Кожата играе жизненоважна роля в модулирането на телесната температура, възприемането на болка и натиск

Моля свържете сеoscar.xiao@wecistanche.comза повече информация

АБСТРАКТ

Заден план:Зелените зърна на Coffee Arabica L. Семейство: Rubiaceae са богат източник на полифеноли, които предотвратяват окислителното увреждане на кожата. В това проучване липозомите са формулирани като лекарствени носители за подобряване на кожната пропускливост на полифенолите за локално приложение. Материали и методи: Екстракти от зелени кафеени зърна се приготвят чрез промяна на съотношенията на метанол и вода. Фитохимичен анализ и in vitro оценка на антиоксидантите бяха проведени на всички екстракти, за да се избере най-добрият екстракт за по-нататъшни изследвания. Цитотоксичният потенциал (MTT анализ) и антиеластазната активност на избрания екстракт бяха оценени върху L929 клетъчни линии с помощта на поточен цитометър. Липозомите на екстракта са получени чрез метода на хидратиране на тънък слой и са оптимизирани чрез промяна на съотношението на фосфатидилхолин към холестерол и постепенно увеличаване на количеството на екстракта. Липозомният състав се превръща в гел, като се използва карбопол"974P като желиращ агент. Приготвената липозомна суспензия и липозомният гел се оценяват за различни параметри на формулировката. Резултати: Резултатите от фитохимичен анализ, in vitro антиоксидантни анализи и in vitro оценка на Клетъчните линии L929 заключиха, че 25 процента метанолов екстракт е нетоксичен с най-високо фенолно съдържание и показва добра антиеластазна активност Ефективността на капсулиране на хлорогеновата киселина в оптимизираната липозомна формулировка е 75 процента Липозомният гел показва продължително освобождаване на лекарството до 12 ч в сравнение с 6-7 ч на конвенционалната формула Заключение: Формулираният гел на базата на липозоми, зареден с екстракт от зелено кафе на зърна, може да служи като потенциален носител за ефекти против стареене.

Ключови думи:Зелени кафеени зърна (GCB), хлорогенна киселина, екстракт, липозоми, антиоксидант, против стареене.

ВЪВЕДЕНИЕ

Кожата играе жизненоважна роля в модулирането на телесната температура, възприемането на болка и натиск и действа като решаваща бариера срещу замърсяването на околната среда, което прави стареенето на кожата много очевидно.1 Дългосрочното излагане на кожата на ултравиолетова радиация произвежда свободни радикали, които предизвикват оксидативен стрес върху кожата. кожата, което води до развитие на фотостареене, слънчево изгаряне, меланогенеза, имуносупресия и фотокарциногенеза.² Свободните радикали са изключително реактивни кислородни молекули, които участват в образуването на кръстосани връзки с молекулите на колагена, което води до загуба на еластичност на кожата.3 Стареенето се проявява с увисване, изтъняване, сухота и петна по кожата. По този начин, с желанието да изглеждате млади, продуктите против стареене са много търсени. Антиоксидантите от растителен произход са придобили значение в козметичната индустрия. Антиоксидантите помагат за възстановяването и предотвратяването на окислително увреждане, причинено от свободните радикали. Антиоксидантната активност на билките се дължи основно на окислително-редукционните свойства на фенолните съединения.4 По този начин е установено, че антиоксидантите са обещаващи за забавяне на признаците на стареене като бръчки, възрастови петна и фини линии.

Зърната на зеленото кафе (Coffea arabica L, Rubiaceae) са богат източник на полифеноли като хлорогенова киселина и свързаните с нея съединения като кафеена киселина, кумарова киселина и ферулинова киселина, които предпазват кожата от окислително увреждане. Проучванията разкриха, че екстрактите от C. Arabica притежават антибактериални,5 антивирусни,6 противовъзпалителни,7 заздравяващи рани по кожата и намаляват окислителното увреждане на макромолекулите? и потискаща активност на металопротеиназната експресия.10

Хлорогеновата киселина, основното полифенолно съединение на зелените кафеени зърна, има антиоксидантни и депигментиращи свойства и инхибира UV-индуцираното увреждане на кожата. I2 Според научни изследвания зелените кафеени зърна съдържат по-голямо количество хлорогенна киселина от печените кафеени зърна и други растения. „3

Моля, щракнете тук, за да научите повече

Доставянето на полифеноли през кожата е неефективно поради ограниченото им проникване. По този начин е необходима основата на формулировката или подобрители на проникването, които подобряват нейното проникване." Така че липозомите бяха избрани като носители на лекарства, тъй като те са амфифилни по природа и хидрофилните молекули могат лесно да бъдат вградени в концентричните двойни слоеве. Липозомите, които са физиологично подобни на клетъчната мембрана, не са Наличието на фосфолипиди в липозомите подобрява локалната абсорбция на лекарството от епидермиса в долните слоеве поради повишената адхезия на лекарствения фосфолипиден комплекс върху кожата.'5 Целта на настоящото изследване е да се разработи гел, съдържащ липозоми, заредени с екстракт от зелено кафе на зърна, който да се използва като антиоксидантна козметична формула за ефекти против стареене.

МАТЕРИАЛИ И МЕТОДИ Материали

Зърната зелено кафе арабика L са получени от местния пазар в Мумбай през август 2019 г. и са удостоверени от д-р Харшад М. Пандит. Бивш ръководител и доцент по ботаника, Guru Nanak Khalsa College, Мумбай, Индия. Фосфатидилхолинът е закупен от HiMedia Laboratories Pvt Ltd, холестерол 99 процента е доставен от Loba Chemie Pvt Ltd, 2,2-дифенил-1-пикрилхидразил (DPPH), а хлорогенната киселина е закупена от Otto Chemie Pvt Ltd, Мумбай . Галова киселина и аскорбинова киселина са доставени от SD Fine Chemicals Ltd, Мумбай. Всички химикали, използвани в това изследване, са от клас AR. Липозомите се произвеждат с помощта на ротационен изпарител, Rotaeva, Equitron и UV-видим спектрофотометър, Shimadzu 1800 се използва за оценка на липозомите.

Cistanche може да спре стареенето

Методи

Методология на извличане

Прахообразните зелени кафеени зърна се обезмасляват с помощта на петролев етер 40-60 степен (1:6 процента w/v) в продължение на 3 часа в апарат на Сокслет. Обезмасленото зелено кафе на прах се екстрахира с различни разтворители като вода, 25 процента метанол, 50 процента метанол, 75 процента метанол и 100 процента метанол в продължение на 2 часа, като се използва система Сокслет. Получените екстракти се концентрират в порцеланова чиния на електрическа водна баня при 80 градуса за отстраняване на разтворителя. Приготвените екстракти са използвани за качествен и количествен анализ.

Общо фенолно съдържание

Общото фенолно съдържание се определя по метода на реагента на Folin-Ciocalteu, като се използва стандартна процедура. Галовата киселина се използва като стандарт и общото полифенолно съдържание се изразява като mg/g еквивалент на галова киселина (GAE) от калибровъчната крива на галова киселина.16

Спектрално наслагване

Използван е UV спектрометричен метод за определяне на наличието на хлорогенна киселина в екстракта. За приготвянето на стандартни разтвори, Img/ml стандартна хлорогенова киселина се разтваря във фосфатен буфер и се приготвя допълнително разреждане, за да се получат 10 ug/ml стандартен разтвор. За разтвора на пробата, 25 процента от 1 mg/ml метанолов екстракт се разтварят във фосфатен буфер и се приготвя допълнително разреждане, за да се получат 10 ug/ml стандартен разтвор. Спектър на наслагване и на двата разтвора беше получен с помощта на UV-Vis спектрофотометрия.

Количествено определяне на хлорогенната киселина във всеки екстракт Приготвяне на стандартен разтвор

Стандартната хлорогенова киселина се разтваря в разтворители като вода, 25 процента метанол, 50 процента метанол, 75 процента метанол и 100 процента метанол. За да се намали грешката в процедурата на приготвяне, разтворът на хлорогенна киселина 10 ppm се приготвя във всеки от горепосочените разтворители и след това се приготвя съответното разреждане, вариращо от концентрация от 2 до 10 ppm. Графиката на линейността беше направена чрез записване на абсорбцията при 324 nm с помощта на UV-Vis спектрофотометър.

Приготвяне на разтвор на проба

За приготвяне на разтвора на пробата, екстрактите бяха разтворени в съответните им разтворители и беше направен разтвор от 10 ppm. Абсорбцията за разтвора на пробата се записва при 324 nm с помощта на UV-Vis спектрофотометър. Получената абсорбция се екстраполира в графиката на линейността, за да се намери концентрацията на хлорогенова киселина във всеки екстракт.

Определяне на антиоксидантни активности

PDF (2,2-дифенил -1-пикрилхидразил) антиоксидантен анализ. Активността на екстрактите към DPPH радикали за отстраняване на радикали е изследвана по следния стандартен метод." Като стандарт е използвана аскорбинова киселина. Експериментът е извършен в три екземпляра. Процентът на активността на DPPH радикално поглъщане беше начертан спрямо всяка концентрация на екстракт и беше определен IC50.Азотен оксид антиоксидантен анализ

Активността на отстраняване на радикали от азотен оксид е изследвана чрез използването на реакцията на Griess Illosvoy.изгубената империя cistanche18 Аскорбиновата киселина се използва като стандарт. Експериментът се провежда трикратно. Процентът на активността на отстраняване на радикали от азотен оксид беше начертан спрямо всяка концентрация на екстракт и процентното инхибиране на IC за двете изследвания на антиоксидантите беше изчислено с помощта на посочената по-долу формула. Активността на отстраняване беше изразена като процент на инхибиране, изчислен чрез следната формула:

Определяне на клетъчната жизнеспособност чрез МТТ анализ Екстрактът от зелени кафеени зърна, а именно 25% метанолов екстракт, беше скриниран за изследване на цитотоксичност срещу клетъчни линии L929. 200 ul клетъчна суспензия се посяват в 96-плака с гнезда с клетъчна плътност (20,000 клетки на ямка), без тестовия агент. Клетките се оставят да растат за около 24 часа. Беше добавена подходяща концентрация на тестовия агент (25 процента метанолов екстракт), плаката беше инкубирана в продължение на 24 часа при 37 градуса в атмосфера с 5 процента CO и отработената среда беше отстранена. МТТ реагентът се добавя до крайна концентрация от (0,5 mg/mL) от общия обем и плочите се инкубират за 2-3 часа при тъмни условия. 100 ul DMSO се добавят след отстраняване на MIT реагента и се разклащат внимателно. Абсорбцията се измерва при 570 nm и 630 nm с помощта на спектрофотометър на ELISA четец. Стойността на IC.o се определя чрез използване на уравнение на линейна регресия. Формули, използвани за изследването:

Определяне на антиеластазна активност

Клетките се култивират при плътност 3×105 клетки/2 ml и се инкубират в CO, инкубатор за 24 часа при 37 градуса. 1 За анти-еластазното изследване клетките, третирани с 250uM епигалокатехин галат (EGCG) бяха използвани като положителна контрола, клетките, третирани с 200ug/ml от 25 процента метанолов екстракт се използва като тестова проба (Таблица 6), а клетките само с културална среда се използват като отрицателна контрола и се инкубират в 2 ml културална среда за 24 часа. Епруветките се центрофугират за пет минути при 300x g при 25 градуса и клетките се промиват с PBS. Добавят се 0,5 ml разтвор на BD Cytofix/Cytoperm след отстраняване на PBS и епруветките се държат необезпокоявани за 10 минути. 0,5 процента говежди серумен албумин (BSA) в 'S[PO OU] USEM Ol pes sem op upon процент I'O pue SEd 20 μL от миша анти-човешка неутрофилна еластаза/ELA2 Alexa Fluor® 647-конюгирано моноклонално антитяло се добавя, смесва се и се инкубира за 30 минути при стайна температура при тъмно. Клетките се третират с 0,1 процента натриев азид и 0,5 ml PBS и се анализират чрез поточна цитометрия с възбуждане и излъчване съответно от 650 nm и 668 nm. В това проучване тестови съединения, а именно екстракт от зърна от зелено кафе (25 процента метанолов екстракт) и стандартен епигалокатехин галат (EGCG) бяха използвани за оценка на ефекта им върху експресията на ELA-2 (конюгирано мише анти-човешко еластазно антитяло) в L929 клетка линии.

Приготвяне на екстракт от зелени кафеени зърна, заредени с липозоми

Методът на хидратиране на тънък слой, както е описан от Bangham et al.1 степен, беше използван за формулиране на липозоми. Липидната смес се приготвя чрез разтваряне на фосфатидилхолин и холестерол в хлороформ и метанол (2:1) в облодънна колба (RBF) и се добавят стъклени перли за образуване на хомогенен филм. RBF беше прикрепен към ротационен флаш изпарител (Roteva, уравнение) и оставен да се върти при 80 rpm/min в термостатирана водна баня при 40 градуса. Органичните разтворители се отстраняват чрез бавно прилагане на вакуум, което води до образуване на хомогенен липиден филм 100 процента по стените на колбата. Филмът се оставя да изсъхне за LH за пълното отстраняване на органичните разтворители. Изсушеният липиден филм се хидратира с фосфатен буфер (рН: 5,4), съдържащ разтворен екстракт (25 процента метанолов екстракт) и след това RBF се върти при 150 rpm/min в термостатирана водна баня, поддържана при 46 градуса, което е над температурата на прехода на липидите. Въртенето продължава 60 минути, докато се получи хомогенна суспензия. Липозомите, произведени с помощта на този метод, са големи и хетерогенни по размер, поради което методът на ултразвук се използва за 30 минути, за да се намали размерът на липозомите. Липозомната суспензия на базата на екстракт от зелени кафеени зърна се оставя да престои 2 часа при стайна температура, за да се осигури пълна хидратация. Липозомната суспензия се съхранява в стъклена бутилка с кехлибарен цвят в хладилник до следваща употреба.

Характеризиране на липозомите

Следните са параметрите, за които са характеризирани получените липозоми

Определяне на ефективността на капсулиране UV-Vis спектрофотометър беше използван за оценка на ефективността на капсулиране на хлорогенова киселина в липозоми, заредени с екстракт от зелени кафеени зърна. Абсорбцията на хлорогеновата киселина, останала в супернатантата след центрофугиране, се измерва при 324 nm с помощта на UV-Vis спектрофотометър.микронизирана пречистена флавоноидна фракция 1000 mg използваСлед това концентрацията се изчислява от калибровъчната графика, получена за стандартна хлорогенна киселина.

Общото количество лекарство, добавено към оптичната микроскопия

Капка от липозомната суспензия се поставя върху чисто предметно стъкло и се наблюдава под силата на 45X и 100X на оптичния микроскоп (Motic microscope). Определяне на размера на везикулите, индекса на полидисперсност (PDI) и зета потенциала

Размерът на везикулите и индексът на полидисперсност бяха анализирани чрез използване на инструмент за динамично разсейване на светлината с компютъризирана система за контрол (анализатор на размера на частиците Malvern). Прясно приготвени липозомни партиди се разреждат в съотношение 1:100 с дейонизирана вода. Всички измервания бяха извършени в три екземпляра при 25±0,5 градуса. Липозомната суспензия се разрежда с дейонизирана вода и зета потенциалът се определя с помощта на Malvern Zetasizer.

Трансмисионна електронна микроскопия (ТЕМ) ТЕМ анализът беше извършен за оптимизирана натоварена с лекарство суспензия чрез трансмисионна електронна микроскопия (Tecnai T20,200Kev, FEI). Капка от суспензията се поставя с помощта на микропипета върху решетката. Решетката се изсушава добре. Изсушената решетка, съдържаща пробата, беше бомбардирана с електрони, ускорени при 200 VK. След това размерът на везикулите и липозомната морфология се визуализират чрез ТЕМ под вакуум (Фигура 1). Приготвяне на липозомален гел

Липозомен гел, зареден с екстракт от зелени кафеени зърна, се приготвя чрез използване на гелна основа carbopol@974P. Точно 0.5 процента от carbopol@974P беше претеглен и държан за хидратация в двойно дестилирана вода, съдържаща консерванти, за една нощ. Липозомните пелети, получени след центрофугиране, се диспергират в дестилирана вода чрез ултразвук и се добавят към хидратиран разтвор на карбопол с разбъркване. Желирането се предизвиква чрез неутрализация с помощта на триетаноламин (TEA). Гелът беше оценен за цвят, текстура (гладкост и омазняване), рН, вискозитет, съдържание на лекарство, разпръскваемост и в проучване за освобождаване на лекарството.

In vitro проучване за освобождаване на лекарства

Апаратът за дифузионни клетки на Franz с капацитет на рецепторното отделение от 22 ml и повърхностна площ от 3,91 cm2 беше използван за оценка in vitro на диализна мембрана за освобождаване на лекарство (граница на молекулно тегло 12,000-14,000), която беше предварително хидратиран чрез накисване в буфер за една нощ и бяха монтирани върху клетките. Като рецепторна течност се използва фосфатен буфер с рН 5,4 (37 градуса ±0.5 градуса). Разтворът на резервоара се разбърква при 100 rpm/min с помощта на магнитни перли. 0,5 g гел се поставя в донорното отделение върху мембраната. Аликвотите се събират на интервали от 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 12 и 24 часа и се анализират с UV-Vis спектрофотометър при 324 nm.

РЕЗУЛТАТИ И ДИСКУСИЯ Методика на извличане

Процентните добиви на екстракти от зърна зелено кафе арабика L. са представени в таблица 3. Физическият вид на всички екстракти е тъмно жълт и тъмнокафяв на цвят. 25-те процента от метаноловия екстракт показват най-висок процентен добив при 26,54±0.13 в сравнение с всички останали екстракти.

Общо фенолно съдържание

Методът на Folin-Ciocalteu беше използван за оценка на общото фенолно съдържание на всички екстракти. TPC на всички екстракти се изразява като еквивалент на галова киселина (уравнението на стандартната крива: y= 0.0031 плюс 0,3477,r2=0.9953), споменато в таблица 1. Сред всички екстракти основното фенолно съдържание се оценява в 25 процента от метаноловия екстракт. Количествено определяне на спектрално наслагване на хлорогенна киселина във всеки екстракт Количеството съдържание на хлорогенова киселина във всеки екстракт е споменато в таблица 3 и фигура 2.отефлавоноидСпоред резултатите е установено, че най-голямото количество хлорогенна киселина присъства в 25 процента метанолов екстракт.

Въз основа на резултатите, получени от общото фенолно съдържание, количественото определяне на хлорогенната киселина и анализа на антиоксидантите, беше установено, че 25 процента метанолов екстракт съдържа най-високо фенолно съдържание, по-голямо количество хлорогенна киселина и максимална активност за отстраняване на радикали в сравнение с други екстракти.

Определяне на клетъчната жизнеспособност чрез МТТ анализ. Анализът на жизнеспособността е анализ, който определя способността на тъканите, клетките или органите да поддържат или възстановяват състоянието на оцеляване. Проучване на цитотоксичността на тестваното съединение, екстракт от зелено кафе на зърна срещу L929 клетъчни линии в статистически данни от изследване на клетъчна цитотоксичност от ELISA читател предполага, че екстрактът от зелено кафе на зърна показва умерени цитотоксични потенциални свойства с инхибиторна концентрация （IC） при 306,38 ug/ml в сравнение със стандарта лекарство Камптотецин с 23 ug/ml Таблица 5. Наблюдението силно предполага, че екстрактът от зелено кафе на зърна няма значителен потенциал за цитотоксичност с концентрация, варираща от 12.5-200 ug/ml съответно с инкубационен период от 24 часа при 37 градуса (Графика 1).

Определяне на антиеластазна активност

Ензимът еластаза е способен да разгражда еластина, неразтворим еластичен фиброзен протеин, който заедно с колагена допринася за механичната здравина на съединителната тъкан. Няколко проучвания показват, че както стареенето на кожата, така и ефектите против бръчки съответстват значително на намалената активност на еластазата. По този начин бяха проведени проучвания за антиеластаза, за да се потвърди полезността на екстракта от зелено кафе на зърна като средство против стареене. В това проучване тестовото съединение, а именно екстракт от зелено кафе на зърна и Std, EGCG, беше използвано за оценка на ефекта им върху експресията на ELA-2 (конюгирано мише анти-човешко еластазно антитяло) в клетъчната линия L929. Концентрациите на съединенията, използвани в експеримента, са както следва:

Даденото изпитвано съединение GC екстракт от боб потиска експресията на ELA-2 в клетъчната линия L929. Относителните средни стойности на интензитета на флуоресценция на ELA-2 бяха почти по същия начин намалени в std, епигалокатехин галат и екстракт от зелено кафе на зърна на тестваното съединение. (Таблица 7; Фигура 3 и Хистограма 1). Следователно GC бобът може да се счита за добър антиеластазен агент. Приготвяне на екстракт от зелени кафеени зърна, заредени с липозоми

В това изследване методът на хидратиране на тънък филм е използван за формулиране на липозоми.пуритански витамин cПричината за избора на това

методът е, тъй като е най-простият метод за приготвяне на многослойни везикули и е способен да зареди по-висока маса от хидрофилни молекули като хлорогенна киселина в сравнение с еднослойните везикули. Установено е, че методът на хидратиране с тънък слой дава 75 процента от ефективността на капсулиране за хлорогенова киселина, присъстваща в екстракта Таблица 2. По този начин този метод е използван за получаването на липозомите.

Характеризиране на липозоми Оптична микроскопия

Многослойната везикула се наблюдава ясно (Фигура 4). Използвани са микроскопски наблюдения за оценка на формата и размера на везикулите, отбелязани за всички приготвени партиди.

Определяне на индекс на полидисперсност (PDI), зета потенциал и размер на везикулите

PDI основно се появява за разпределението на размера на везикулите в дадена проба.систанчеЧислената стойност на PDI започва от {{0}}.0 (перфектно еднакъв размер на частиците) до 1,1 (силно полидисперсен размер на частиците). В случай на базирани на липиди носители като липозоми и нанолипозомите с размер 0,3 и по-малко са приемливи, тъй като показват хомогенна популация от фосфолипидни везикули.21 Дзета потенциалът е важна техника за характеризиране, която се използва за разбиране на физическата стабилност на частиците. Стойност от -30 mV до плюс 30mV обикновено се счита, че има достатъчна отблъскваща сила за постигане на по-добра физическа колоидна стабилност.

Методът на хидратиране с тънък слой дава големи и хетерогенни многослойни везикули. Анализът на размера на произведените липозоми разкрива z-среден (d.nm) размер от 864.2 nm, PDI от 0.375 и Zeta потенциал от -12.4 с добро ефективност на улавяне.

Трансмисионна електронна микроскопия (ТЕМ) Морфологичен анализ на тези липозоми чрез ТЕМ показва липозоми със сферична форма. Приготвяне на липозомален гел

Липозомната дисперсия просто се смесва с полимера, за да се получат съответните гелове. Съставът на липозомния гел е с предимство, тъй като сливането на везикулите може ефективно да бъде избегнато или сведено до минимум, тъй като полимерът служи като разделител между липозомите. По този начин размерът на везикулите не се влияе, тъй като това е контролиран процес на взаимодействие полимер/липозома. Кремовата формула на базата на липозоми не е избрана, тъй като се съобщава за проблеми със стабилността при продукти на основата на емулсия, дължащи се на метода, тъй като това е най-простият метод за приготвяне на многослойни везикули и е в състояние да зареди по-голяма маса от хидрофилни молекули като хлорогенна киселина в сравнение с еднослойни везикули. Установено е, че методът на хидратиране с тънък слой дава 75 процента от ефективността на капсулиране за хлорогенова киселина, присъстваща в екстракта Таблица 2. По този начин този метод е използван за получаването на липозомите.

Характеризиране на липозоми Оптична микроскопия

Многослойната везикула се наблюдава ясно (Фигура 4). Използвани са микроскопски наблюдения за оценка на формата и размера на везикулите, отбелязани за всички приготвени партиди.

Определяне на индекс на полидисперсност (PDI), зета потенциал и размер на везикулите

PDI основно се появява за разпределението на размера на везикулите в дадена проба. Числената стойност на PDI започва от {{0}}.0 (перфектно еднакъв размер на частиците) до 1,1 (силно полидисперсен размер на частиците). В случай на базирани на липиди носители като липозоми и нанолипозомите с размер от 0,3 и по-малко са приемливи, тъй като показват хомогенна популация от фосфолипидни везикули.21 Дзета потенциалът е важна техника за характеризиране, която се използва за разбиране на физическата стабилност на частиците. Стойност от -30 mV до плюс 30mV обикновено се счита, че има достатъчна отблъскваща сила за постигане на по-добра физическа колоидна стабилност. 2

Методът на хидратиране с тънък слой дава големи и хетерогенни многослойни везикули. Анализът на размера на произведените липозоми разкрива z-среден (d.nm) размер от 864.2 nm, PDI от 0.375 и Zeta потенциал от -12.4 с добро ефективност на улавяне.

Трансмисионна електронна микроскопия (ТЕМ) Морфологичен анализ на тези липозоми чрез ТЕМ показва липозоми със сферична форма.

Приготвяне на липозомален гел

Липозомната дисперсия просто се смесва с полимера, за да се получат съответните гелове. Съставът на липозомния гел е с предимство, тъй като сливането на везикулите може ефективно да бъде избегнато или сведено до минимум, тъй като полимерът служи като разделител между липозомите. По този начин размерът на везикулите не се влияе, тъй като това е контролиран процес на взаимодействие полимер/липозома. Формулировката на крем на базата на липозоми не е избрана, тъй като се съобщава за проблеми със стабилността при продукти на базата на емулсии, дължащи се на

наличието на повърхностно активно вещество и излишно масло, което може да взаимодейства с везикулите. Различни свойства като вискозитет могат лесно да се контролират чрез промяна на концентрацията на полимера или промяна на типа на полимера. По този начин бяха приготвени липозомни гелове, тъй като те заобикалят проблема със стабилността, осигуряват контролирано освобождаване, лесни за приготвяне и имат естетичен вид като козметика за грижа за кожата.23 Приготвените липогели бяха бледожълти на цвят и непрозрачни. Установено е, че 0.5 процента w/w от carbopol@974P има добра консистенция и гладък външен вид, лишен от всякакво агрегиране. Установено е, че съдържанието на лекарството в липозомния гел е 94,16±1,3 с вискозитет на гела в диапазона от 13 500 cps до 16 500 cps и разстилаемост около 7-8 g.cm/s.

Профил на освобождаване на лекарството in vitro

Най-външният слой на кожата е роговият слой и се състои главно от протеин кератин и липиди. Междуклетъчните липиди играят жизненоважна роля в контролирането на перкутанната абсорбция. Междуклетъчните липиди могат да взаимодействат с фосфолипидите, присъстващи в липозомите и по този начин да причинят подуване на липидите, без да променят многослойната двуслойна структура на роговия слой. Тези набъбнали липиди причиняват натрупване на лекарството и образуване на вътрекожно депо. Въпреки че механизмът на локално прилаганите липозоми не е напълно разбран, но липидният състав, повърхностният заряд и липозомната ламеларност играят основна роля в разпределението на лекарството. Проучванията също така разкриха, че локалното доставяне също се влияе от размера на липозомите.24 Освобождаването на лекарството in vitro се извършва с помощта на диализна мембрана. Проучването in vitro за =освобождаване на липозомния гел показа ефект на продължително освобождаване до 12 часа в сравнение с 7-8 часа на конвенционален гел Графика 2.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Екстрактите от зелено кафе на зърна арабика бяха проверени за общо фенолно съдържание, количествено определяне на хлорогенна киселина и антиоксидантен анализ. Въз основа на резултатите, получени от тези изследвания, 25 процента от метаноловия екстракт е избран да бъде включен в липозомите, тъй като е показал най-високо фенолно съдържание, по-голямо количество хлорогенна киселина и по-добра антиоксидантна активност. Преди включването на екстракта в липозомите той беше скриниран за МТТ и антиеластазен анализ. Въз основа на MT анализа екстрактът няма потенциал за клетъчна цитотоксичност и според антиеластазния анализ екстрактът има антиеластазна активност. Така екстрактът може да се използва за формулиране на липозоми против стареене. Мултиламеларните везикули се приготвят с помощта на метода на хидратиране на тънък слой. Приготвените липозоми имат добра ефективност на капсулиране и по-добра физическа стабилност. Базираната на екстракт липозомна суспензия беше формулирана в липозомален гел. Според in vitro проучване за освобождаване на лекарство, липозомният гел показва ефект на удължено освобождаване до 12 часа в сравнение с конвенционалния гел. Следователно липозомите, заредени с екстракт от зелено кафе на зърна, могат да се считат за ефективен носител за локално доставяне с потенциал против стареене.

БЛАГОДАРНОСТ

Авторите са благодарни на Stellixir Biotechechnology, Бенгалуру и Карнатака за тяхната помощ при завършването на изследванията на МТТ анализа и анти-еластазния анализ, ние също благодарим на Sprint testing solutions, Мумбай за TEM изображения и нашия колеж SVKM's Dr.Bhanuben Nanavati College of Pharmacy за осигуряване на най-добрите условия за провеждане на това проучване.

КОНФЛИКТ НА ИНТЕРЕСИ

Авторите декларират липса на конфликт на интереси.

СЪКРАЩЕНИЯ:

TPC: Общо фенолно съдържание; DPPH:2,2-дифенил -1-пикрилхидразил; GAE: еквивалент на галова киселина; GC: Зелено кафе; GCB: Зелено кафе на зърна; ELA-2 (конюгирано мише анти-човешко еластазно антитяло): неутрофилна еластаза; EGCG: епигалокатехин галат; PC: фосфатидилхолин; CH: холестерол; RBF: колба с кръгло дъно; TEM: трансмисионна електронна микроскопия; МТТ: 3-(4,5-диемтилтиазол-2-ил)-2,5-дифенил тетразолиев бромид; PDI: Индекс на полидисперсност; IC": Половин максимална инхибиторна концентрация.

Тази статия е извлечена от Desai и Mallya.: Разработване на липозомален гел против стареене, зареден с екстракт от зелени кафеени зърна