Изследване на компонентния анализ и антиоксидантната активност на полизахаридите от Cistanche Deserticola Deserticola
Jul 06, 2023
Резюме: В тази статия неутралната захар CLP1 и киселинната захар CLP2 на Cistanche deserticola са получени чрез екстрахиране на полизахарида от Cistanche deserticola deserticola и пречистване на суровия полизахарид CLP на Cistanche deserticola deserticola с DEAE целулозна колонна хроматография. Съдържанието на обща захар, уронова киселина и протеин в суровия полизахарид CLP на Cistanche deserticola, неутралната захар на Cistanche deserticola CLP1 и киселинната захар на Cistanche deserticola CLP2 бяха определени чрез сканиране на ултравиолетовия спектър и бяха определени молекулното тегло и монозахаридният състав на полизахарида. В същото време, съдържанието на суровия полизахарид CLP на Cistanche deserticola Капацитетът за отстраняване на радикали DPPH и общият антиоксидантен капацитет на неутралната захар CLP1 на Cistanche deserticola deserticola и киселинната захар CLP2 на Cistanche deserticola deserticola бяха анализирани експериментално. Измерените данни показват, че съставът на суровия полизахарид CLP от Cistanche deserticola deserticola, неутралната захар CLP1 от Cistanche deserticola deserticola и киселинната захар CLP2 от Cistanche deserticola deserticola са сходни, но съдържанието е значително различно; Неутралната захар CLP1 на Cistanche deserticola deserticola и киселинната захар CLP2 на Cistanche deserticola deserticola могат да получат множество пикове на елуиране, когато се разделят и пречистят с DEAE целулозна хроматографска колона, а молекулното тегло е между 0 и 10000 Da, което показва, че че основният компонент на полизахарида Cistanche deserticola deserticola е нискомолекулна захар. Монозахаридите на неутрална захар CLP1 в Cistanche deserticola deserticola показват, че монозахаридите, съдържащи се в неутралната захар CLP1 в Cistanche deserticola deserticola deserticola, са главно маноза, галактоза уронова киселина, глюкоза, галактоза и арабиноза; Резултатите от определянето на монозахаридите на киселата захар на Cistanche deserticola CLP2 показват, че монозахаридите, съдържащи се в киселата захар на Cistanche deserticola CLP2, са главно рамноза, галактоза, уронова киселина, глюкоза и галактоза. Експериментът за отстраняване на свободните радикали DPPH и експериментът с общия антиоксидантен капацитет на полизахаридите в Cistanche deserticola показаха, че антиоксидантният капацитет на неутралната захар CLP1 в Cistanche deserticola е по-висок от този на суровия полизахарид CLP в Cistanche deserticola и киселинната захар CLP2 в Cistanche deserticola.
Ключови думи: Cistanche deserticola; полизахариди; Компонентен анализ; Антиоксидантна активност; абсорбция
Експеримент Cistanche deserticola
Cistanche deserticola deserticola е вид тревисто паразитно растение, което съдържа голям брой фенолни гликозиди, алкалоиди, гликозиди на фенетилов алкохол, захари и алкохоли. Сред тях захарите са предимно под формата на полизахариди. Полизахаридите на Cistanche deserticola имат силна функция за регулиране на имунната активност [1-2]. Като междинен метаболит в човешките жизнени дейности, свободните радикали са в нестабилно състояние и имат висока интензивност на окислителна активност, което ще причини увреждане на тъканите и органите на биомакромолекулите в човешкото тяло. Следователно използването на естествени антиоксиданти за елиминиране на свободните радикали се превърна в основната посока на настоящите изследвания на храните. Полизахаридните компоненти в Cistanche deserticola имат силен антиоксидантен капацитет, който може да насърчи елиминирането на свободните радикали в човешкото тяло [3].
Ползи от cistanche tubulosa - антиоксидант
В тази статия Cistanche deserticola deserticola беше взето като обект на изследване и полизахаридните вещества бяха извлечени и класифицирани. Молекулното тегло на полизахаридните вещества на Cistanche deserticola deserticola беше измерено чрез високоефективна гелпроникваща хроматография. В същото време съставът на полизахаридните вещества беше анализиран задълбочено. Антиоксидантната активност на полизахаридите Cistanche deserticola deserticola deserticola беше анализирана чрез измерване на капацитета за отстраняване на свободните радикали и общия антиоксидантен капацитет на полизахаридните компоненти на Cistanche deserticola deserticola. Това осигурява теоретична основа за разработването и използването на Cistanche deserticola deserticola и насърчаването на добавена стойност.
Пустинна жива цистанче
Щракнете тук, за да видите продуктите на Cistanche
【Попитайте за повече】 Имейл:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692
1 Приготвяне на проба от Cistanche deserticola
Претеглете 2,5 kg Cistanche deserticola, нарежете го, добавете 12,5 L дестилирана вода и го варете в продължение на 3 часа. След кипене се филтрира и филтратът се събира. Добавете 75 процента етанол и оставете да престои 24 часа. Центрофугирайте го при 4000 r/min за 30 минути, съберете утайката и замразете и изсушете утайката, за да получите суров полизахарид CLP от Cistanche deserticola [4]. Вземете DEAE целулоза, накиснете я и я набъбнете преди обработката с дегазиране, заредете я в DEAE целулозната анионобменна хроматографска колона и я балансирайте с дестилирана вода и разтвор на NaCl. Претеглете 100 mg суров полизахарид CLP от Cistanche deserticola deserticola и го разтворете в 10 mL дестилирана вода. След промиване с дестилирана вода, елуентът се събира и се концентрира за сушене чрез замразяване, за да се получи неутрална захар CLP1 от Cistanche deserticola deserticola; След елуиране с разтвор на NaCl, елуентът се събира, концентрира и лиофилизира след диализа, за да се получи киселинната захар CLP2 на Cistanche deserticola [5].
Пригответе неутралната захар CLP1 и киселинната захар CLP2 на Cistanche deserticola в полизахаридни разтвори с концентрация съответно 1 mg/mL. Използвайте 210-600nm спектрофотометър за UV спектроскопско сканиране. Когато се появи пик при 260-280nm, се потвърждава, че разтворът съдържа протеин и нуклеинова киселина [6].
Основни химични съставки на Cistanche deserticola
2 Определяне на полизахаридните компоненти на Cistanche deserticola
Съдържанието на обща захар в Cistanche deserticola се определя по метода на фенолната сярна киселина. Измерете {{0}}, 0.2, 0.4, 0.6, {{10}}.8 и 1mL разтвори на глюкоза с концентрация 0,1 mg/mL и ги поставете в стъклени епруветки. Добавете дестилирана вода до постоянен обем от 1 ml и след това добавете 0,5 ml фенолен реагент с концентрация 6 процента и 2,5 ml концентрирана сярна киселина към епруветките. Разклатете добре и охладете до стайна температура. Използвайте спектрофотометър, за да измерите абсорбцията при 490 nm, със съдържание на захар като оста x и абсорбция като оста y, начертайте стандартна крива и изчислете регресионното уравнение [7-8].
Методът на Coomassie brilliant blue беше използван за определяне на съдържанието на протеин в проби от Cistanche deserticola. Вземете 1 ml стандартни проби с различни концентрации и разтвори на проби с концентрации 0.1 mg/mL, съответно добавете 4 ml разтвор на кумаси брилянтно синьо във всяка епруветка, разклатете добре и след това оставете неподвижно. Използвайте спектрофотометър за измерване на абсорбцията при 495 n и изчислете съдържанието на протеин в пробата съгласно уравнението на стандартната крива [9].
Съдържанието на уронова киселина в Cistanche deserticola се определя по метода на m-хидроксифенил. Вземете 0.4mL стандартен разтвор с различни концентрации и разтвор на пробата с концентрация 0.1mg/mL, добавете 2.5mL концентрирана сярна киселина в епруветката, разклатете я добре и след това извършете 25 минути кипяща водна баня, извадете го и го охладете до стайна температура, добавете m-хидроксифенил с концентрация 0.3 процента и разтвор на натриев хидроксид с концентрация 0.5 процента в епруветка, разклатете я добре и след това я поставете за 30 минути. Използвайте спектрофотометър, за да измерите абсорбцията при 525 n и изчислете съдържанието на уронова киселина в пробата според уравнението на стандартната крива [10-11]. Относителното молекулно тегло на полизахарида Cistanche deserticola се определя чрез високоефективна гел хроматография, а монозахаридният състав на Cistanche deserticola deserticola се определя чрез високоефективна течна хроматография [12].
3 Резултати от определяне и анализ на полизахаридните компоненти на Cistanche deserticola
Сканиращата крива на UV спектъра на фотометъра при 210-600nm е показана на фигура 1
Фигура 1 UV спектрална сканираща крива (210-600nm)
Може да се види от Фигура 1, че неутралната захар CLP1 на Cistanche deserticola deserticola има очевиден пик на абсорбция при 280 nm, а киселинната захар CLP2 на Cistanche deserticola deserticola deserticola няма очевиден пик на абсорбция при 260-280nm, но UV спектърът на поглъщане е висок. Тъй като триптофанът и тирозинът, съдържащи се в протеина, имат голяма стойност на абсорбция на ултравиолетова светлина при 280 nm, може да се определи, че неутралната захар CLP1 на Cistanche deserticola съдържа гликопротеин и е невъзможно да се определи дали киселинната захар CLP2 на Cistanche deserticola съдържа нуклеинови киселина и протеин.
DEAE целулозна анионообменна хроматографска колонна хроматография може да адсорбира йонни вещества и примеси върху хроматографската колона, за да осъществи разделянето на полизахаридните вещества. След концентриране и изсушаване на промивния разтвор с дестилирана вода се получават общо 34,68 mg неутрална захар CLP1 от Cistanche deserticola и след елуиране, концентриране и сушене с разтвор на NaCl се получават общо 16,52 mg кисела захар CLP2 от Cistanche deserticola. По време на експеримента бяха получени уравненията на стандартната крива на общото съдържание на захар, съдържанието на протеини и уронова киселина от Cistanche deserticola. Съдържанието на обща захар, протеин и уронова киселина в Cistanche deserticola беше измерено, както е показано в таблица 1.
Таблица 1 Общо съдържание на захар, протеини и уронова киселина в Cistanche deserticola
Регресионното уравнение може да се получи чрез определяне на молекулното тегло и площта на пика на стандартната проба. Молекулното тегло на пробата, която ще се тества, може да се получи чрез заместване на стойността на фотоемисионния сигнал на пробата, която ще се тества, в регресионното уравнение. Допълнителен анализ и изчисление може да получи средното молекулно тегло, средното молекулно тегло и коефициента на дисперсия на неутралната захар CLP1 и киселинната захар CLP2 на Cistanche deserticola. Резултатите от изчислението на времето на задържане и молекулното тегло на високоефективната гелпроникваща хроматограма на Cistanche deserticola неутрална захар CLP1 и Cistanche deserticola кисела захар CLP2 са показани в таблица 2. Средното молекулно тегло се използва за представяне на размера на измерената молекула, и съотношението на средното тегловно молекулно тегло към средночисленото молекулно тегло се използва за представяне на ширината на молекулно разпределение.
Таблица 2 Време за определяне на пика на задържане и резултати от изчислението на молекулното тегло
Може да се види от таблица 2, че диапазонът на разпределение на молекулното тегло на неутралната захар CLP1 на Cistanche deserticola и киселинната захар CLP2 на Cistanche deserticola е 0~10000 Da, което показва, че полизахаридът в Cistanche deserticola е малък молекула полизахарид с различни молекули и молекулното тегло показва хетерогенност. Може да се заключи, че неутралната захар CLP1 на Cistanche deserticola и киселинната захар CLP2 на Cistanche deserticola са смеси от няколко полизахаридни вещества.
Вижте таблица 3 за HPLC пиковете и пиковите времена на задържане на девет монозахаридни стандартни проби, неутрална захар CLP1 от Cistanche deserticola deserticola и кисела захар CLP2 от Cistanche deserticola deserticola. Чрез сравняване на пиковото време може да се заключи, че има пет очевидни монозахарида в неутралната захар CLP1 на Cistanche deserticola и четири очевидни монозахарида в киселата захар CLP2 на Cistanche deserticola. Делът на монозахаридите в неутралната захар CLP1 на Cistanche deserticola deserticola и киселинната захар CLP2 на Cistanche deserticola deserticola е показан в таблица 4.
Таблица 3 Време на задържане на монозахаридни пикове на високоефективна течна хроматография
Таблица 4 Съотношение на монозахаридите в Cistanche deserticola
Съдържанието на монозахарид в неутралната захар CLP1 на Cistanche deserticola след хидролиза е значително различно от това на киселинната захар CLP2 на Cistanche deserticola. Съдържанието на глюкоза в неутралната захар CLP1 на Cistanche deserticola е 88,62 процента, съдържанието на глюкоза в киселата захар CLP2 на Cistanche deserticola е само 9,99 процента, а съдържанието на галактозна алдехидна киселина, галактоза и рамноза в киселата захар CLP2 на Всички Cistanche deserticola са повече от 5 процента.
4 Анализ на антиоксидантната активност на полизахарида Cistanche deserticola
По време на антиоксидантния експериментален анализ на полизахарид Cistanche deserticola deserticola, полизахаридът Cistanche deserticola deserticola беше приготвен в разтвор на полизахарид Cistanche deserticola deserticola с концентрация {{0}}, 0.25, 0 .5, 1.0, 2.0, 4.0 mg/mL и бяха измерени скоростта на улавяне на свободните радикали DPPH и общият антиоксидантен капацитет на разтвора. По време на определянето на скоростта на улавяне на свободните радикали на DPPH от разтвор на полизахарид на Cistanche deserticola deserticola, добавете 2 × Общо 2 mL 10-4mol/L DPPH се смесват равномерно и се поставят на тъмно за 15 минути. Разтворът се центрофугира при скорост на центрофугиране 4000 r/min и време на центрофугиране 15 минути. Използвайте спектрофотометър, за да измерите стойността на абсорбцията на разтвора при 517 nm вълна, от която може да се получи скоростта на отстраняване на DPPH радикали от разтвор на полизахарид Cistanche deserticola deserticola, както е показано в таблица 5.
Таблица 5 Скорост на отстраняване на DPPH радикали от полизахаридния разтвор на Cistanche deserticola
Може да се види от Таблица 5, че скоростта на улавяне на суровия полизахарид CLP от Cistanche deserticola и неутралната захар CLP1 от Cistanche deserticola върху DPPH свободните радикали е значително по-висока от тази на киселата захар CLP2 на Cistanche deserticola върху свободните радикали DPPH. Когато концентрацията на разтвора е по-малка от 2.0mg/mL, скоростта на отстраняване на DPPH радикали от суров полизахарид CLP от Cistanche deserticola deserticola и неутрална захар CLP1 от Cistanche deserticola deserticola постепенно се увеличава с увеличаването на концентрацията и най-накрая става стабилен.
По време на определянето на общия антиоксидантен капацитет на полизахарид Cistanche deserticola deserticola беше използван комплектът за тест за антиоксидантен капацитет за бързо откриване. Вземете стандартния разтвор за откриване на Trolox и го разредете с дестилирана вода до {{0}}, 0.25, 0.5, 1.0, 2.{ {10}} и съответно 4,0 mg/mL. Добавете работен разтвор на пероксидаза към плаката с ямки за откриване, след това добавете пробата или стандартния разтвор за откриване, който ще се тества, и накрая добавете работния разтвор от комплекта за бързо откриване. Разбъркайте добре и оставете да престои 6 минути. Общият антиоксидантен капацитет на полизахарида Cistanche deserticola се определя от четец на микроплаки при дължина на вълната 405 nm и 734 nm [14-15]. Вижте Таблица 6 за резултатите от теста за общия антиоксидантен тест за полизахаридния разтвор на Cistanche deserticola deserticola.
Таблица 6 Общ антиоксидантен капацитет на полизахаридния разтвор на Cistanche deserticola
Може да се види от Таблица 6, че когато концентрацията на разтвора на Cistanche deserticola е по-малка от 4.0mg/mL, общият антиоксидантен капацитет на суровия полизахарид CLP на Cistanche deserticola, неутралната захар CLP1 на Cistanche deserticola и киселата захар CLP2 на Cistanche deserticola се увеличава с увеличаване на концентрацията на разтвора; Антиоксидантният капацитет на неутралната захар CLP1 на Cistanche deserticola deserticola е значително по-висок от този на суровия полизахарид CLP на Cistanche deserticola deserticola deserticola и киселинната захар CLP2 на Cistanche deserticola deserticola deserticola.
Чай от цистанче
5. Заключение
Резултатите от анализа на полизахарида Cistanche deserticola deserticola чрез високоефективна гелпроникваща хроматография показват, че молекулното тегло на съдържащия се в него полизахарид е не повече от 10 000 Da и съдържа множество пикове на елуиране. Полизахаридът Cistanche deserticola deserticola има определени антиоксидантни свойства. Резултатите от това проучване поставят основата за по-нататъшното развитие и използване на Cistanche deserticola.
Препратки:
[1] Bi Cuicui, Liu Yinlu, Wei Fenfen и др. Напредък на изследванията върху основните химични съставки и биологични активности на Cistanche deserticola [J]. Изследване за оценка на лекарства, 2019, 42 (9): 1896-1900
[2] Dong Yuwei, Miao Jingzhi, Li Yong. Оптимизиране на процеса на двойна ензимна екстракция за полизахариди от чесън и неговата in vitro антиоксидантна активност ［ J ］. Китайски подправки, 2020 г., 45 (10): 30-35, 48
[3] Янг Тинг, Еладан Макинтайър, Тао Ичун и др. Определяне на съдържанието на полизахариди и антиоксидантната активност на утайки от Cistanche tubulosa ［ J ］. Journal of Xinjiang Medical University, 2019, 42 (2): 234-236241
[4] Liu Lisa, Zhang Qing, You Lin и др. Проучване на технологията за екстракция с разтворител на гликозиди на фенетилов алкохол от Cistanche tubulosa [J]. Хранителна наука и технологии, 2019, 44 (4): 225-229
[5] Liu Yaowei, Su Zihao. Проучване на процеса на флаш екстракция на гликозиди от ехинацея и Verbascum thapsus в Cistanche deserticola ［ J ］. Медицинска диета и здраве, 2020 г., 18 (23): 27-28
[6] Tian Wenjing, Zhou Xuan, Huang Qunhui и др. Ефект на ултразвукова обработка върху реологичните свойства на Cistanche deserticola deserticola полизахарид ［ J ］. Бюлетин по биология, 2021, 56 (2): 48-53
[7] Feng Jie, Guo Yehong, Zhu Wenjuan и др. Ефекти на различни гостоприемници, местообитания и дати на прибиране на реколтата върху съдържанието на активни съставки в Cistanche deserticola ［ J ］. Китайски диви растителни ресурси, 2021 г., 40 (5): 18-23
[8] Lv Mingshuai, Zhao Bo, Sun Wenyu и др. Изследване на физикохимичните свойства и антиоксидантната активност на богатия на селен Auricularia auricula-judge полизахарид ［ J ］. Китайски ароматизатор, 2021, 46 (6): 54-59
[9] Чен Юебай. Скринингът на процеса на извличане на лентинан и анализът на текущото състояние на изследванията върху неговите ефекти върху здравето [J]. Китайски аромат, 2021, 46 (8): 189-191
[10] Guo Qiaoli, Wu Zhibo, Zhou Yubi и др. Анализ на състава и антиоксидантна активност на полизахариди от Cistanche deserticola в Ланджоу ［ J ］. Наука и технологии в хранително-вкусовата промишленост, 2021, 42 (15): 96-103
[11] Cao Libo, Gong Xingcheng, Jia Jinru и др. Бърз качествен анализ на химическите съставки на Cistanche salsa чрез метод на пълно сканиране с многоетапна масспектрометрия с директно инжектиране ［ J ］. Китайски вестник за традиционна китайска медицина, 2021 г., 46 (16): 4150-4156
[12] Hu Dongbao, Du Wei, Yang Meng. Оптимизиране на процеса на екстракция и антиоксидантната активност на полизахарид от Macrocybe gigantea чрез методология на повърхността на реакция ［ J ］. Китайски подправки, 2021, 46 (10): 78-82
[13] Xu Sheng, Chai Shasha. Методът за бързо откриване на основните активни вещества в Cistanche deserticola [J]. Вестник на Wuhan Vocational and Technical College, 2021, 20 (4): 116-120
[14] Zhang Hongchi, Liu Rui, Jiao Lele и др. Оптимизиране на процеса на екстракция на Lentinan въз основа на ортогоналния метод на ротация на квадратичната регресия ［ J ］. Китайски ароматизатор, 2021,46 (11): 88-93
[15] Song Qingqing, Zhang Ke, Li Ting и др. Едновременно определяне на многокомпонентно съдържание на Cistanche deserticola чрез хроматография с обратно фазово хидрофилно взаимодействие, персонализиран метод за наблюдение на множество реакции [J]. Аналитична химия, 2020, 48 (11): 1573-1593
