Резюме:Съобщава се, че корените на Vitis amurensis имат потенциал за избелване на кожата чрез оценка на меланогенезата и инхибиторната активност на тирозиназата. В това проучване корените на V. amurensis бяха използвани за бърз избор на избелващи съставки с помощта на LC-Q-TOF-MS, съчетан с инхибиторен анализ на тирозиназата, и за оптимизиране на процеса на екстракция за използване като функционален материал за избелване на кожата чрез методология на отговорната повърхност. Резултатите показват, че корените на V. amurensis проявяват инхибиторни ефекти върху тирозиназата от два стилбенови олигомера, ε-vinifera (1) и витамин B (2), както е предвидено от LC-Q-TOF-MS, съчетано с биоанализ. Оптималните условия на екстракция (концентрация на метанол 66 процента, обем на разтворителя 140 mL и време за екстракция 100 минути) за съставките за избелване на кожата са установени с добиви от 6,20 процента, а инхибиторната активност на тирозиназата е 87,27 процента. Връзката между всеки фактор и съответния му отговор беше потвърдена от корелационния анализ на Pearson. Обемът на разтворителя показва ясна линейна връзка с добивите, а концентрацията на метанол има силна линейна връзка с инхибиторната активност на тирозиназата за съединения 1 и 2, както и тяхната комбинация. Като цяло, LC-Q-TOF-MS, съчетан с биотест, е доказано, че има потенциал за ефективно намиране на нови активни съставки, както и известни активни съставки; витамините могат да бъдат предложени като нов естествен потенциален избелващ агент.

Според съответните проучвания,цистанчее широко разпространена билка, известна като „чудотворната билка, която удължава живота“. Основният му компонент ецистанозид, който има различни ефекти катоантиоксидант, противовъзпалително, инасърчаване на имунната функция. Механизмът между цистанче иизбелване на кожатасе крие в антиоксидантния ефект на цистанчегликозиди. Меланинът в човешката кожа се произвежда от окислението на тирозин, катализирано оттирозиназа, а окислителната реакция изисква участието на кислород, така че свободните от кислород радикали в тялото се превръщат във важен фактор, влияещ върху производството на меланин. Cistanche съдържацистанозид, който е антиоксидант и може да намали генерирането на свободни радикали в тялото, като по този начин инхибира производството на меланин.

Щракнете върху Cistanche Продадено близо до мен

За повече информация:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

Ключови думи:Vitis amurensis; LC-Q-TOF-MS, свързан с инхибиторен анализ на тирозиназа; методология на отговорната повърхност; Корелация на Пиърсън

1. Въведение

Меланинът е отговорен за цвета на кожата и косата на бозайниците и предпазва кожата от ултравиолетовите лъчи, но прекомерното производство на меланин и натрупването на меланин в кожата причинява хиперпигментационни кожни заболявания като лунички, мелазма, възрастови петна, ефелиди и сенилни лентигини. Тирозиназата, известна като съдържащ мед оксидазен ензим, има решаваща роля в биосинтезата на меланин. Ензимът катализира две последователни реакции на окисление: първата стъпка, хидроксилирането на L-тирозин до 3,4-дихидрокси-L-фенилаланин (L-DOPA), и втората стъпка, окислението на L-DOPA до допахинон. Допахинонът е силно реактивно вещество, което може да полимеризира спонтанно, за да генерира меланин [1–3]. Следователно, инхибиторите на тирозиназата могат да се използват като лечение на кожни заболявания, свързани с хиперпигментация, и като средства за избелване на кожата.

Vitis amurensis, диворастящ вид грозде, е разпространен главно в Азия (Корея, Китай и Япония). Напълно узрелите плодове се консумират сурови и съдържат изобилие от хранителни вещества като захароза, глюкоза, протеини и витамини, така че се използват като материал за вино, сок, желета и конфитюри. Освен това листата му се използват в салата [4]. Неговите корени и стъбла се използват като традиционна медицина за лечение на рак, невралгични болки и болки в корема [5,6]. Корените му се състоят от стилбени (основна съставка), процианидини, флавоноиди, тритерпеноиди и други фенолни съединения. Досега химическият състав на корена е проучен достатъчно подробно. По-специално се съобщава за различни стилбенови олигомери, включително ресвератрол, амурензин А, витамин А, (плюс)-ε-винифера, амурензини C–M, ампелопсин A, D и ампелопсин Е [6]. Метанолният екстракт от корена проявява антимеланогенен ефект срещу -меланоцит-стимулиращ хормон-индуцирана меланогенеза в B16F10 клетки и при 3,4-дихидроксифенилаланин (L-DOPA) окисление чрез гъбична тирозиназа [7]. В допълнение, екстрактите от V. amurensis и техните активни съединения проявяват антиоксидантни, противовъзпалителни, невропротективни и антитуморни ефекти [7–10].

LC-MS, комбиниран с биотест, може едновременно да потвърди химическия профил и биологичната активност на компонентите в природните продукти без необходимост от екстракция и изолиране. Поради това наскоро се използва за ефективно и бързо идентифициране на биоактивни съединения в природни продукти [11–13].

Оптимизацията е процес, който позволява максимална ефективност на експерименталните системи или продукти. Методология на повърхността на отговор (RSM), многовариантен анализ, дизайн на експерименти, използващи математически и статистически техники, базирани на емпирични модели, и изразяване на корелацията между експерименталния дизайн и резултатите като полиномна функция, са някои техники, които осигуряват идеални условия за оптимизация с максимална ефективност. RSM е точен и ефективен метод за оптимизация, широко използван в различни области, включително преработка на храни, химия, биология и селско стопанство [14–16]. През последните десетилетия се увеличи интересът към фармацевтичните продукти, козметиката и функционалните храни, съдържащи натурални продукти; следователно има текущи изследвания както в академичните среди, така и в индустрията, насочени към разработването на такива продукти [17,18]. Първата стъпка в тези изследвания включва извличането на биоактивната съставка от естествени продукти. Понастоящем, тъй като множество фактори като време на екстракция, температура, съотношение течност-твърдо вещество и обем на разтворителя повлияха на екстрахираните съставки, е необходима оптимизация за максимално извличане на биоактивните съставки.

Доколкото ни е известно, рядко се съобщава за инхибиторни съставки на тирозиназата и оптимизиране на екстрактите от корените на V. amurensis [5,19]. Ето защо това проучване имаше за цел бързо получаване на тирозиназния инхибитор от корени на V. amurensis с помощта на LC-Q-TOF-MS, съчетан с инхибиторен анализ на тирозиназата и оптимизиране на условията на екстракция за разширяване на използването на корените на V. amurensis като средство за избелване на кожата от RSM.

2. Резултати и дискусия

2.1. LC-QTOF MS, съчетан с тест за инхибиране на тирозиназа, използващ екстракт от корен на V. amurensis

80 процента МеОН екстракт от корен на V. amurensis показва значителна инхибиторна активност на тирозиназата (80,7 ± 0,8 процента при 50 µg/mL, Таблица S1). За идентифициране на инхибиторните съединения на тирозиназата в корена на V. amurensis без изолиране, беше проведено LC-QTOF-MS, съчетано с инхибиторен анализ на тирозиназа. Химическият профил на екстракта от корен на V. amurensis е получен при първия цикъл (Фигура S1) и биоактивните съединения са идентифицирани с помощта на инхибиторен анализ на тирозиназата на фракции, събрани на всеки 30 s от втория цикъл (Фигура 1). Имаше два пика между 19 и 22 минути на масовата хроматограма, за които се прогнозира, че имат значителна инхибиторна активност на тирозиназата и техните структури бяха идентифицирани като стилбен димер (1) и стилбен тетрамер (2) с помощта на химическо профилиране (Таблица 1).

2.2. Идентифициране на инхибиторните съставки на тирозиназата на корена на V. amurensis

Първо, два компонента, за които се очаква да имат инхибиторна активност на тирозиназа, бяха изолирани от EtOAc фракцията и тяхната биоактивност беше оценена. Структурите на изолираните съединения 1 и 2 бяха идентифицирани съответно като ε-vinifera (1) [20,21] и витамин B (-vinifera, 2) [21–23], използвайки 1H-NMR, 13C-NMR и ESI-MS (Фигура 2, Фигури S2 и S3 и Таблица S2). При теста за инхибиране на тирозиназата стойностите на IC50 на съединения 1, 2 и коджиковата киселина са съответно 3,51, 10,74 и 27,09 цМ. И двете съединения показват по-високи инхибиторни ефекти на тирозиназата в сравнение с положителната контрола, коджиковата киселина, която е известната съставка за избелване на кожата (Таблица 1 и Фигура S4). В предишни проучвания се съобщава, че ε-vinifera (1) има инхибиторна активност на тирозиназа [23]; въпреки това, витамин B (2) беше идентифициран за първи път в нашето проучване.

Като цяло, резултатите, корелирани с прогнозираните данни от LC-MS, съчетани с тест за инхибиране на тирозиназата и витамин B (2), показват потенциал като нов инхибитор на тирозиназата. Освен това бяха проведени молекулярни докинг изследвания в подкрепа на резултата от значителната инхибиторна активност на тирозиназата на двата стилбенови олигомера. Както е показано в Таблица 1, съединения 1 и 2 показаха по-висок докинг резултат от положителната контрола, коджикова киселина, в съответствие с нашите експериментални данни. Въпреки това, резултатите от докинг на съединенията бяха в противоречие с нашите експериментални резултати. Режимите на взаимодействие на съединения 1 и 2 са описани на фигура 3. Съединение 1 образува 4 водородни връзки, 2 хидрофобни взаимодействия и 1 взаимодействие с pi-lone двойка, а съединение 2 образува 11 водородни връзки, 7 хидрофобни взаимодействия, 1 взаимодействие на ван дер Ваалс , и 3 pi-lone двойки взаимодействия. В резултат на това беше потвърдено, че съединенията могат да бъдат вмъкнати в активното място на целевия протеин и да се свържат с каталитични аминокиселинни остатъци, които могат да инхибират активността на тирозиназата. Освен това, ε-vinifera (1) се съобщава като конкурентен инхибитор, който се свързва към същото място, където L-DOPA се свързва с тирозиназа [23]. Беше наблюдавано, че витамин B (2) се свързва към същото място като ε-vinifera (1), което потвърди, че витамин B (2) е нов конкурентен инхибитор.

2.3. Оптимизиране на екстракцията на корен на V. amurensis с помощта на RSM

За да се използват корените на V. amurensis като функционален материал за избелване на кожата, оптималните условия за екстракция са проектирани от дизайна на Box-Behnken (BBD), за да се увеличи добивът на екстракция и инхибиторната активност на тирозиназата. Ефектите от независими реакции, като добив на екстракция, инхибиторна активност на тирозиназата, количество на съединение 1, количество на съединение 2 и количество от сбора на съединения 1 и 2 върху трите независими променливи (време на екстракция, концентрация на MeOH/вода и обем на разтворителя), бяха измерени (Таблица 2). Диапазонът от променливи беше зададен като време за екстракция (40, 70 и 100 минути), концентрация на МеОН (40, 70 и 100 процента) и обем на разтворителя ( 35, 87.5 и 140 mL) въз основа на предварителен еднофакторен експеримент (данните не са показани). Стойностите, получени от проектираните експерименти, бяха изразени като полиноми на корелации между променливи с помощта на регресионен анализ (Таблици S4–S13 и Фигура S5). В резултат на извършване на индивидуална оптимизация за всяка реакция (Таблица 3), се очаква добивът да представлява 6,21 процента, когато се екстрахира с 100.00 min, МеОН 64,78 процента, 140.{{42} } mL. Инхибиторната активност на тирозиназата (проценти) се екстрахира с 65,22 минути, МеОН 100.00 процента, 140.00 mL условия и се прогнозира да покаже стойност от 90,37 процента. Количеството на съединение 1 при 65,74 минути, МеОН 100.00 процента, 35,00 mL беше предвидено като 37,45 µg/mg, а количеството на съединение 2 при 70,00 минути, МеОН 70,00 процента и 92,24 mL беше предсказано като 86.77 µg/mg. В допълнение, общото съдържание на съединения 1 и 2 се очаква да покаже максимална стойност от 108.10 µg/mg, когато се екстрахира при условия от 75.20 минути, МеОН 100.00 процента и 35.00 mL. Експериментите, базирани на оптимизирани условия, дават 6,19 ± 0,36 процента, инхибиторна активност на тирозиназата 91,72 ± 3,48 процента, съдържание на съединение 1 36,54 ± 1,78 µg/mg, съдържание на съединение 2 85,74 ± 16,57 µg/mg и сумата от съединения 1 и {{85} }.10 ± 19.11 µg/mg бяха получени и индивидуалните отговори за всяка променлива показват разлика от 5 процента или по-малко от теоретично предвидените стойности. Извършена е оптимизация на множество реакции, за да се увеличи добивът на екстракция и инхибиторната активност на тирозиназата (Таблица 3). Оптимизираните условия са както следва: време на екстракция 100 минути; концентрация на МеОН, 66.38 процента; и обем на разтворителя 140 mL. Използвайки тези условия, добивът беше определен на 5.95 ± 1.13 процента и тирозиназната инхибиторна активност беше 85.93 ± 1.57 процента; тези стойности бяха подобни на прогнозираните стойности, съответно 6,20 и 87,25 процента. Освен това, корелацията между всяка променлива и съответния отговор беше анализирана с помощта на корелацията на Pearson (Таблица 4). Добивът на екстракция показва ясна линейна връзка между времето на екстракция и концентрацията на MeOH и отрицателна линейна връзка с количеството на съединение 1. Освен това, инхибиторната активност на тирозиназата показва силна линейна връзка между количеството на съединение 2 и количеството на сумата на съединения 1 и 2 и ясна линейна връзка със съединение 1. Следователно, инхибиторната активност на тирозиназата на корена на V. amurensis е пропорционална на двете съединения 1 и 2, но показва по-силна линейна връзка с количеството на съединение 2, отколкото съединение 1.

3. Материали и методи

3.1. Общи експериментални процедури

Течна хроматография със средно налягане (MPLC) се провежда с помощта на Biotage Isolera (Biotage AB, Uppsala, Швеция). Едната система е оборудвана с помпа за високоефективна флаш хроматография (HPFC), детектор с променлива двойна дължина на вълната и колектор. NMR спектрите бяха получени с помощта на спектрометър Bruker SPECTROSPIN 300 MHz (Bruker Corporation, Billerica, MA, USA). Метанол-d4, NMR разтворител, беше закупен от Cambridge Isotope Laboratories, Inc. Ацетонитрил (ACN), вода и метанол (MeOH) с хроматографски клас бяха закупени от ThermoFisher Scientific Korea Ltd. (Сеул, Република Корея). L-тирозин, тирозиназа от гъби, коджикова киселина и мравчена киселина бяха закупени от Sigma-Aldrich Co (Сейнт Луис, Мисури, САЩ).

3.2. Растителен материал

Коренът на V. amurensis е получен от Gyeongbuk, Корея и също е закупен от Omniherb (Daegu, Република Корея). Те бяха идентифицирани от д-р проф. Ki Yong Lee от колежа по фармация в Корейския университет. Образец от ваучер (KUP-HD071) беше депозиран в Лабораторията по фармакогнозия, колеж по фармация, Корейски университет.

3.3. LC-Q-TOF масспектрометрия

LC се извършва с помощта на серия Agilent 1260 (Agilent, Санта Клара, Калифорния, САЩ), включваща бинарна помпа, онлайн дегазатор, автоматичен пробоотборник, термостатно контролирано отделение за колона и фотодиоден детектор. Хроматографското разделяне се извършва с помощта на колона Shiseido CapCell PAK C18 (5 µm, 4.6 mm, ID × 150 nm). Подвижната фаза се състои от вода (разтворител A) и ACN (разтворител B), като и двете съдържат 0.1 процента мравчена киселина. Условията на градиента бяха както следва: 0–5 минути, 10 процента B, 5–30 минути и линейно увеличаване на B от 10 до 90 процента. Съвместната скорост беше настроена на 0,6 mL/min; 5 µL и 20 µL от пробите бяха инжектирани съответно за LC-Q-TOF-MS анализ и LC-Q-TOF-MS, съчетан с инхибиторен анализ на тирозиназа. Масспектрометрията се извършва с помощта на масспектрометър Agilent 6530 Q-TOF (Agilent, Санта Клара, Калифорния, САЩ) с интерфейс за йонизация с електроспрей (ESI) в отрицателен режим. Данните за масов диапазон от m/z 50–1000 бяха събрани в центроиден режим. Масовите параметри са както следва: капилярно напрежение 4000 V; налягане на пулверизатора, 40 psi; напрежение на фрагмента, 175 V; напрежение на скимера, 65 V; температура на изсушаващия газ 325 ◦C; друга скорост на изсушаващ газ, 12,0 L/min; енергия на сблъсък 10, 20, 30 и 40 eV. Настройката на параметрите за придобиване и обработката на данни бяха извършени с помощта на LC-MS/MS Data Acquisition с помощта на 6530 серия Q-TOF (версия B.05.00) (софтуер MassHunter Workstation, Agilent, Санта Клара, Калифорния, САЩ).

3.4. LC-Q-TOF-MS, съчетано с тест за инхибиране на тирозиназа

LC-Q-TOF-MS, съчетан с тест за инхибиране на тирозиназа, беше проведен по метода, установен в предишното проучване [24]. Накратко, анализът протече в два цикъла. В първия цикъл химичният профил на пробата беше получен с помощта на LC-Q-TOF-MS. В следващия цикъл, елуатът след преминаване през LC системата при посочените условия LC-Q-TOF се събира в 96-плаки с ямки на всеки 30 s. Тирозиназната инхибиторна активност на събраните фракции се оценява с помощта на тирозиназен инхибиторен анализ.

3.5. Изолиране на инхибиторни на тирозиназа съединения от корен на V. amurensis

За изолиране на инхибиторни съединения на тирозиназата, идентифицирани с помощта на LC-Q-TOF-MS, съчетано с тест за инхибиране на тирозиназа, коренът на V. amurensis (3.01 kg) се екстрахира три пъти с 80 процента МеОН за 60 минути при стайна температура с помощта на ултразвук. Екстрахираният разтворител се филтрува и концентрира, за да се получи суров екстракт (215.7 g), който се суспендира във вода и последователно се разделя с помощта на n-хексан, етил ацетат (EtOAc) и n-BuOH. EtOAc фракцията (25.85 g) се подлага на колонна хроматография със силикагел, използвайки n-хексан: EtOAc при градиентни условия (20:1 → 0:1), за да се получат седем фракции (E1–E7). Фракция E4 се разделя с помощта на MPLC и 100 g SNAP KP-Sil, патрон със силикагел и дихлорометан: МеОН при градиентни условия (97:3 → 0:100), за да се получат седем подфракции (E4–1 до E4–7) . Съединение 2 (417,0 mg) се получава от E4–5. Субфракция E4–4 се хроматографира повторно на MPLC с помощта на SNAP 25 g Ultra, патрон със силикагел и хлороформ:MeOH:H2O при градиентни условия (50:4:1 → 15:4:1), за да се получат седем фракции ( E4–4–1 до E4–4–7). Съединение 1 (396.0 mg) се получава от E4–4–5, което се наблюдава като единично петно ​​върху плака за тънкослойна хроматография (TLC).

3.6. Тест за инхибиране на тирозиназата

Инхибиторната активност на тирозиназата беше оценена с помощта на описан по-рано метод с лека модификация [25]. Двата микролитра проба и 50 µL от 0.1 U/µL гъбена тирозиназа бяха третирани в 96-плаки с ямки и инкубирани при 37 ◦C. След 15 минути се добавят 50 µL от 1 mM L-тирозин и след това реагира при 37 ◦C за 15 минути. Количеството образуван допахром се измерва при 495 nm с помощта на четец на микроплаки Spectra Max 19{{20}} (Molecular Devices, Сан Хосе, Калифорния, САЩ). Инхибиторната активност на тирозиназата се изчислява с помощта на следното уравнение: инхибиране на тирозиназа (проценти)=[1 − (S − S0)/(C − C0)] × 100, където S е абсорбцията на пробата, тирозиназата и L -тирозин; S0 е абсорбцията на пробата и L-тирозин; C е абсорбцията на тирозиназа и L-тирозин, а C0 е абсорбцията на L-тирозин. Kojic киселина, известен инхибитор на тирозиназа, се използва като положителна контрола. IC50 стойностите се изчисляват с помощта на GraphPad Prism 6 (GraphPad Software, Inc., La Jolla, СА, САЩ).

3.7. Молекулярни докинг изследвания

Молекулярното докинг беше извършено с помощта на софтуер SYBYL-X 2.1.1 (Tripos Ltd., St. Louis, MO, USA) с кристални структури на PPO3, тирозиназа от Agaricus bisporus (Protein Data Bank (PDB) ID: 2Y9W). Всички водни молекули на целевия протеин бяха отстранени и подготовката на лиганда беше проведена чрез протокол за "дезинфекция" в SYBYL-X 2.1.1. Афинитетът протеин-лиганд се изчислява чрез силовото поле на Tripos и се изразява като общи резултати. Закачената поза на лиганда от комплекса протеин-лиганд беше визуализирана в програмата Discovery Studio 2017 R2 Client (Biovia Co., Сан Диего, Калифорния, САЩ).

3.8. Експериментален дизайн и статистически анализ

Оптимизирано условие за извличане на съставки с максимална тирозиназна инхибиторна активност от корен на V. amurensis беше установено с помощта на BBD с три променливи и три нива (MINITAB издание 14.12.0 статистически софтуер). Въз основа на резултатите от предварителните еднофакторни експерименти бяха избрани независимите променливи, включително времето за екстракция (X1), MeOH и концентрацията на вода (X2) и обемът на течността (X3) и набор от техните променливи (Таблица S3). Променливите за RSM бяха кодирани с помощта на три нива, -1, 0 и 1. Като цяло бяха проектирани 15 експеримента, включително 3 реплики в центъра на дизайна (Таблица 2). Като независими отговори бяха измерени добивът (процент), инхибиторната активност на тирозиназата (процент), количеството на съединение (1) (ug/mg) и количеството на съединение (2) (ug/mg). Тирозиназната инхибиторна активност на екстракта се оценява при концентрация от 50 µg/mL. Всеки отговор се изразява с помощта на следното полиномно уравнение от втори ред:

където R означава реакцията; 1, 2 и 3 са линейните коефициенти; 12, 23 и 13 са коефициентите на взаимодействие между три променливи; и 11, 22 и 33 са квадратичните коефициенти.
Освен това беше извършен корелационният анализ на Pearson, за да се определи съществуването на линейна връзка между всяка променлива и отговора. Коефициентът на корелация на Pearson има силна линейна връзка между {{0}}.7 и 1.0, ясна линейна връзка между 0.3 и 0.7, слаба линейна връзка между {{10}}.1 и 0.3 и никаква или пренебрежимо малка линейна връзка между 0.0 и 0.1. Положителната и отрицателната корелация се изразяват в зависимост от това дали корелационният коефициент на Pearson е положителен или отрицателен.

3.9. Количествен анализ на инхибиторни на тирозиназата съединения 1 и 2

Количеството на всяко съединение 1 и 2 в екстракти, получени при използване на проектираните 15 експериментални условия, бяха измерени с помощта на калибрационните криви (Таблица 2). Кривите на калибриране за съединения 1 и 2 бяха определени с помощта на площта под кривата на UV хроматограмата (330 nm, получени при концентрации от 0,1–1000 µg/mL и съответно 7,81–1000 µg/mL). LC се извършва с помощта на система Waters 2695 LC (Waters, Санта Клара, Калифорния, САЩ) със същите условия като тези на системата LC, подробно описани в Материали и методи, LC-Q-TOF мас спектрометрия.

4. Изводи

ε-Виниферин (1) и витамин В (2) от корените на V. amurensis се характеризират като съставки за избелване на кожата с помощта на LC-Q-TOF-MS, съчетан с тест за инхибиране на тирозиназа. По-специално, витамин В (2) за първи път е идентифициран като инхибиторно съединение на тирозиназата в това проучване и ε-vinifera (1) и витамин В (2) показват по-високи инхибиторни ефекти на тирозиназата от положителната контрола, коджиковата киселина. Условията за оптимизиране с максимален инхибиторен ефект на тирозиназата и добив на корени на V. amurensis бяха установени с помощта на време за екстракция (100 минути), концентрация на МеОН (66,38 процента) и обем на течността (140 mL). Резултатът показа добро съответствие между експерименталните и прогнозираните стойности. Следователно, LC-Q-TOF-MS, съчетан с биотест, доказа потенциала за ефективно намиране на нови активни съставки, както и известни активни съставки, витамин B (2), който може да бъде предложен като нов естествен потенциален избелващ агент.

Допълнителни материали: Следното е достъпно онлайн, Фигура S1: MS хроматограма в режим на отрицателна йонизация (A); UV хроматограма при 280 nm (B) на екстракти от корени на V. amurensis, Фигура S2: 1H- и 13C-NMR спектри на съединение 1 (300 и 75 MHz, CD3OD), Фигура S3: 1H- и 13C-NMR спектри на съединение 2 (300 и 75 MHz, CD3OD), Фигура S4: Сигмоидална диаграма и IC50 на положителна контрола, съединения 1 и 2, Фигура S5: Графики на повърхността на реакцията и контурите, показващи ефекта от параметрите на екстракция (X1: време на екстракция, min; X2: Концентрация на MeOH, проценти; X3: обем на разтворителя, mL). (A) добив; (В) тирозиназна инхибиторна активност; (C) съединение 1; (D) съединение 2; (E) сума от съединения 1 и 2, Таблица S1. Инхибиторна активност на тирозиназа на екстракти от корени на V. amurensis, Таблица S2: 1H- и 13C NMR данни на съединения 1 и 2 в CD3OD (δ в ppm), Таблица S3: Независими променливи и нива за методология на повърхността на отговор, Таблица S4: Очаквана регресия коефициент за добив, Таблица S5: Анализ на вариация за добив, Таблица S6: Оценен коефициент на регресия за инхибиторна активност на тирозиназа, Таблица S7: Анализ на вариация за инхибиторна активност на тирозиназа, Таблица S8: Оценен коефициент на регресия за съединение 1, Таблица S9: Анализ на дисперсия за съединение 1, Таблица S10: Оценен коефициент на регресия за съединение 2, Таблица S11. Анализ на дисперсията за съединение 2, Таблица S12: Оценен коефициент на регресия за сумата от съединения 1 и 2, Таблица S13: Анализ на дисперсията за сумата от съединения 1 и 2.
Авторски принос: Концептуализация, KYL; методология, K.-EO, HS и KYL; софтуер, K.-EO и HS; валидиране, ХС; формален анализ, K.-EO и HS; разследване, K.-EO, HS, MKL и KYL; обработка на данни, K.-EO, HS, BP и KYL; писане - първоначална чернова, K.-EO и HS; писане—преглед и редактиране, HS, MKL, BP и KYL; надзор, MKL, BP и KYL Всички автори са прочели и са съгласни с публикуваната версия на ръкописа.
Финансиране: Това изследване беше подкрепено от безвъзмездна помощ от Националната изследователска фондация на Корея, финансирана от корейското правителство (NRF-2017R1A2B4003403 и NRF-2019R1A6A1A03031807) и безвъзмездна помощ от Корейския проект за научноизследователска и развойна дейност в областта на здравните технологии чрез Корейското развитие на здравната индустрия Институт (KHIDI), финансиран от Министерството на здравеопазването и социалните грижи, Република Корея (HF20C0038).
Декларация за наличност на данни: Данните, представени в това проучване, са налични в допълнителния материал.
Конфликти на интереси:Авторите декларират липса на конфликт на интереси.
Наличност на проба: Не е наличен

Препратки

1. Ранджбар, С.; Шахваран, PS; Едраки, Н.; Khoshneviszadeh, M.; Даруди, М.; Sarrafifi, Y.; Hamzehloueian, M.; Khoshneviszadeh, M. 1, 2, 3-триазол-свързани 5-бензилиден (тио) барбитурати като нови инхибитори на тирозиназата и уловители на свободни радикали. Арх. Pharm. 2020, 353, 2000058. [CrossRef] [PubMed]

2. Чанг, Т.-С.; Гумена лодка.; Лин, Х.-К. Идентифициране на 6, 7, 40 -трихидроксиизофлавон като мощен инхибитор на тирозиназата. Biosci. Биотехнология. Biochem. 2005, 69, 1999–2001. [CrossRef] [PubMed]

3. Миядзава, М.; Ошима, Т.; Кошио, К.; Ицузаки, Й.; Anzai, J. Тирозиназен инхибитор от черни оризови трици. J. Agric. Food Chem. 2003, 51, 6953–6956. [CrossRef]

4. Чен, К.; Diao, L.; Песен, Х.; Zhu, X. Vitis amurensis Rupr: Преглед на химията и фармакологията. Фитомедицина 2018, 49, 111–122. [CrossRef] [PubMed]

5. Джин, К.-С.; О, YN; Хюн, SK; Kwon, HJ; Kim, BW Бетулиновата киселина, изолирана от корен на Vitis amurensis, инхибира индуцираната от 3-изобутил-1- метилксантин меланогенеза чрез регулиране на MEK/ERK и PI3K/Akt пътища в B16F10 клетки. Food Chem. Токсикол. 2014, 68, 38–43. [CrossRef]

6. Ким, Х.; Thuong, PT; Ngoc, ТМ; Лий, И.; Hung, ND; Bae, K. Антиоксидантна и липоксигеназна инхибиторна активност на олигостилбени от листата и стъблото на Vitis amurensis. J. Ethnopharmacol. 2009, 125, 304–309. [CrossRef]

7. Джин, К.-С.; О, YN; Хюн, SK; Kwon, HJ; Kim, BW Vitis amurensis Ruprecht корен инхибира меланоцит стимулиращ хормон-индуцирана меланогенеза в B16F10 клетки. Nutr. Рез. Практ. 2014, 8, 509–515. [CrossRef]

8. Джанг, MH; Пиао, XL; Ким, HY; Cho, EJ; Baek, SH; Kwon, SW; Park, JH Resveratrol олигомери от Vitis amurensis намаляват индуцирания от амилоид оксидативен стрес в PC12 клетки. Biol. Pharm. Бик. 2007, 30, 1130–1134. [CrossRef]

9. Лий, Е.-О.; Lee, H.-J.; Hwang, H.-S.; Ahn, K.-S.; Chae, C.; Канг, К.-С.; Lu, J.; Ким, С.-Х. Мощно инхибиране на растежа на рак на белия дроб на Lewis от хексанол А от корените на Vitis amurensis чрез апоптотични и антиангиогенни дейности. Канцероген 2006, 27, 2059–2069. [CrossRef]

10. Бак, М.-Ж.; Truong, VL; Kang, H.-S.; Джун, М.; Jeong, W.-S. Противовъзпалителен ефект на процианидини от семена от диво грозде (Vitis amurensis) в LPS-индуцирани RAW 264.7 клетки. Оксид. Med. клетка. Лонгев. 2013, 2013. [CrossRef]

11. Шин, Х.; Chung, H.; Парк, Б.; Lee, KY Идентифициране на антиоксидантни съставки от Polygonum aviculare с помощта на LC-MS, съчетано с DPPH анализ. Нац. произв. Sci. 2016, 22, 64–69. [CrossRef]

12. Парк, С.; Шин, Х.; Парк, Y.; Чой, И.; Парк, Б.; Lee, KY Характеризиране на инхибиторните съставки на производството на NO от Catalpa ovata с помощта на LC-MS, съчетано с клетъчно базиран анализ. Bioorg. Chem. 2018, 80, 57–63. [CrossRef] [PubMed]

13. Инганинан, К.; De Best, C.; Van Der Heijden, R.; Хофте, А.; Карабатак, Б.; Irth, H.; Tjaden, U.; Van der Greef, J.; Verpoorte, R. Високоефективна течна хроматография с онлайн свързано UV, масспектрометрично и биохимично откриване за идентифициране на инхибитори на ацетилхолинестеразата от природни продукти. J. Chromatogr. 2000, 872, 61–73. [CrossRef]

14. Безера, Масачузетс; Сантели, RE; Оливейра, ЕП; Villar, LS; Escaleira, LA Методология на повърхността на отговор (RSM) като инструмент за оптимизация в аналитичната химия. Talanta 2008, 76, 965–977. [CrossRef] [PubMed]

15. Witek-Krowiak, A.; Чойначка, К.; Podstawczyk, D.; Dawiec, A.; Покомеда, К. Приложение на методологията на отговорната повърхност и методите на изкуствената невронна мрежа при моделиране и оптимизиране на процеса на биосорбция. Биоресурс. техн. 2014, 160, 150–160. [CrossRef] [PubMed]

16. Араухо, PW; Brereton, RG Експериментален дизайн I. Скрининг. Анализатор на тенденциите. Chem. 1996, 15, 26–31. [CrossRef]

17. Уанг, Й.; Zhao, L.; Джан, Р.; Янг, X.; Sun, Y.; Shi, L.; Xue, P. Оптимизиране на ултразвукова екстракция чрез повърхностна методология на отговор, антиоксидантен капацитет и инхибиторна активност на тирозиназата на антоцианини от червени оризови трици. Food Sci. Nutr. 2020, 8, 921–932. [CrossRef]

18. Веремфо, А.; Adulley, F.; Adarkwah-Yiadom, M. Едновременно оптимизиране на микровълнова екстракция на фенолни съединения и антиоксидантна активност на семена от авокадо (Persea americana Mill.) Използвайки методологията на повърхността на реакцията. J. Anal. Методи Chem. 2020, 2020, 7541927. [CrossRef]

19. Ко, Дж.; Choi, J.; Bae, SK; Ким, Дж.; Yoon, KD Разделяне на пет олигостилбени от Vitis amurensis чрез градиентна високоефективна противотокова хроматография. J. Sep. Sci. 2013, 36, 3860–3865. [CrossRef]

20. Уанг, К.-Т.; Chen, L.-G.; Tseng, S.-H.; Huang, J.-S.; Hsieh, M.-S.; Wang, C.-C. Противовъзпалителни ефекти на ресвератрол и олигостилбени от Vitis thunbergii var. taiwaniana срещу липополизахарид-индуциран артрит. J. Agric. Food Chem. 2011, 59, 3649–3656. [CrossRef]

21. Ху, Дж.; Лин, Т.; Xu, J.; Динг, Р.; Wang, G.; Шен, Р.; Zhang, Y.-W.; Chen, H. Полифеноли, изолирани от листа на Vitis thunbergii var. Тайвана регулира пътя, свързан с APP. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2016, 26, 505–511. [CrossRef] [PubMed]

22. Ошима, Й.; Kamijou, A.; Ohizumi, Y.; Нива, М.; Ito, J.; Хисамичи, К.; Такешита, М. Нови олигостилбени от Vitis coignetiae. Tetrahedron 1995, 51, 11979–11986. [CrossRef]

23. Анна Малиновска, М.; Билет, К.; Друе, С.; Munsch, T.; Unlubayir, M.; Tungmunnithum, D.; Giglioli-Guivarc'h, N.; Hano, C.; Lanoue, A. Екстракти от гроздова тръстика като многофункционална подмладяваща козметична съставка: Оценка на активността на сиртуин, инхибиране на тирозиназата и потенциал за бионаличност. Молекули 2020, 25, 2203. [CrossRef] [PubMed]

24. Янг, HH; О, К.-Е.; Джо, YH; Ahn, JH; Liu, Q.; Турк, А.; Джанг, JY; Hwang, BY; Лий, Кентъки; Lee, MK Характеризиране на инхибиторни съставки на тирозиназата от надземните части на Humulus japonicus с помощта на LC-MS/MS свързан онлайн анализ. Bioorg. Med. Chem. 2018, 26, 509–515. [CrossRef] [PubMed]

25. Лиу, К.; Ким, С.; Джо, YH; Ким, SB; Hwang, BY; Lee, MK Синтез и биологична оценка на производни на ресвератрол като инхибитори на меланогенезата. Молекули 2015, 20, 16933–16945. [CrossRef] [PubMed]

За повече информация: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501