Методите за откриване на циркулиращ екзозомален PD-L1

Контакт:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Все още липсват приети и основни методи за откриване на циркулиращ екзозомален PD-L1. Традиционните методи за откриване на екзозоми като ензимно-свързан имуносорбентен анализ (ELISA) и анализ на потока могат да се използват за откриване на PD-L1 в циркулиращи екзозоми, а ELISA в момента е най-често използваният метод. Методът ELISA може да открие количествено съдържанието на PD-L1 в циркулиращите екзозоми и е лесен за работа. Проточната цитометрия може да се използва за количествено откриване на циркулиращ екзозомален PD-L1 в големи проби, но изисква високо оборудване за откриване. Със задълбочените изследвания на екзозомите, методите за откриване на екзозомни протеини и нуклеинови киселини също са обогатени и разработени, а някои нови методи са въведени в областта на откриването на PD-L1 в циркулиращи екзозоми (Фигура).

Откриване нациркулиращиекзозомаленPD-L1

1. Дигитален PCR

Поради малкото количество нуклеинова киселина, съдържащо се в екзозомите, е трудно за конвенционалните методи за откриване да открият точно броя на техните генни копия. Дигиталната PCR технология е метод за откриване на нуклеинова киселина с изключително висока чувствителност и абсолютно количествено определяне. Неговата чувствителност може да достигне нивото на една молекула нуклеинова киселина, така че има предимства при откриване на съдържанието на нуклеинова киселина в екзозомите. Изследователите са използвали цифрова PCR технология, за да анализират точно количествено броя на копията на PD-L1 иРНК в плазмените екзозоми на пациенти с меланом и недребноклетъчен рак на белия дроб и разкриват връзката между броя на копията на плазмената екзозомна PD-L1 иРНК и корелацията на анти-PD1 между ефектите от лечението. Въвеждането на цифрова PCR технология значително подобри способността за откриване на екзозомна PD-L1 иРНК, което е от голямо значение за изследването на екзозомален PD-L1. Възможно е обаче да има несъответствия между съдържанието на екзозомна PD-L1 иРНК и експресията на PD-L1 протеин. Следователно откриването само на екзозомна PD-L1 иРНК може да има определени дефекти, които се нуждаят от допълнителни изследвания и изясняване.

Противораковата пустинна цистанче се възползва от екстракта от цистанче

2. ELISA

ELISA е традиционен имунологичен метод за анализ, който често се използва за откриване на малки молекулни протеини в плазмата или хранителната среда. Има висока чувствителност и може да се анализира количествено. ELISA може също да се използва за откриване на екзозомален PD-L1 протеин и може да постигне количествено откриване на големи партиди проби. Комплектът за откриване на PD-L1 протеин, базиран на принципа на метода ELISA, също е приложен за количествено откриване на плазмен екзозомален PD-L1 протеин. Чен и др. конструира система за откриване на екзозомален PD-L1 протеин, базирана на принципа на ELISA, която се използва за откриване на екзозомален PD-L1 протеин, получен от среда за клетъчна култура или плазма. Линейният диапазон на откриване беше {{10}}.2-12.0 ng/mL. ELISA е добър метод за откриване на екзозомален PD-L1 протеин, който е лесен за количествено откриване и има добра повторяемост. Въпреки това, поради наличието на свободен протеин PD-L1 в плазмата, това ще попречи на неговата точност. Следователно този метод открива циркулация. Чувствителността и специфичността на екзозомалния PD-L1 протеин все още трябва да бъдат допълнително проучени.

Herba cistanche корен: противораково

3. Метод за анализ на потока

Проточната цитометрия често се използва за типизиране и преброяване на клетки или други биологични частици, суспендирани в течност, така че този метод също е въведен в откриването и преброяването на екзозоми. ТЕОДОРАКИС и др. първо използва хроматография за първоначално разделяне на екзозоми в плазмата на пациенти с рак на главата и шията и след това използва анализ на потока за откриване и преброяване на PD-L1-положителни екзозоми. Експресията на PD-L1 протеин се изразява като интензитет на флуоресценция. Резултатите показват, че методът има добра възпроизводимост при откриване на екзозомален PD-L1 протеин и неговата интраиндивидуална вариация е 7%, когато се извършват множество паралелни анализи върху проба от един пациент. В същото време, за да се провери точността на метода, изследователите са използвали конфокален флуоресцентен анализ като референтен метод за откриване на екзозомния PD-L1 протеин. Три проби бяха тествани паралелно и резултатите бяха сравнени и беше установено, че резултатите от поточната цитометрия и конфокалния флуоресцентен анализ са силно последователни, което показва, че поточната цитометрия е точен метод за количествен анализ на екзозомален PD-L1. В допълнение, LUX et al. също така успешно открива експресията на екзозомни PD-L1 и c-Met протеини в серума на пациенти с рак на панкреаса чрез поточна цитометрия, но ефективността на метода за откриване трябва да бъде допълнително проучена. Понастоящем също са пуснати на пазара анализатори на потока, специално използвани за откриване на екзозоми, като ултрачувствителния анализатор на нано поток Apogee, който е по-подходящ за откриване на екзозомни протеини от традиционните анализатори на потока.

Ползата от добавката с екстракт от Cistanche tubulosa: противотуморни и ракови

4. Повърхностно подобрена технология за раманово разсейване

Повърхностно подобреното раманово разсейване (SERS) е високочувствителна техника за спектроскопия на пръстови отпечатъци, която се използва широко в биомедицинските области. В момента учените са използвали технологията SERS за откриване на екзозомален PD-L1 протеин. Изследователите първо са използвали TiO2-модифицирани магнитни зърна за неспецифично адсорбиране на екзозоми в плазмата и след това са използвали SERS сонди, свързани с PD-L1 антитела, за да модифицират златните наночастици и след това инкубират екзозомните проби със златни наночастици. Той образува комплексна структура от магнитни зърна-екзозома-златни наночастици и накрая използва магнитно поле за обогатяване и разделяне на комплекса, след което се поставя върху лазерен конфокален раманов спектрометър за откриване, така че да се реализира откриването на PD-L1 положителни екзозоми . Откриване на съдържанието на тялото. Този метод има висока чувствителност на откриване и най-ниската му граница на откриване може да достигне 1 PD-L1 плюс екзозома/μL плазма. В допълнение, изследователите са използвали този метод за откриване на група проби с различни концентрации. Резултатите показват, че интензитетът на SERS е линейно свързан с логаритъма на концентрацията на проби от екзозоми, което показва, че методът за откриване има добра стабилност и може да се използва директно в плазмата. Откривайте екзозоми без допълнителна стъпка за изолиране на екзозоми. Понастоящем има малко проучвания за директното приложение на технологията SERS за откриване на екзозомален PD-L1 протеин, но е проведено изследване за приложението на технологията SERS за откриване на други екзозоми, което също има важна препратка за откриване на стойност на екзозомален PD-L1 протеин.

Desertliving cistanche растяща ситуация

5. Метод HOLMES-ExoPD-L1

Методът HOLMES-ExoPD-L1 е нов метод за откриване на екзозомния протеин PD-L1. В този метод е проектиран нов MJ5C аптамер, насочен към PD-L1 протеин, който може ефективно да свързва PD-L1 протеин върху екзозомната мембрана и не се намесва от гликозилиране на PD-L1 протеин. При този метод флуоресцентно белязаният аптамер MJ5C и екзозомите първо се инкубират съвместно в тънка капилярка, за да се свържат един с друг, и инфрачервеният лазер се фокусира в тънката капилярка, за да образува температурен градиент в микронна скала. Скоростите на термофореза на свободния MJ5C аптамер и екзозомалните MJ5C аптамерни комплекси са значително различни и термофоретичното изчерпване на свободния аптамер е по-бързо от това на комплекса екзозома-аптамер. отделени. Следователно, под действието на възбуждаща светлина, съдържанието на екзозомален PD-L1 протеин може да се определи чрез откриване на интензитета на флуоресценция на флуоресцентно белязани аптамери. Методът има висока чувствителност и граница на откриване 17,6 pg/mL. В допълнение, той има и предимствата на по-малък обем на пробата и кратко време за откриване. Това е много оригинален метод за откриване на екзозомален PD-L1 протеин, който е много важен за разработването на нови. Методът за откриване на екзозомален PD-L1 протеин има просветляваща стойност.

Антитуморна: добавка цистанче

Екзозомният PD-L1 има широки перспективи за приложение в областта на имунотерапията на злокачествен тумор и се превърна в една от горещите точки в областта на изследването на екзозомите. В сравнение с откриването на експресия на тъканен PD-L1, откриването на циркулиращ екзозомален PD-L1 е по-лесно за получаване на проби и извършване на откриване в реално време, като същевременно се избягва проблемът с тъканната хетерогенност, причинен от патологично вземане на проби; екзозомният PD-L1 също води до туморен имунитет. Това е важна причина за бягство и е свързано с прогресирането на злокачествени тумори и може да се превърне във важен индикатор за оценка на заболяването и прогнозиране на прогнозата. В допълнение, плазмените екзозомни нива на PD-L1 също се очаква да бъдат използвани за скрининг на пациенти, подходящи за анти-PD-L1 имунотерапия и прогнозиране на техния отговор на лечението. Все още обаче липсват признати и ефективни методи за откриване на циркулиращи екзозоми PD-L1. Необходимо е да се установи идеална циркулираща екзозома с просто или никакво отделяне, по-малко търсене на проби, висока чувствителност, добра повторяемост и по-малко чувствителни сигнали за откриване. Метод за откриване на PD-L1 in vivo. Методът за откриване на циркулиращ екзозомален PD-L1 все още се нуждае от по-нататъшни задълбочени изследвания, но се смята, че с разработването и прилагането на нови методи за откриване в бъдеще, циркулиращият екзозомален PD-L1 ще може по-добре да ръководи анти-PD1 имунотерапията и да се използва за диагностика и лечение на злокачествени тумори. играят по-важна роля.