Ваксините предизвикват силно кръстосано реактивен клетъчен имунитет към варианта на SARS-CoV-2 Omicron

Контакт: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Имейл:audrey.hu@wecistanche.com

Jinyan Liu1*, Abishek Chandrashekar1*, Daniel Sellers1*, Julia Barrett1, Michelle Lifton1, Katherine McMahan1, Michaela Sciacca1,

Haley VanWyk1, Cindy Wu1, Jingyou Yu1, Ai-ris Y. Collier1, Dan H. Barouch1,2*

1 Медицински център Beth Israel Deaconess, Бостън, Масачузетс, САЩ;

2 Ragon Institute of MGH, MIT и Harvard, Cambridge, MA, САЩ

Доказано е, че силно мутиралият вариант на SARS-CoV-2 Omicron (B.1.1.529) избягва значителна част от отговорите на неутрализиращи антитела, предизвикани от настоящите ваксини, които кодират WA1/2020 Spike immunogen1, което води до повишени пробивни инфекции и намалена ефикасност на ваксината. Клетъчните имунни отговори, особено CD8 плюс Т-клетъчните отговори, вероятно са от решаващо значение за защитата срещу тежка SARS-CoV-2 болест2-6. Тук показваме, че клетъчният имунитет, предизвикан от настоящите ваксини срещу SARS-CoV-2, е силно кръстосано реактивен срещу варианта на SARS-CoV-2 Omicron. Индивиди, които са получили ваксини Ad26.COV2.S или BNT162b2, демонстрират трайни CD8 плюс и CD4 плюс Т клетъчни отговори, които показват широка кръстосана реактивност срещу вариантите Делта и Омикрон, включително в клетъчни субпопулации от централна и ефекторна памет. Средните Omicron-специфични CD8 плюс Т-клетъчни отговори бяха 82-84 процента от WA1/2020-специфични CD8 плюс Т-клетъчни отговори. Тези данни предполагат, че настоящите ваксини могат да осигурят значителна защита срещу тежко заболяване с варианта на SARS-CoV-2 Omicron въпреки значителното намаляване на реакциите на неутрализиращи антитела.

ползи за здравето на cistanche: подобряване на имунитета

Скорошни проучвания показват, че предизвиканите от ваксината неутрализиращи антитела (NAbs) са значително намалени до силно мутиралия SARS-CoV-2 вариант Omicron, което води до бързо глобално разпространение, включително внезапни инфекции при напълно ваксинирани лица1. За да оценим кръстосаната реактивност на предизвиканите от ваксината клетъчни имунни отговори срещу варианта на SARS-CoV-2 Omicron, ние оценихме CD8 плюс и CD4 плюс Т клетъчните отговори при 51 индивида, които бяха ваксинирани с базирания на аденовирус вектор Ad26. COV2.S ваксина7 (Johnson & Johnson; N=20) или ваксина BNT162b2, базирана на иРНК8 (Pfizer; N=31).

След ваксинация с BNT162b2 наблюдавахме високи WA1/2020-специфични отговори на NAb на месец 1, последвани от рязък спад до месец 8, както се очаква9,10 (фиг. 1а). След ваксинация с Ad26.COV2.S имаше значително първоначални по-ниски WA1/2020-специфични отговори на NAb на месец 1, но тези отговори бяха по-трайни и продължиха на месеци 89, 11 (фиг. 1а). Въпреки това, минимални кръстосано реактивни Omicron-специфични NAbs са наблюдавани и за двете ваксини (фиг. 1а), в съответствие с последните данни при липса на допълнително усилване1. Рецепторно-свързващият домейн (RBD)-специфични свързващи отговори на антитела бяха оценени чрез ELISA и показаха сходни тенденции, с минимални кръстосано реактивни Omicron-специфични свързващи антитела (фиг. 1b). За разлика от отговорите на антителата, Spike-специфичните клетъчни имунни отговори, оценени от Обединените пептидни IFN-g ELISPOT анализи показват значителна кръстосана реактивност към Omicron (разширени данни Фиг. 1). След това оценихме Спайк-специфичните CD8 плюс и CD4 плюс Т клетъчни отговори чрез вътреклетъчни анализи за оцветяване с цитокини. Ad26.COV2.S индуцира медианата на Спайк-специфични IFN-g CD8 плюс Т-клетъчни отговори от 0.061 процента, 0.062 процента и {{ 72}}.051 процента спрямо WA1/2020, Delta и Omicron, съответно, на 8-ия месец след ваксинацията (фиг. 2а). BNT162b2 индуцира медианата на Спайк-специфични IFN-g CD8 плюс Т-клетъчни отговори от 0.028 процента и 0,023 процента спрямо WA1/2020 и Omicron, съответно, на 8-ия месец след ваксинацията (фиг. 2а). Тези данни предполагат, че Omicron-специфичните CD8 плюс Т-клетъчни отговори са били 82-84 процента кръстосано реактивни с WA1/2020-специфични CD8 плюс Т-клетъчни отговори. Спайк-специфичните IFN-g CD4 плюс Т-клетъчни отговори, предизвикани от Ad26.COV2.S, са медиана от 0,026 процента, 0,030 процента и 0,029 процента съответно спрямо WA1/2020, Delta и Omicron, а от BNT162b2 са медиана от 0,033 процента и 0,027 процента спрямо WA1/2020 и Omicron, съответно, което показва значителна кръстосана реактивност на CD4 плюс Т-клетъчните отговори също (фиг. 2b). Значителна кръстосана реактивност на Omicron също се наблюдава за Спайк-специфични TNF-a и IL-2 секретиращи CD8 плюс и CD4 плюс Т клетъчни отговори (Разширени данни Фиг. 2).

Линеен регресионен анализ показа, че Omicron-специфични CD8 плюс Т-клетъчни отговори корелират с WA1/2020-специфични CD8 плюс Т-клетъчни отговори за ваксината Ad26.COV2.S и за двете времеви точки (R=0.78, P<0.0001, slope="" 0.75)="" and="" the="" bnt162b2="" vaccine="" (r="0.56,"><0.0001, slope="" 0.81),="" although="" two="" individuals="" had="" undetectable="" omicron-specific="" cd8+="" t="" cell="" responses="" following="" bnt162b2="" vaccination="" (fig.="" 3a).="" similarly,="" omicron-specific="" cd4+="" t="" cell="" responses="" correlated="" with="" wa1/2020-specific="" cd4+="" t="" cell="" responses="" for="" both="" the="" ad26.cov2.s="" vaccine="" (r="0.79,"><0.0001, slope="" 0.83)="" and="" the="" bnt162b2="" vaccine="" (r="0.90,"><0.0001, slope="" 0.88)="" (fig.3b).="" spike-specific="" ifn-g="" cd8+="" and="" cd4+="" t="" cell="" central="" memory="" and="" effector="" memory="" subpopulations="" elicited="" by="" ad26.cov2.s="" also="" showed="" extensive="" cross-reactivity="" to="" delta="" and="" omicron.="" at="" month="" 8,="" cd8+="" central="" memory="" responses="" were="" 0.076%,="" 0.054%,="" and="" 0.075%,="" cd8+="" effector="" memory="" responses="" were="" 0.168%,="" 0.143%,="" and="" 0.146%,="" cd4+="" central="" memory="" responses="" were="" 0.030%,="" 0.035%,="" and="" 0.038%,="" and="" cd4+="" effector="" memory="" responses="" were="" 0.102%,="" 0.094%,="" and="" 0.083%,="" against="" wa1/202,="" delta,="" and="" omicron,="" respectively="" (fig.="">

Нашите данни показват, че Ad26.COV2.S и BNT162b2 предизвикват широко реактивен клетъчен имунитет срещу SARS-CoV-2 варианти, включително Omicron. Последователността на тези наблюдения в две различни технологии за платформа за ваксини (вирусен вектор и иРНК) предполага възможността за обобщаване на тези открития. Обширната кръстосана реактивност на Omicron-специфични CD8 плюс и CD4 плюс Т-клетъчни отговори контрастира рязко със значително намалените Omicron-специфични отговори на неутрализиращи и свързващи антитела. Тези данни са в съответствие с предишни проучвания, показващи по-голяма кръстосана реактивност на предизвиканите от ваксината клетъчни имунни отговори в сравнение с хуморалните имунни отговори срещу вариантите на SARS-CoV-2 Alpha, Beta и Gamma12. 82-84 процента кръстосана реактивност на отговорите на CD8 плюс Т клетки към Omicron е в съответствие с теоретичните прогнози, базирани на мутациите на Omicron6.

Предклиничните проучвания показват, че CD8 плюс Т-клетките допринасят за защитата срещу SARS-CoV-2 при макаците резус, особено когато отговорите на антителата са неоптимални5. Трайни CD8 плюс и CD4 плюс Т клетъчни отговори също са докладвани след инфекция и ваксинация2- 4,6,9,11,13,14. Като се има предвид ролята на CD8 плюс Т клетките в изчистването на вирусни инфекции, вероятно е клетъчният имунитет да допринесе значително за защитата на ваксината срещу тежко заболяване SARS-CoV-2. Това може да е особено важно за Omicron, който избягва значителна част от отговорите на антителата. Нашите данни предполагат, че настоящите ваксини могат да осигурят значителна защита срещу тежко заболяване, дължащо се на варианта на SARS-CoV-2 Omicron, въпреки намалените реакции на неутрализиращи антитела и увеличените пробивни инфекции.

цистанче на прах

Методи

Проучване на населението

Проби от лица, които са получили ваксина BNT162b2, са получени от биохранилище за проби на Beth Israel Deaconess Medical Center (BIDMC). Проби от лица, които са получили Ad26.COV2.S, са получени от проучването COV1001 (NCT04436276). И двете проучвания бяха одобрени от институционалния съвет за преглед на BIDMC. Всички участници предоставиха информирано съгласие. Индивиди бяха изключени от това проучване, ако са имали анамнеза за SARS-CoV- 2 инфекции, получили са други COVID-19 ваксини или са получили имуносупресивни лекарства. Тест за псевдовирус неутрализиращи антитела

Псевдовирусите SARS-CoV-2, експресиращи луциферазен репортерен ген, бяха използвани за измерване на неутрализиращи псевдовирус антитела. Накратко, конструкцията на опаковката psPAX2 (Програма за ресурси и реагенти за СПИН), луциферазен репортерен плазмид pLentiCMV Puro-Luc (Addgene) и pcDNA3, експресиращ шип протеин.1-SARS-CoV-2 SΔCT бяха съвместно трансфектирани в HEK293T клетки (ATCC CRL_3216) с липофектамин 2000 (ThermoFisher Scientific). Псевдовирусите на вариантите на SARS-CoV-2 са генерирани чрез използване на щам WA1/2020 (Wuhan/WIV04/2019, GISAID ID за достъп: EPI_ISL_402124), вариант B.1.1.7 (Алфа, GISAID ID на достъп: EPI_ISL_601443), B.1.351 вариант (Бета, GISAID ID на достъп: EPI_ISL_712096), B.1.617. 2 (Делта, GISAID ID на достъп: EPI_ISL_2020950), или B.1.1.529 (Omicron, GISAID ID: EPI_ISL_7358094.2). Супернатантите, съдържащи псевдотиповите вируси, се събират 48 часа след трансфекцията; псевдотиповите вируси бяха пречистени чрез филтруване с 0.45-µm филтър. За да се определи неутрализационната активност на човешкия серум, HEK293T-hACE2 клетки се посяват в 96-плаки за тъканна култура при плътност от 1,75 × 104 клетки на ямка за една нощ. Приготвят се трикратни серийни разреждания на топлинно инактивирани серумни проби и се смесват с 50 ul псевдовирус. Сместа се инкубира при 37 градуса за 1 час преди добавяне към HEK293T-hACE2 клетки. След 48 часа клетките се лизират в Steady-Glo Luciferase Assay (Promega) съгласно инструкциите на производителя. Неутрализационните титри на SARS-CoV-2 се определят като разреждането на пробата, при което се наблюдава 50-процентно намаление (NT50) в относителни светлинни единици спрямо средната стойност на контролните ямки за вируса.

Ензимно-свързан имуносорбентен анализ (ELISA)

SARS-CoV-2 спайк рецептор-свързващ домен (RBD)-специфични свързващи антитела в серума бяха оценени чрез ELISA. 96-ямковите плаки бяха покрити с 2 ug/mL SARS-CoV-2 WA1/2020, B.1.617.2 (Делта), B.1.351 (Бета), или B.1.1.529 (Omicron) RBD протеин в 1 × Dulbecco фосфатно буфериран физиологичен разтвор (DPBS) и инкубиран при 4 градуса за една нощ. След инкубиране плаките се промиват веднъж с промивен буфер (0,05 процента Tween 20 в 1 × DPBS) и се блокират с 350 μL разтвор на казеинов блок на ямка за 2 до 3 часа при стайна температура. След инкубиране блоковият разтвор се изхвърля и плаките се изсушават. Серийни разреждания на топлинно инактивиран серум, разреден в казеинов блок, се добавят към ямките и плаките се инкубират в продължение на 1 час при стайна температура, преди още 3 промивания и 1-час инкубиране с 1:4000 разреждане на анти- човешка IgG пероксидаза от хрян (HRP) (Invitrogen, ThermoFisher Scientific) при стайна температура на тъмно. Плаките се промиват 3 пъти и към всяка ямка се добавят 100 μL разтвор SeraCare KPL TMB SureBlue Start; Развитието на плаката беше спряно чрез добавяне на 100 μL разтвор SeraCare KPL TMB Stop на ямка. Абсорбцията при 450 nm, с еталон при 650 nm, беше записана с четец на микроплаки VersaMax (Molecular Devices). За всяка проба титърът на крайната точка на ELISA беше изчислен с помощта на 4-параметрична логистична крива, за да се изчисли реципрочното серумно разреждане, което дава коригирана стойност на абсорбция (450 nm-650 nm) от 0,2. Докладвани са интерполирани крайни титри.

екстракт от цистанче десертикола: подобрява имунитета

Ензимно-свързан имуно-точков (ELISPOT) анализ.

Плаките ELISPOT бяха покрити с мише античовешко IFN-моноклонално антитяло от MabTech при 1 µg/ямка и инкубирани една нощ при 4 градуса. Плаките се промиват с DPBS и се блокират с R10 среда (RPMI с 10 процента топлинно инактивиран FBS с 1 процент от 100x пеницилин-стрептомицин, 1M HEPES, 100 mM натриев пируват, 200 mM L-глутамин и 0,1 процента от 55 mM 2-меркаптоетанол) за 2-4 h при 37 градуса. SARS-CoV-2 обединени S пептиди от SARS-CoV-2 WA1/2020, B.1.617.2 (Делта) или B.1.1.529 (Omicron) (21st Century Biochemicals) бяха приготвени и посяват се при концентрация от 2 µg/ямка и 100,000 клетки/ямка се добавят към плаката. Пептидите и клетките се инкубират за 15-20 h при 37 градуса. Всички стъпки след тази инкубация се извършват при стайна температура. Плаките се промиват с ELISPOT промивен буфер и се инкубират за 2-4 h с биотинилирано мише анти-човешко IFN-моноклонално антитяло от MabTech (1 µg/mL). Плаките се промиват втори път и се инкубират за 2-3 h с конюгиран кози антибиотин AP от Rockland, Inc. (1,33 µg/mL). Последното промиване беше последвано от добавяне на Nitor-син тетразолиев хлорид/5-бромо-4-хлоро 3 'индолил фосфат р-толуидинова сол (NBT/BCIP хромаген) субстратен разтвор за 7 минути. Хромагенът се изхвърля и плаките се промиват с вода и се сушат на тъмно място в продължение на 24 часа. Плаките бяха сканирани и преброени на Cellular Technologies Limited Immunospot Analyzer.

Анализ на вътреклетъчно оцветяване с цитокини (ICS).

CD4 плюс и CD8 плюс Т клетъчните отговори бяха количествено определени чрез обединени пептид-стимулирани вътреклетъчни цитокинови оцветяващи анализи (ICS). Пептидните пулове съдържаха 15 аминокиселинни пептида, припокриващи се с 11 аминокиселини, обхващащи SARS-CoV-2 WA1/2020, B.1.617.2 (Делта) или B.1.1 .529 (Omicron) Spike протеини (21st Century Biochemicals). 106 ямки за мононуклеарни клетки от периферна кръв бяха ресуспендирани в 100 µL от R10 среда, допълнена с CD49d моноклонално антитяло (1 µg/mL) и CD28 моноклонално антитяло (1 µg/mL). Всяка проба беше оценена с макет (100 µL R10 плюс 0,5 процента DMSO; фонова контрола), пептиди (2 µg/mL) и/или 10 pg/mL форбол миристат ацетат (PMA) и 1 µg/ml йономицин (Sigma- Aldrich) (100 uL; положителна контрола) и се инкубира при 37 градуса за 1 час. След инкубиране, 0.25 µL от GolgiStop и 0.25 µL от GolgiPlug в 50 µL от R10 се добавят към всяка ямка и се инкубират при 37 градуса за 8 часа и след това се държат при 4 градуса за една нощ. На следващия ден клетките се промиват два пъти с DPBS, оцветяват се с аква жива/мъртва боя за 10 минути и след това се оцветяват с предварително определени титри на моноклонални антитела срещу CD279 (клон EH12.1, BB700), CD4 (клон L200, BV711), CD27 (клон M-T271, BUV563), CD8 (клон SK1, BUV805), CD45RA (клон 5H9, APC H7) за 30 минути. След това клетките се промиват два пъти с 2 процента FBS/DPBS буфер и се инкубират за 15 минути с 200 µL от BD CytoFix/CytoPerm разтвор за фиксация/пермеабилизация. Клетките се промиват два пъти с 1X Perm Wash буфер (BD Perm/WashTM Buffer 10X в CytoFix/CytoPerm Fixation/ Permeabilization kit, разреден с MilliQ вода и прекаран през 0,22 µm филтър) и се оцветяват вътреклетъчно с моноклонални антитела срещу IFN- (клон B27; BUV395) и CD3 (клон SP34.2, Alexa 700), за 30 минути. Клетките се промиват два пъти с 1X Perm Wash буфер и се фиксират с 250 uL прясно приготвен 1,5 процента формалдехид. Фиксираните клетки бяха прехвърлени в 96-плака с кръгло дъно и анализирани от системата BD FACSymphony™. Данните бяха анализирани с помощта на FlowJo v9.9.

добавка Cistanche:подобряване на имунитета

Препратки

1. Cele S, Jackson L, Khan K, et al. SARS-CoV-2 Omicron има широко, но непълно избягване на Pfizer BNT162b2, предизвикана неутрализация и изисква ACE2 за инфекция. medRxiv 2021.

2. Dan JM, Mateus J, Kato Y, et al. Имунологична памет към SARS-CoV-2, оценена до 8 месеца след инфекцията. Наука 2021;371.

3. Sette A, Crotty S. Адаптивен имунитет към SARS-CoV-2 и COVID-19. Клетка 2021; 184: 861-80.

4. Goel RR, Painter MM, Apostolidis SA, et al. иРНК ваксините предизвикват трайна имунна памет срещу SARS-CoV-2 и варианти, които предизвикват безпокойство. Наука 2021; 374: abm0829.

5. McMahan K, Yu J, Mercado NB, et al. Корелати на защита срещу SARS-CoV-2 при макаци резус. Nature 2021; 590: 630-4.

6. Grifoni A, Weiskopf D, Ramirez SI, et al. Цели на Т-клетъчните отговори на SARS-CoV-2 коронавирус при хора с COVID-19 заболяване и неизложени лица. Клетка 2020;181:1489-501 e15.

7. Sadoff J, Gray G, Vandebosch A, et al. Безопасност и ефикасност на еднодозова ваксина Ad26.COV2.S срещу Covid-19. N Engl J Med 2021; 384: 2187-201.

8. Polack FP, Thomas SJ, Kitchin N, et al. Безопасност и ефикасност на ваксината BNT162b2 mRNA Covid-19. N Engl J Med 2020.

9. Collier AY, Yu J, McMahan K, et al. Диференциална кинетика на имунните отговори, предизвикани от Covid-19 ваксини. N Engl J Med 2021; 385: 2010-2.

10. Falsey AR, Frenck RW, Jr., Walsh EE, et al. SARS-CoV-2 Неутрализиране с BNT162b2 ваксина Доза 3. N Engl J Med 2021.

11. Barouch DH, Stephenson KE, Sadoff J, et al. Трайни хуморални и клетъчни имунни отговори 8 месеца след ваксинацията с Ad26.COV2.S. N Engl J Med 2021; 385: 951-3.

12. Alter G, Yu J, Liu J, et al. Имуногенност на ваксината Ad26.COV2.S срещу SARS-CoV-2 варианти при хора. Nature 2021; 596: 268-72.

13. Poon MML, Rybkina K, Kato Y, et al. SARS-CoV-2 инфекцията генерира тъканно локализирана имунологична памет при хората. Научна имунология 2021; 6: eabl9105.

14. Vidal SJ, Collier AY, Yu J, et al. Корелати на неутрализация срещу SARS-CoV-2 Варианти на загриженост от серуми за ранна пандемия. J Virol 2021; 95: e0040421.

полза от добавката цистанче:подобряване на имунитета