Четецът на RNA M6 A YTHDF2 контролира антитуморния и антивирусен имунитет на NK клетките, част 2

YTHDF2 е необходим за антивирусната функция на NK клетките

За да определим дали дефицитът на Ythdf2 засяга антивирусната активност на NK клетките, ние инжектирахме 2.5 × 104 PFU на MCMV в Ythdf2WT мишки и Ythdf2ΔNK мишки.

Антивирусната активност и имунитетът са неразделни и имат тясна връзка. Вирусите са много малки микроорганизми, но могат да причинят много заболявания и дори смърт в тежки случаи.

Антивирусната активност се отнася до способността на организма да се бори с вирусите. Хората с високи нива на антивирусна активност могат да изчистят вирусите по-бързо и ефективно да устоят на появата на болестта. Имунитетът се отнася до защитните вещества, произведени от тялото след периода на адаптация, които могат да премахнат вредните вещества от тялото.

Достатъчният сън, здравословното хранене и упражненията са изключително важни за поддържането на добро здраве. Тези фактори могат да подобрят човешкия имунитет и по този начин да засилят антивирусната активност на организма. Особено по време на пандемията от COVID-19 е важно да останем здрави.

В допълнение, стабилното настроение също оказва голямо влияние върху имунитета. Оптимистичното отношение може да накара хората да се чувстват физически и психически комфортно, като по този начин подобрява имунитета и антивирусната активност. Напротив, песимистичните емоции ще намалят имунитета на организма и ще направят тялото по-уязвимо към вирусни атаки.

Накратко, антивирусната активност и имунитетът са взаимосвързани и трябва да обърнем внимание на подобряването на имунитета и антивирусната активност на организма по различни начини, за да осигурим физическо здраве и здравословен начин на живот. Може да се види, че трябва да подобрим паметта и Cistanche deserticola може значително да подобри паметта, тъй като Cistanche deserticola има антиоксидантни, противовъзпалителни и анти-стареене ефекти, които могат да помогнат за намаляване на окисляването и възпалителните реакции в мозъка, като по този начин защитават здраве на нервната система. В допълнение, Cistanche deserticola може също така да стимулира растежа и възстановяването на нервните клетки, като по този начин подобрява свързаността и функцията на невронните мрежи. Тези ефекти могат да помогнат за подобряване на паметта, ученето и скоростта на мислене и могат също така да предотвратят развитието на когнитивна дисфункция и невродегенеративни заболявания.

Щракнете върху познайте добавките за увеличаване на паметта

Резултатите показват, че Ythdf2ΔNK мишките са по-податливи на MCMV инфекция, както е показано чрез значителна загуба на тегло и повишени вирусни титри в кръвта, далака и черния дроб в сравнение с Ythdf2WT мишки (Фиг. 3, A и B; и Фиг. S2, A и B) .

Ние също така наблюдавахме значително намаляване на процента и абсолютния брой на общите NK клетки в далака и кръвта на Ythdf2ΔNK мишки в сравнение с тези в Ythdf2WT мишки след инфекция (Фигура 3, C и D; и Фигура S2, C и D). Допълнителен анализ показа, че NK клетки от Ythdf2ΔNK мишки имат значително по-ниска експресия на Ki67 от Ythdf2WT мишки (Фиг. 3, E–G).

Жизнеспособността на NK клетките обаче беше подобна между Ythdf2WT мишки и Ythdf2ΔNK мишки, както е показано чрез оцветяване с анексин V (фиг. S2 E). Тези данни показват, че дефицитът на YTHDF2 в NK клетки води до дефект в клетъчната пролиферация, а не до клетъчно оцеляване по време на вирусна инфекция.

NK-клетките инхибират MCMV инфекцията чрез активиращите рецептори Ly49H и Ly49D и процесът се характеризира с антивирусен отговор, медииран от перфорин или IFN (Arase et al., 2002; Lee et al., 2009; Loh et al., 2005; Orr et др., 2010; Sumaria и др., 2009). Ние открихме, че Ythdf2ΔNK мишки са намалили значително Ly49H+ и Ly49D+ NK клетки в далака и кръвта в сравнение с Ythdf2WT мишки след инфекция (Фиг. 3, H–J; и Фиг. S2, F–K).

Допълнителен анализ показа, че макар и на процент, само Ly49D+Ly49H+ клетките показват разлика при Ythdf2ΔNK мишки в сравнение с тази на Ythdf2WT мишки, абсолютните клетъчни числа на Ly49D−Ly49H+ NK клетки, Ly49D+Ly49H− NK клетки и Ly49D+Ly49H+ NK клетки в далак и кръв бяха значително намалени при Ythdf2ΔNK мишки в сравнение с Ythdf2WT мишки след инфекция (фиг. S2, L–W).

Нашите данни предполагат, че контролирането на MCMV инфекция от YTHDF2 изглежда се медиира главно от Ly49D+Ly49H+ NK клетки. Производството на гранзим B и IFN от NK клетки в Ythdf2ΔNK мишки е сравнимо с това на Ythdf2WT мишки (фиг. S2, X и Y).

Установихме значително намалено производство на перфорин от Ythdf2ΔNK мишки в сравнение с това на Ythdf2WT мишки както в далака, така и в кръвта 7 дни след инфекцията (фиг. 3, K–M), което показва, че YTHDF2 засяга главно сперфорин-медиираната антивирусна активност срещу MCMV в NK клетки. Тези данни предполагат, че YTHDF2 е критичен за експанзията на NK клетките и ефекторната функция по време на MCMV инфекция.

YTHDF2 контролира хомеостазата на NK клетките и крайното съзряване в стабилно състояние

Горните констатации, че дефицитът на Ythdf2 в NK клетки засилва туморните метастази и нарушава капацитета на NK клетките да контролират MCMV инфекцията, ни насърчи да проучим дали YTHDF2 е необходим за поддържане на NK клетки в стабилно състояние.

Както е показано на Фиг. 4 А, честотата и абсолютният брой на NK клетките са значително намалени в периферната кръв, далака, черния дроб и белия дроб, но не и в костния мозък (BM) на Ythdf2ΔNK мишки в сравнение с Ythdf2WT мишки.

Въпреки това, няма значителни промени сред общия лимфоиден прогенитор, пре-NK клетъчен прогенитор и рафиниран NK клетъчен прогенитор (NKP) в BM (Fathman et al., 2011) между Ythdf2WT и Ythdf2ΔNK мишки (фиг. S3 A), което показва, че YTHDF2 може да не повлияе ранното развитие на NK клетките в нашия модел. За да изследваме потенциалните механизми, отговорни за намаляването на NK клетките в Ythdf2ΔNK мишки, ние изследвахме клетъчната пролиферация, жизнеспособността и способността за трафик на NK клетки след делеция на Ythdf2 в стабилно състояние.

Процентът на пролифериращи NK клетки е сравним между Ythdf2WT и Ythdf2ΔNK мишки, както се вижда от оцветяването с Ki67 (фиг. S3 B). Жизнеспособността на NK клетките също е еквивалентна между Ythdf2WT и Ythdf2ΔNK мишки, както е показано чрез оцветяване с анексин V (фиг. S3 C).

За да се провери дали YTHDF2 засяга излизането на NK клетки от BM към периферията, Ythdf2WT и Ythdf2ΔNK мишки бяха инжектирани iv с антиCD45 антитяло за маркиране на имунни клетки и умъртвени след 2 минути и техните BM клетки бяха анализирани. Това ни позволи да определим количествено броя на NK клетките в синусоидалните спрямо паренхимните региони на BM, индикатор за трафик на NK клетки от BM към периферна кръв в стационарно състояние (Leong et al., 2015).

Резултатите показват значително намаляване на честотата на CD45+ NK клетки в Ythdf2ΔNK мишки в сравнение с Ythdf2WT мишки в синусоидите (Фиг. 4 B), което показва, че дефицитът на Ythdf2 нарушава излизането на NK клетки от BM към циркулационната система in vivo .Имунните клетки претърпяват хомеостатична пролиферация по време на лимфопения, предизвикана от определени вирусни инфекции или причинена от химиотерапия (Sun et al., 2011).

Въпреки че открихме, че YTHDF2 е незаменим за NK клетъчна пролиферация в стационарно състояние, ние наблюдавахме значително намаляване на клетъчната пролиферация по време на MCMV инфекция (фиг. 3, E–G). Ето защо ние изследвахме ролята на YTHDF2 в регулирането на хомеостатичната пролиферация на NK клетки в лимфопенична среда in vivo. Ние котрансферирахме равен брой NK клетки на далака от CD45.2 Ythdf2ΔNK мишки или CD45.1 конгенични мишки в лимфоцитно-дефицитни Rag2-/-Il2rg-/- мишки.

Резултатите показват, че по-голяма част от NK клетките са получени от CD45.1WT контролни мишки, отколкото от CD45.2 Ythdf2ΔNK мишки на ден 3 след клетъчния трансфер (фиг. S3 D). Допълнителен анализ показа, че намаляването на NK клетките от Ythdf2ΔNK мишки се дължи на нарушена клетъчна пролиферация (Фигура S3 E), но не и на клетъчна апоптоза (Фигура S3 F), което предполага, че YTHDF2 задвижва хомеостатична пролиферация на NK клетки in vivo при лимфопенични условия.

По-нататъшното диференциране на миши NK клетки може да се класифицира в незрели (CD11b−CD27+), междинни зрели (CD11b+CD27+) и терминални зрели (CD11b+CD27−) стадии въз основа на нивата на CD11b и CD27 ( Chiossone и др., 2009; Geiger и Sun, 2016).

Открихме, че експресията на Ythdf2 нараства с узряването и че CD11b−CD27+, CD11b+CD27+ и CD11b+CD27− показват съответно най-ниските, междинните и най-високите нива на експресия на Ythdf2 (фиг. S3 G ), което показва, че YTHDF2 може да участва в узряването на NK клетки. Ето защо ние изследвахме ролята на YTHDF2 в узряването на NK клетките, дефинирана от маркерите на клетъчната повърхност CD11b и CD27.

Ние открихме, че загубата на Ythdf2 в NK клетките води до значително намаляване на честотата на терминалните зрели NK клетки и/или увеличаване на незрелите и междинно зрелите NK клетки в далака, черния дроб, белите дробове и кръвта, но не и в BM (фиг. 4 C и Фиг. S3 H), което показва, че YTHDF2 регулира положително терминалното съзряване на NK клетки. В съответствие с тези данни, нивата на KLRG1, който е атерминален маркер за съзряване на NK клетки, са значително по-ниски при Ythdf2ΔNK мишки в далака, черния дроб и белия дроб, но не и BM в сравнение с този на Ythdf2WT мишки в съответните органи или тъканни компартменти (фиг. 4 D).

За да определим дали намаленият брой зрели NK клетки от дефицит на Ythdf2 е присъщ на клетката, ние създадохме химери в Rag2−/−Il2rg−/− мишки чрез инжектиране на BM клетки от CD45.1 WT и CD45.2 Ythdf2ΔNK мишки, смесени в 1:1 съотношение.

Както е показано чрез поточна цитометрия на 8 седмици след трансплантацията, намален дял на терминални зрели NK клетки е получен от CD45.2 Ythdf2ΔNK BM клетки в сравнение с тези от CD45.1 WT контролни клетки (Фиг. 4 E), което предполага, че NK клетъчното крайно съзряване се контролира от YTHDF2 T-box транскрипционните фактори Eomes и Tbet са критични за съзряването на NK клетките (Daussy et al., 2014; Gordon et al., 2012).

Вътреклетъчното оцветяване разкрива значително намаляване на протеиновите нива на Eomes в NK клетки от Ythdf2ΔNK мишки в сравнение с Ythdf2WT мишки (фиг. S3 I). В допълнение, ние открихме, че намаляването на нивата на протеин и иРНК на Eomes се появява специално в терминални зрели (CD11b + CD27−) NK клетки (фиг. S3, J–L).

Обаче, за разлика от Eomes, експресията на Tbet е еквивалентна в NK клетки между Ythdf2ΔNK и Ythdf2WT мишки (фиг. S3, I и K), което показва, че YTHDF2 вероятно регулира съзряването на NKклетъчния терминал чрез насочване към Eomes.

YTHDF2 насърчава ефекторната функция на NK клетките

Нашето откритие, че дефицитът на Ythdf2 възпрепятства хомеостазата и узряването на NK клетките ни мотивира да определим дали YTHDF2 също потиска ефекторната функция на NK клетките. Основният механизъм, който регулира функцията на NK клетките, е относителният принос на инхибиторните и активиращите рецептори (Chan et al., 2014).

След това проверихме нивата на експресия на молекули, свързани с активиране или инхибиране на NK клетки. Ние открихме, че нивата на експресия на активиращите рецептори CD226 и NKG2D, но не и CD69, са намалени в NK клетки на далака от Ythdf2ΔNK мишки в сравнение с тези от Ythdf2WT мишки (фиг. 5 A), докато инхибиторните рецептори NKG2A, TIGIT и PD{{ 7}} бяха подобни между Ythdf2ΔNK мишки и Ythdf2WT мишки (Фиг. 5 A и Фиг. S3 M).

В допълнение, Ythdf2ΔNK NK клетки произвеждат значително по-малко IFN- отколкото Ythdf2WT NK клетки, когато са стимулирани с IL-12плюс IL-18 или с YAC-1 миши лимфомни клетки (фиг. 5, B и C ).

След това тествахме цитотоксичната способност на Ythdf2ΔNK NK клетки. Ние открихме, че Ythdf2ΔNK NK клетките са имали значително намалена цитотоксичност срещу MHC клас I–дефицитни миши лимфомни клетъчни линии RMA-S (фиг. 5 D), но показват подобна цитотоксичност срещу MHC клас I–достатъчно RMA клетки (фиг. S3 N), както е показано от 51Crassay . Взети заедно, тези открития показват, че YTHDF2 е от съществено значение за ефекторната функция на NK клетките.

For more information:1950477648nn@gmail.com