Качествени маркери на Cistanches Herba въз основа на връзката между спектъра на антиоксидантите и ефекта Ⅱ

3 резултата

3.1 Създаване на карта с пръстови отпечатъци

Пригответе 10 партиди от тестови разтвори съгласно метода в 2.1, използвайте хроматографските условия в 2.2 за откриване, вземете пръстовите отпечатъци от всяка партида проби (Фигура 1) и изберете пик № 11 (C11) като референтен пик на пръстов отпечатък. Импортирайте данните за течната фаза AIA на пръстовия отпечатък на тестовия продукт Cistanche deserticola в софтуера „Система за оценка на подобието на хроматографски пръстови отпечатъци на традиционната китайска медицина“ (версия 2012 г.). Седемнадесет общи хроматографски пика бяха калибрирани в общ режим и в сравнение със смесения референтен стандартен спектър (Фигура 2), бяха идентифицирани общо 10 общи пика.

3.2 Изследване на антиоксидантния ефект на Cistanche deserticola

3.2.1 Ефект на Cistanche deserticola върху жизнеспособността на HEK 293 клетки.

В сравнение с клетките в нормалната група, Cistanche deserticola не предизвиква цитотоксичност при масова концентрация от 50~100 ug·mL–1 и степента на преживяемост на клетките е над 90%. Тъй като концентрацията на Cistanche deserticola се увеличава, жизнеспособността на клетките намалява. Следователно, Cistanche deserticola с масова концентрация от 100 µg·mL–1 беше избрана за последващо приложение.

3.2.2 Ефект на Cistanche deserticola върху ROS, индуциран от H2O2 в HEK 293 клетки

ROS IC50 на Cistanche deserticola при различни концентрации се изчислява с помощта на софтуер GraphPad Prism 8. Резултатите са показани на фигура 3 и таблица 2.

За повече знания относно цистанхата, нека да разгледаме как да разграничим качеството на цистанш. Качеството на Cistanche зависи от съдържанието на активните съставки Echinacoside и Acteoside, по-високото съдържание означава по-силна функция, днес ние вземаме 30% Echinacoside и 12% Acteoside Cistanche добавки като пример, за да ни даде обяснение, като цяло наричаме cistanche в тази статия.

КОЛКО ВРЕМЕ НЕОБХОДИМО НА CISTANCHE ЗА РАБОТА?

3.2.3 Ефект на Cistanche deserticola върху индуцираната от H2O2- SOD на HEK 293 клетки

Както е показано на Фигура 4, в сравнение с нормалната група, активността на SOD в клетките на моделната група беше значително намалена и активността на SOD на групата на приложение на Cistanche deserticola се увеличи в различна степен (P<0.001), indicating that Cistanche deserticola can increase the intracellular SOD enzyme activity.

3.2.4 Ефект на Cistanche deserticola върху H2O2-индуцирана CAT в HEK 293 клетки

Както е показано на фигура 5, H2O2 може да причини значително намаляване на вътреклетъчната CAT ензимна активност (P<0.001), with the activity only reaching 30% of the normal group, indicating that H2O2 has seriously damaged the antioxidant system of cells. After Cistanche deserticola administration, intracellular CAT enzyme activity decreased significantly (P<0.001). The enzyme activity was significantly increased (P<0.001).

3.3 Скрининг на Q-маркера Cistanche deserticola въз основа на корелационен анализ на спектралната ефективност

3.3.1 PCA използва собствената стойност > 1 и процента на приноса на кумулативната вариация > 85% като стандарт за извличане на 4 основни компонента. Графиката на сипеите (Фигура 6) на първите три основни компонента има по-стръмна крива, което означава, че нейният процент на принос е по-висок. голям. Кумулативната вариация на приноса на четирите основни компонента е 87,640%, което показва, че тези четири главни компонента могат да представляват 87,640% от информацията на оригиналните променливи. Първоначалните собствени стойности и нивата на принос на дисперсията са показани в таблица 3. Матрицата на ротираните компоненти се получава чрез метода на нормализиране на максималната дисперсия на Кайзер, вижте таблица 4. Според стойността на натоварване на всеки хроматографски пик върху четирите основни компонента, информацията, отразена от всеки основният компонент може да бъде извлечен. Тоест, колкото по-голяма е стойността на натоварването, толкова по-голямо е влиянието на хроматографския пик върху главния компонент. В основен компонент 1 пикове 1 до 3, 5, 7, 11 и 13 до 15 имат най-големите абсолютни натоварвания; в главен компонент 2, пикове 6 и 16 имат най-големите абсолютни натоварвания; пик 17 обяснява информацията за главен компонент 3, пик 8 има най-голямо въздействие върху основен компонент 4, така че 13-те химични компонента на пикове 1~3, 5~8, 11, 13~17 са избрани като основна материална основа на Cistanche deserticola за последващ анализ на спектралната ефективност.

3.3.2 ПКК

ROS IC50 е отрицателен индикатор за ефикасност на лекарството, така че отрицателен коефициент на корелация означава, че зависимата променлива корелира положително с ефикасността на лекарството. Коефициентите на корелация на 13-те хроматографски пика на Cistanche deserticola са всички отрицателни, което показва, че всички те са положително свързани с отстраняването на ROS IC50, сред които пикове 14 и 3, 7, 11, 1 и 13 са изключително силно свързани с ROSIC50 (П<0.01), and peaks 2, 5, and 15 were strongly correlated (P<0.05); the 13 chromatographic peaks were all positively correlated with SOD, among which peaks 13 and 3 , 15, 11, 2 were extremely strongly correlated with SOD (P<0.01), and peaks 1, 14, 7, 5, and 6 were strongly correlated (P<0.05); 11 peaks were positively correlated with CAT, and peak 5 was positively correlated with CAT. There was a strong correlation (P<0.05). The results are shown in Table 5.

Комбинирайки резултатите от PCC на ROS IC50, SOD и CAT, пикове 1~3, 5, 7, 11 и 13~15 бяха избрани като група активни съставки за Cistanche deserticola за упражняване на антиоксидантни ефекти.

3.3.3 ПЛС

In PLS, the ROS IC50 regression coefficients of 13 chromatographic peaks are all negative and positively correlated with the pharmacodynamic activity. Among them, the chromatographic peaks with VIP>1 are: 14, 3, 11, 1, 7, 13, 2, 5, 15 (Figure 7A); in the study of SOD enzyme activity, the coefficients of all peaks are positive, that is, all peaks are positively correlated with drug efficacy. Among them, the chromatographic peaks with VIP>1 are: 13, 3, 15, 11, 2, 1 , 14, 7 (Figure 7B); in the study of CAT enzyme activity, except for peaks 6 and 16, the other chromatographic peaks are positively correlated with drug efficacy, among which the chromatographic peaks with VIP>1 са: 5, 13, 14, 11, 7 (фиг. 7C). Съединенията, представени от пикове 1~3, 5, 7, 11 и 13~15, бяха отсеяни като потенциални антиоксидантни активни компоненти в PLS модела.

3.4 Проверка на активността на Q-маркера Cistanche deserticola

3.4.1 Ефект на активните съставки върху цитотоксичността на HEK 293

Въз основа на резултатите от корелационния анализ на спектъра и ефекта, 6 съставки, включително генипинова киселина, 8-епистрихноева киселина, ехинацеозид, вербаскозид, антоцинозид А и изобаскозид, бяха избрани за проверка на активността. Шестте активни съставки на Cistanche deserticola не показват цитотоксичност при концентрации, вариращи от 0.781 до 3.125 µmol·mL–1, а нивата на преживяемост на клетките са над 90%. С увеличаването на концентрацията жизнеспособността на клетките се инхибира. Следователно, следващите концентрации на дозиране бяха избрани като 0,781, 1,563 и 3,125 µmol·mL–1.

3.4.2 Двойки активни съставки

Антиоксидантният ефект на H2O2-индуцирани HEK 293 клетки беше потвърден чрез откриване на очистващия ефект на всяка активна съставка върху вътреклетъчния ROS и способността да се регулира активността на SOD и CAT ензимите, за да се провери дали има антиоксидантен ефект. В експеримента за почистване на ROS, разликите между групите със средна и висока доза генипинова киселина и моделната група бяха статистически значими (P<0.01, P<0.001, Figure 8A). Compared with the model group, there were statistically significant differences between the low, medium and high dose groups of inulin, anthoside A, verbascoside and isorbascoside (P<0.001, Figure 8B, Figure 8C), indicating that the six monomers All have a certain degree of ROS scavenging effect; in the SOD and CAT enzyme activity measurement test, the enzyme activities of the low, medium and high dose groups of active ingredients were all higher than the model group, indicating that all 6 monomers can increase SOD and CAT Enzyme activity.