Токсикологични изследвания върху безопасността на екстракта от Cistanche Deserticola

Резюме:

Цел Да се ​​оцени общата токсичност игенетична токсичност на Cistanche deserticola екстракти предоставя основа заразработване на допълнителни функционални изследвания. Методи Anтест за остра орална токсичности повторна доза90-ден перорална токсичностбяха проведени тестове при плъхове, за да се наблюдава общата токсичност наЕкстракт от Cistanche deserticola. Три теста за мутагенност, включващи тест за бактериална обратна мутация (тест на Ames), полихроматичен еритроцит от костен мозък на мишка и in vitro тест за хромозомни аберации при бозайници, бяха проведени за оценка на генетичната токсичност на екстракта от Cistanche deserticola. Всички методи за изпитване бяха проведени в съответствие с националните стандарти. Експерименталните данни бяха статистически обработени, като се използва или тестът χ{{0}}, или анализ на дисперсията. Нивото на теста беше 0.05.

Резултати Theостра перорална средна летална доза(LD50 ) отЕкстракт от Cistanche deserticolaкакто при женски, така и при мъжки мишки е над 10g/kg. Резултатите от теста на Ames показаха, че екстрактът от Cistanche deserticola не предизвиква никакво увеличаване на колониите с обратна мутация на всички тествани щамове и има отрицателен резултат. Резултатите от полихроматични еритроцити от костен мозък на мишка показват, че няма статистически значима разлика (χ2=3. 036, 1.755, всички P > 0.05) в нивата на микроядра при женски и мъжки мишки между групите на дозата и разтворителя контролна група и имаше отрицателен резултат. Резултатите от in vitro тест за хромозомни аберации при бозайници показват, че със или без система за метаболитно активиране има статистически значими разлики (χ2=13. 244,9.955, всички P<0. 05) in chromosome aberration rate of Chinese hamster lung (CHL) cell between the positive control groups and the solvent control groups, and there were no statistically significant differences (χ 2 = 0. 436,1. 008, all P>0. 05) в клетъчната честота на хромозомни аберации между дозираните групи от екстракт от Cistanche deserticola и контролните групи с разтворител и имаше отрицателен резултат. По време на периода на 90--дневния орален тест за токсичност с многократна доза при плъхове, дейностите, консумацията на храна и консумацията на вода на животните са били нормални. Не са наблюдавани очевидни промени в поведението и прояви на отравяне и не е наблюдавана смърт. В сравнение с контролната група, не се наблюдава очевидна аномалия в телесната маса, консумацията на храна, хематологичните и биохимичните показатели, теглото на органите и относителното тегло на органите на плъхове във всяка група с доза. При хистопатологичното изследване не е открита очевидна патологична анормална промяна. Заключение При настоящите експериментални условия екстрактът от Cistanche deserticola няма обща токсичност и генетична токсичност и могат да бъдат извършени допълнителни функционални изследвания.

Ключови думи:Оценка на безопасността;Екстракт от Cistanche deserticola; Остра токсичност; Генетична токсичност; Обща токсичност

ПРОДАВАМ НАТУРАЛНА СУРОВИНА СИСТАНЧ

Фитохимикалите са клас биоактивни вещества с ниско молекулно тегло, които съдържат различни здравословни функции в допълнение към основните хранителни вещества в растенията [1]. През последните години, с непрекъснатото развитие на науката за храненето, непрекъснато се откриват благоприятните ефекти на различни фитохимикали върху човешкото тяло, като против умора, понижаване на липидите в кръвта и повишаване на имунитета. Cistanche deserticola, известен също като земен дух, цистанче и ден, е известен като „пустинен женшен“ [2]. В моята страна има 6 вида и 1 вариант, а именно Cistanche deserticola, Cistanche alsa, Cistanche tubulosa, Cistanche sinensis, Cistanche lanzhouensis, Cistanche ambigua и вариант Cistanche salsavar [3]. Cistanche deserticola расте главно в солено-алкална земя, пясъчна земя и пустинна среда. В моята страна той е разпространен главно в автономния регион Вътрешна Монголия, провинция Гансу и провинция Шанси. Екстрактът му има ползи за здравето, като овлажняване на червата, повишаване на клетъчния имунитет и защита на черния дроб [4-7]. Понастоящем има малко проучвания за токсичност върху животни върху екстракта от Cistanche deserticola. Това проучване систематично оценява неговата остра токсичност, обща токсичност и генетична токсичност, за да оцени неговата безопасност и да постави основата за по-нататъшни задълбочени изследвания в бъдеще.

1 Материали и методи

1. 1 Материал

1. 1. 1 Тествано вещество

Екстрактът от Cistanche deserticola е прахообразно твърдо вещество, произведено и предоставено от Inner Mongolia Yuhangren High-tech Industry Co., Ltd., партиден номер: 211101. Препоръчителната консумация от човека е 0,72 g/ден, което се превръща в препоръчителна дневна консумация от 12 mg/kg·т.т.

1. 1. 2 Опитни животни

Здрави плъхове Sprague-Dawley (SD), свободни от специфични за възрастни (SPF) плъхове са закупени от Hunan Slake Jingda Experimental Animal Co., Ltd., с номер на лиценз за производство на животни SCXK (Xiang) 2019-0014. Те са били държани в стая за животни с бариерен клас на Института за профилактика и контрол на професионалните заболявания в Хунан, при температура от 21~24 градуса и влажност от 45%~68%. Номерът на лиценза за експериментална употреба на животни е SYXK (Xiang) 2017-0001.

1. 1. 3 Бактерии

Salmonella typhimurium с дефицит на хистидин. Щамовете са TA97, TA98, TA100 и TA102, всички предоставени от MOLTOX, САЩ и идентифицирани от нашата лаборатория като отговарящи на изискванията.

1. 1. 4-клетъчна клетъчна линия от бял дроб на китайски хамстер (CHL), закупена от клетъчната банка на Китайската академия на науките (Шанхай, Китай).

1. 2 Методи

1. 2. 1 Тест за остра орална токсичност

Този тест използва метода на границата. Бяха избрани 20 SD плъха с телесно тегло 185.80 ~ 220. 00g, половината женски и половината мъжки, и гладуваха в продължение на 16 часа. Настройте група с доза от 10.00g/kg·т.т., вземете 50,04g от тестовата проба и добавете чиста вода до 75.00 ml, за да приготвите тестов разтвор с концентрация 666,70 mg/ml. Тестовият разтвор се прилага перорално в доза от 15.00ml/kg·т.т. Периодът на наблюдение е 14 дни, като симптомите на отравяне и смъртта на животните са регистрирани ежедневно. Животните се претеглят в началото на експеримента, на 7-ия ден след прилагането и в края на експеримента. След периода на наблюдение, плъховете бяха убити с CO2 анестезия и общият анатомичен преглед на животните беше завършен.

1.2.2 Тест на Еймс

Настройте 5 дози от 50, 158, 500, 1580 и 5000 ug/блюдо и настройте група за контрол на положителни мутации и група за контрол на разтворител. Положителните вещества са натриев азид, 2-аминофлуорен, 1, 8-дихидроксиантрахинон и дихлоротиазид, а разтворителят е чиста вода. Три паралелни блюда бяха поставени за всяка дозирана група в този тест. Тестът беше проведен в две системи с S9 (чернодробен микрозомен ензим) и без S9 и клетките бяха култивирани в инкубатор с постоянна температура 37 градуса за 48 часа след прилагане.

1.2.3 Тест за полихроматичен еритроцитен микроядрен костен мозък на мишка

Мишки Kunming, 25 женски и 25 мъжки, с телесно тегло 29,3~35.0g. Тестът установи три дозови групи от 2,5, 5.0 и 10.0g/kg·т.т., положителна контролна група и контролна група с разтворител. Положителната субстанция беше циклофосфамид (CP; производител: Baxter; партиден номер: OH397A), а дозата беше 40 mg/kg·т.т. На контролната група с разтворител и групата на дозата са дадени 40 ml/kg·т.т., а на положителната контролна група са дадени 20 ml/kg·т.т. Методът на приложение е лекарството да се прилага два пъти в рамките на 30 часа, като последното приложение се извършва 24 часа след първото приложение. Животните се умъртвяват 6 часа след края на приложението, костният мозък на гръдната кост се взема за подготовка и броят на клетките, съдържащи микроядра, се преброява под микроскоп (производител: Olympus, модел: CX23).

1.2.4 In vitro тест за хромозомни аберации на клетка на бозайник

Тестът създава контролна група с разтворител (чиста вода), групи с дози от 250, 500 и 1000 ug/ml и група с положителна контрола. Положителните контроли бяха 20 ug/ml метил метансулфонат (MMS) (производител: West Asia Reagent, партиден номер: 20200109) (без система за метаболитно активиране) и 10 ug/ml циклофосфамид (производител: Baxter, партиден номер:

OH397A) (със система за метаболитно активиране). След като потвърдите, че клетките не са замърсени, регулирайте концентрацията на клетките до 5 × 10

5/ml, добавете 200ml клетъчна суспензия към всяка бутилка, след това добавете 300ml от Dulbecco's modified eagle medium (DMED) (производител: Zhejiang Jinuo Biomedical Technology Co., Ltd. , партиден номер: 22112501), и поставете в инкубатора за около 24 часа. След като културалната среда в бутилката бъде изсмукана, добавете 4,95 ml пълна среда DMEM (без система за метаболитно активиране) или 4,45 ml пълна среда DMEM и 0,50 ml смесен разтвор S9 (със система за метаболитно активиране) към всяка бутилка и накрая добавете 50 ul от подготвената тестова проба или контролна проба и поставете бутилката с култура в инкубатора (производител: Shanghai Lishen Scientific Instrument Co., Ltd., модел: HF160W) за 4 часа излагане на отровата. След заразяването изхвърлете културалната среда, измийте клетките три пъти с балансиран солев разтвор на Ханкс (HBSS) (производител: Zhejiang Jinuo Biomedical Technology Co., Ltd., партиден номер: 2109220213) и след това добавете 5.{{19} }ml DMEM пълна културална среда към всяка бутилка, култура за 24 часа и събиране на клетките.

4 часа преди прибиране на реколтата, добавете 50 ul от 100 mg/ml колхицин към всяка бутилка, инкубирайте за 4 часа, усвоете с 0,25% разтвор на трипсин (производител: Zhejiang Jinuo Biopharmaceutical Technology Co., Ltd., партиден номер: 22071201), центрофугирайте и събирайте клетките, подгответе предметни стъкла съгласно рутинния метод, пригответе по едно предметно стъкло на бутилка и оцветете с 10% оцветяване на Giemsa [производител: China Pharmaceutical (Group) Shanghai Chemical Reagent Company, партиден номер: 20220114].

Под маслена имерсионна леща (производител: Olympus, модел: CX23), 100 метафази бяха анализирани във всяка група, броят на аберантните клетки, типът на аберацията и координатите на аберантното зрително поле бяха наблюдавани и записани, а степента на хромозомна аберация беше изчислено.

1.2.5 90-дневен орален тест за токсичност при плъхове

120 SD плъхове, на възраст 4 седмици, наполовина женски и наполовина мъжки, с телесно тегло 75.5-97.0 g в началото на теста за женски плъхове и 80.{{6} }.8 g за мъжки плъхове. Експериментът създава три дозови групи от 600, 1200 и 3600 mg/(kg·тт·ден) и една положителна контролна група, с 10 женски и мъжки животни във всяка група. Освен това имаше средносрочна контролна сателитна група, контролна сателитна група за периода на възстановяване, средносрочна сателитна група с висока доза и сателитна група с висока доза за възстановителен период, с 5 женски и мъжки мишки във всяка група. Дозировката на групите с ниска, средна и висока доза е еквивалентна съответно на 50, 100 и 300 пъти препоръчителната консумация от хора. Тестовият разтвор беше прясно приготвен всеки ден и обемът на сондата беше 10 ml/(kg·т.т.·ден). Животните се наблюдават всеки ден по време на експеримента и се записва общото им състояние. В края на експеримента се взема кръв след гладуване в продължение на 16 часа и се измерва кръвната рутина и биохимията на кръвта и се наблюдават груби органни лезии и хистопатологични изследвания.

1.3 Статистически анализ

За анализ на данните беше използван статистически софтуер IBM SPSS Statistics 20.0. Микроядреният тест на еритроцитите на бозайник беше статистически анализиран с помощта на разпределение на Поасон и дисперсионен анализ. In vitro тестът за хромозомни аберации на клетка от бозайник беше статистически анализиран с помощта на χ2 теста. 90--дневният орален тест за токсичност беше статистически анализиран с помощта на еднопосочен дисперсионен анализ и (или) t-тест. П<0.05 was considered statistically significant, and the test level was α = 0.05.