Аномалии на В-клетките и Т-клетките при пациенти със селективен дефицит на IgA

Резюме

Заден план

Селективният дефицит на IgA (SIgAD) е най-често срещаната вродена грешка на имунитета с почти неизвестна етиология. Това проучване имаше за цел да изследва клиничните диагностични и прогностични стойности на подгрупите и функцията на лимфоцитите при симптоматични пациенти със SIgAD.

Методи

Общо 30 налични пациенти със SIgAD от иранския регистър и 30 здрави контроли, съответстващи на възрастта и пола, бяха включени в настоящото проучване. Ние анализирахме В и Т клетъчни периферни подгрупи и Т клетъчен пролиферационен анализ чрез поточна цитометрия при пациенти със SIgAD с леки и тежки клинични фенотипове.

Резултати

Нашите резултати показват значително увеличение на наивните и преходните В-клетки и силно намаляване на подобните на маргинална зона и превключени В-клетки на паметта при пациенти със SIgAD. Установихме, че CD4+ CD{2}} Т-клетъчните подмножества с наивна и централна памет, както и Th1, Th2 и регулаторните Т-клетки, значително са намалели. От друга страна, има значително намаление на централните и ефекторните Т клетки на паметта CD8+, докато пропорциите на двете (CD4+ и CD8+) терминално диференцирани ефекторни Т клетки на паметта (TEMRA) бяха значително повишени при нашите пациенти. Въпреки че някои Т-клетъчни подгрупи при тежък SIgAD са сходни, намалението на В-клетките на маргиналната зона и превключваната памет и увеличението на CD21low B-клетките при пациенти с тежък SIgAD е леко изразено. Освен това, пролиферативната активност на CD4+ Т клетки е силно нарушена при пациенти със SIgAD с тежък фенотип.

Заключение

Пациентите със SIgAD имат различни клетъчни и хуморални дефицити. Следователно оценката на Т-клетките и В-клетките може да помогне за по-добро разбиране на хетерогенната патогенеза и оценка на прогнозата на заболяването.

Ключови думи

Вродени грешки на имунитета, първичен имунен дефицит, селективен дефицит на IgA, подгрупи В клетки, подгрупи Т клетки, поточна цитометрия, пролиферацияанализ

cistanche tubulosa - подобряват имунната система

екстракт от цистанче

Въведение

Селективният дефицит на IgA (SIgAD) е най-разпространеното първично имунодефицитно разстройство (PID) или вродени грешки на имунитета (IEI), идентифицирани чрез серумна концентрация на IgA под 7 mg/dL и нормални концентрации на IgG и IgM при пациенти на възраст над четири години . По-голямата част от пациентите със SIgAD са асимптоматични, въпреки че някои от тях проявяват различни клинични прояви, включително инфекции на стомашно-чревния тракт и дихателните пътища, алергични заболявания и автоимунни заболявания. Съобщава се за прогресия на заболяването до общ променлив имунодефицит (CVID) при избрана група пациенти със SIgAD с дефицит на подкласове IgG или автоимунни заболявания [1]. Все още не са докладвани конкретни причини за патогенезата на SIgAD. Въпреки това, дефекти в процеса на превключване на IgA клас рекомбинация (CSR), производството и секрецията на IgA, както и дългосрочното оцеляване на IgA, превключените В клетки на паметта и плазмените клетки на пациенти със SIgAD са идентифицирани в неразкрити случаи [2 ]. Дефектите в тези имунологични процеси са свързани с аномалии в лимфоцитите на пациенти със SIgAD. Следователно, оценката на лимфоцитите, особено подгрупите В клетки и Т клетки, може да бъде ценна и полезна. Няколко проучвания показват аномалии на В- и Т-клетките при някои групи пациенти със SIgAD [3, 4]. По отношение на подгрупите В клетки, се съобщава за намаляване на броя на превключените В клетки на паметта, IgA плазмени клетки и преходни IL-10+ регулаторни В клетки на пациенти със SIgAD [5–8]. От друга страна, се съобщава за дефект в някои Т-клетъчни подгрупи на случаи на SIgAD, който е свързан с недостатъчно произвеждащи IgA В-клетки [5, 8, 9]. Флоуцитометричното имунофенотипизиране може да играе важна роля в диагностиката, прогнозата, класификацията и управлението на пациенти със SIgAD. Следователно, за първи път ние имахме за цел да изследваме основните субпопулации на В и Т лимфоцити заедно с оценка на Т клетъчната функция, за да изясним връзката между имунологичните характеристики и клиничните прояви при симптоматични пациенти със SIgAD.

материали и методи

пациенти

Общо 30 налични симптоматични пациенти със SIgAD (от иранския регистър на IEI [10, 11]) и 30 здрави контроли (HCs), съответстващи на възрастта и пола, бяха включени в настоящото проучване. Te HCs бяха потвърдени след клинични и лабораторни оценки, че нямат имунен дефицит или някакво основно заболяване. Пациентите са били насочени към Детския медицински център (Център за върхови постижения по педиатрия, свързан с Техеранския университет по медицински науки, Техеран, Иран). Всички пациенти са диагностицирани със SIgAD според Европейското дружество за имунодефицити [12]. Проучването е одобрено от Комитета по етика на Медицинския университет в Техеран и е получено писмено информирано съгласие от всички лица (IR.TUMS.VCR.REC.1396.2018). Демографските, клиничните прояви и имунологичните данни на пациентите бяха документирани във формуляр на въпросник.

Класификация на пациентите

За да се сравнят демографските, клиничните и имунологичните данни, пациентите бяха категоризирани в две групи тежки и леки (въз основа на клинични прояви), както и кръвнородствени и некръвни групи (въз основа на родителска родство). Минималните критерии за включване, за да се счита, че пациентът е симптоматичен, са десет предупредителни знака на фондация Jeffrey Modell. Пациентите бяха разделени на две групи леки и тежки, тъй като пациентите с тежки инфекции (напр. кръвообращението, централната нервна система и дълбоко вкоренени инфекции като остеомиелит и артрит), автоимунни заболявания или злокачествени заболявания бяха категоризирани в тежката група и други усложнения се считат за лека група. Тъй като пневмонията и други респираторни инфекции са чести при пациенти със SIgAD и ние искахме да го проверим като параметър между тежки и леки групи, така че не ги категоризирахме в тежката група.

Ползи от добавката Cistanche - как да подсилим имунната система

Щракнете тук, за да видите продуктите Cistanche Enhance Imunity

【Попитайте за повече】 Имейл:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Анализ на лимфоцитни субгрупи

Мононуклеарни клетки от периферна кръв (PBMC) се отделят от 8 ml кръвни проби, събрани в епруветки с натриев хепарин, като се използва центрофугиране с градиент на плътност Ficoll-Hypaque при 600 g за 25 минути при 22 градуса. За извънклетъчно оцветяване PBMCs се разделят на 5-панелни фракции и се оцветяват за 20 минути при 2–8 градуса на тъмно място, като всеки коктейл съдържа моноклоналните антитела в оптимални концентрации. Панелът B1 беше използван за определяне на наивен (CD19+CD27−IgM+IgD+), памет само за IgM (CD19+CD27+ IgM++IgD−), превключен памет (CD19+CD27+IgM−IgD−) и В клетки, подобни на маргинална зона (CD19+CD27+IgM++IgD+). Панелът B2 беше използван за идентифициране на CD21low B клетки (CD19+CD21−/lowCD38−/lowIgM+++), плазмобласт (CD19+CD21−/lowCD38++/{ {34}}IgM−) и преходни В клетки (CD19+CD21+CD38++IgM+). Панелът T1 беше използван за класифициране на наивна (CD4+ или CD8+ и CD45RA+CCR7+), ефекторна памет (CD4+ или CD8+ и CD45RA−CCR7−), централна памет (CD4+ или CD8+и CD45RA−CCR7+) и TEMRA (терминално диференцирана ефекторна памет) Т клетки (CD4+ или CD8+ и CD45RA+CCR7−). T2 панелът беше използван за класифициране на регулаторните Т клетки (TregsCD4+CD25+FOXP3+CD127−/low). За вътреклетъчно оцветяване, след оцветяването на повърхностните молекули, те бяха фиксирани и пермеабилизирани в целия FOXP3/Permeabilization буфер (eBioscience, САЩ) съгласно инструкциите на производителя за следното: анти-човешки FOXP3 (PE), анти-човешки IL{{67} } (PE), античовешки IL-4 (APC) и античовешки IFN- (FITC). Всички антитела и изотипни контроли бяха закупени от eBioscience, американска корпорация. За да се оценят Т хелперните клетки (включително Т1, Т2 и Т17), 1 × 106 (клетка/mL) PBMCs се култивират в среда за клетъчна култура на Roswell Park Memorial Institute (RPMI 1640), последвано от стимулация с форбол миристат ацетат (PMA). , 50 ng/mL, Sigma-Aldrich, САЩ)/йономицин (1 ug/mL, Sigma-Aldrich) и в присъствието на брефелдин (5 ug/mL, eBioscience). След това клетките се инкубират при 37 градуса в инкубатор с 5% CO2 и 95% влажност за 5 часа. Стимулираните клетки се промиват с фосфатно буфериран физиологичен разтвор (PBS) и се извършва повърхностно оцветяване с анти-човешки CD4 (PerCp)-Cy5.5. Вътреклетъчни цитокинови оцветяващи антитела (анти-IFN-FITC, анти-IL-17 PE и анти-IL-4 APC за оценка на Т подгрупи и анти-FoxP3 PE за оценка на Treg) бяха добавени и инкубирани на стайна температура за 30 минути. Клетките се промиват с пермеабилизиращ буфер и се ресуспендират в студен буфер за оцветяване и броят се определя с помощта на BD FACSCalibur Flow Cytometer (BD Biosciences) (Допълнителен файл 1: Таблица S1). Стратегията за стробиране е подобна на нашето предишно проучване [13, 14].

Анализ на Т-клетъчна пролиферация

За да се оцени Т клетъчната пролиферация, РВМС се култивират с флуоресцентен 5,6-карбоксифлуоресцеин сукцинимидил естер (CFSE, Biolegend, САЩ). Изходният разтвор на CFSE се приготвя чрез разтваряне на CFSE в диметилсулфоксид (DMSO) при концентрация от 5 mM/L, въз основа на инструкциите на производителя. Този запас беше замразен на малки аликвоти, за да се предотвратят прекомерни цикли на замразяване и размразяване. CFSE се добавя към напречна falcon епруветка, съдържаща 500 μL суспензия от PBMC (5 × 106 клетки/mL) в среда за клетъчна култура RPMI 1640, съдържаща 10% FBS (фетален волски серум, Biosera, Франция) с крайна концентрация от 5 μM и 2 mM L-глутамин, 100 U/mL пеницилин и 100 ug/mL стрептомицин (Lymphosep; Biosera, Франция). Тръбата се завърта бързо и се завихря, за да се осигури хомогенно разпръскване. След маркиране, клетъчната суспензия се инкубира в продължение на 5 минути при 37 градуса. След това към клетъчната суспензия се добавят 9 mL RPMI1640, съдържащ 10% FBS и се центрофугира при 500 g за 5 минути. Клетките се промиват три пъти и се добавя 1 mL RPMI1640 с 10% FBS. По отношение на специфичната Т клетъчна стимулация и пролиферация, анти-CD3 антитяло (1 µg/ml) се добавя към 500 µL стерилен PBS и плаката се инкубира при 37˚C в продължение на 2 часа. Покритата плака се промива два пъти със стерилен PBS и белязаните клетки се добавят директно и накрая се добавя анти-CD28 антитяло (2 ug/ml) като стимулант за Т клетки. Плаката се инкубира при 37 ºC в инкубатор с 5% CO2 и 95% влажност за 96 часа [15–17]. Нестимулираната ямка се счита за контрола за непролиферативни клетки. След 96 часа клетките се събират и се промиват. След оцветяване с античовешки CD4 (PerCPCy5.5), клетките в крайна сметка бяха анализирани с BD FACSCalibur™ Flow cytometer и CellQuest Pro софтуер (BD, Biosciences, Сан Хосе, Калифорния, САЩ). Анализът на пролиферацията беше извършен чрез сравняване на три критерия, включително процента разделени клетки (% разделени), средния брой клетъчни деления, на които претърпява една клетка (индекс на делене) и средния брой клетъчни деления, които се случват в цялата първична клетъчна популация (Индекс на разпространение) от софтуера FlowJo 7.6.

Статистически анализ

Софтуерът SPSS (Windows версия 16.0; SPSS Inc., Чикаго, Илинойс, САЩ) беше използван за статистически анализ. Използвахме теста на Колмогоров-Смирнов, за да оценим дали данните са нормално разпределени. Констатациите бяха представени като средни (интерквартилен диапазон [IQR], представени като диапазон с 25-75-ти персентил) стойности. За сравнения се използва хи-квадрат тест или точен тест на Фишер. За сравнение на повече от две групи, ако разпределението на данните е нормално, се използва ANOVA, а ако разпределението на данните не е нормално, се използва тестът на Kruskal Wallis. Разликите се считат за статистически значими за P-стойностите, които са били<0.05.

Cistanche ползи за мъжете - укрепване на имунната система

Резултати

Демографски, имунологични и клинични находки

Сред всички регистрирани ирански пациенти със SIgAD, 30 налични пациенти (23 мъже и седем жени) бяха наети в настоящото проучване. Средната (IQR) възраст на пациентите е 11 (7,3–16) години по време на проучването. Кръвното родство на родителите е налице при 16 (53,3% от) пациенти. Пневмонията (42,3%) е най-честата клинична проява при изследваните пациенти и злокачествено заболяване не е диагностицирано в тази кохорта. Демографските, клиничните и имунологичните характеристики на пациентите са обобщени в Таблица 1. След категоризиране на пациентите въз основа на тежки и леки фенотипове, демографските, клиничните и имунологичните данни бяха сравнени (Таблица 1, Фиг. 1). Пациентите с тежки фенотипове проявяват повече респираторни усложнения, отколкото леката група. Други параметри не показват значителна разлика. Същите сравнения са извършени при пациенти с и без кръвно родство и нито един от тях не е имал значителна разлика. Обратно, пациентите с леки фенотипове показват малко по-висок процент на алергия и стомашно-чревни прояви с повишено серумно ниво на IgE, което предполага повишено превключване към производство на IgE.

Таблица 1 Сравнение на демографски, клинични и имунологични данни на пациенти със SIgAD с тежки и леки фенотипове

Фиг. 1 Сравнение на клиничните прояви между тежка и лека SIgAD

В-клетъчни подмножества

Пациентите със SIgAD показват значително повишена честота на CD{{0}} B-клетки [11,2% (9,4–13.07%) спрямо 7,2% (6–8,6%), p < 0.001], с повишени наивни В-клетки [71% (63,7–80%) спрямо 66,5% (56,2–71,1%), p=0.036] и преходни В-клетки [ 8% (3,6–13,5%) срещу 4,8% (2,6–9,5%), p=0.032] в сравнение с HCs. За разлика от това, процентът на подобни на маргинална зона [2,3% (2–3,5%) спрямо 3,4% (2,3–4,8%), p=0.022) и В-клетки с превключена памет [3,5% (1,9) –5,5%) срещу 6% (3,5–8,4%), p=0.006] са значително по-ниски от HCs. Въпреки това, намалената памет само на IgM и плазмобластите и повишените CD21low B-клетки при пациенти в сравнение с тези в HCs не са значими (фиг. 2). Интересното е, че някои сравнения са значими между клиничните групи на пациентите. Процентът на CD19+ B клетки както при лек, така и при тежък фенотип е значително по-висок от HCs [11,6% (8,7–13) срещу 7,2% (6–8,6), p <0,0001, 10,8% (9,6–13,2) ) спрямо 7,2% (6–8,6), p <0,0001], съответно. Пациентите с тежка SIgAD показват значително увеличение на процента на CD21low B-клетки [1,5% (1–2,2) спрямо 2,7% (1,6–5,6), p=0.025] и значително намаление на процента както на подмножества В клетки на маргиналната зона, така и на комутирана памет [3,4% (2,3–4,8) спрямо 2,2% [2, 3], p=0.040, 6% (3,5–8,4) спрямо 2,7% ( 1.7–4.7), p=0.003], съответно. Процентът на преходните В клетки при леки пациенти с SIgAD е по-висок от HCs [10,7% (3,9–13,8) срещу 4,8% (2,6–9,5), p=0.047] (фиг. 3). Процентът на памет само за IgM е значително по-висок при пациенти с кръвно родство, отколкото при тези без кръвно родство. Ние също така категоризирахме честотата на В-клетъчните подгрупи на пациенти със SIgAD в три категории: нормална, намалена и повишена въз основа на нормалния диапазон на HCs (Таблица 2). Въз основа на този анализ, най-голямото намаление на подгрупите В клетки е свързано с В-клетките с превключена памет (23%), докато най-голямото увеличение е свързано с наивните В клетки (27%) при пациенти със SIgAD. С изключение на повишени CD21 ниски В-клетки при пациенти с тежка SIgAD в сравнение с пациенти с лека SIgAD.

Фиг. 2 Количествен анализ на процентите на субгрупата на В клетки и Т клетки при пациенти със SIgAD и здрави контроли. Медианата е представена с хоризонтална линия. Данните бяха анализирани с помощта на U теста на Mann-Whitney. *стр<0.05, statistical significance between patients and HCs. HC Healthy control

Т-клетъчни подмножества

Разделянето на подгрупа на CD4+ Т клетки показва значително намаляване на общия брой CD4+ Т клетки [36,5% (30,8–41,2%) спрямо 40,1% (37,3–47,2%), p{{14 }}.038)], клетки на централната памет [11% (7,3–13,1%) спрямо 24,5% (16–29%), p<0.0001), T1 [7.7% (5.2–9.9%) vs. 12% (7.8–16%), p=0.002], T2 [0.3% (0.2–0.4%) vs. 0.6% (0.4–1.3%), p<0.0001] and Tregs [0.3% (0.03–0.7%) vs. 1.4% (1.1– 1.6%), p<0.0001] in patients compared with HCs. Oppositely, the percentage of TEMRA [9.5% (5.7–16.4%) vs. 2% (1.3–6.2%), p<0.0001] was meaningfully higher than HCs. Moreover, decreased effector memory and T17, and increased naïve helper T cells in patients in comparison with HCs were not significant (Fig.  2). Regarding the percentage of CD8+ T cell subsets, central memory [0.6% (0.3–0.8%) vs. 3% (2–6%), p<0.0001] and effector memory [12.3% (7.6–22.1%) vs. 23.9% (19.5– 27.2%), p<0.0001] were markedly diminished in patients compared with HCs. On the other hand, the percentage of cytotoxic TEMRA [44.1% (28.4–55.7%) vs. 24.4% (20– 31%), p<0.0001] was significantly higher than HCs. However, increased total CD8+ T cells and decreased naïve CD8+ T cells were not significant in patients compared to those in HCs (Fig. 2). Regarding the comparison of the percentage of CD8+ T cells subsets between severe SIgAD patients with HCs, naïve T cells, effector, and central memory cells demonstrated a significant reduction. Also, there was a significant decrease in the percentage of total CD4+ T-cells, central memory, T1, T2, and regulatory T cells, whereas TEMRA in both CD4+ and CD8+ T cells demonstrated an increase. On the other hand, the percentage of effector and central memory cells within CD8+ T cells, as well as central memory, TEMRA, T1, and regulatory T cells within CD4+ T cell subsets demonstrated a significant decrease in mild forms of SIgAD compared to HCs. In contrast, we found an increase in TEMRA CD8+ T cells and T2 CD4+ T cells in mild patients compared to controls (Fig.  3). Comparisons of the percentages of all T cell subsets between SIgAD patients with and without consanguinity have not indicated any significant difference. We also categorized the frequency of T cell subsets of SIgAD patients into three categories: normal, decreased, and increased based on a normal range of HCs (Table  2). Based on this analysis, the most decrease in T cell subsets is related to Tregs (67%), while the most increase is related to CD8+ TEMRA (37%) in SIgAD patients. Flow cytometry results of B cell and T cell subsets in 30 SIgAD patients have shown separately in Additional file 1: Tables S2 and S3. To evaluate the impact of the T cell subset on the switching process of B cells and the production of different Ig subtypes we performed a correlation analysis. Surprisingly only IgG but not IgM and IgE were significantly associated with specific T cell subsets (negative association with naïve CD4 and naïve CD8 T cells and positive association with CD4+ TEM and T17 cells, Additional file 1: Table S4) indicating the independent association of IgM to IgE from co-stimulation of T cell subsets in our patient cohorts. Moreover, correlation analysis of absolute counts and percentage of subsets should significant direct correlation in all measured parameters (Additional file 1: Table S5).

Фиг. 3 Количествен анализ на процентите на субгрупата от В клетки и Т клетки при пациенти с тежка и лека SIgAD. Медианата е представена с хоризонтална линия. Данните бяха анализирани с помощта на U теста на Mann-Whitney. *стр<0.05, statistical signifcance between severe and mild patien

Таблица 2 Разпределение на нормални, повишени и намалени пропорции на Т-клетъчни и В-клетъчни подгрупи при всички пациенти със SIgAD. N=30

Т клетъчна пролиферация

Данните, генерирани от маркирани с CFSE култури, бяха анализирани за количествено определяне на пролиферацията на CD4+ Т клетки. Няма значителна разлика в индекса на разделяне (DI), индекса на пролиферация (PI) и процента на разделяне (PD) между пациентите със SIgAD и HCs (фиг. 4). Интересното е, че когато сравнихме тези индекси между пациенти с SIgAD с тежки и леки фенотипове, открихме, че медианата на DI и PD при пациенти с тежка SIgAD в сравнение с леки случаи са значително отменени [0.1 (0 .08–0.4) спрямо 0.5 (0.3–0.8), p=0.019 и 12.2 (8.4– 26,4) срещу 42,5 (26,8–52,6), p=0.009, съответно]. Въпреки това, няма значима разлика в PI между тежките и леките групи (фиг. 4). От друга страна, сравненията на DI, PI и PD между пациенти със SIgAD със и без кръвно родство не са значими.

Фиг. 4 Сравнение на индексите на пролиферация на Т лимфоцити при пациенти с тежка и лека SIgAD. Медианата е представена с хоризонтална линия. *стр<0.05, statistical significance between severe and mild patients

Дискусия

SIgAD е най-разпространеният IEI с различни клинични прояви. Тези пациенти имат различен спектър от клинични прояви. Съответно, полезни са имунологичните изследвания при пациенти с различен спектър от клинични прояви. Най-разпространената клинична проява при IEI, особено при SIgAD, са рецидивиращите респираторни инфекции [18–20]. Открихме пневмонията като най-честото усложнение при нашите регистрирани симптоматични пациенти. Повтарящите се респираторни инфекции обикновено се проявяват под формата на инфекции на горните дихателни пътища и могат да останат недиагностицирани в продължение на няколко години; въпреки това, някои пациенти със SIgAD проявяват по-тежки фенотипове като бронхиектазии или облитериращ бронхиолит, което налага имунологично изследване при тези пациенти [21]. Като се има предвид, че повтарящите се респираторни инфекции са докладвани като най-важната причина за заболеваемост и смърт при деца с IEI, особено първични дефицити на антитела [22, 23], ранната диагностика и управление на респираторни нарушения, свързани със SIgAD, са много важни [24, 25] . Показано е, че при някои пациенти със SIgAD се наблюдават аномалии в подгрупите В клетки [3, 4]. Нашите резултати показват значително увеличение на наивните и преходните В-клетки и силно намаляване на подобни на маргинална зона и превключени В-клетки на паметта. Този анормален В-клетъчен модел предполага дефекти в терминалните етапи на диференциация на В-клетките, подобно на пациентите с CVID [26]. Като се има предвид, че CVID и SIgAD споделят почти сходен генетичен произход и могат да се натрупват като множество случаи в едно семейство, тази прилика е предвидима. Като цяло, повече от половината от пациентите с IEI, регистрирани в иранския регистър, имат родство по родителска линия, но този процент все още е по-рядък при пациенти със SIgAD. При иранските пациенти със SIgAD в сравнение със западните пациенти кръвното родство е по-разпространено. Въпреки че може да съществуват моногенетични причини, те все още не са идентифицирани въпреки секвенирането от следващо поколение при няколко пациенти [27]. Открихме намаляване на В-клетките на паметта, подобни на маргинална зона и превключени, особено при пациенти с тежка SIgAD, както беше докладвано по-рано [28]. Наскоро докладвахме за подобно намаляване на В-клетките на паметта, подобни на маргинална зона и превключени, при пациенти с CVID [14].

ползи от добавката Cistanche-увеличаване на имунитета

От друга страна, въпреки че наблюдавахме значително намаляване на превключваната памет при пациенти с атаксия телеангиектазия (AT), но беше наблюдавано рязко увеличение на В-клетките, подобни на маргиналната зона [29]. Пациентите със SIgAD, особено група пациенти с тежки клинични прояви (рецидивираща и интензивна инфекция и автоимунитет), имат по-ниски превключени В-клетки на паметта [28, 30, 31]. Предполага се, че намаляването на субпопулацията на B-клетките с комутирана памет се дължи на дефекти в нивото на процеса на рекомбинация на класа на антитялото (CSR), причинени от ензимен дефицит или аномалии в цитокиновите мрежи и техните рецептори [28]. Някои пациенти със SIgAD с тежък фенотип прогресират до CVID, което отразява тази подгрупа на SIgAD може да споделя с CVID обща имунна патогенеза, особено в развитието на CSR стъпка. Съответно В-клетките с комутирана памет се считат за диагностичен биомаркер при пациенти [28]. Въпреки това, честотата на превключените В-клетки на паметта е нормална сред децата в нашата изследвана популация и намалението се наблюдава повече при възрастни пациенти; което предполага, че стареенето вероятно води до прогресиране на SIgAD до CVID, особено при пациенти с тежки клинични прояви (данните не са показани). От друга страна, В-клетките на маргиналната зона са специализирана популация от В-клетки, които произвеждат IgM за защита срещу инфекции, особено капсулирани бактерии [32]. Въпреки че предишни проучвания показват, че броят на В-клетките, подобни на маргинална зона, при пациенти със SIgAD не се различава в сравнение с нормалните контроли [33], въпреки това получихме значително намаление на В-клетките, подобни на маргинална зона, в нашите случаи, подобно на предишен доклад при пациенти с CVID [34]. Намаляването на маргиналните В-клетъчни подгрупи при други пациенти с дефекти в производството на антитела може да бъде свързано с повишен риск от инфекция като пневмония и намаляване на серумните нива на IgM, подобно на пациентите с CVID [35]. Открихме повишени CD21low B клетки в сравнение с контролата, главно при пациенти с тежка SIgAD. Предишни проучвания съобщават за увеличение на CD21low B клетки както при SIgAD [3], така и при пациенти с CVID [36] и други автоимунни заболявания [37]. Напоследък също се съобщава за повишаване на CD21low при пациенти с АТ [29]. Увеличаването на броя на CD21low клетките е пряко свързано не само с автоимунитета, но и с инфекцията [36]. От друга страна, хроничното излагане на вирусна инфекция може да доведе до превръщане на антиген-реактивни В клетки в неотзивчиви CD21low В клетки [38]. За да се изясни причината за разширените CD21low B клетки; необходимо е да се направят допълнителни изследвания за тази В-клетъчна субпопулация. Като се има предвид високата субпопулация на CD21low B клетки при пациенти с CVID и прогресията на някои пациенти със SIgAD до CVID, тежката група от пациенти с SIgAD с повишени CD21low B клетки по-вероятно ще развие CVID. Поради това те се нуждаят от по-редовно проследяване, за да се оцени хода на заболяването. Преходните В клетки са на междинен етап в развитието между незрелите клетки на костния мозък и зрелите В клетки в далака [39]. В настоящото проучване наблюдавахме значително повишени преходни В клетки при нашите пациенти със SIgAD, особено при пациенти с тежка SIgAD, въпреки че броят на преходните В клетки при деца със SIgAD беше нормален (данните не са показани). Наскоро наблюдавахме значително намаляване на преходните В клетки AT [29]. За разлика от предишни проучвания, които показват намалени преходни В клетки [8, 28, 40], възрастните пациенти показват леко повишени преходни В клетки. Освен това, Lemarquis et al. показаха намаляване на функционалната активност на преходните В клетки на базата на производството на IL-10 и CpG стимулация [40]. Като се има предвид дефектът в крайните стадии на В-клетките в SIgAD, изглежда, че увеличаването на преходните В клетки и наивните В клетки на нашите пациенти се дължи на компенсаторен механизъм, който увеличава ранното развитие на В клетките. По отношение на различните резултати между нашето проучване и други, изглежда, че тази разлика се дължи на различни процеси на подбор, тъй като всички наши пациенти са били симптоматични, докато други са изследвали хетерогенно асимптоматични и симптоматични пациенти със SIgAD. По отношение на Т клетъчните подгрупи, наблюдавахме намален общ брой CD4+ Т клетки, Т1, Т2 и Treg клетки и повишен TEMRA както в CD4+, така и в CD8+ клетки. В съответствие с нашите резултати, предишни проучвания показват увеличение и намаляване на популацията на CD8+ и CD4+ Т лимфоцити, съответно [4]. Също така открихме, че централната памет както в CD4+, така и в CD8+ Т клетките и ефекторната памет в CD8+ Т лимфоцитите са намалени при пациенти със SIgAD в сравнение с HCs. Наблюдавахме значително увеличение на TEMRA клетъчната подгрупа както в CD4+, така и в CD8+ лимфоцитната популация, особено при пациенти с тежка SIgAD. TEMRA е трета подгрупа на Т-клетъчната памет в периферни възпалителни тъкани, които експресират CD45RA, но нямат експресия на CCR7 или CD27. При хората натрупването на TEMRA клетки се влияе от хронични инфекции, като CMV [41, 42]. Увеличаването на тези прекратени Т-клетъчни подгрупи може да се дължи на хроничен клетъчен отговор на инфекции при тези пациенти; все пак трябва да се извършат допълнителни проучвания по отношение на това явление. В съответствие с нашите резултати, Нечваталова и др. демонстрира разширени CD4+ и CD8+ TEMRA клетки при пациенти със SIgAD, които са свързани с CMV инфекция [43]. Ние не изследвахме CMV инфекция при пациенти със SIgAD, но увеличаването на броя на подгрупата TEMRA клетки при нашите пациенти може да бъде свързано с хронични инфекции. Наскоро оценихме отговорите на специфични антитела към PPSV-23 при пациенти със SIgAD и AT и разкрихме, че 18,6% от пациентите със SIgAD и 81,3% от пациентите с AT са имали неадекватен отговор. Броят на плазмобластите, В клетките на маргиналната зона, преходните В клетки, наивните CD8+ Т клетки и процентът на CD8+ Т клетките, IgM В клетките на паметта и В клетките на превключената памет при пациенти със SIgAD бяха значително по-ниска в групата на неотговорилите в сравнение с групата на отговорилите. Въпреки че дефицитът на специфични антитела е по-чест при пациенти с AT, отколкото пациенти с SIgAD [44]. Регулаторните Т клетки играят важна роля в производството на IgA антитела чрез трансформиране на секрецията на растежен фактор-бета (TGF-) [45–47]. Открихме значително намалени Tregs при нашите пациенти в съответствие с предишни публикувани проучвания [48], въпреки че едно проучване съобщава за повишени Tregs при пациенти със SIgAD [43]. Също така се съобщава за корелация между намалените Treg клетки и тежестта на заболяването SIgAD, особено при индивиди с автоимунитет, и дефицит на IgA CSR при пациенти с тежки клинични прояви [30, 48]. Ниската честота на Treg клетки и други Т-клетъчни подгрупи, включително Т1 и Т2 при нашите пациенти, може да се дължи на ниски тимусни емигранти, причинени от дефектна тимопоеза и/или повишена апоптоза на тези клетки [49]. Т-клетъчният функционален анализ чрез митогенна или антигенна стимулация е важна характеристика при диагностицирането на различни имунни нарушения и имунодефицити [50]. Традиционно има един протокол за оценка на функцията на Т клетките, базиран на поглъщането на [3H] тимидин след PHA стимулация с помощта на радиоактивни компоненти, който се нуждае от специфични лабораторни условия и също така не е специфичен за Т клетките, тъй като може да стимулира няколко други имунни клетки като добре. От друга страна, най-важната слабост е, че не може да се получи информация за конкретни подгрупи клетки. Тестът за пролиферация на CFSE е практически избор за оценка на отговорите на Т клетките към антиген или митоген при пациенти с IEI, особено SIgAD за насочване на допълнителни анализи на потенциални Т клетъчни дефекти при тези пациенти [51]. Досега има малко съобщения за дефекти на Т-клетъчния отговор при пациенти със SIgAD. Както се очакваше, нашето проучване не разкрива значителна разлика в отговора на Т клетките между пациентите и контролите. Въпреки това, когато категоризирахме пациентите в две групи въз основа на тежки и леки фенотипове, тежките пациенти показаха намалена Т-клетъчна пролиферация в сравнение с леките пациенти. Този резултат може да бъде важно откритие за категоризиране на пациенти със SIgAD за познаване на прогнозата на пациента. Наскоро съобщихме, че пролиферацията на Т клетки е значително нарушена в сравнение със здравите контроли при пациенти с CVID и пациенти с АТ [29, 52]. Освен това, това показва, че пациентите със SIgAD с дефектна Т-клетъчна пролиферация трябва да бъдат проследявани допълнително за прецизно медицинско управление. Препоръчваме допълнителни проучвания за оценка на действието на функцията на Т клетките при пациенти със SIgAD въз основа на тежки и леки фенотипове в други проучвания. Ограниченията на експеримента включват малкия брой симптоматични пациенти, недостъпността на много от тях и дори подобрението на някои пациенти.

Изводи

Нашите резултати показват значителни малформации в моделите на В клетките, подобни на пациенти с CVID. Като се има предвид, че CVID и тежките форми на SIgAD споделят почти сходни клинични и имунологични фенотипове и най-вероятно генетичен произход, това понятие е предвидимо. Въз основа на фенотипни анализи, ние наблюдавахме още някои аномалии при пациенти със SIgAD с тежки фенотипове, като висока субпопулация на CD21low B клетки и дефект на Т клетъчна пролиферация. Съответно, тежките пациенти проявяват по-голям брой респираторни инфекции в сравнение с лекия SIgAD, с многобройни пациенти, страдащи от синузит, отит, пневмония и б, бронхиектазии, което предполага по-нататъшно проследяване и по-прецизно управление при тези пациенти. Бащите на настоящото изследване предполагат, че изследването на подгрупи В и Т клетки може да бъде полезно за по-добро разбиране на патогенезата и прогнозата на заболяването.

Препратки

1. Aghamohammadi A, Mohammadi J, Parvaneh N, Rezaei N, Moin M, Espanol T, et al. Прогресия на селективен IgA дефицит до общ променлив имунен дефицит. Int Arch Allergy Immunol. 2008; 147 (2): 87–92.

2. Bagheri Y, Sanaei R, Yazdani R, Shekarabi M, Falak R, Mohammadi J, et al. Хетерогенна патогенеза на селективен дефицит на имуноглобулин. Int Arch Allergy Immunol. 2019; 179 (3): 232–46.

3. Нечваталова J, Pikulova Z, Stikarovska D, Pesak S, Vlkova M, Litzman J. В-лимфоцитни субпопулации при пациенти със селективен IgA дефицит. J Clin Immunol. 2012; 32 (3): 441–8.

4. Litzman J, Vlková M, Pikulová Z, Štikarovská D, Lokaj J. Т и В лимфоцитни субпопулации и маркери за активиране/диференциране при пациенти със селективен IgA дефицит. Clin Exp Immunol. 2007; 147 (2): 249–54.

5. Lemarquis AL, Einarsdottir HK, Kristjansdottir RN, Jonsdottir I, Ludviksson BR. Преходните В клетки и отговорите на TLR9 са дефектни при селективен IgA дефицит. Преден имунол. 2018; 9: 909.

6. Celiksoy M, Yildiran A. Сравнение на B клетъчни подгрупи при първични имунни дефицити прогресира при здрави деца, съответстващи на дефицит на антитела. Алергол Имунопатол. 2016; 44 (4): 331–40.

7. Marasco E, Farroni C, Cascioli S, Marcellini V, Scarsella M, Giorda E, et al. В-клетъчното активиране с CD40L или CpG измерва функцията на В-клетъчните подгрупи и идентифицира специфични дефекти при пациенти с имунен дефицит. Eur J Immunol. 2017; 47 (1): 131–43.

8. Lemarquis AL, Theodors F, Einarsdottir HK, Ludviksson BR. Картографирането на сигналните пътища, свързани с sIgAD, разкрива нарушено активиране на STAT3 B-клетки, управлявано от IL-21-. Преден имунол. 2019; 10: 403.

9. Borte S, Pan-Hammarstrom Q, Liu C, Sack U, Borte M, Wagner U, et al. Интерлевкин -21 възстановява производството на имуноглобулин ex vivo при пациенти с общ променлив имунодефицит и селективен IgA дефицит. Кръв. 2009; 114 (19): 4089–98.

10. Abolhassani H, Kiaee F, Tavakol M, Chavoshzadeh Z, Mahdaviani SA, Momen T, et al. Четвърта актуализация на иранския национален регистър на първичните имунодефицити: интегриране на молекулярна диагностика. J Clin Immunol. 2018; 38 (7): 816–32.

11. Aghamohammadi A, Rezaei N, Yazdani R, Delavari S, Kutukculer N, Topyildiz E, et al. Регистър на консенсус в Близкия изток и Северна Африка относно вродени грешки на имунитета. J Clin Immunol. 2021; 41 (6): 1339–51.

12. Seidel MG, Kindle G, Gathmann B, Quinti I, Buckland M, van Montfrans J, et al. Работни дефиниции на регистъра на Европейското дружество за имунодефицити (ESID) за клинична диагностика на вродени грешки на имунитета. J Allergy Clin Immunol Pract. 2019; 7 (6): 1763–70.

13. Shad TM, Yousef B, Amirifar P, Delavari S, Rae W, Kokhaei P, et al. Променливи аномалии в Т и В клетъчни подгрупи при атаксия телеангиектазия. J Clin Immunol. 2020: 1–13.

14. TofghiZavareh F, Mirshafey A, Yazdani R, Keshtkar AA, Abolhassani H, Bagheri Y, et al. Лимфоцитни подгрупи в корелация с клиничен профил при пациенти с CVID без моногенни дефекти. Expert Rev Clin Immunol. 2021; 17 (9): 1041–51.

15. Moeini Shad T, Yousef B, Amirifar P, Delavari S, Rae W, Kokhaei P, et al. Променливи аномалии в Т и В клетъчни подгрупи при атаксия телеангиектазия. J Clin Immunol. 2021; 41 (1): 76–88.

16. Azizi G, Mirshafey A, Abolhassani H, Yazdani R, Ghanavatinejad A, Noorbakhsh F, et al. Дисбалансът на циркулиращите Т хелперни подгрупи и регулаторните Т клетки при пациенти с дефицит на LRBA: Корелация с тежестта на заболяването. J Cell Physiol. 2018; 233 (11): 8767–77.

17. Azizi G, Mirshafey A, Abolhassani H, Yazdani R, Jafarnezhad-Ansariha F, Shaghaghi M, et al. Подгрупи на циркулиращи хелперни Т-клетки и регулаторни Т-клетки при пациенти с общ променлив имунен дефицит без известното моногенно заболяване. J Investig Allergol Clin Immunol. 2018; 28 (3): 172–81.

18. Reisi M, Azizi G, Kiaee F, Masiha F, Shirzadi R, Momen T, et al. Оценка на белодробни усложнения при пациенти с първични имунодефицитни нарушения. Eur Ann Allergy Clin Immunol. 2017; 49 (3): 122.

19. Cerutti A, Chen K, Chorny A. Имуноглобулинови отговори на интерфейса на лигавицата. Annu Rev Immunol. 2011; 29: 273-93.

20. Bagheri Y, Babaha F, Falak R, Yazdani R, Azizi G, Sadri M, et al. IL-10 индуцира секреция на TGF, повишена регулация на TGF-рецептор II и секреция на IgA в В клетките. Eur Cytokine Netw. 2019; 30 (3): 107–13.

21. Ozkan H, Atlihan F, Genel F, Targan S, Gunvar T. IgA и/или IgG подклас дефицит при деца с повтарящи се респираторни инфекции и връзката му с хронично белодробно увреждане. J Investig Allergol Clin Immunol. 2005; 15 (1): 69–74.

22. Tavakol M, Jamee M, Azizi G, Sadri H, Bagheri Y, Zaki-Dizaji M, et al. Диагностичен подход при пациенти със съмнение за първичен имунен дефицит. Endocr Metab Лекарствени цели за имунни разстройства. 2020; 20 (2): 157–71.

23. Resnick ES, Moshier EL, Godbold JH, Cunningham-Rundles C. Заболеваемост и смъртност при общ променлив имунен дефицит за 4 десетилетия. Кръв. 2012; 119 (7): 1650–7.

24. Yazdani R, Abolhassani H, Asgardoon M, Shaghaghi M, Modaresi M, Azizi G, et al. Инфекциозни и неинфекциозни белодробни усложнения при пациенти с първични имунодефицитни нарушения. J Investig Allergol Clin Immunol. 2017; 27 (4): 213–24.

25. Ahmadi M, Nouri M, Babaloo Z, Farzadi L, Ghasemzadeh A, Hamdi K, et al. Лечението с интравенозен имуноглобулин (IVIG) модулира Th17 периферната кръв и регулаторните Т клетки при пациенти с повтарящи се спонтанни аборти: нерандомизирано, отворено клинично изпитване. Immunol Lett. 2017; 192: 12–9.

26. Yazdani R, Seify R, Ganjalikhani-Hakemi M, Abolhassani H, Eskandari N, Golsaz-Shirazi F, et al. Сравнение на различни класификации за пациенти с общ променлив имунодефицит (CVID), използвайки измерване на B-клетъчни подгрупи. Алергол Имунопатол (Madr). 2017; 45 (2): 183–92.

27. Aghamohammadi A, Abolhassani H, Rezaei N. Първични имунодефицитни заболявания в Иран: минало, настояще и бъдеще. Arch Iran Med. 2021. https://doi. org/10.34172/aim.2021.18.

28. Aghamohammadi A, Abolhassani H, Biglari M, Abolmaali S, Moazzami K, Tabatabaeiyan M, et al. Анализ на превключени В клетки на паметта при пациенти с IgA дефицит. Int Arch Allergy Immunol. 2011; 156 (4): 462-8.

29. Yousef B, Amirifar P, Delavari S, Rae W, Kokhaei P, Abolhassani H, et al. Променливи аномалии в Т и В клетъчни подгрупи при атаксия телеангиектазия. J Clin Immunol. 2020 г. https://doi.org/10.1007/s10875-020-00881-9.

30. Abolhassani H, Gharib B, Shahinpour S, Masoom SN, Havaei A, Mirminachi B, et al. Автоимунитет при пациенти със селективен IgA дефицит. J Investig Allergol Clin Immunol. 2015; 25 (2): 112–9.

31. Arkwright PD, Abinun M, Cant AJ. Автоимунитет при човешки първични имунодефицитни заболявания. Кръв. 2002; 99 (8): 2694–702.

32. Cerutti A, Cols M, Puga I. Маргинална зона B клетки: добродетели на вродени подобни на антитела произвеждащи лимфоцити. Nat Rev Immunol. 2013; 13 (2): 118–32.

33. Bukowska-Straková K, Kowalczyk D, Baran J, Siedlar M, Kobylarz K, Zembala M. В-клетъчното отделение в периферната кръв на деца с различни видове първичен хуморален имунодефицит. Pediatr Res. 2009; 66 (1): 28–34.

34. Karaman SBES, Gülez N, Genel F. Значението на B-клетъчните подгрупи при пациенти с некласифицирана хипогамаглобулинемия и връзката с изискването за интравенозна имуноглобулинова замяна. Iran J Immunol. 2018; 15 (1): 1–13.

35. Patuzzo G, Mazzi F, Vella A, Ortolani R, Barbieri A, Tinazzi E, et al. Имунофенотипен анализ на В-лимфоцити при пациенти с общ променлив имунодефицит: идентифициране на CD23 като полезен маркер при дефиницията на заболяването. ISRN Immunol. 2013. https://doi.org/10. 1155/2013/512527.

36. Patuzzo G, Barbieri A, Tinazzi E, Veneri D, Argentino G, Moretta F, et al. Автоимунитет и инфекция при общ променлив имунодефицит (CVID). Autoimmun Rev. 2016; 15 (9): 877–82.

37. Рахманов M, Keller B, Gutenberger S, Foerster C, Hoenig M, Driessen G, et al. Циркулиращите CD21low В клетки при общ променлив имунодефицит наподобяват насочващи се към тъканта, подобни на вродени В клетки. Proc Natl Acad Sci. 2009; 106 (32): 13451–6.

38. Isnardi I, Ng YS, Menard L, Meyers G, Saadoun D, ​​Srdanovic I, et al. Рецепторът на комплемента 2/CD21-човешки наивни В клетки съдържа предимно автореактивни неотговарящи клонове. Кръв. 2010; 115 (24): 5026-36.

39. Sims GP, Ettinger R, Shirota Y, Yarboro CH, Illei GG, Lipsky PE. Идентифициране и характеризиране на циркулиращи човешки преходни В клетки. Кръв. 2005; 105 (11): 4390–8.

40. Lemarquis AL, Einarsdottir HK, Kristjansdottir RN, Jonsdottir I, Ludviksson BR. Преходните В клетки и отговорите на TLR9 са дефектни при селективен IgA дефицит. Преден имунол. 2018. https://doi.org/10.3389/fmmu.2018. 00909.

41. Willinger T, Freeman T, Hasegawa H, McMichael AJ, Callan MF. Молекулярните подписи разграничават човешката централна памет от CD8 Т клетъчните подгрупи на ефекторната памет. J Immunol. 2005; 175 (9): 5895-903.

42. Martin MD, Badovinac VP. Дефиниране на памет CD8 Т клетка. Преден имунол. 2018; 9: 2692.

43. Nechvatalova J, Pavlik T, Litzman J, Vlkova M. Терминално диференцирани Т клетки на паметта се увеличават при пациенти с общ променлив имунодефицит и селективен IgA дефицит. Cent Eur J Immunol. 2017; 42 (3): 244–51.

44. Khanmohammadi S, Shad TM, Delavari S, Shirmast P, Bagheri Y, Azizi G, et al. Оценка на отговорите на специфични антитела при пациенти със селективен IgA дефицит и атаксия телеангиектазия. Endocr Metab Лекарствени цели за имунни разстройства. 2022; 22 (6): 640–9.

45. Cazac BB, Roes J. TGF-рецепторът контролира реакцията на В клетките и индуцирането на IgA in vivo. Имунитет. 2000; 13 (4): 443–51.

46. ​​Van Vlasselaer P, Punnonen J, De Vries J. Трансформиращ растежен фактор-бета насочва превключването на IgA в човешки В клетки. J Immunol. 1992; 148 (7): 2062–7.

47. Cerutti A, Rescigno M. Биологията на отговорите на чревния имуноглобулин А. Имунитет. 2008; 28 (6): 740–50.

48. Soheili H, Abolhassani H, Arandi N, Khazaei HA, Shahinpour S, Hirbod Mobarakeh A, et al. Оценка на естествените регулаторни Т клетки при субекти със селективен дефицит на IgA: от старша идея до нови възможности. Int Arch Allergy Immunol. 2013; 160 (2): 208–14.

49. Yazdani R, Fatholahi M, Ganjalikhani-Hakemi M, Abolhassani H, Azizi G, Hamid KM, et al. Роля на апоптозата при общ променлив имунодефицит и селективен дефицит на имуноглобулин А. Mol Immunol. 2016; 71: 1–9.

50. McCusker C, Warrington R. Първичен имунен дефицит. Всички Asth Clin Immun. 2011; 7 (Допълнение 1): S11.

51. Marits P, Wikström AC, Popadic D, Winqvist O, Thunberg S. Оценка на функцията на Т и В лимфоцитите в клиничната практика с помощта на пролиферационен анализ, базиран на поточна цитометрия. Clin Immunol. 2014; 153 (2): 332–42.

52. TofghiZavareh F, Mirshafey A, Yazdani R, Keshtkar AA, Abolhassani H, Mahdaviani SA, et al. Имунофенотипен и функционален анализ на лимфоцитни подгрупи при пациенти с обща променлива имунна недостатъчност без моногенни дефекти. Scand J Immunol. 2022;96(1):e13164.