Защитни ефекти на ехинакозид върху диабетна нефропатия

За повече информация:ali.ma@wecistanche.com

Защитни ефекти на ехинакозид от цистанхе върху бъбречната функция, бъбречната тъкан и увреждането на мезангиалните клетки при плъхове с диабетна нефропатия

He Qin, Liu Fan, Wang Hongli, Li Jianping, Duan Jun (Department of Cadre Medical Care, Caotang Ward, Sichuan Academy of Medical Sciences, Sichuan Provincial People's Hospital, Chengdu, Sichuan)

Ключови думи: Cistanche; ехинакозид;екстракт от цистанче,диабетна нефропатия; бъбречна интерстициална фиброза; апоптоза; плъх

диабетикнефропатия(DN) е често срещанодиабетикмикроваскуларно усложнение, което може не само да причини увреждане на бъбреците, но и да засегне други органи. Бъбречната тубулоинтерстициална фиброза е основната патологична характеристика в клиниката [1]. Патогенезата надиабетна нефропатиясложно е. Предишни проучвания [2-3] смятат, че заболяването е причинено главно от хипергликемия вдиабетикпациенти, което е причинило бъбречни хемодинамични промени и нарушен метаболизъм. Клиничните прояви са протеинурия и намалена скорост на гломерулна филтрация. Изчакайте. В момента пациентите сдиабетна нефропатиявсе още липсват ефективни клинични методи за лечение и намирането на нови ефективни лекарства е ключът към лечението надиабетна нефропатия.

Ехинакозид(ECH) е един от екстрактите наЦистанчеtubulosa, което има ефект на подхранване на бъбреците и укрепване на Ян [4]. Съвременните фармакологични изследвания [5] показват товаехинакозидотцистанчеима антиокислителни, антиапоптозни, противовъзпалителни и фармакологични ефекти като подобряване на кръвния поток и микроциркулацията.Eхинакозидотцистанчеможе също да регулира метаболизма на глюкозата в организма и да подобри глюкозния толеранс. През последните години проучвания [6] показват, чеехинакозидотцистанчеможе да инхибира бъбречната фиброза надиабетна нефропатияплъхове чрез инхибиране на сигналния път на трансформиращия растежен фактор (TGF-) и защита на бъбречната тъкан на плъхове. В литературата обаче има малко съобщения за лечението надиабетна нефропатиясЦистанчеехинакозиди неговия специфичен механизъм за защитадиабетна нефропатияпри плъхове все още не е ясно. Следователно, това проучване допълнително изследва ефектите и възможните механизми наехинакозидотЦистанчевърху бъбречната фиброза и апоптозата на клетките на бъбречната тъкан вдиабетна нефропатияплъхове и имаше за цел да осигури теоретична основа за клиничното приложение наехинакозидотЦистанче.

Ехинакозид от Цистанчезащитадиабетна нефропатия

Кликнете, за да видите предимствата и страничните ефекти на Cistanche tubulosa

1 Материал и методи

1.1 Животни

60 SD плъха, мъжки, клас SPF, на възраст 8 седмици, телесно тегло 240-280 g, предоставени от Beijing Weitong Lihua Laboratory Animal Technology Co., Ltd., номер на лиценз за животни: SCXK (Пекин) 2015-0001, животни Сертификат за качество номер: 11400700106210, отгледан в лабораторията на центъра за животни на болницата, поддържайки стайната температура постоянна на 25 градуса, симулирайки деня и нощта, променяйки условията на светлина веднъж на всеки 12 часа и животните са свободни да ядат и пият.

1.2 Лекарства и реактиви

Ехинакозид, Китайски изследователски институт за контрол на храните и лекарствата, партиден номер: 111670-201706; Losartan Potassium, Hangzhou Merck Pharmaceutical Co., Ltd., Национален медицински стандарт: H20030654; Streptozotocin, American Sigma Company, партиден номер: 040103; Комплект за тест за съдържание на протеин в урината, Ningbo Meikang Biotechnology Co., Ltd. Science And Technology Co., Ltd., партиден номер: 20170612; Комплект за откриване TUNEL, Amictech Technology Co., Ltd., партиден номер: 20180406; Комплект за екстракция на РНК, комплект за обратна транскрипция, Shanghai Hengfei Biotechnology Co., Ltd., партиден номер: 20180705, 20180904; Серумна хиалуронова киселина (HA), инхибитор на тъканна металопротеиназа-1 (TIMP-1) ​​и комплект за откриване на ламинин (Laminin, LN), Shanghai Yuanmu Biotechnology Co., Ltd., партидните номера са: 20180612, 20180624, 20180706; Молекула за съдова клетъчна адхезия 1 (молекула за съдова клетъчна адхезия- 1, VCAM- 1), трансформиращ растежен фактор (трансформиращ растежен фактор, TGF-) и антитела срещу актин на гладката мускулатура (-SMA), Santa Cruz Company, САЩ, партидни номера: sc13160, sc130348, sc-324317; пероксид от хрян Ензим (пероксидаза от хрян, HRP), белязан с кози анти-заешки IgG, датска компания DAKO, партиден номер: P0447.

1.3 Модел на апарата

7600 автоматичен биохимичен анализатор, японска компания HITACHI; преносим глюкомер, Beijing Yicheng Bioelectronics Technology Co., Ltd.; Оптичен микроскоп BX60, Японска компания OLYMPUS; SN-695B радиоимуноанализатор, Shanghai Rihuan Instruments Shenbei Co., Ltd.; IQTM5 флуоресцентен количествен PCR инструмент, American Bio-Rad Company; Инструмент за електрофореза DYY-6C, Beijing Liuyi Instrument Factory; AlphaImager HP система за анализ на изображения с гел, американска компания Alpha Innotech.

1.4 Методи за групиране, репликация на модела и администриране

60 плъха бяха хранени предварително в продължение на 1 седмица и произволно разделени на контролна група, моделна група,ехинакозидгрупи с висока, средна и ниска доза и група с лозартан калий, 10 плъха във всяка група. Моделната група,ехинакозидгрупата и групата с лосартан калий бяха третирани с диета с високо съдържание на мазнини и захар, комбинирана с ниска доза стрептозотоцин, за да се индуцира модел на плъховедиабетна нефропатия[6]. Преди моделът да бъде възпроизведен, плъховете гладуват с вода в продължение на 12 часа. Плъховете от контролната група са били хранени с обикновена храна, а останалите групи са били хранени с храна с високо съдържание на мазнини и захар. След 4 седмици непрекъснато хранене, плъховете в контролната група получиха еднократна интраперитонеална инжекция с равен обем цитратен буфер, а останалите групи получиха единична интраперитонеална инжекция стрептозотоцин бактериоцин (40 mg·kg-1) до възпроизвеждане на модела на плъхдиабетна нефропатия. 72 часа след като на плъховете е инжектиран стрептозотоцин, кръвната глюкоза е по-голяма или равна на 16,7 mmol·L-1, а 24-часовата скорост на отделяне на протеин в урината след 3 седмици е по-висока от тази на контролна група и 24-часовото количествено определяне на протеина в урината е било по-голямо от 50 процента преди моделът да бъде репликиран, което показва, че моделът Копието е било успешно. Четири седмици след инжектирането на стрептозотоцин, ниска, средна и висока дозаехинакозидна групите са дадени 20 mg·kg-1, 50 mg·kg-1 и 100 mg·kg-1ехинакозид(Разтворете в нормален физиологичен разтвор при 37 градуса според стандарта от 5 mL·kg-1 за телесно тегло на плъхове. Плъхове в групата с лосартан калий получават перорално приложение на лосартан калий 16 mg·kg-1 Моделната група и контролната група получават еднакъв обем Нормалният физиологичен разтвор се дава веднъж на ден в продължение на 2 седмици.

1.5 Събиране на проби

След последното приложение плъховете гладуват без храна и вода и количеството вода, консумирано от плъховете за 24 часа, се записва и урината за 24 часа се събира. Рано сутринта на втория ден плъховете бяха претеглени. След събиране на урина, интраперитонеално инжектиране на 2% разтвор на пентобарбитал натрий 2 mL·kg-1 за анестезия, отделяне на кръв от коремна аорта на плъхове, центрофугиране (3 500 r·min-1, 15 минути) и се събира серум. Съхранявайте временно в хладилник при -20 градуса; отделете тъкан от бъбрек на плъх и разделете на две части, едната част се фиксира в 4 процента параформалдехид, другата част се приготвя като 10 процента хомогенат и се поставя в -80 градуса хладилник за по-късна употреба.

1.6 Определяне на глюкозния и липидния метаболизъм при плъхове

Вземете серум от всяка група плъхове, използвайте глюкомер за измерване на кръвната захар на гладно и автоматичен биохимичен анализатор за откриване на нивата на триглицеридния естер, холестерола и липопротеините с ниска плътност.

1.7 24 Взети са показатели за белтък в урината, бъбречна функция и бъбречна фиброза

24 h урина на всяка група плъхове, 24-h съдържанието на микропротеин в урината се определя чрез радиоимуноанализ и операцията се извършва стриктно съгласно инструкциите. Серумът от всяка група плъхове беше събран и съдържанието на креатинин в кръвта и уреен азот бяха открити чрез автоматичен биохимичен анализатор, серумното ниво на TIMP-1 беше открито чрез ELISA, а нивата на HA и LN бяха открити чрез радиоимуноанализ. Операцията се извършва стриктно съгласно инструкциите.

1.8 HE оцветяване за наблюдение на патологичните промени на бъбречната тъкан и TUNEL оцветяване

Наблюдавайте апоптозата на клетките на бъбречната тъкан. Вземете фиксираните бъбречни тъкани от всяка група, потопете ги в парафин и ги нарежете. Една секция се използва за оцветяване с HE за наблюдение на морфологичните промени на бъбречните тубули, гломерули и бъбречен интерстициум под светлинен микроскоп; другият участък се използва за оцветяване с TUNEL, работейки според инструкциите на комплекта и наблюдавайки броя и положителността на клетките на бъбречната тъкан под микроскоп. Броят на клетките, съотношението на броя на положителните клетки към броя на клетките на бъбречната тъкан е изчислено, което е степента на апоптоза.

2 резултата

1. Western Blot метод за определяне на експресията на VCAM-1, TGF- и -SMA протеин в бъбречна тъкан

Вземете около 50 mg хомогенат от бъбречна тъкан на плъх, разтворете го с клетъчен лизат, съдържащ протеазни инхибитори, и извлечете общия протеин с клетъчен лизат, като използвате метода BCA за количествено определяне на протеина. Общата протеинова проба, екстрахирана с 50 μmol·L-1, се прехвърля в нитроцелулозна мембрана чрез електрофореза с полиакриламиден гел и се запечатва с 5 процента обезмаслено мляко, след което се добавят съответно първичното антитяло (1∶1000) и -актин протеин Моноклонално антитяло (1:300), инкубирайте една нощ при 4 градуса. Накрая добавете вторичното антитяло и инкубирайте за 2 часа при 37 градуса и наблюдавайте чрез електрохемилуминесценция. Използвайте софтуера за анализ на изображения на Photoshop, за да анализирате сивата стойност на протеиновите ленти.

2 Резултатите показват ефекта на ехинакозида върху метаболизма на глюкозата и липидите при плъхове с диабетна нефропатия.

В сравнение с контролната група, кръвната захар на гладно на плъховете от моделната група е значително повишена и разликата е статистически значима (P<0.05); triglycerides,="" cholesterol,="" and="" low-density="" lipoprotein="" increased,="" but="" the="" difference="" was="" not="" statistically="" significant="" (p="">0.05) ). В сравнение с моделната група, кръвната захар на гладно на плъхове в групите със средна и висока дозаехинакозиди групата на лозартан калий е значително намалена и разликата е статистически значима (P<0.05); triglycerides,="" cholesterol,="" and="" low-density="" lipoprotein="" were="" reduced,="" but="" the="" difference="" was="" not="" statistically="" significant="" (p="">0.05).

3 Ефектите на ехинакозида върху 24-часовия протеин в урината и бъбречната функция на плъхове с диабетна нефропатия.

В сравнение с контролната група, нивата на микроалбумин в урината, уреен азот и креатинин в моделната група бяха значително повишени и разликите бяха статистически значими (P<0.05); compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" middle="" and="" high="" dose="">ехинакозидгрупи Нивата на микроалбумин в урината, уреен азот и креатинин на плъхове в групата на калий и лосартан калий са значително намалени и разликите са статистически значими (P<>

4 Ефектите на ехинакозида върху бъбречната фиброза при плъхове с диабетна нефропатия.

В сравнение с контролната група, серумните нива на HA, TIMP-1 и LN в моделната група бяха значително повишени и разликите бяха статистически значими (P<0.05); the="" levels="" of="" ha,="" timp-1,="" and="" ln="" of="" rats="" in="" the="" sartan="" potassium="" group="" were="" significantly="" reduced,="" and="" the="" differences="" were="" statistically="" significant=""><>

5 HE оцветяване за наблюдение на патологичните промени на бъбречната тъкан при плъхове с диабетна нефропатия.

Клетъчната структура на бъбречната тъкан е пълна и не се наблюдават очевидни патологични промени. HE оцветяване на плъхове в моделната група и ниска дозаехинакозидгрупата показва: гломерулът е набъбнал и увеличен по обем, бъбречните тубулни епителни клетки са набъбнали или се отделят, бъбречният интерстициум, придружен от възпалителна клетъчна инфилтрация, и известна мезангиална хиперплазия и интерстициална пролиферация също са видими. Фиброза. HE оцветяване на плъхове в средни и високи дози отехинакозиди групата с лосартан калий показаха, че лезиите на бъбречната тъкан са значително намалени, с малко количество възпалителна клетъчна инфилтрация, мезангиалната хиперплазия и интерстициалната фиброза също са по-леки от моделната група.

6 Ефектът на ехинакозида върху апоптозата на бъбречната тъкан при плъхове с диабетна нефропатия.

Оцветяването с TUNEL показа, че в сравнение с контролната група, степента на апоптоза на плъхове в моделната група е значително увеличена и разликата е статистически значима (P＜0.05); Степента на апоптоза при плъхове в групата с кафяв калий беше значително намалена и разликите бяха статистически значими (P<>

7 Ефектите на ехинакозид върху експресията на свързани с апоптоза гени в бъбречните тъкани на плъхове с диабетна нефропатия.

Резултатите от RT-PCR показват, че в сравнение с контролната група, експресията на Bax и Caspase-3 mRNA в моделната група е значително повишена, а експресията на Bcl-2 mRNA е значително понижена и разликата беше статистически значима (P<0.05); compared="" with="" the="" model="" group="" in="" comparison,="" the="" expression="" of="" bax="" and="" caspase-3="" mrna="" was="" significantly="" down-regulated="" in="" the="" middle="" and="" high-dose="">ехинакозидгрупите и групата на лосартан калий и експресията на Bcl-2 иРНК беше значително повишена, а разликите бяха статистически значими (P<>

8 Ефектите на ехинакозида върху експресията на VCAM-1, TGF- и -SMA протеини при плъхове с диабетна нефропатия.

В сравнение с контролната група, експресията на VCAM-1, TGF- и -SMA протеин в моделната група беше значително повишена и разликата беше статистически значима (P<0.05); the="" expressions="" of="" vcam-1,="" tgf-β,="" and="" α-sma="" proteins="" in="" rats="" in="" the="" dose="" group="" and="" the="" losartan="" potassium="" group="" were="" significantly="" down-regulated,="" and="" the="" differences="" were="" statistically="" significant=""><>

3 Дискусия

Началото надиабетна нефропатияе скрита, а патогенезата е сложна и разнообразна. Веднъж образувана, тя трудно се лекува. Това е хронично заболяване с големи увреждания и важна причина за краен стадий на бъбречно заболяване [8]. Пациенти съсдиабетна нефропатиячесто се лекуват с инхибитори на ангиотензин-конвертиращия ензим и антагонисти на ангиотензин рецепторите, но клиничният ефект от лечението не е много задоволителен [9]. Лозартан калий е ангиотензин Ⅱ рецепторен антагонист, който може да се използва за лечение на есенциална хипертония. Някои проучвания [10-11] показват, че лозартан калий може също да инхибира бъбречния интерстициум на плъхове сдиабетна нефропатияФиброза, защита на бъбречната функция. Следователно това проучване избра лосартан калий като положителна контрола за сравняване на защитните ефекти наехинакозидвърху бъбречната тъкан на плъхове сдиабетна нефропатия.Клиничните проучвания [12-13] показват, че съдържанието наехинакозидв Changui Yishen Capsules е около 3,104 mg · kg-1. След преобразуване въз основа на дозата на приложение при хора и мишки, най-ниската доза Changui Yishen Capsules задиабетна нефропатияплъхове е 0.648 g·kg-1 и дозата, преобразувана вехинакозиде около 2 mg·kg-1. Тъй като има малко клинични доклади за лечението наехинакозидза диабет или нефропатия това проучване избира 10 пъти най-ниската клинична доза, т.е. 20 mg·kg-1 ехинакозид като ниска доза и се увеличава в последователност. 50 mg·kg-1ехинакозиде средна доза и 100 mg·kg-1ехинакозиде висока доза.

Ехинакозид от цистанче лекува диабетна нефропатия

В това проучване, ниска дозаехинакозидняма очевиден ефект върху бъбречната тъкан надиабетна нефропатияплъхове, докато средни и високи дози отехинакозидможе значително да подобри патологичните промени в бъбречната тъкан и да подобри увреждането на бъбречната тъкандиабетна нефропатияплъхове. , което предполага, че средни и високи дози отехинакозидможе да защити увреждането на бъбречната тъкан надиабетна нефропатияплъхове по зависим от концентрацията начин и се очаква да се използва при лечението на клиничнидиабетна нефропатия. В това проучване средни и високи дози отехинакозидможе значително да увеличи телесната маса на плъхове сдиабетна нефропатияи да намалят приема на вода, отделянето на урина и кръвната захар на гладно. Клиничните проучвания [14] показват, че инсулинът при пациенти сдиабетна нефропатияе в абсолютен или относителен дефицит и нивата на кръвната захар са повишени. Прекомерната концентрация на глюкоза в кръвта ще надвиши капацитета на гломерулна реабсорбция, екскретира се с урината, честотата на уриниране се увеличава и пиенето на вода се увеличава. Намаляването на телесната маса е в съответствие с резултатите от това проучване, което предполага, чеехинакозидможе да увеличи телесната маса надиабетна нефропатияплъхове чрез понижаване на кръвната захар и намаляване на пиенето и отделянето на урина.

В това проучване средни и високи дози отехинакозидможе значително да намали микроалбумина в урината, креатинина и урейния азот при плъхове сдиабетна нефропатия. Креатининът и урейният азот се екскретират главно от тялото чрез гломерулна филтрация, която може по-точно да отразява бъбречната функция. При бъбречна дисфункция скоростта на гломерулната филтрация намалява, концентрацията на креатинин в кръвта и уреен азот ще се повиши значително [15]. Нивото на протеин в урината е един от най-често използваните индикатори за отразяване на степента на гломерулно увреждане, което може директно да увреди мезангиалните клетки и може също да влоши бъбречното увреждане и бъбречната дисфункция [16]. Изследване на Zhang Yun и др. [17] показват, че хипергликемията при плъхове сдиабетна нефропатияможе да доведе до намаляване на скоростта на гломерулна филтрация, което води до повишаване на нивата на креатинина в кръвта, азота на уреята и микроалбумина в урината. Резултатите от това проучване показват, чеехинакозидможе да намали кръвната захар, да подобри бъбречната функция, да намали нивата на креатинина в кръвта, урейния азот и микроалбумина в урината и да подобри увреждането на клетките на бъбречната тъкан.

В това проучване средни и високи дози отехинакозидможе значително да намали експресията на Bax и Caspase-3 mRNA вдиабетна нефропатияплъхове, регулирайки нагоре експресията на Bcl-2 mRNA и инхибирайки апоптозата на клетките на бъбречната тъкан. Bax генът е проапоптотичен член на семейството Bcl-2. При физиологични условия Bax и Bcl-2 образуват хетеродимер, който намалява пропускливостта на клетъчната мембрана и освобождаването на цитохром С. След като експресията на Bcl-2 се регулира надолу, това ще доведе до повишаване на клетъчната пропускливост, освобождаване на цитохром С, активиране на каспазната каскада надолу по веригата и индуциране на клетъчна апоптоза [18]. Каспаза -3 е изпълнителна молекула за апоптоза, която може да разгради различни важни протеини в клетките и да участва в клетъчната апоптоза [19]. Проучването на Dong et al. [20] показа товаехинакозидможе да инхибира апоптозата на различни клетки, което е в съответствие с резултатите от това проучване, което предполага, чеехинакозидможе да инхибира апоптозата на клетките на бъбречната тъкан, като по този начин защитава увреждането на бъбречната тъкан. В това проучване средни и високи дози отехинакозидможе значително да намали експресията на протеина VCAM-1 вдиабетна нефропатияплъхове. VCAM-1 е важна молекула за съдова клетъчна адхезия, която е тясно свързана с възникването и развитието надиабетен нефропатy и може да се използва за клинична оценка на пациенти сдиабетна нефропатия[21]. Проучването на Zhang et al. [22] показват, че VCAM-1 може да индуцира невронална апоптоза след интрацеребрален кръвоизлив при плъхове. Резултатите от това проучване показват, че средни и високи дози отехинакозидможе да инхибира експресията на VCAM-1 и да инхибира апоптозата на бъбречните клетки при плъхове с диабетна нефропатия.

В това проучване средни и високи дози отехинакозидможе значително да намали нивата на HA, TIMP-1 и LN при плъхове сдиабетна нефропатия.HA е основният компонент на екстрацелуларния матрикс, а LN е важен структурен гликопротеин, който е често използван клиничен индикатор за тъканна фиброза [23]. TIMP-1 е инхибитор на матрични металопротеинази (MMP), който може да инхибира експресията на MMP, да инхибира разграждането на извънклетъчния матрикс и да насърчи фиброзата на бъбречната тъкан [24]. Проучването на Bieniaa et al. [25] показаха, че TIMP-1 може да инхибира експресията на MMP, да стимулира експресията на HA и LN и да насърчава появата и развитието на фиброза на бъбречната тъкан. Това е в съответствие с резултатите от това проучване, което предполага, чеехинакозидможе да инхибира нивата на HA, TIMP-1 и LN, да инхибира появата и развитието на бъбречна фиброза. В това проучване средни и високи дози отехинакозидможе значително да намали експресията на TGF- и -SMA протеини вдиабетна нефропатияплъхове. Голям брой проучвания [26-27] показват, че сигналният път на TGF-/Smad играе важна роля при появата и развитието на бъбречна интерстициална фиброза. Когато TGF- се свърже към своя рецептор в клетъчната мембрана, той може да фосфорилира Smad2 и Smad3 и активираният Smad образува тример, който се прехвърля към ядрото, за да регулира експресията на ефекторни молекули надолу по веригата като -SMA и матрични металопротеинази. Индуцирайте производството на бъбречна интерстициална фиброза [28]. -SMA е признак за трансформация на фибробласти в миофибробласти, които могат да насърчат секрецията и отлагането на извънклетъчен матрикс и да насърчат появата на бъбречна интерстициална фиброза. Недостатъкът е, че размерът на извадката е малък, което може да причини определени статистически грешки в резултатите, но може да осигури определена теоретична основа за избора на дозировка и клиничното приложение наехинакозид.

препратки:

[1] ZANCHI C, MASSONI D, TRIONFINI P, et al. МикроРНК-184 е ефектор надолу по веригата на албуминурията, водеща до бъбречна фиброза при плъхове сдиабетна нефропатия[J]. Diabetologia, 2017, 60 (6): 1114-1125.

[2] TENCEL GC, YILDIRIM S. Повишените експресии на eNOS и iNOS корелират с апоптозата надиабетна нефропатияпри индуциран от стрептозотоцин тип 1диабетикплъхове [J]. J Comp Pathol, 2016, 154 (1): 63.

[3] SCHALKWIJK CG, CHATURVEDI N, TWAAFHOVEN H, et al. Amadori - албуминът корелира с микроваскуларни усложнения и предхожда нефропатия при тип 1диабетикпациенти.[J]. Eur J Clin Invest, 2015, 32(7): 500-506.

[4] Wei Dawei, Ge Xinyu, Liu Yihan и др.Ехинакозидиндуцира мезенхимните стволови клетки на костния мозък да растат Изследване на диференциацията на остеобластите [J]. Фармакология и клиника на китайската Materia Medica, 2017, 33 (2): 48-52.

[5] MORIKAWA T, NINOMIYA K, IMAMURA M, et al. Ацилирани фенилетаноидни гликозиди,ехинакозиди актеозид отЦистанчеtubulosa, подобряват глюкозния толеранс при мишки [J]. J Nat Med, 2014, 68(3): 561-566.

[6] Guo Congcong, Jiao Mingwen, Zhang Yaqin и др. Усъвършенстване и оценка на метода за моделиране на едностраннонефректомиякомбиниран със стрептозотоцин-индуцирандиабетна нефропатияпри плъхове[J]. Напредък във ветеринарната медицина, 2019, 40 (2): 135-139.

[7] He Zhu, Kuang Shixiang, Zhang Shusen и др. Отвара от Naotong върху хипокампалните неврони на плъхове с хипоксия/реоксигенация Влиянието на експресията на Bcl-2, Bax и Caspase-3 [J]. Китайски журнал по геронтология, 2015, 23 (24): 6973-6976.

[8] ROSSING P. Насърчаване, прогнозиране и предотвратяване на прогресията нанефропатияпри захарен диабет тип 1 [J].диабетикMed, 2015, 15 (11): 900-919.

[9] Бао Джиенджоу, Джоу Баохуа. Клинично изследване върху 68 случая надиабетна нефропатиялекувани с отвара Yiqi Yangyin Huoxue [J]. Фармакология и клиника на китайската Materia Medica, 2015, 31(2): 177-178.