Продължителна Ex-vivo Нормотермична бъбречна перфузия: Въздействието на перфузата състав
Feb 26, 2022
Абстрактен
Normothermic машина перфузия (NMP) на донорБъбреците предоставя възможност за подобрено запазване на присадката и обективна предварителна трансплантация ex-vivo оценка на органите. В момента за бъбречна NMP съществуват множество перфузионни разтвори. Това проучване има за цел да оцени четири различни перфузионни разтвора едно до друго и да определи влиянието на различните перфузни състави върху измеренитеБъбречнаперфузионни параметри. СвинеБъбрецитеи кръв са получени от кланица.Бъбрецитеподложени на NMP при 37°C в продължение на 7 часа, с 4 различни перфузионни разтвора (n = 5 на група). Група 1 се състои от червени кръвни клетки (RBCs) и перфузионен разтвор въз основа на Medium E. Група 2 на Williams се състои от RBCs, албумин и балансиран електролитен състав. Група 3 съдържа RBCs и носител на базата на британски клиничен NMP разтвор. Група 4 съдържа RBCs и среда, използвана при 24-часови експерименти с перфузия. NMP моделите на потока за разтвори 1 и 2 бяха подобни, разтвори 3 и 4 показаха по-ниски, но по-стабилни дебити. Реактивните вещества на тиоббитуровата киселина са значително по-високи в разтвор 1 и 4 в сравнение с останалите групи. Нивата на маркера за нараняване N- ацетил-β-D глюкозаминидаза са значително по-ниски в разтвор 2 в сравнение с разтвор 3 и 4. Това проучване илюстрира, че съставът на перфузата по време на NMP значително оказва влияние върху измерените параметри на перфузия и нараняване и по този начин влияе върху тълкуването на потенциалните маркери за жизнеспособност. Необходими са допълнителни изследвания, за да се проучат индивидуалните влияния на компонентите на главни парфюми, за да се определят най-оптималните условия по време на NMP и в крайна сметка да се разработят универсални критерии за оценка на органите.
Ключови думи:бъбречна функция; бъбрек; бъбречно увреждане; бъбреци, парфюмирани ; бъбречна тръбна
CISTANCHE ще подобри бъбречната/бъбречната фукция
Въвеждането
В световен мащаб стандартният донорбъбрекметод за запазване е статично студено съхранение (SCS). В нидерландската хипотермична машина перфузия (HMP) обаче се използва клинично за запазване на всички починали донориБъбреците.HMP показва намаляване на забавената функция на присадката и подобрена 1- и 3-годишнаБъбречнапреживяемостта на присадката в сравнение със запазването на SCS [1,2]. За да се сведе до минимум съществената разлика между предлагането и търсенето на донориБъбрецитенеоптимален починал-донорБъбрецитесе използват все по-често. Поради увеличената употреба на тези донори, по-малко от оптимално качествоБъбрецитеот изключително значение е да се установят още по-нататъшни оптимизирани стратегии за солидна и обективна оценка преди трансплантацията, както и за запазване. Използването на перфузия на нормотермична машина (NMP) за тези починали-донориБъбрецитевсе по-често се разглежда. Предклиничните проучвания показват, че NMP може да доведе до по-добър резултат от трансплантацията в сравнение само с SCS [3]. Като дарение след сърдечна смърт и удължени критерии донорБъбрецитеса по-малко толерантни към хипотермичното съхранение в сравнение с органите, получени от стандартни критерии донорски процедури, органите донори с маргинално качество биха могли да се възползват от запазването на NMP [4,5]. Понастоящем само един клиниченБъбречнаNMP изпитване се провежда във Великобритания, със сравнително кратък период на перфузия преди трансплантацията от 1 час [6]. За адекватна оценка на органите и реанимация, обаче, по-дългите NMP времена са замислимо необходими [7]. Този метод предоставя възможност за предтрансплантационна органна диагностика, подобрено запазване и ex-vivo интервенции преди трансплантацията за подобряване на следтрансплантационнитебъбречна функция. В днешно време много центрове за трансплантации започнаха да инвестират в тази обещаваща стратегия за перфузията normothermic ex-vivo. Сред тези центрове съществува голямо разнообразие от NMP перфузионни решения. Голямата разнородност в състава би могла да възпрепятства крайната цел за определяне на единни и стабилни критерии за оценка на НМР. Тази разнородност отчасти се задвижва от понастоящем само ограниченото разбиране за това каква трябва да бъде точната формулировка на NMP разтвор. Най-вероятно нормотермичен перфузионен разтвор трябва да съдържа кислороден носител, колоид и балансиран електролитен състав [8]. Съставът ще зависи и от продължителността на НМР, тъй като по-дългите периоди на перфузия ще изискват оптимизирани перфузни състави, за да се поддържа стабилна почти физиологична среда през цялата перфузия. Това проучване оценява четири различни нормотермични решения за перфузия, три често използвани съществуващи решения, на които не са направени никакви промени и едно новопроизведени решения. Проведохме продължителна (7h) NMP в свинебъбрекмодел на дарение. Целта ни беше да анализираме до каква степен различните перфузни композиции като цяло въздействие електролитен баланс,бъбречна функция, и маркери за наранявания, измерени по време на NMP.
Материали и методи
Бъбрек и извличане на кръвЖизнеспособна свинска свинскаБъбрецитеот домашни прасета landrace (посев; тип Topigs 20) и кръв са получени от местна кланица (Kroon Vlees, Гронинген, Холандия). Прасетата бяха зашеметени с двувременен токов удар и впоследствие екссангинирани според нормалните процедури на кланиците. Събрана е автоложна кръв и е добавен хепарин (5000 международни единици на ml (IU), LEO1 фарма, Ballerup, Дания), за да се предотврати съсирването на кръвта.Бъбрецитеса извлечени бързо след кръвоносна смърт на прасето, което води до приблизително 20 минути топла исхемия (WI) преди запазване на студа. След периода WI,Бъбрецитеса промити и охлаждани с 180 ml натриев хлорид (NaCl) (0,9%) (Baxter B.V., Утрехт, Нидерландия) при 4°C, което бележи началото на студена исхемия (CI).Бъбрецитеса били дисектирани без излишната мастна тъкан и кръвоносните съдове са били изложени. СледващБъбрецитеса били свързани сБъбрекПомощ транспорт HMP устройство (Орган асист, Гронинген, нидер-земи). Тази HMP машина запазенаБъбрецитесъс студен (0–4°C) UW машинен перфузионен разтвор (Разтвор на Belzer UW-MP, Bridge to Life Ltd, Колумбия, SC) в продължение на 2– 4 часа с помощта на оксигениран пулзатил HMP при средно артериално налягане от 25 mmHg. Хепаринираната автоложна кръв е левкоцитна изчерпана с помощта на левкоцитен филтър (BioR 02 плюс BS PF, Fresenius Kabi, Zeist, Холандия), центрофугирана и впоследствие, свръхнатантна плазма е отстранена.
Перфузионни разтвориОпределени са четири експериментални групи (n = 5 на група), с различен NMP разтвор във всяка група. Предибъбрекизвличане, е определен разтворът на перфузията, който би се използвал по време на експеримента. И четирите перфузионни разтвора съдържаха автоложни червени кръвни клетки от свине (RBCs), но съставът на всяка NMP среда беше различен (Таблица 1). В нашата лаборатория е натрупан достатъчно опит с перфузията на свинетеБъбрецитеи черен дроб от гризачи, използващи Среден Е (WME) на Уилямс (Life Technologies Ltd, Bleiswijk, Neth- erlands) [9–11]. Този перфузат не съдържа вазодилататор и решихме да не правим
променяния на първоначалния разтвор. Перфузионният разтвор на група 2 е разработен от нашата група, за да съдържа електролити във физиологични концентрации и да упражнява физиологично колоидно осмотично налягане върху гломерулната мембрана. Перфузатът от група 3 е без колоиден клинично използван британски NMP разтвор, който в момента се използва в рандомизирано контролирано изпитване, сравняващо 1h NMP с SCS на човешки починал донорБъбрецитев Обединеното кралство [12]. Що се отнася до група 4, това решение е успешно използвано в проучване за автотрансплантация на свине в Орхус, Дания [13]. Той се основава на перфузата, проектиран от Weissenbacher et al., който на слели се изхвърлени човешкиБъбрецитевреме на 24 часа [7]. В допълнение към горепосочените съставки, перфузатът в група 1 беше допълнен с глюкоза, когато концентрацията спадна под 4 mmol/l. Произведена урина е
почасово заменени с WME. В група 2 инфузионна помпа за спринцовка влива общо парентерално хранене (SmofKabiven) (Fresenius Kabi Nederland B.V., Zeist, Нидерландия) със скорост 0,5 ml/ръчен инсулин (1000 IU, също Novo Nordisk A/S) със скорост 0,005 ml/h. След всеки час производството на урина се рециркулира в група 2, за да се поддържа стабилен електролитен баланс. В третата група 170 ml чисти RBCs са смесени със 120 ml физиологичен разтвор, Аденин, глюкоза и манитол (SAG-M), което води до хематокрит от 0,5–0,65 l/l, за да имитира състава на типична клинично използвана единица RBCs (която се използва в британския клиничен NMP перфузат). По време на тези експерименти са използвани три инфузионни помпи за спринцовка за вливане на Flolan (GlaxoSmithKline B.V., Zeist, Нидерландия) със скорост 5 ml/h, глюкоза 5% (Baxter B.V., Утрехт, Neth- erlands) със скорост 4 ml/h и смес от 150 ml Синтамин-17 10% (Baxter Healthcare Ltd., Норфолк, Обединено кралство), 6 ml натриев бикарбонат (NaHCO 3 ) 8,4% (B. Braun Melsun- gen AG, Melsungen, Германия), 30 IU инсулин (1000 IU, Novo Nordisk A/S, Bagsværd, Den-mark) и Cernevit (Baxter B.V., Утрехт, Нидерландия) със скорост 20 ml/h, съгласно протокола на настоящото клинично проучване във Великобритания. Производството на урина е почасово заменено от Рингерс лактат (също Baxter B.V.). По време на NMP от четвъртата група инфузионна помпа за спринцовка, влята верапамил (2,5 mg/ml, също Sandoz B.V.), разтворена в физиологичен разтвор със скорост 0,3 ml/h. Производството на урина също е рециркулирано в тази група след всеки час, за да се поддържа стабилен електролитен баланс. Примерните обеми във всяка група бяха коригирани с различни компоненти. Обемът в група 1 е заменен с WME, в група 2 с перфузионна среда, в група 3 с Рингерс лактат и в група 4 със Sterofundin1 (също B. Braun).
Настройка на NMPНастройката на перфузията беше идентична с описаната преди това от нашата група [14]. TheБъбрецитеса били парфюмирани в асинузоидна пулсатилна мода, с честота 60пулса в минута, комплект АТА, регулирани без обратна връзка, налягане от 110/70 mmHg и кислородирани с 95% кислород/5% въглероден диоксид (карбоген) по време на опитите. Това супрафизиологично ниво на кислород е стандартна процедурав четирите съществуващи протокола. Перфузията беше контролирана ота по поръчка електронен интерфейс и софтуер за контрол (LabView Software, Национални инструменти Холандия B.V., Woerden, Холандия). Схематична фигура на тогаваормотермичната перфузионна верига е показана на Фиг 1.
Анализ на урината и перфузатитеПочасово са взети проби от артериален перфузат и урина. В групи 2 и 4, при които урината е рециркулирана, преди рециркулацията на урината са взети проби от перфузат. Пробите от артериален кръвен газ на перфузата са анализирани след 0, 240 и 420 минути NMP. Параметрите на перфузията бяха документирани на всеки половин час. Концентрациите на лактат дехидрогеназа (LDH) и аспартат аминотрансфераза (ASAT), натрий, калий, глюкоза и креатинин са измерени със стандартни клинични асайта в перфузата. Креатининовият клирънс, дробната екскреция на креатинин на 100g (FE креатинин/100g), и дробната екскреция на натрий (FENa + ) са изчислени, за да се определибъбречна функция. Уравненията могат да бъдат намерени в S1 Допълнението. Както N-ацетил-β-D глюкозаминидаза (NAG) (също Сигма-Алдрич), като маркер наБъбречнатубулна дисфункция/нараняване, и реактивни вещества на тиобабитурната киселина (TBARS) (Липидна пероксидация-малондиалдехид (MDA)) Assay Kit, Сигма-Алдрих B.V., Zwijndrecht, Нидерландия), за количествено определяне на оксидативния стрес, са измерени в перфузата.
ХистологияБиопсия на анегъл на горнатабъбречна корае било взето преди началото наNMP. В края наексперимента на пробите от хирургична тъкан от горната кора са събрани. Тези биопсии са
Статистически анализАнализът на данните е извършен с помощта на GraphPad Prism Version 8.3.1 (софтуер на GraphPad Inc., La Jolla, CA, САЩ). За всички непрекъснато надлъжно измерени променливи, като ASAT и LDH, площта под кривата (AUC) е изчислена. Еднопосочна ANOVA с множество сравнения е използвана за сравняване на стойностите на AUC между групите, ако данните обикновено се разпределят (тест shapiro Wilk) и са имали хомогенност на вариантите (тествани чрез тест на Бартлет). Ако данните не са издържали тези предположения тестът Kruskal-Wallis с теста за множество сравнения на Dunn е използван. Счита се, че двустранните p-стойности от 0,05 или по-малко показват статистическа значимост.
Резултати
Параметри на перфузиятаВ таблица 2 са представени данни (средно, минимално и максимално) за топла и студена исхемия, HMP продължителност и тегло преди началото и след NMP, както и делта тегло (разлика в теглото при t = 420 спрямо t = 0). Делта теглото е значително по-високо в група 1 в сравнение с група 2 (p = 0,041). Нямаше други значителни разлики между стойностите на всички експериментални групи. По време на NMPБъбречнаартериален поток се увеличава през първите 60 минути на реперфузия в група 1 и 2. След 60 минути дебитите обикновено започнаха да намаляват. Перфузиите в група 3 и 4 започнаха с по-ниски стойности на потока, но показаха по-постоянен поток в цялата NMP. Крайните стойности след 7 часа NMP са приблизително 75 ml/min/100g във всички групи (Фиг 2).
Анализ на урината и перфузатитеИндивидуални данни за функционалните параметри и параметрите на нараняването в цялата перфузия могат да бъдат намерени в таблица 3.Бъбречна функция.Група 3 показва най-високите нива на изход на урина (Фиг 3). Кумулативната диуреза в група 3 е значително по-висока в сравнение с група 1 (p = 0,003), група 2 (p< 0.001)="" and="" group="" 4="" (p="0.008)." some="" of="" the="">Бъбрецитев група 2 не произвежда урина при t = 180 и t = 300, което води до по-ниски средни нива на производство на кумулативна урина при t = 360 и t = 420. Нивата на натрий и калий се различаваха значително между групите (Фиг 4). Нивата при t = 0 показват началните изходни стойности при перфузия. Особено група 3 показа силно
По време на перфузията рН в група 3 намалява без стабилизиране, докато другите групи достигат по-балансирано ниво от приблизително 7,4 след 7 часа НМР (Фиг 5). Креатининов клирънс е нисък във всички групи (Фиг 6А и 6Б). Независимо от това той е значително по-висок, отколкото в група 3 в сравнение с група 2 (p = 0,039). Дробната екскреция на креатинин на 100g (Фиг 6C и 6D) е значително по-висока в група 3 в сравнение с група 1 (p = 0,026), група 2 (p = 0,017), и група 4 (p = 0,045). FENa + е висока във всички групи, което показва, че тръбната функция е тежко нарушена (Фиг 6E и 6F) при тези исхемично повредениБъбреците. FENa + в група 3 е значително по-висока в сравнение с група 2 (p = 0,037) и група 4 (p = 0,019). Всички други групи не се различаваха значително.Бъбречно нараняване.Нивата на ASAT по време на NMP са анализирани (Фиг 7А и 7Б) като маркер за общо клетъчна травма. Средната AUC е определена за всяка група. Нивата в група 4 са значително по-високи в сравнение с група 1 (p = 0,022) и група 2 (p = 0,011). Нивата на LDH също са измерени в перфузата като общ маркер за нараняване (Фиг 7C и 7D). Изчислена е AUC, която показва най-ниски нива на LDH в групи 1 и 2. Група 2 е значително по-ниска в сравнение с група 4 (p = 0,020). Група 1 показва значително по-ниски нива в сравнение с група 4 (p = 0,022). Нивата на NAG са значително по-високи в група 3 в сравнение с група 1 (p = 0,043) и група 2 (p = 0,006) (Фиг 8А и 8Б). TBARS, концентрацията на малондиалдехид (MDA), са измерени във всичките четири групи като маркер за липидна пероксидация (Фиг 8С и 8D). Нивата на MDA са значително по-високи в група 1, когато се сравняват с група 2 (p = 0,003) и група 3 (p< 0.001).="" group="" 2="" showed="" significantly="" lower="" mda="" levels="" compared="" to="" group="" 4="" (p="0.006)." group="" 3="" showed="" significantly="" lower="" levels="" compared="" to="" group="" 4="" (p=""><>
Хистология
Точките парцели в Фиг 9 показватБъбречнатръбно увреждане/ATN, тръбна дилатация, и гломерулна дилатация резултати преди началото на NMP (t = 0) и след 7 часа на NMP (t = 420). Първоначалните стойности на хистологичната некроза и тръбната дилатация бяха сравними между групите, като само пределните разлики в крайните точки. Гломерулната дилатация при t = 420 е забележително по-ниска в група 2 в сравнение с останалите 3 групи. Хистологични фигури на група могат да бъдат намерени в S1 Фиг. Bax и Bcl-2 индукция на сгъване, показатели за про- и анти-апоптотична генна експресия, съответно, и двете показаха изместване на нивата на NMP в крайна точка в сравнение с нивата при t = 0 (Фиг 10). Генната експресия на Delta Bax (разлика между t = 0 и t = 420) е изчислена във всички групи и е значително по-висока в група 1 в сравнение с група 2 (p = 0,046), група 3 (p< 0.001)="" and="" group="" 4="" (p="0.003)." bcl-2="" expression="" decreased="" in="" all="" groups="" after="" 7="" hours="" of="" perfusion="" with="" no="" significant="" differences="" between="">
Разискване
Общ интерес къмБъбречнаnormothermic ex-vivo машина перфузия техники се повишава, но клинични доказателства остава ограничен само с едно текущо клинично NMP изпитване. Проведени са обширни предклинични проучвания, изследващи потенциала на NMP. Множество от различниБъбречнанормотермични парфюми съществува сред различните изследователски групи. Въпросът до каква степен обаче въздействията върху парфюмния съставбъбречна функцияи как се отразява на тълкуването на потенциалните маркери за жизнеспособност остава. Поради това това проучване оценява влиянието на четири различни нормотермични ex-vivo перфузионни разтвора едно до друго върхубъбречна функцияинараняване на бъбрецитевреме на продължителна НМР с помощта на свинскабъбрекдарение след модел на кръвоносна смърт.
оценяват изолиранибъбречна функцияпреди трансплантацията. Hosgood и колеги предоставят първите клинични доказателства за осъществимостта на оценката на жизнеспособността преди трансплантацията по време наБъбречнаНМР. Техният разтвор на перфузия в момента е най-широко използваният по време на NMP и първоначално е разработен за оценка набъбречна функцияпреди трансплантацията в рамките на 1–2 часова времево време [16].Бъбрецитеперфузирани с този разтвор, обикновено показват високо производство на урина [17]. Наистина, най-високото производство на урина се наблюдава в група 3, която се основава на този клиничен великобритания перфузат, което води до повече от пълна екскреция на урината на циркулиращия обем на перфузата в тази група по време на 7 часа NMP. Непрекъснатата загуба на обем на циркулиращата перфузионна течност трябваше да бъде компенсирана чрез периодично добавяне на подобни обеми на лактата на Рингер, съответстващ на клиничния протокол за този перфузионен разтвор. В нашето проучване това доведе до значителни променяния на електролитния състав и рН, тъй като урината не беше рециркулирана. Това високо производство на урина най-вероятно може да се припише на липсата на колоид само в този перфузионен разтвор. И трите други решения за перфузия на групите съдържаха значително количество албумин. В вътресъдовото пространство албуминът е основният компонент, който поддържа нормално колоиден осмотично налягане [18]. Балансът между хидростатично налягане и колоидно осмотично налягане води до физиологична скорост на ултрафилтрация над гломерулната мембрана [19]. Kaths et al. показа, че производството на урина по време на NMP не корелира с пост-трансплантация функция. Те хипотеза, че производството на урина до голяма степен се влияе от парфюмирания състав, по-специално онкотичното налягане и осмоларност, което е в съответствие с нашите резултати [20].
CISTANCHE ще подобри бъбречната/бъбречна недостатъчност
Основният отговорен орган за регулиране на електролитите ебъбрекно има доказателства, чебъбрексебе си също се възползва от баланс в електролитите. Установено е, че дисбалансът в калий и конкретно хипокалиемия, може да доведе до разнообразни промени вбъбречна функциявключително нарушен тръбен транспорт, нарушена способност за концентриране на урина, променена реабсорбция на натрий, и вътреклетъчна ацидоза [21–23]. За да се отчете неизбежната уринарна загуба на важни парфюмирани електролити, Weissenbacher et al. предложи използването на урина рециркулация по време на NMP. Те показаха, че улеснява правилното поддържане на обема на парфюма и хомеостазата при изхвърлени човешкиБъбреците, дори след 24 часа NMP [7]. Измерената концентрация на албумин в перфузата намалява с течение на времето по време на перфузията. Това намаление най-вероятно е причинено от придържането на албумин към пластмасовата перфузионна верига tubing и само малко количество може да се припише на загубата в произвежданата урина, която се наблюдава и в други NMP проучвания [24]. Тази уринарна загуба на албумин може да се обясни с топла исхемия индуцирана увреждане на ендотелните клетки с прекъсване на филтъра диафрагми, което води до протеинурия, което е в съответствие с нашите наблюдавани нива на албуминурия по време на NMP [25].
Не можем да обясним напълно механизма на разликите между групите, които наблюдавахме вбъбрекнаддаване на тегло по време на NMP. Хистологичното изследване не е било решаващо за възможните области на образуване на оток. Необходимо е допълнително разследване, за да се изяснят потенциално мултифакторните механизми на наддаване на тегло във връзка с използвания перфузионен разтвор. Измерени са различни перфузионни параметри, къдетоБъбречнапоток показа най-поразителни разлики.Бъбречнапоток в групи 3 и 4 поддържа най-стабилните нива през целия 7-часов NMP период. Решенията в тези групи бяха допълнени с вазодилататор, докато разтворите в първите две групи не бяха. Ендогенните вазодилататори насърчават съдовата гладка мускулна релаксация и по този начин регулират регионалния кръвен поток [26]. Тъй като групи 1 и 2 не са допълнени с вазодилататор, вазоспазмите биха могли да доведат до намаленаБъбречнаартериален поток. Освен това има доказателства, че медуларен и кортикален поток може да се регулира индивидуално [27,28]. Предварителни непубликувани данни от нашата група, въз основа на прецизни и количествени функционални измервания на яМР (ASL) поток по време на NMP силно поддържа този механизъм. При тези експериментиБъбречнапоток по време на първия час на NMP е главно медуларен, който се измества към кортикълпоток след повече от час перфузия. Това регионално преразпределение на потока може да обясни пикът, наблюдаван при перфузии от групи 1 и 2, вероятно поради медуларно шунтиране през първия час. Добавянето на вазодилататор при старта на NMP би могло да засили преобладаващо кортикално микроперфузия веднага в началото на NMP, което води до по-стабилен поток, както се наблюдава в група 3 и 4. Оттук, ако по време на NMP се желае стабилен модел на потока и евентуално по-физиологична преобладаващо кортикална перфузия, може да е препоръчително да се добави вазодилататор към перфузионния разтвор. Като алтернатива многократното измиване на RBCs преди перфузията би могло да намалиБъбречнавазоконстрикция чрез намаляване на вазоконстриктивната активност на RBCs [29].
Бъбречна функциявреме на NMP е бил подчертано увреден във всички свинеБъбреците, вероятно поради първоначалното топло исхемично увреждане и липсата на физиологични хуморални регулаторни механизми, като тези, задвижвани от антидиуретичен хормон и алдостерон. Креатининов клирънс е нисък и високи стойности на FENa + са наблюдавани във всички групи. Внезапното повишаване на FENa + след 3 часа НМР в група 2 е можело да бъде резултат от липсата на производство на урина в няколкоБъбрецитепри t = 240 и t = 300, докато в края на перфузиятаБъбрецитезапочва отново да произвежда урина. Повишени стойности на FENa + е вероятно резултат от тръбна некроза, както е съобщено и в предишни проучвания [30,31]. В допълнение, ин-виво креатинин клирънс и FENa + нива са повлияни в голяма степен от хуморално регулиране. Като хуморална регулация
липсва по време на NMP експериментите, физиологичен креатинин клирънс и FENa + нива не се очаква в нашата NMP настройка.
За количествено определяне на нараняването наБъбречнаклетки, нивата на ASAT и LDH са измерени. Най-високите нива са наблюдавани в групи 3 и 4, което предполага, че повечето наранявания са настъпили в тези две групи. Kaths et al. показва, че повишените нива на ASAT по време на NMP корелират с посттрансплантабъбречна функцияи следователно ASAT може да бъде важен биомаркер за оценка на жизнеспособността на органите [20]. Влиянието на различните парфюмни състави върху измерените нива на ASAT подчертава значението за хармонизиране на Протоколите за НМР сред центровете за трансплантация, за да се даде възможност за последователно тълкуване на данните от НМР на глобална основа. Нивата на NAG, маркер за променена тръбна цялост и тръбни щети [32,33], са най-високи в група 3, което показва, че повечето тръбни наранявания са настъпили в тази група. Нивата на TBARS са измерени за количествено определяне на оксидативния стрес по време на перфузията. Най-високите нива са наблюдавани в група 1 и 4, което предполага, чеБъбрецитев тези групи опит най-висок оксидативен стрес, което би могло да доведе до нарушена клетъчна функция [34]. Промяната в съотношение Bax/Bcl-2 след 7 часа NMP в сравнение с биопсия преди NMP вероятно е резултат от първоначалния топъл исхемичен период, а не потенциално вредните ефекти, възникващи по време на NMP. Исхемичната травма след последваща реперфузия предизвиква регулаторна апоптоза каскада, която играе ключова роля в процеса на ремонт на увредената проксимална тубула [35]. Въпреки че са предложени много маркери за нормотермично нараняване, към днешна дата нито един не е валидиран в добре захранвано клинично изпитване. Проучване, корелиращо масив от обещаващи маркери за нараняване, измерени по време на NMP с посттрансплантабъбречна функциясе изисква да елуцидира кои потенциални биомаркери следва да бъдат включени в нормотермичните критерии за оценка на жизнеспособността ex-vivo.
CISTANCHE ще подобри бъбречната/бъбречна инфекция
Нашата Настройка на NMP е използвана във връзка с модел на свине на DCDбъбрекдарение, в което кланицатаБъбрецитеса били утихнати. Ограничение на това проучване е, че процедура на кланица се основава на ексангвинация, последвана от сърдечен арест, което го прави малко по-различен от действителен модел DCD, при който кръвоносен арест е резултат от сърдечна исхемия и/ или недостатъчност. Въпреки това СметнатаБъбрецитев нашето проучване показва исхемична травма, подобна на тази, възникнала след DCD [36,37]. Оттук ние чувстваме, че настоящият модел кланица DCD ще помогне за намаляване на използването на лабораторни животни, като същевременно се поддържа съществена надеждност и репро- ducibility. Въпреки че нашите експериментални групи бяха сравнително малки, нашите групови размери са сравними с тези в други свинебъбрекпроучвания за перфузия на машината [17,38–40]. Параметрите за перфузия на NMP, които записахме в група 3, който се основаваше на британския клиничен перфузионен разтвор, използван от Hosgood et al., не могат да бъдат напълно сравнени с резултатите, съобщени преди това от групата leicester/Cambridge [6,12]. В нашето проучванеБъбрецитепретърпява много по-дълъг период на NMP и са били парфюмирани с по-високо средно артериално налягане. По-нататък,Бъбрецитеперфузирани от Hosgood et al. са трансплантирани след перфузия на машината. За напълно надеждно сравнение между четирите решения за перфузия бъдещо проучване следва да включва трансплантация наБъбрецитеслед NMP, тъй като това ще позволи действително проследяване и функционална оценка in vivo.
В заключение, перфузията на свинетеБъбрецитесе оказа осъществимо с всичките четири тествани решения. Имаше обаче съществени разлики между нивата на електролита,бъбречна функцияпараметри, и маркери за наранявания в четирите групи. Тези различия, в комбинация с настоящата разнородност в приложените перфузионни разтвори сред групите, възпрепятстват развитието на стандартизираните критерии за оценка на НМР. Чувстваме, че както в експерименталната, така и в клиничната НМР е от съществено значение внимателно да се уточни предварително точната цел и желаната продължителност на NMP, тъй като всяка би могла да призове за необходими корекции в протокола за перфузата и перфузията. Важно е да се подчертае, че това проучване се фокусира върху ефектите на съществуващите парфюми като цяло върху измерените резултати, вместо да разследва ролите на отделните парфюмни компоненти. Необходими са допълнителни проучвания за елюцидиране на индивидуалните влияния и достойнства на всяка перфузатна съставка по време на NMP