Какви са ползите от полизахарида Cistanche върху имунната функция

Контакт: emily.li@wecistanche.com

Имунологичната активност и механизмът на Cistanche Polysaccharide

Zeng Qunli, Zheng Yifan, Lu Zhiliang

[Резюме]Цел: Изучаване наимуннадейност наЦистанчеПолизахарид(CDPS) и неговия механизъмимуннарегулиране ин витро. Методи: Използван е колориметричният метод с тиазолово синьо (MTT) за наблюдение на регулиращия ефект на CDPS (Полизахарид Cistanche) върху IQS DEX TNF, инхибиращ пролиферацията на миши тимусни лимфоцити in vitro; CDPS (Полизахарид Cistanche) се използва за извършване на клетъчен цикъл и анализ на клетъчния цикъл с помощта на поточна цитометрия. Определяне на вътреклетъчен Са2. Резултати: CDPS (Полизахарид Cistanche) при по-висока концентрация може да устои на инхибиторния ефект на ISQDEX върху лимфоцитната пролиферация и на инхибиторния ефект на високата концентрация на TNF върху лимфоцитната пролиферация и синергизира стимулиращия пролиферацията ефект на TNF с ниска концентрация върху лимфоцитите; 100 ug/ml 200 ug/ml CDPS (Полизахарид Cistanche) може значително да увеличи клетките във фазата на делене; по-висока концентрация (100ug/ml) CDPS (Полизахарид Cistanche) може значително да повиши концентрацията на Са йон в миши тимоцити. Заключение: CDPS (Полизахарид Cistanche) може да насърчи клетките да навлязат във фазата на делене и се предполага, че неговият стимулиращ ефект върху пролиферацията на миши тимусни лимфоцити е свързан с неговото насърчаване на освобождаването на калций в миши тимусни лимфоцити.

Цистанче(ЦистанчеДезертиколаYC Ma) е рядък и ценен китайски медицински материал в моята страна. Той е посочен като най-висок клас в "Materia Medica на Шен Нонг".Цистанчеима функции за подхранване на кръвта, подхранване на бъбреците и подпомагане на Ян, овлажняване на червата и забавяне на стареенето. Съвременните фармакологични изследвания показват товаЦистанчеПолизахаридможе да подобри тялотоимуннафункция, насърчават синтеза на ДНК, укрепват физическата сила, подобряват интелигентността и имат очевидни ефекти против стареене [1]. Авторът изследва регламента на CDPS(Полизахарид Cistanche), полизахариден компонент наЦистанче, наимуннафункцияот миши лимфоцити.

Полизахарид Cistancheповишаванеразпространение налимфоцити

1 Материал и методи

1.1 Реактиви и лекарства.

RPM, I 1640 среда: GIB-CO; ХЕПЕС: ФАРКО; L-глутамин: Shanghai Dongfeng Reagent Factory; Пеницилин и стрептомицин: Фармацевтична фабрика в Северен Китай; Конканавалин (ConA), MTT: SIGM A Company; Фитохемаглутинин (PHA): Шанхайска медицинска лаборатория; Изопротеренол (ISO): Шанхай Tianfeng Pharmaceutical Factory; Меркаптоетанол: Fluka Company; Серум за новородено теле: Sijiqing Bioengineering Company; Дексаметазонът (DEX) беше представен от д-р Ма Лианг, Първата свързана болница на Медицинския факултет на университета Zhejiang; Тумор супресорният фактор (TNF) е предоставен от Yu Yuehan, професор, Катедра по клетки, Училище по науки за живота, Zhejiang University; Останалите реактиви са местно производство с аналитична степен.

1.2 Опитни животни.

ICR мишки, мъжки, на възраст 68 седмици, с тегло 18-20g, 22, бяха закупени от Zhejiang Experimental Animal Center.

1.3 Извличане на полизахарид Cistanche [2]:

ЦистанчеПолизахаридсе извлича от нашата лаборатория! След раздробяване на суровата дрогаЦистанче, той се потапя в горещ етанол, екстрахира се във вряща вода и се утаява в етанол. Неутрален ензим, комбиниран с метод на Sewag за депротеинизация, анионна DEAE-Sephadex A- 50 обменна хроматография и Sephacry S-200 гелфилтрационна хроматография за получаване на единичен компонент на CDPS (Полизахарид Cistanche)). Съхранявайте на сухо, използвайте непълен RPMI1640, за да направите определена концентрация преди употреба, и стерилизирайте чрез ултрафилтрация

1.4 Приготвяне на лимфоцити от далака и тимуса [3]:

The mice were sacrificed by neck removal. The spleen or thymus was taken aseptically and sieved through a 200-mesh steel mesh. The Hanks solution containing porridge newborn calf serum was used to prepare a single-cell suspension. After centrifugation at 1500 r/min for 10 min, red blood cells were lysed with 0.01 mol/L Tris-NHCl hypotonic solution for 1 min, and then washed with Hanks liquid centrifugation. Finally, the cells were suspended in RPMI1640 containing 10% fresh calf serum for complete culture Solution (containing 2 mmol/LL glutamine, 100 mmol/L sodium pyruvate, 1 mmol/L mercaptoethanol, add penicillin 100 U/ml and streptomycin 100 μg/ml just before use), trypan blue count, live For cells>93, регулирайте концентрацията на клетките на далака до X 10 /ml и концентрацията на тимоцитите до × 10 градуса /ml

1.5 Реакция на лимфоцитна пролиферация:Съгласно метода на Mosmanmn [4] Подобрение: 96-платка с клетъчна култура на ямки, добавете 10/ml суспензия от клетки от далак или вода 10/ml суспензия на тимоцити 100M1 и различни концентрации на лекарства 10041 във всяка ямка. Култивирайте в CO2.37C инкубатор за 72 часа. 4 часа преди края на култивирането добавете 8μ1 МТТ (5 mg/ml) към всяка ямка. В края на културата аспирирайте 150"1 от супернатантата от всяка ямка и добавете 0,5N изопропанол хидрохлорид 150M1. Внимателно разклатете микрошейкъра, за да разтворите напълно сините кристали. Измерете OD570 на четеца на микроплаки. Задайте всеки експеримент точка като три повторни ямки.

1.6 Определяне на влиянието върху клетъчния цикъл [5]:

{{0}}плака с клетъчна култура на гнезда, добавете 4 10 градуса /ml тимоцитна суспензия 1 ml към всяка ямка, добавете различни реагенти и полизахариден разтвор към 2 ml в силен CO, 37 инкубатора След култивиране в продължение на 72 часа, центрофугирайте при 1500r/min за 15 min, изхвърлете супернатантата, добавете 7 етанол за фиксиране на утаените клетки, съхранявайте при 4C за тестване в режим на готовност, промийте клетките два пъти с PBS, центрофугирайте при 1500r/min за 15 min, изхвърлете супернатанта и се добавя. След като 0,5 ml 0,1 RNaseA се смила при 4°С за 30 минути, 50 ug/ml бромоацетат се оцветява за 30 минути при 4°С и интензитетът на флуоресценция на клетъчните проби се измерва на поточен цитометър FACScan. 10 000 клетъчни тестови точки бяха събрани за всяка проба и данните бяха използвани за анализ на софтуера за няколко триколки.

1.7 Определяне на концентрацията на вътреклетъчни калциеви йони [6]

Вземете миши тимоцити по същия начин, както по-горе. Суспендирайте в непълна културална среда RPMIl640 и регулирайте клетъчната концентрация до × 10'/ml. Добавете 1 ml суспензия на тимоцити и 1 μM към всяка експериментална епруветка Fluo-3AM оцветяващ разтвор 5μ1, 2 процента F-275μ1, след инкубиране при 37°С за 30 минути, промийте два пъти с непълен RPM1640, 1500r/ min, центрофугирайте за 10 min, изхвърлете супернатантата и добавете различни концентрации на полизахариди и полизахариди към утаените клетки. След ConA интензитетът на флуоресценция беше измерен на поточен цитометър FACScan. Данните от 10 000 клетъчни тестови точки бяха събрани за всяка проба и анализирани от софтуера CELLQUEST. 1.8 Статистическите методи бяха използвани за анализ на вариацията и клетъчният цикъл и измерването на калциевите йони бяха анализирани от софтуера на поточния цитометър.

Cistanche Полизахарид от cistanche deserticola

2 резултата

2.1 Cistanche Polysaccharide in vitro инхибира пролиферацията на миши тимусни лимфоцити от ISO DEX TNF

Агонистът на -адренергичния рецептор изопротеренол (ISO) и клас хормон на надбъбречната кора дексаметазон (DEX) инхибират лимфоцитната пролиферация CDPS (Полизахарид Cistanche) при по-висока концентрация (75 125ug/ml) може да устои на инхибиторния ефект на ISO DEX върху пролиферацията на лимфоцити (P<0.01) as="" shown="" in="" figure="" 1.="" tumor="" necrosis="" factor="" (tnf="" β)="" on="" lymphocytes="" at="" high="" concentration="" cdps="">Цистанче Полизахарид) (125 ug/ml) при по-висока концентрация може да устои на инхибиторния ефект на TNF и синергично да насърчи пролиферацията на лимфоцити с ниска концентрация на TNF (Фигура 2)

2.2 Цистанхе полизахаридът регулира цикъла на тимусните лимфоцити

CDPS (ЦистанчеПолизахарид) 25ug/ml 100ug/ml 200#g/ml три концентрации бяха въздействани върху миши тимусни лимфоцити за 72 часа, съдържанието на ДНК в клетките беше измерено чрез FACS и беше изчислен индексът на пролиферация (PI) според формулата. Резултатите показват, че както 100 ug/ml, така и 200 ug/ml могат значително да увеличат клетките във фазата на делене, а индексът на пролиферация (68,0 процента, 56,6) и на двете е значително по-висок от контролната група (44,6) и 200 ug/ml групата е малко по-ниска от групата 100 ug / ml, тъй като при концентрация от 200 ug / ml ефектът му върху клетъчната пролиферация се е превърнал в низходяща тенденция [7]. Стойността на PI (47,5 процента) на групата с 25 ug/ml не е значително по-висока от тази на контролната група.

2.3 Ефектът на Cistanche Polysaccharide върху концентрацията на калциевите йони в миши тимоцити

Експерименталните резултати показват, че по-висока концентрация (100 ug/ml) на CDPS (Cistanche полизахаридд) може значително да насърчи повишаването на концентрацията на калциевите йони в миши тимоцити. В сравнение с контролната група има значителна разлика (P<0.01), and="" there="" is="" a="" certain="" effect="" relationship="" with="" the="" action="" time="" (figure="">

3 Дискусия

Цистанче, известен като"пустинен женшен“, представлява сухо, люспесто месесто стъбло наЦистанче.Цистанчеима функциите на подхранване на бъбреците Ян, подхранваща есенция, кръв и черва. Той принадлежи към вид възбуждане на хипофизно-надбъбречната кора или има хормоноподобен ефект, подобен на надбъбречната кора. Ценно китайско лекарство, което може да регулира наимуннафункцияна тялото. Нашите предишни резултати от изследвания показват, че CDPS (Полизахарид Cistanche) in vitro може да стимулира пролиферацията на тимусни Т лимфоцити, които не са били активирани или активирани от ConA PHA. В комбинация с ConA PHA има два вида Т-клетъчен стимулатор, ние вярваме, че CDPS (Полизахарид Cistanche) е бадювант за Т-клетките и също открихме, че CDPS (Полизахарид Cistanche) може значително да повиши секрецията на миши лимфоцити от далака при по-високи концентрации [8]

Някои проучвания са установили, че рекомбинантният TNF може да причини апоптоза на нормални миши и човешки Т лимфоцитни клъстери in vitro и този ефект може потенциално да бъде инхибиран от IIL-2 IL-1 IFN и IIL-4 с дексаметазон (DEX) Може да инхибира лимфоцитната пролиферация чрез инхибиране на лимфоцитната експресия и секрецията на IL-2 и понижаване на производството на IL-2R с висок афинитет. Този експеримент установи, че по-висока концентрация на CDPS (ЦистанчеПолизахарид) може да противодейства на ефектите от висока концентрация на TN F върху пролиферацията на лимфоцити. Инхибиране, синергично с ниска концентрация на TNF за насърчаване на пролиферацията на лимфоцити и може да противодейства на инхибиторния ефект на ISQ DEX върху пролиферацията на лимфоцити. Тези ефекти са именно чрез CDPS (ЦистанчеПолизахарид) за насърчаване на пролиферацията на Т лимфоцити и са автокринни от Т клетки IL-2 и други цитокини за завършване.

През последните години има много изследвания върху имунофармакологичните ефекти на растителните полизахариди, но малко изследвания върхуимуннарегулаторен механизъм на полизахаридите, особено пътя на сигнална трансдукция на полизахаридите, действащи върху лимфоцитите с Ca2 като втори носител. Няма отчет. Този експеримент проведе предварителни изследвания в тази област. Вътреклетъчните сигнални молекули включват cAM R Ca", IP3 DG cGMP и др., сред които Ca" има изключително важен физиологичен ефект върху клетките. Увеличаването на вътреклетъчната концентрация на Ca2 е важен феномен в ранния стадий на активиране и пролиферация на лимфоцити. Този процес се случва главно през първите десетки секунди до минути, когато клетките се активират от стимулатори. Класическият начин за активиране на Т клетки е фосфатидилинозитол (PIB) за метаболизиране на фосфатидил мускул. Алкохолният метаболит 1,4.5-инозитол трифосфат (IP3) може да насърчи освобождаването на Ca", съхраняван във вътрешната мрежа, чрез свързване с рецепторите на вътрешната мрежа, повишавайки нивото на вътреклетъчния Ca2 и концентрацията на вътреклетъчния Ca * увеличава. Високият може да насърчи производството на NF-AT (нудеичен фактор на активирана Т клетка), последният има ефект на насърчаване на експресията на гена IIL-2. Експерименталните резултати показват, че по-висока концентрация (100ug/ml ) на CDPS (ЦистанчеПолизахарид) е ефективен за 5 10 мин. Време има значителен ефект върху повишаването на концентрацията на Ca* в миши тимоцити и има синергичен ефект с ConA. Следователно ние спекулираме, че CDPS (Полизахарид Cistanche) насърчава освобождаването на калций в миши тимусни лимфоцити за повишаване на концентрацията на вътреклетъчните калциеви йони. Увеличението насърчава експресията на гена IL-2 и води до пролиферация на Т клетки, което е една от теоретичните основи наЦистанчеПолизахаридитерегулиращ ефект върху тялото

Полизахарид Cistanche

Препратки

1. IN XiuHin, SU Yuke (Обща ситуация на фармакологичните изследвания наЦистанчеСка 【J】. Китайски традиционни и билкови лекарства ((китайска билкова медицина). 1993.24(10. 550-552(на китайски))

2. ZHANG Weijiee (Биохимична теория на комбинирания полизахарид [M]. Hangzhou Zhejiang University Pres (Zhejiang University Press), 1994.16-17 (на китайски)

3. MA Bo- (Ma Baoli). Имунологична техника【M1. Прес на Шанхайския медицински университет (Shanghai Medical University Press), 1984 188-190. (n китайски))

4. Mosmann T. Рапилолоимерен анализ за по-лесен растеж и приложение на оцеляване за премахване на пролиферацията и цитотоксичността [JJ Immun Meth.1983, 6 55- 58.

5. WU is-hi, WU shailing, Acai-n, et al (Wu Jiahui, Wu Shuibing. Li Carian и др.), Ефектът на zin върху пролиферацията на циклични клетки вимуннаорганен анализ с помощта на поточна цитометрия [J]. Китайска имунология (Chinese Journal of Immunology), 1994, 10X5: 278-281. (на китайски)

6. ТАО аксин. JIYong-yong, GAO Qi-rong и др. (Tao Jiaxian, Ji Yongpu Gao Qirong и др.). FACS анализ на промените във вътреклетъчния С2 по време на еактивиране [J] Китайско списание по имунология (China Journal of Immunology), 1993, 9 (2): 97-10L. (на китайски)

7. ZENGQu-li.MAO Jum-hao, LU suchiang; Пречистване d полизадарид наЦистанчеДезертиколаYC Mfa и неговите имуномодулиращи ефекти върху Tellfunction[J].burnal на Zhejiang Medical University (Journal of Zhejiang Medical University), 1998.27 (3: 108-111. (на китайски)

8. Sarin A, Michelle C C. Perre AH Цитотоксичен ефект на TNF и лимфотоксин върху T Lymphoblak. J Immunol, 1995, 1553716-3721.