Терапевтичен ефект на цистанозид А върху костния метаболизъм на овариектомирани мишки

Контакт: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Имейл:audrey.hu@wecistanche.com

Резюме

Цистанозид А (Cis A) е активен фенилетаноиден гликозид, изолиран отCistanche deserticola YC Maпривлече вниманието ни поради възможната му роля при лечението наостеопороза. В настоящото изследване ние оценихме ефектите на Cis A върху модел на мишка с овариектомия (OVX) и изследвахме неговите основни молекулярни механизми на действие. След 12 седмици на перорално прилагана интервенция, Cis A (20, 40 и 80 mg/kg телесно тегло/ден) показва значителни антиостеопоротични ефекти върху OVX мишки, доказани от повишена костна здравина, костна минерална плътност и подобрена трабекуларна костна микроархитектура. Междувременно активността на маркерите за костна резорбция, включително резистентна на тартарат кисела фосфатаза (TRAP), дезоксипиридинолин (DPD) и катепсин К, беше намалена и биоактивността на маркера за костно образуване алкална фосфатаза (ALP) беше повишена. Механично, Cis A инхибира експресията на фактор 6, свързан с TNF-рецептор (TRAF6), молекула нагоре по веригата, която е споделена както от усилвателя на леката верига на ядрения фактор капа на активираните В клетки (NF-κB), така и от фосфатидилинозитол 3-киназата ( PI3K)/Akt пътища и впоследствие потиска нивата на рецепторни активатори на ядрен фактор kappaB лиганд (RANKL), понижава експресията на NF-κB и повишава остеопротегерин (OPG), PI3K и Akt, което означава, че Cis A притежава антиостеопорозна активност при овариектомирани мишки чрез TRAF6-медиирано NF-kappaB инактивиране и PI3K/Akt активиране. Взети заедно, ние представяме нови открития, че Cis A, чрез понижаване на TRAF6, координира инхибирането на NF-κB и стимулирането на PI3K/Akt пътища за насърчаване на образуването на кост и предотвратяване на костна резорбция. Тези данни демонстрират потенциала на Cis A като обещаващ агент за лечение наостеопорозазаболяване.

Ключови думи: цистанозид А; овариектомирани мишки; антиостеопоротичен; TRAF6; РАНКЛ

Въведение

остеопороза, системен скелетен „тих убиец“, се превърна в основна опасност за здравето, засягаща над 2000 милиона души по света през последните години [1]. Характеризира се с ниска плътност на костната маса (BMD) и влошаване на микроархитектурата, които произтичат от прекомерна костна резорбция спрямо образуването на кост и накрая водят до остеопоротична фрактура [2,3]. В днешно време идентифицирането на агенти за блокиране на диференциацията и резорбцията на остеокластите са обичайните и успешни стратегии за разработване на терапевтични лекарства заостеопороза[4] и наистина има много синтетични агенти, включително естрадиол валерат и натриев алендронат, които могат да предотвратят и лекуватостеопороза. Въпреки това, лекарствата за болестите далеч не са идеални; някои от тези лекарства могат да увеличат риска от рак на ендометриума и гърдата и също така имат известна степен на странични ефекти, като хиперкалциемия, хиперкалциурия и др. [5], които ограничават клиничните им приложения. Ето защо в продължение на повече от хилядолетие традиционната китайска медицина (ТКМ), особено ядливата ТКМ с изолираните биоактивни съединения и фракции, са били широко използвани безопасно и ефективно в азиатските страни за предотвратяване и лечение на различни заболявания, включителноостеопороза[6,7].

остеопорозасе характеризира като повишена костна резорбция, дължаща се на повишена остеокластогенеза, и този процес включва ангажирането на хематопоетичните моноцити в прекурсори на остеокластите, които се сливат, за да образуват многоядрени остеокласти, които са насочени към костни места, подложени на ремоделиране [4]. Рецепторен активатор за ядрен фактор-κB лиганд (RANKL), ключов фактор, който се секретира от остеобластите, стимулира диференциацията на моноцитите в остеокласти [8,9]. Взаимодействието на RANKL с неговия рецептор RANK води до каскада от вътреклетъчни събития, включително NF-κB, PI3K/Akt, калций/калмодулин-зависима киназа чрез набиране на адапторния сигнален протеин TNF рецептор-асоцииран фактор (TRAF6). В резултат на това няколко свързани с остеокластите маркерни гени, включително TRAP, катепсин К и DPD, се регулират нагоре и процесът на костна резорбция се ускорява.

Фенилетаноидните гликозиди се характеризират с канелена киселина и хидроксил фенил етил части, които са прикрепени към -глюкопираноза (апиоза, галактоза, рамноза, ксилоза и др.) чрез гликозидна връзка, които са широко разпространени в лечебните растения [10]. Цистанозид А (Cis A) е активен фенилетаноиден гликозид вCistanche deserticola YC Ma. Според записите на китайската фармакопея C. deserticola традиционно се използва за лечение на бъбречен дефицит на ин, мускулна слабост, лумбална слабост и т.н., а фенилетаноидните гликозиди са основните биоактивни съставки в тази билка [11]. Въз основа на теорията за „бъбрека“ на TCM, бъбрекът може да управлява костната система, което означава, че развитието и функциите на костите зависят от същността на бъбрека и тази същност на бъбрека може да се трансформира в костен мозък, за да подхранва костите, насърчават растежа и възстановяването на скелета и укрепват скелета [12]. Тъй като C. deserticola може да укрепи бъбреците, ние предположихме, че Cis A може да предотврати и лекуваостеопороза. Следователно настоящото проучване е предназначено да потвърди потенциала на Cis A за предотвратяванеостеопорозачрез използване на модел на овариектомирана мишка и маркерите за образуване на кост и резорбция, както и свързаните потенциални механизми, бяха определени за оценка на антиостеопорозната биоактивност на този агент.

Резултати

Ефекти на Cis A върху теста за триточково огъване на костта

За да анализираме дали лечението с Cis A прави костта по-здрава, ние подложихме бедрените кости на теста за триточково огъване. Както е показано на фигура 1, максималното натоварване, приложено при счупване на костите, е 21,5 процента и 22.0 процента по-високо при животните, третирани с 20 mg/kg и 80 mg/ kg Cis A, съответно, в сравнение с животни в групата с овариектомия (OVX) (p < 0.05).="" междувременно,="" лечението="" с="" cis="" a="" също="" повишава="" сковаността="" на="" костите;="" всички="" мишки,="" третирани="" с="" cis="" a,="" показват="" значително="" повишена="" скованост="" с="" данни="" от="" 121.0="" ±="" 12,1="" (p=""><0,05), 124,1="" ±="" 16,2="" (p=""><0,05) и="" 127,7="" ±="" 9,6="" (p=""><0,01), съответно="" ,="" в="" сравнение="" със="" 102,2="" ±="" 10,7="" от="" ovx="" мишките.="" резултатите="" показват,="" че="" повишената="" здравина="" на="" костите="" при="" ovx="" мишките,="" третирани="" с="" cis="" a,="" се="" дължи="" на="" увеличено="" количество="" кост="" и="" подобряване="" на="" качеството="" на="">

Ефекти на Cis A върху костната микроархитектура

Триизмерната трабекуларна костна микроархитектура на мишки, измерена чрез микро-CT (Фигура 2 и Таблица 1), интуитивно показва, че мишките в групата OVX са показали значително намаление на трабекуларната площ и трабекуларния брой в сравнение с фиктивната група, което показва, че овариектомията може да предизвика значително намаляване на плътността на костната маса (BMD, -46 процента), костното минерално съдържание (BMC, -66 процента), тъканното минерално съдържание (TMC, -85 процента), костната обемна фракция (BVF, -82 процента), трабекуларен брой (Tb. N, -76 процента) и увеличение на трабекуларното разделяне (Tb. Sp, плюс 80 процента) без промяна в общата тъканна минерална плътност (TMD) и трабекуларната дебелина (Tb. Th) след операцията на 12 седмици.

Въпреки това, OVX мишките, третирани с Cis A, доведоха до дозозависимо повишена BMD (плюс 43 процента ~57 процента), BMC (плюс 65 процента ~73 процента), TMC (плюс 83 процента ~90 процента), BVF (плюс 80 процента ~88 процента), по-голямо намаляване на Tb. Sp (-79 процента ~88 процента) и допълнително подобрен Tb. N (плюс 73 процента ~82 процента) в сравнение с групата на OVX. Изглежда, че TMD не се повлиява от овариектомията, но се увеличава значително от лечението с естрадиол валерат (EV).

Ефекти на Cis A върху маркерите за костно образуване и резорбция

Ефектите на Cis A върху маркерите за костна резорбция, включително TRAP, DPD, катепсин К и индекс на костно образуване ALP и костен Gla-протеин (BGP), са показани на Фигура 3. След 12 седмици операция на овариектомия, активността на TRAP, DPD и катепсин К в групата на OVX бяха значително увеличени, особено DPD, който се увеличи с близо 55,6 процента; TRAP и катепсин К бяха повишени съответно с 43,5 процента и 38,1 процента в сравнение с фиктивната група. Cis A, прилаган перорално в продължение на 12 седмици, демонстрира забележителен потенциал за предотвратяване на всички горепосочени маркери за костна резорбция, особено високата доза (80 mg/kg), проявяваща значителен ефект върху потискането на активността на DPD с 45.0 процента, TRAP с 49.0 процента и катепсин К съответно с 44.0 процента (p < 0.01),="" в="" сравнение="" с="" ovx="" група="" (фигура="" 3).="" въпреки="" че="" в="" групата="" на="" ovx="" беше="" демонстрирана="" нарастваща="" тенденция="" на="" alp="" и="" bgp="" активности,="" не="" бяха="" наблюдавани="" статистически="" значими="" промени.="" въпреки="" това,="" значително="" подобрение="" на="" активността="" на="" alp="" се="" наблюдава="" при="" групи,="" третирани="" с="" нисък="" и="" висок="" cis="" a,="" в="" сравнение="" с="" фиктивната="" група="" (р=""><>

Ефекти на Cis A върху нивата на протеинова експресия на TRAF6, NF-κB PI3K, Akt, OPG и RANKL

Western blot анализът разкрива, че в сравнение с фиктивната група, протеиновите нива на TRAF6, NF-κB и RANKL в групата OVX са значително повишени (p < 0.05),="" докато="" opg,="" pi3k="" и="" akt="" бяха="" значително="" намалени="" (фигура="" 4).="" cis="" a="" (20="" mg/kg="" или="" 80="" mg/kg)="" значително="" намалява="" експресията="" на="" traf6="" (p="">< 0.05),="" последвана="" от="" експресията="" на="" rankl,="" която="" е="" намаля="" и="" opg="" се="" увеличи,="" което="" означава,="" че="" съотношението="" opg/rankl="" беше="" регулирано="" нагоре.="" следователно,="" сигналните="" каскади="" на="" nf-κb="" бяха="" регулирани="" надолу="" и="" pi3k/akt="" бяха="" регулирани="" нагоре="" чрез="" лечение="" с="" cis="" a="" (p=""><0.05). молекули="" 2017,="" 22,="" 197="" 5="" от="" 11="" 2.1.4.="" ефекти="" на="" cis="" a="" върху="" нивата="" на="" протеинова="" експресия="" на="" traf6,="" nf-κb="" pi3k,="" akt,="" opg="" и="" rankl="" анализът="" на="" western="" blot="" разкрива,="" че="" в="" сравнение="" с="" фиктивната="" група,="" протеиновите="" нива="" на="" traf6,="" nf-κb="" и="" rankl="" в="" групата="" на="" ovx="" са="" били="" значително="" повишени="" (p=""><0,05), докато="" opg,="" pi3k="" и="" akt="" са="" значително="" намалени="" (фигура="" 4).="" cis="" a="" (20="" mg/kg="" или="" 80="" mg/kg)="" значително="" намалява="" експресията="" на="" traf6="" (р=""><0,05), последвано="" от="" намаляване="" на="" експресията="" на="" rankl="" и="" повишаване="" на="" opg,="" което="" означава,="" че="" съотношението="" opg/rankl="" е="" регулирано="" нагоре.="" следователно,="" сигналните="" каскади="" на="" nf-κb="" бяха="" регулирани="" надолу="" и="" на="" pi3k/akt="" бяха="" регулирани="" нагоре="" чрез="" лечение="" с="" cis="" a="" (p=""><>

Дискусия

Предвид ограниченията на настоящите терапевтични възможности заостеопорозазаболяване, има нужда от алтернативи от храни или естествени ядливи лечебни растения. Като част от продължаващите ни усилия за откриване на ефективни антиостеопоротични агенти от TCM, ние открихме серия от екстракти, фракции и съединения, които притежават ефекта на антиостеопоротични свойства [13,14].Cistanche deserticolaе важен класически TCM, за който е установено, че притежава благоприятен профил на безопасност [15] и широки медицински функции за лечение на бъбречна недостатъчност и т.н. [16]. Според теорията на TCM, TCM, които притежават ефекта на ободряване на бъбреците, обикновено се използват за лечение наостеопороза; фенилетаноидните гликозиди са основните биоактивни съставки в тази билка, което означава, че фенилетаноидните гликозиди, съдържащи се в C. deserticola, могат да притежават антиостеопорозни свойства. Доказано е, че екстрактът от C. deserticola може значително да инхибира намаляването на BMD и да предотврати влошаването на трабекуларната микроархитектура, причинено от OVX [17]. В експеримента in vitro той също значително повишава ALP, костния морфогенетичен протеин -2 и остеопонтин иРНК, както и костната минерализация на култивирани остеобласти [18]. Ехинакозидът, основен биоактивен компонент в C. deserticola, официално записан в китайската фармакопея [11], проявява антиостеопорозна активност с висока доза от 30~270 mg/kg телесно тегло/ден [19], а допълнителни in vitro резултати показват, че може да насърчи костната регенерация чрез увеличаване на съотношението OPG/RANKL в MC3T3-E1 субклон 14 клетки [20]. Cis A е един от фенилетаноидните гликозиди, изолирани от C. deserticola, и няколко доклада разкриват, че това съединение притежава антиоксидантна активност [21] и противовъзпалителни свойства [22,23]. Наскоро публикувана статия откри, че Cis A проявява защитна активност както върху CCl4, така и върху индуцирана от алкохол хепатотоксичност при мишки, и също така показва защитно свойство върху индуцирано от етанол увреждане в първично култивирани миши хепатоцити in vitro [24]. В нашето настоящо проучване резултатите показват, че Cis A притежава антиостеопорозна активност при ниска доза (20~80 mg/kg телесно тегло/ден) чрез използване на модел на овариектомирана мишка и тази биоактивност се упражнява чрез понижаване на нивото на TRAF6, потискане на експресията на RANKL и NF-κB и стимулиране на OPG, PI3K и Akt, което означава, че терапевтичният ефект на Cis A при OVX мишки е чрез механизма на TRAF6-медиирано NF-kappaB инактивиране и PI3K/Akt активиране.

Добре известно е, че овариектомията може да причиниостеопорозас очевидно намаляване на КМП, биомеханичната сила, качеството на костта и трабекуларната костна микроархитектура, като горните промени се дължат отчасти на естрогенен дефицит [25]. Сега, в настоящия in vivo експеримент, нашето проучване демонстрира, че индуцираната от овариектомияостеопорозадоведе до значително намаляване на биомеханичната якост и трабекуларните структурни параметри, включително BMD, BMC, TMC и Tb. N и увеличаване на Tb. Sp; и лечението с Cis A значително подобри механичните свойства на костта, включително максимално натоварване и твърдост, повиши BMD и подобри повечето от структурните параметри на трабекуларната микроархитектура на костта в сравнение с мишките в групата OVX, което показва, че Cis A е ефективен за подобряване на качеството на костите и трабекуларна микроархитектура в OVX мишки.

Освен общата BMD, триточковият тест за огъване и измерването на микроархитектурата на трабекуларната кост могат директно да диагностициратостеопороза, маркерите за костно образуване, включително ALP и BGP, и индексът на костна резорбция, включително TRAP, DPD и катепсин К, също бяха използвани за изясняване на свързаните антиостеопоротични механизми на Cis A. В нашето проучване, активността на ALP в мишки от групата OVX демонстрира незначителна нарастваща тенденция, което показва повишена скорост на костен обмен [26,27] в постменопаузаостеопороза; високата (80 mg/kg телесно тегло/ден) и ниската (20 mg/kg телесно тегло/ден) дози на лечение с Cis A показват значително подобрение на активността на ALP в сравнение с фиктивната група, докато BGP активността изглежда не се повлиява от овариектомия във всички лекувани групи; TRAP, DPD и катепсин К бяха значително повишени в групата на OVX, а приложението на Cis A значително намали и трите маркера за костна резорбция. Горните данни предполагат, че Cis A притежава потенциална антиостеопоротична активност и този ефект се упражнява от регулирането на костния метаболизъм, включително както потискане на костната резорбция, така и увеличаване на образуването на кост.

Координацията между остеобласта и остеокластите е критичен фактор за поддържането на целостта на скелета. Остеокластите, експресиращи TRAP, се прикрепят към повърхността на костта чрез образуването на свързани с актин уплътнителни зони, в които се освобождават протеолитични ензими, като катепсин К, което води до образуването на резорбционни ями. Модулирането на остеокластогенезата от незрели клетки от остеобластната линия се медиира от RANKL и OPG [28]. OPG е примамващ рецептор, който инхибира RANKL активирането на остеокластогенезата, като по този начин намалява костната резорбция. RANKL, който осигурява важен сигнал за прогениторите на остеокластите, е свързана с мембрана молекула от фамилията лиганди на фактора на туморната некроза, която насърчава образуването на остеокласти. Смята се, че съотношението на експресията на OPG/RANKL е ключов параметър на остеокластогенната активност, а сигналните каскади, активирани от RANKL, включват NF-κB и PI3K пътищата [29]. Значението на пътя на NF-кВ за остеокластогенезата се доказва от факта, че делецията на NF-кВ при мишки води до липса на зрели остеокласти [30]. TRAF6 е доказано като обещаваща цел за нови антиостеопорозни лекарства. Мишки с дефицит на TRAF6-, проявяващи дефектна остеокластогенеза и тежка остеопетроза, по този начин демонстрират значението на TRAF6 в костния метаболизъм. Появяващите се доказателства сочат критична регулаторна функция за TRAF6 в RANKL/RANK-медиирани сигнални каскади [4,31]. Данните от настоящото проучване показват, че лечението с Cis A на OVX мишки води до понижаване на нивата на експресия на TRAF6 протеин, намален RANKL и повишени OPG експресии и по този начин предотвратява RANKL активирането на NF-κB надолу по веригата и активирането на сигналните пътища PI3K/Akt , което предполага, че Cis A инхибира остеокластната диференциация чрез TRAF6-медиирано NF-kappaB инактивиране и PI3K/Akt активиране и повишава съотношението OPG/RANKL, впоследствие инхибирайки остеокластогенезата и насърчавайки образуването на кост.

Препратки

1. Lane, NE Епидемиология, етиология и диагностика наостеопороза. Am. J. Obstet. Gynecol 2006, 194 (Допълнение S2), S3–S11. [CrossRef] [PubMed]

2. Канис, JA; McCloskey, EV; Харви, NC; Йохансон, Х.; Leslie, WD Прагове за интервенция и диагностика наостеопороза. Дж. Костокопач. Рез. 2015, 30, 1747–1753. [CrossRef] [PubMed]

3. Jiang, J.; Li, J.; Jia, X. Антиостеопорозната активност на централния икаридин (CIT) върху костния метаболизъм на овариектомирани плъхове. Молекули 2014, 19, 18690–18704. [CrossRef] [PubMed]

4. Ли, Дж.; Zeng, L.; Xie, J.; Юе, З.; Deng, H.; Ма, X.; Zheng, C.; Wu, X.; Luo, J.; Liu, M. Инхибиране на остеокластогенезата и костната резорбция in vitro и in vivo от пренил флавоноид ксантохумол от хмел. Sci. Rep. 2015, 5, 1–14.

5. Barzel, САЩ Естрогени в превенцията и лечението на постменопаузаостеопороза: Преглед. Am. J. Med. 1988, 85, 847–850. [CrossRef]

6. Джу, З.; Xue, LM; Хан, Т.; Jiao, L.; Qin, LP; Li, YS; Zheng, HC; Zhang, QY Антиостеопоротични ефекти и протеомно характеризиране на мишената и механизма на Er-Xian отвара върху остеобластни UMR-106 и остеокласти, индуцирани от RAW264.7. Молекули 2010, 15, 4695–4710. [CrossRef] [PubMed]

7. Wu, YB; Zheng, CJ; Qin, LP; Сън, LN; Хан, Т.; Jiao, L.; Джан, QY; Wu, JZ Антиостеопорозната активност на антрахиноните от Morinda Officinalis върху остеобласти и остеокласти. Молекули 2009, 14, 573–583. [CrossRef] [PubMed]

8. Bonewald, LF Удивителният остеоцит. Дж. Костокопач. Рез. 2011, 26, 229–238. [CrossRef] [PubMed]

9. Банин Хирата, BK; Oda, JM; Лоси Гембаровски, Р.; Ариза, CB; де Оливейра, CE; Watanabe, MA Молекулярни маркери за рак на гърдата: прогнозиране на поведението на тумора. дис. Маркери 2014, 2014, 1–12. [CrossRef] [PubMed]

10. Алипиева, К.; Коркина, Л.; Орхан, IE; Георгиев, М. И. Вербаскозид - Преглед на неговото възникване, (био)синтез и фармакологично значение. Биотехнология. адв. 2014, 32, 1065–1076. [CrossRef] [PubMed]

11. Фармакопея, Редакционен комитет на китайската фармакопея. Фармакопея на Китайската народна република; China Medical Science and Technology Press: Пекин, Китай, 2015 г.

12. Джан, Х.; Xing, WW; Li, YS; Жу, З.; Wu, JZ; Джан, QY; Джан, В.; Qin, LP Ефекти на традиционен китайски билков препарат върху остеобласти и остеокласти. Maturitas 2008, 61, 334–339. [CrossRef] [PubMed]

13. Ма, X.-Q.; Zheng, C.-J.; Джан, Й.; Hu, C.-L.; Бинг, Л.; Фу, X.-Y.; Han, L.-Y.; Xu, L.-S.; Рахман, К.; Цин, Л.-П. Антиостеопоротични флавоноиди от Podocarpium podocarpum. Phytochem. Лет. 2013, 6, 118–122. [CrossRef]

14. Йе, К.; Ма, XQ; Hu, CL; Лин, Б.; Xu, LS; Zheng, CJ; Qin, LP Антиостеопоротична активност и съставки на Podocarpium podocarpus. Фитомедицина 2015, 22, 94–102. [CrossRef] [PubMed]

15. Гао, Й.; Qin, G.; Уен, П.; Wang, Y.; Fu, W.; Той, Л.; Яо, С.; Zhao, P. Оценка на безопасността на прахообразниCistanche deserticola YCMaчрез 90-дневен тест за хранене при плъхове Sprague-Dawley. Drug Chem. Токсикол. 2016, 1–7. [CrossRef] [PubMed]

16. Хуанг, ZX; Chen, GM; Джао, КТ; Чен, Р.; Lin, CF Изследване на токсичността наCistanche Deserticola. Брадичка. J. Health Lab. техн. 2014, 24, 1098–1100.

17. Джан, Л.; Юе, X.; Джан, Л.; Zhao, J.; Чен, Й.; Cao, Z.; Liu, Y. Антиостеопорозен ефект наЕкстракт от Cistanche deserticola Maпри овариектомирани плъхове. Троп. J. Pharm. Рез. 2016, 15, 1929–1933. [CrossRef]

18. Li, TM; Huang, HC; Su, CM; Хо, TY; Wu, CM; Чен, WC; Фонг, YC; Танг, CHЕкстракт от Cistanche deserticolaувеличава образуването на кост в остеобластите. J. Pharm. Pharmacol. 2012, 64, 897–907. [CrossRef] [PubMed]

19. Ли, Ф.; Янг, X.; Янг, Й.; Guo, C.; Zhang, C.; Янг, З.; Li, P. Антиостеопоротична активност на ехинакозид при овариектомирани плъхове. Фитомедицина 2013 г.,

20, 549–557. [CrossRef] [PubMed] 20. Li, F.; Янг, Й.; Жу, П.; Чен, В.; Qi, D.; Ши, X.; Zhang, C.; Янг, З.; Li, P. Echinacoside насърчава регенерацията на костите чрез увеличаване на съотношението OPG/RANKL в MC3T3-E1 клетки. Fitoterapia 2012, 83, 1443–1450. [CrossRef] [PubMed]

21. Сюн, К.; Кадота, С.; Тани, Т.; Namba, T. Антиоксидативни ефекти на фенилетаноиди отCistanche deserticola. Biol. Pharm. Бик. 1996, 19, 1580–1585. [CrossRef] [PubMed]

22. Нан, ЗД; Zeng, KW; Shi, SP; Джао, MB; Jiang, Y.; Tu, PF Фенилетаноидни гликозиди с противовъзпалителни действия от стъблата наCistanche deserticolaкултивиран в пустинята Тарим. Fitoterapia 2013, 89, 167–174. [CrossRef] [PubMed]

23. Сюн, К.; Тезука, Й.; Канеко, Т.; Li, H.; Тран, LQ; Хасе, К.; Намба, Т.; Kadota, S. Инхибиране на азотен оксид от фенилетаноиди в активирани макрофаги. Евро. J. Pharmacol. 2000, 400, 137–144. [CrossRef]. Luo, H.; Cao, R.; Wang, L.; Zhu, L. Защитен ефект на Cistanchis A върху индуцирано от етанол увреждане в първично култивирани миши хепатоцити. Biomed. Pharmacother. 2016, 83, 1071–1079. [CrossRef] [PubMed]

25. Ниан, Х.; Ma, MH; Nian, SS; Xu, LL Антиостеопоротична активност на икариин при овариектомирани плъхове. Фитомедицина 2009, 16, 320–326. [CrossRef] [PubMed]

26. Swaminathan, R. Биохимични маркери на костния обмен. Clin. Чим. Acta 2001, 313, 95–105. [CrossRef]

27. Лим, Д.У.; Ким, JG; Лий, Ю.; Ча, SH; Kim, YT Превантивни ефекти на екстракт от кора на Eleutherococcus senticosus при OVX-индуцираностеопорозапри плъхове. Молекули 2013, 18, 7998–8008. [CrossRef] [PubMed]

28. Борд, С.; Ирландия, окръг Колумбия; Beavan, SR; Compston, JE Ефектите на естрогена върху експресията на остеопротегерин, RANKL и естрогенен рецептор в човешки остеобласти. Bone 2003, 32, 136–141. [CrossRef]

29. Takayanagi, H. Остеоимунология: споделени механизми и взаимодействие между имунната и костната системи. Нац. Rev. Immunol. 2007, 7, 292–304. [CrossRef] [PubMed]

30. Franzoso, G.; Карлсън, Л.; Xing, L.; Поляк, Л.; Шорс, EW; Браун, KD; Леонарди, А.; Тран, Т.; Бойс, BF; Siebenlist, U. Изискване за NF-kappaB в развитието на остеокласти и В-клетки. Джийн Дев. 1997, 11, 3482–3496. [CrossRef] [PubMed]

31. Тан, ЕМ; Li, L.; Indran, IR; Chew, N.; Yong, EL TRAF6 медиира потискането на остеокластогенезата и превенцията на костна загуба, предизвикана от овариектомия, чрез нов пренил флавоноид. Дж. Костокопач. Рез. 2016. [CrossRef] [PubMed]

32. Дзяо, Л.; Cao, DP; Qin, LP; Хан, Т.; Джан, QY; Жу, З.; Ян, Ф. Антиостеопоротична активност на фенолни съединения от Curculigo orchioides. Фитомедицина 2009, 16, 874–881. [CrossRef] [PubMed]