 4% разтвор на PFA, за да се увеличи целостта на тъканта по време на in situ обработка. Тъкан от женски плъхове се обработва без това промиване с PFA. След това слайдовете се промиват и инкубират в буфер на протеиназа К (PK) при 37 градуса, преди да бъдат обработени с 0,5 процента оцетен анхидрид/1,5 процента разтвор на триетаноламин, съдържащ ледена оцетна киселина за пермеабилизиране. След това слайдовете се промиват с физиологичен разтвор-натриев цитрат (SSC) буфер, преди да бъдат дехидратирани чрез потапяне в нарастващи концентрации на етанол и изсушени на въздух. Накрая, всяко предметно стъкло беше покрито с 300 µL хибридизационен буфер, съдържащ тРНК на дрожди (Invitrogen; Карлсбад, Калифорния, САЩ), ДНК на сперматозоиди от сьомга (Ambion), дитиотреитол (Sigma; Сейнт Луис, Мисури, САЩ) и cRNA сондата (1:100). След това всяко предметно стъкло беше покрито с покривно стъкло и запечатано около краищата с DPX крепеж (Electron Microscopy Sciences; Hatfield, PA, USA), преди да бъде инкубирано в хибридизационния разтвор за 20 часа при 60 градуса. Трябва да се отбележи, че покривното стъкло предпазва тъканта от всякакъв директен контакт с DPX стойката, така че по-късно отстраняването на втвърдения DPX не причинява увреждане на тъканта.

След като хибридизацията приключи, покривните стъкла бяха внимателно отстранени и предметните стъкла бяха инкубирани в 4xSSC буфер, смесен с натриев тиосулфат (ST) при 60 градуса за един час, преди да бъдат обработени с разтвор на основата на етилендиаминтетраоцетна киселина за инхибиране на РНКазната активност при 37ºC. След това слайдовете се промиват в низходящи концентрации на SSC ​​разтвор, смесен със ST отново при 60 градуса. След това тъканта се измива в разтвор на детергент (Tween20), преди да се оцвети с PerkinElmer TSA Fluorescein система (NEL701001KT; PerkinElmer, Waltham, MA, USA). Слайдовете се поставят във влажна камера и се третират с блокиращ буфер, последван от анти-DIG-HRP конюгат в продължение на 2 часа. След това предметните стъкла се измиват за кратко в разтвора на детергента, преди да бъдат върнати в тъмна влажна камера и покрити с разтвор, съдържащ флуоресцеин тирамиден реагент (FITC) и оставени да престоят 30 минути. Накрая предметните стъкла се измиват, оставят се да изсъхнат на въздух и се покриват с монтиращо средство, съдържащо ядреното оцветяване 4′,6-диамидино-2-фенилинодол (DAPI) (Vectashield; Vector Lab, Бърлингейм, Калифорния, САЩ) . Слайдовете се съхраняват на тъмно при – 20 градуса до изобразяване.

Изобразяване. Всички изображения бяха завършени с помощта на микроскоп Axio Scope A1 (Zeiss; Tornwood, NY, USA). Регионите, представляващи интерес, бяха идентифицирани чрез DAPI оцветяване с помощта на 10×обектив с помощта на мозъчния атлас на Paxinos и Watson63 и след това изобразени под 40×обектив (действително увеличение ~900×). Бяха направени изображения както за DAPI, така и за FITC петна и по-късно оцветени и обединени автоматично с помощта на персонализиран макрос в софтуера ImageJ с FIJI (NIH, Bethesda, MD). Поради разграждането на тъканите, протичащо in situ, не всички участъци или зони от потенциален интерес са жизнеспособни. Като такива, изображенията не могат да бъдат надеждно z-подредени и вместо това са заснети на една равнина. Бяха изобразени и преброени следните региони: прелимбичната кора (плюс 3,72 до плюс 2,52 от брегма), инфралимбичната кора (плюс 3,52 до плюс 2,2 от брегма), латералната (плюс 3,72 до плюс 3,2 от брегма) и вентралната (плюс 3,72 до плюс 3,0 от брегма) орбитофронтален кортекс, областта CG1 на предния цингуларен кортекс (плюс 3,72 до плюс 2,52 от брегма) и областта CA3 на вентралния хипокампус (- 4,3 до - 4,8 от брегма) (фиг. S6). Въпреки че амигдаларните ядра също представляват особен интерес за тяхната добре установена роля в научаването на страха, гореспоменатото увреждане на тъканите е особено тежко в тази област. Поради това не успяхме да получим достатъчно голям размер на извадката, за да включим този регион (необходими бяха минимум 6 жизнеспособни изображения/регион, за да може плъх да бъде включен в статистическия анализ на дадена област).

Преброяването беше завършено регион по регион и на всички файлове с изображения беше присвоен произволен цифров код, за да се заслепи експериментаторът, завършващ преброяването, от всякакви подробности относно изображението по време на преброяването. Всички преброявания на клетките бяха направени в ImageJ с пакета FIJI и бяха направени с помощта на инструмента за преброяване на клетки. Клетките се преброяват за ядрена и цитоплазмена Arc mRNA експресия отделно и клетките, показващи припокриваща се експресия, се преброяват като двойно експресиращи. Окончателните преброявания за ядрени Arc-експресиращи и цитоплазмени Arc-експресиращи клетки включват само тези клетки, експресиращи само в тази област (т.е. не включват двойно-експресиращи клетки). Бяха направени пълни преброявания за оцветени с DAPI клетки и процентът на клетките, показващи експресия във всяка дадена област, беше изчислен, последван от средния процент на клетките, показващи всеки тип активиране при отделни плъхове. За да се предотврати непропорционален ефект на резултатите от плъхове с по-голям брой изображения върху нашата статистика и да се предотврати инфлация на размера на извадката, само тези средни стойности бяха използвани в нашия окончателен анализ.

Преглед на статистическия анализ. Всички статистически анализи бяха завършени с помощта на софтуера за кодиране на R. Пълният код е свободно достъпен за преглед в нашето хранилище на данни на https://dataverse.tdl.org/dataverse/MonflsFearMemoryLab. Освен ако не е посочено друго, граничната стойност за тест, който да се счита за статистически значим, беше зададена на p<0.05. All of our Arc results, unless otherwise mentioned, were tested for significance using a series of two-way ANOVAs (type 2) containing sex and condition as between-subject variables (Sex and Condition) with an individual ANOVAs run for each area of expression (nucleus, cytoplasm, and dual). Similarly, a series of one-way ANOVAs were run with a combined variable containing the food task (diet Cin only or Choice test for Demonstrators and Observers; plain chow only for all Controls) for each area of expression. Sex was not included as a secondary variable as the relatively low number of female rats made sample sizes too small for certain condition/food task combinations. When ANOVA assumptions were violated, data were transformed using either a log(y+1) function or by taking the inverse square root. As these transforms did not always succeed in bringing ANOVAs in line with assumptions, Kruskal-Wallace tests were performed on datasets where transforms were not effective. Pairwise t-tests were performed for posthoc analyses against a Bonferroni-corrected alpha value when ANOVAs indicated a significant effect of condition (α=0.017) or a significant sex and condition interaction (α=0.008; conditions tested against each other within each sex-only) with between-group effect sizes calculated using Cohen's d. To provide a better gauge of variability for our smaller group sizes, the MSError obtained from our ANOVA was used in the denominator of post hoc t-tests. Effect sizes for ANOVAs were calculated using the standard partial η2 formula and for Kruskal-Wallace tests using the formula η2 H =(H − k+1)/(n – k). For simplicity of data presentation, unless the addition of the food task grouping variable resulted in a significant effect or unless a significant contribution of sex was detected all data were presented graphically split up by area of expression and overall experimental condition only. Any rats that had fewer than 6 viable images counted in a given brain region were excluded from the analysis for that area.

Бяха изчислени двумерни корелации за плъхове наблюдатели и демонстратори, за да се оценят потенциалните връзки между поведенческите мерки и броя на Arc клетките за експресия, възникваща в подходящи моменти от време (напр. цитоплазмен брой Arc за процент изядена канела). Корелационните коефициенти на Pearson бяха използвани, ако не бяха открити отклонения в двата набора от данни с тест на Grubbs. Ако бяха открити извънредни стойности, вместо това се използваше коефициентът на корелация на Spearman. За да се прецени дали има връзка между социалното обучение и Arc в двойно експресиращите клетки в наблюдатели, общ показател за социално обучение - наричан оттук нататък като показател за социално обучение (SLM) - беше изчислен чрез вземане на средната стойност на стандартизираните резултати ( z-резултат) за процента на общото изядено, което е демонстрираната храна и процента на времето, прекарано в контакт с Демонстратора по време на фазата на социално обучение на FCbP по време на CS презентацията (мъже) или след CS презентацията (жени). Трябва да се отбележи, че процентът на замръзване в момента на последния ден не беше използван за плъхове наблюдатели, тъй като нашите резултати и резултатите от нашия последващ експеримент (вижте Допълнителни материали) показват, че условията на нашата процедура за тестване на поведението са довели до известно поведение на замръзване дори в Контролните плъхове - поне при мъжките - и като такива може да не са най-добрият измерител на силата на социално придобитата реакция на страх. Като такива, като се имат предвид нашите минали констатации, че взаимодействията с демонстратора по време или след CS (в зависимост от пола) силно предсказват по-късно замразяване до репликата 12–14, взаимодействието с демонстратора в подходящата за пола времева точка беше тествано за корелации срещу активността на ядрената дъга вместо да замръзне на момента в последния ден за плъхове наблюдатели. За демонстраторите подобен показател беше изчислен въз основа на стандартизирано замразяване до момента на последния ден и процента от общото изядено, което беше познатата диета (Диета Cin) и проверено спрямо активността на двойна дъга. За коригиране на множеството тестове, изпълнявани на всеки набор от поведенчески данни (6, за всяка мозъчна област), критичната p-стойност за корелации беше коригирана на Bonferroni на 0.0083.

Препратки

1. Dawson, G., Meltzof, AN, Osterling, J., Rinaldi, J. & Brown, E. Децата с аутизъм не успяват да се ориентират към естествено възникващи социални стимули. J. Autism Dev. Разстройство. 28, 479–485 (1998).

2. Zeeland, AAS-V., Dapretto, M., Ghahremani, DG, Poldrack, RA & Bookheimer, SY Обработка на наградите при аутизъм. Autism Res.

3, 53–67 (2010). 3. Chevallier, C., Kohls, G., Troiani, V., Brodkin, ES & Schultz, RT Теория за социалната мотивация на аутизма. Тенденции Cogn. Sci. 16, 231–239 (2012).

4. Öst, L.-G. Начини за придобиване на фобии и резултат от поведенчески лечения. поведение. Рез. тер. 23, 683–689 (1985).

5. Олендик, TH & Кинг, Ню Джърси Произход на детските страхове: Оценка на теорията на Рахман за придобиването на страх. поведение. Рез. тер. 29, 117–123 (1991).

6. Merckelbach, H., Arntz, A. & de Jong, P. Кондициониращи преживявания при фобия от паяк. поведение. Рез. тер. 29, 333–335 (1991).

7. Jeon, D. et al. Обучението на страх чрез наблюдение включва дефектна система за болка и Cav1.2 Ca2 плюс канали в ACC. Нац. Neurosci. 13, 482–488 (2010).

8. Yusufshaq, S. & Rosenkranz, JA Социалната изолация след отбиване влошава обуславянето на страх от наблюдение. поведение. Brain Res. 242, 142–149 (2013).

9. Kavaliers, M., Choleris, E. & Colwell, DD Да се ​​научим от другите да се справяме с хапещи мухи: Социално обучение на предизвикана от страх условна аналгезия и активно избягване. поведение. Neurosci. 115, 661–674 (2001).

10. Kavaliers, M., Colwell, DD & Choleris, E. Да се ​​научим да се страхуваме и да се справяме с естествен стрес: Индивидуално и социално придобит кортикостерон и реакции на избягване на хапещи мухи. Horm. поведение. 43, 99–107 (2003).

11. Kavaliers, M., Colwell, DD & Choleris, E. Родство, познаване и социален статус модулират социалното обучение за "микрохищници" (хапещи мухи) при еленови мишки. поведение. Ecol. Sociobiol. 58, 60–71 (2005).

12. Bruchey, AK, Jones, CE & Monfls, M.-H. Обуславяне на страх чрез прокси: Социално предаване на страх по време на възстановяване на паметта. поведение. Brain Res. 214, 80–84 (2010).

13. Jones, CE & Monfls, M.-H. Статусът на доминиране предсказва предаването на социален страх при лабораторни плъхове. Anim. Cogn. 19, 1051–1069 (2016).

14. Agee, LA, Jones, CE & Monfls, M.-H. Различни ефекти от познаване/родство при социалното предаване на страхови асоциации и хранителни предпочитания при плъхове. Anim. Cogn. 22, 1013–1026 (2019).

15. Mitchell, CJ, Heyes, CM, Gardner, MR & Dawson, GR Ограничения на двупосочна контролна процедура за изследване на имитация при плъхове: сигнали за миризма на манипуландума. QJ Exp. психол. B 52, 193–202 (1999).

16. Galef, BG & Wigmore, SW Прехвърляне на информация относно далечни храни: Лабораторно изследване на хипотезата за „информационния център“. Anim. поведение. 31, 748–758 (1983).

17. Galef, BG, Mason, JR, Preti, G. & Bean, NJ Въглероден дисулфид: Семиохимичен медииращ социално индуциран избор на диета при плъхове. Physiol. поведение. 42, 119–124 (1988).

18. Галеф, БГ Казус в поведенчески анализ, синтез и внимание към детайла: Социално научаване на хранителни предпочитания. поведение. Brain Res. 231, 266–271 (2012).

19. Posadas-Andrews, A. & Roper, TJ Социално предаване на хранителните предпочитания при възрастни плъхове. Anim. поведение. 31, 265–271 (1983).

20. Countryman, RA, Orlowski, JD, Brightwell, JJ, Oskowitz, AZ & Colombo, PJ Фосфорилиране на CREB и експресия на c-Fos в хипокампуса на плъхове по време на придобиване и припомняне на социално предавани хранителни предпочитания. Хипокампус 15, 56–67 (2005).

21. Boix-Trelis, N., Vale-Martínez, A., Guillazo-Blanch, G., Costa-Miserachs, D. & Martí-Nicolovius, M. Ефекти от стимулацията на nucleus basalis magnocellularis върху социално предавани хранителни предпочитания и в -Fos израз. Уча. Мем. 13, 783–793 (2006).

22. Ross, RS & Eichenbaum, H. Динамика на хипокампална и кортикална активация по време на консолидацията на непространствена памет. J. Neurosci. 26, 4852–4859 (2006).

23. Smith, CA, Countryman, RA, Sahuque, LL & Colombo, PJ Времеви курсове на експресията на Fos в хипокампуса и неокортекса на плъх след придобиване и припомняне на социално предавани хранителни предпочитания. Neurobiol. Уча. Мем. 88, 65–74 (2007).

24. Lesburguères, E. et al. Ранното маркиране на кортикалните мрежи е необходимо за формирането на трайна асоциативна памет. Science 331, 924–928 (2011).

25. Кнапска, Е. и др. Трансферът на емоционална информация между субектите предизвиква специфични модели на активиране на амигдалата. Proc. Natl. акад. Sci. 103, 3858–3862 (2006).

26. Jones, CE, Riha, PD, Gore, AC & Monfls, M.-H. Социално предаване на павловски страх: обуславяне на страх чрез прокси при свързани женски плъхове. Anim. Cogn. 17, 827–834 (2014). 27. Twining, RC, Vantrease, JE, Love, S., Padival, M. & Rosenkranz, JA Една интра-амигдала верига специфично регулира социалното учене на страха. Нац. Neurosci. 20, 459–469 (2017).

28. Olsson, A., Knapska, E. & Lindström, B. Невронни и изчислителни системи за социално обучение. Нац. Rev. Neurosci. 21, 197–212 (2020).

29. Guzowski, JF, McNaughton, BL, Barnes, CA & Worley, PF Специфична за околната среда експресия на непосредствено-ранния ген Arc в хипокампалните невронни ансамбли. Нац. Neurosci. 2, 1120–1124 (1999).

30. Kim, JJ & Jung, MW Невронни вериги и механизми, включени в кондиционирането на страха на Павлов: Критичен преглед. Neurosci. Биологично поведение. Rev. 30, 188–202 (2006).

31. Laurent, V. & Westbrook, RF Инактивирането на инфралимбичната, но не и на прелимбичната кора уврежда консолидацията и възстановяването на изчезването на страха. Уча. Мем. 16, 520–529 (2009).

32. Tovote, P., Fadok, JP & Lüthi, A. Невронни вериги за страх и тревожност. Нац. Rev. Neurosci. 16, 317–331 (2015).

33. Agee, LA & Monfls, M.-H. Ефект на надеждността на демонстратора и актуалността на последната демонстрация върху придобиването на социално предавано предпочитание към храната. R. Soc. Open Sci. 5, 172391 (2018).

34. Nikolaienko, O., Patil, S., Eriksen, MS & Bramham, CR Arc протеин: Гъвкав център за синаптична пластичност и познание. Семин. Cell Dev. Biol. 77, 33–42 (2018).

35. Chia, C. & Otto, T. Експресията на Hippocampal Arc (Arg3.1) се индуцира от извикване на паметта и е необходима за повторно консолидиране на паметта при кондициониране на следи от страх. Neurobiol. Уча. Мем. 106, 48–55 (2013).

36. Pilarzyk, K. et al. Загубата на функция на фосфодиестераза 11A4 показва, че скорошните и отдалечените дългосрочни спомени могат да бъдат разделени. Curr. Biol. 29, 2307-2321.e5 (2019).

37. Jones, CE Социално предаване на асоциативен страх при гризачи - Индивидуални различия в обуславянето на страха чрез прокси Vol. 17 (Springer, 2021).

38. Smith, CA, East, BS & Colombo, PJ Орбитофронталният кортекс не е необходим за придобиване или дистанционно припомняне на социално предавани хранителни предпочитания. поведение. Brain Res. 208, 243–249 (2010).

39. Rudebeck, PH, Walton, ME, Smyth, AN, Bannerman, DM & Rushworth, MFS Отделните невронни пътища обработват различни разходи за вземане на решения. Нац. Neurosci. 9, 1161–1168 (2006).

40. Rolls, ET & Grabenhorst, F. Орбитофронтален кортекс и отвъд: От афект до вземане на решения. Прог. Neurobiol. 86, 216–244 (2008).

41. Wallis, JD Междувидови изследвания на орбитофронталната кора и вземането на решения, базирани на стойности. Нац. Neurosci. 15, 13–19 (2012).

42. Izquierdo, A. Функционална хетерогенност в рамките на орбитофронталния кортекс на плъх при обучението за възнаграждение и вземането на решения. J. Neurosci. 37, 10529–10540 (2017).

43. Randesi, M. et al. Половите разлики след хроничен стрес в експресията на гени, свързани с опиоиди, стрес и невропластичност, в хипокампуса на плъхове. Neurobiol. Стрес 8, 33–41 (2018).

44. Maren, S., Phan, KL & Liberzon, I. Контекстуален мозък: последици за кондиционирането на страха, изчезването и психопатологията. Нац. Rev. Neurosci. 14, 417–428 (2013).

45. Vidal-Gonzalez, I., Vidal-Gonzalez, B., Rauch, SL & Quirk, GJ Микростимулацията разкрива противоположни влияния на прелимбичния и инфралимбичния кортекс върху изразяването на условен страх. Уча. Мем. 13, 728–733 (2006).

46. ​​Sierra-Mercado, D., Padilla-Coreano, N. & Quirk, GJ Дисоциируеми роли на прелимбични и инфралимбични кори, вентрален хипокампус и базолатерална амигдала в изразяването и изчезването на условен страх. Невропсихофармакология 36, 529–538 (2011).

47. Баран, SE, Армстронг, CE, Niren, DC, Hanna, JJ & Conrad, CD Хроничен стрес и различия между пола върху припомнянето на обуславянето и изчезването на страха. Neurobiol. Уча. Мем. 91, 323–332 (2009).

48. Greiner, EM, Müller, I., Norris, MR, Ng, KH & Sangha, S. Половите разлики в регулирането на страха и поведението, търсещо възнаграждение, в задача за дискриминация страх-безопасност-възнаграждение. поведение. Brain Res. 368, 111903 (2019).

49. Дей, HLL & Stevenson, CW Невробиологична основа на половите различия в научения страх и неговото инхибиране. Евро. J. Neurosci. 52, 2466–2486 (2020).

50. van Hasselt, FN et al. Индивидуалните вариации в грижата за майката в началото на живота корелират с вземането на решения в по-късен живот и експресията на c-fos в префронталните субрегиони на плъхове. PLoS ONE 7, e37820 (2012).

51. Bayless, DW & Daniel, JM Полови разлики в нивата на свързания с миелин протеин в рамките на и плътността на проекциите между орбиталния фронтален кортекс и дорзалния стриатум на възрастни плъхове: Последици за инхибиторен контрол. Неврология 300, 286–296 (2015).

52. Orsini, CA & Setlow, B. Половите различия в животинските модели на вземане на решения. J. Neurosci. Рез. 95, 260–269 (2017).

53. Corcoran, KA & Quirk, GJ Дейността в прелимбичния кортекс е необходима за изразяване на наученото, но не е вродена. страхове. J. Neurosci. 27, 840–844 (2007).

54. Burgos-Robles, A., Vidal-Gonzalez, I. & Quirk, GJ. Устойчивите условни реакции в прелимбичните префронтални неврони са свързани с изразяването на страх и неуспеха на изчезване. J. Neurosci. 29, 8474–8482 (2009).

55. Fenton, GE et al. Постоянната активност на прелимбичния кортекс допринася за засиленото изразяване на научен страх при жените. Уча. Мем. 21, 55–60 (2014).

56. Fenton, GE, Halliday, DM, Mason, R., Bredy, TW & Stevenson, CW Половите разлики в наученото изразяване на страх и изчезване включват променени гама трептения в медиалния префронтален кортекс. Neurobiol. Уча. Мем. 135, 66–72 (2016).

57. Кири, AJ и др. Сигнализацията на хипофизния аденилат циклаза-активиращ полипептид (PACAP) в префронталния кортекс модулира научаването на страх, но не и пространствената работна памет при женски плъхове. Неврофармакология 133, 145–154 (2018).

58. Day, HLL, Suwansawang, S., Halliday, DM & Stevenson, CW Половите разлики в слуховата дискриминация на страха са свързани с променена функция на медиалния префронтален кортекс. Sci. Справка 10, 6300 (2020).

59. Kikusui, T., Takigami, S., Takeuchi, Y. & Mori, Y. Алармен феромон засилва индуцираната от стрес хипертермия при плъхове. Physiol. поведение. 72, 45–50 (2001).

60. Friard, O. & Gamba, M. BORIS: Безплатен, многофункционален софтуер за регистриране на събития с отворен код за видео/аудио кодиране и наблюдения на живо. Методи Ecol. Еволюция 7, 1325–1330 (2016). 61. Lee, HJ, Haberman, RP, Roquet, RF & Monfls, M.-H. Изчезването и възстановяването плюс изчезването на условния страх по различен начин активират медиалния префронтален кортекс и амигдалата при плъхове. Отпред. поведение. Neurosci. 9, 1–10 (2016).

62. Петрович, GD, Holland, PC & Gallagher, M. Amygdalar и префронталните пътища към латералния хипоталамус се активират от научен сигнал, който стимулира храненето. J. Neurosci. 25, 8295–8302 (2005).

63. Paxinos, G. & Watson, C. Te Rat Brain in Stereotaxic Coordinates: Hard Cover. (Elsevier, 2006).