Определяне на съдържанието на пет съединения в сперма Rehmanniae и установяване на неговия HPLC отпечатък

Таблица 3 Резултати от теста за възстановяване (n=6)

2.4 Определяне на пробата

Шестте събрани партиди Rehmannia бяха приготвени съгласно метода под "2.2.2" и взети проби и определени в съответствие с хроматографските условия под "2.1". Резултатите от определянето на съдържанието са показани в таблица 4. Резултатите показват, че измежду петте компонента, съдържанието на ремания гликозид D е най-високо, вариращо от 0.460% до {{1 0}}.730%; съдържанието на гликозида леонури е второ, вариращо от 0,100% до 0,270%, като съдържанието на двата компонента в проби от различни производствени зони не се различава значително. В проба SX1, с изключение на ехинакозид, съдържанието на останалите четири компонента е значително по-високо от това на други партиди проби; съдържанието на ехинакозид, цистанхезид А и вербаскозид в Rehmannia glutinosa от различни производствени райони е доста различно и нередовно.

БИЛКА ЦИСТАНЧЕ СДОБРО КАЧЕСТВЕНА КОНСИНТЕНЦИЯ

2.5 Установяване и оценка на сходството на HPLC пръстов отпечатък на Rehmannia glutinosa

Хроматограмите и данните от определянето на съдържанието на много компоненти в Rehmannia glutinosa бяха импортирани в софтуера „Chinese Herbal Medicine Chromatographic Fingerprint Similarity System (2012 Edition)“ и беше избрана хроматограмата на тестовата проба SX1 като референтен спектър. Ширината на времевия прозорец беше зададена на 0.10 min и методът на медианата беше използван за генериране на насложени спектри и референтни спектри. Бяха идентифицирани общо 23 общи пика (виж Фигура 3). Приликата между пръстовите отпечатъци на пробата от Rehmannia glutinosa и референтната е 0,904~0,950, което показва, че пробите от Rehmannia glutinosa от различни производствени зони и между суровата Rehmannia glutinosa и варената Rehmannia glutinosa са сходни и имат консистенция с добро качество.

Таблица 4 Резултати от определяне на съдържанието на 5 компонента в сперма Rehmanniae/%

13. реманиозид D; 17. леонурид; 19. ехинакозид; 20. Кастанозид А; 21. актеозид

Фигура 3 Наслагващи се HPLC хроматограми на 6 партиди сперма Rehmanniae (SX1-SX4, HN1, HN2) и еталон (R)

3 Дискусия

3.1 Избор на хроматографски условия

В това изследване са изследвани четири системи подвижни фази, ацетонитрил-вода, ацетонитрил-0.1% разтвор на мравчена киселина, метанол-вода и метанол-0.1% разтвор на мравчена киселина. Резултатите показват, че петте компонента имат добри ефекти на разделяне в ацетонитрилната система; в сравнение със системата за подвижна фаза ацетонитрил-вода, пиковете на гликозидите на rehmannia glutinosa и motherwort в подвижната фаза на ацетонитрил-0.1% разтвор на мравчена киселина са по-тесни и имат добра пикова симетрия. В същото време, поради различната ултравиолетова абсорбция на петте компонента, съдържанието на компонентите варира значително. За да се определи по-точно съдържанието на всеки компонент и да се гарантира, че интензитетът на абсорбция на петте компонента е равномерно разпределен в една и съща хроматограма, ултравиолетовата абсорбция нареманиев гликозид D, гликозид от motherwort, ехинакозид, цистанхезид А и вербаскозид бяха анализирани и беше избрано определяне на променлива дължина на вълната, т.е. 0-24 min, първият отделен реманиев гликозид беше определен при 203 nm и 24-40 min, отделените ехинакозид, цистанхезид А и вербаскозид се определят при 330 nm. В допълнение, това проучване също изследва ефектите на екстракция на метанол, 70% разтвор на метанол, 50% разтвор на метанол и 50% разтвор на ацетонитрил като екстракционни разтворители. Резултатите показват, че 70% разтвор на метанол като разтворител за екстракция може по-добре да разтвори компонентите, които ще бъдат тествани, и извлечената проба има по-малко примеси. Следователно, това изследване избра 70% метанол като екстракционен разтворител, ацетонитрил-0.1% разтвор на мравчена киселина като подвижна фазова система и използва променлива дължина на вълната за определяне на съдържанието на петте компонента в Rehmannia.

3.2 Анализ на резултатите от определяне на пробите

От резултатите от определянето може да се види, че след обработка с пара, с изключение на леко увеличение на съдържанието на ехинакозид, съдържанието на другите четири компонента е значително намалено, особено съдържанието на леонуризид и цистанчезид А; съдържанието на реманиа гликозид D и цистанхезид А в Rehmannia glutinosa от същата производствена зона е леко различно, а съдържанието на леонуризид, ехинакозид и вербаскозид е значително различно; съдържанието на ехинакозид в Rehmannia glutinosa от производствената зона на Хенан е значително по-високо от това на пробите от производствената зона на Шанси, а съдържанието на останалите четири компонента е малко по-различно. В същото време, според HPLC отпечатъка, установен в това проучване, сходството между 6-те партиди проби от Rehmannia и контролния отпечатък е 0.904~0.950, което показва, че основният химикал компонентите на 6-те партиди проби от Rehmannia преди и след обработката бяха много последователни.

В обобщение, методът за определяне на съдържанието и HPLC отпечатъците, установени в това проучване, са точни, надеждни и имат добра специфичност. Те могат да се използват за характеризиране на промените в компонентите и степента на обработка на Rehmannia glutinosa преди и след обработката и да осигурят техническа поддръжка за контрол на качеството на Rehmannia glutinosa. Това изследване обаче има недостатъците на малки партиди проби и непълно покритие на производствените зони, което изисква допълнителен анализ и проверка.

Референции

[1] Комитет по китайска фармакопея. Фармакопея на Китайската народна република: том 1 [S]. Пекин: China Medical Science and Technology Press, 2020: 129-130.

[2] Xu Jun, Fu Zhetong. Изследване на историческата еволюция на имената на обработената Rehmannia glutinosa и изследване на нейната ефикасност [J]. Китайска патентна медицина, 2017, 39 (9): 1913-1916.

[3] Zhu Jue, Zhu Xiangmei, Shi Yuhe и др. Напредък на изследванията върху Rehmannia glutinosa и прогнозен анализ на неговите маркери за качество [J]. Китайска патентна медицина, 2022 г., 45 (2): 1273-1281.

[4] Chen Jinpeng, Zhang Kexia, Liu Yi и др. Напредък в изследванията върху химичния състав и фармакологичните ефекти на Rehmannia glutinosa [J]. Китайска билкова медицина, 2022, 52 (6): 1772-1784.

[5] Li Hongwei, Meng Xiangle. Напредък в изследванията върху химичните компоненти и фармакологичните ефекти на Rehmannia glutinosa［J］.

Изследване за оценка на лекарства, 2015, 38 (2): 218-228.

[6] Zhang Boyong, Jiang Zhenzuo, Wang Yuefei и др. Анализ на химичните компоненти на прясна Rehmannia glutinosa, сурова Rehmannia glutinosa и варена Rehmannia glutinosa чрез UPLC/ESI-Q-TOF MS［J］. Китайска патентна медицина, 2016, 38(5): 1104-1108.

[7] Zhang Lixian, Wei Yue, Li Feifei и др. Разпознаване на шаблони на пръстови отпечатъци и определяне на многокомпонентно съдържание на различни обработени продукти от Rehmannia glutinosa［J］. Хубейски селскостопански науки, 2023 г., 62(9): 135-141.

[8] Chen Jinpeng, Zhang Kexia, Liu Yi и др. Напредък в изследванията върху химичните компоненти и фармакологичните ефекти на Rehmannia glutinosa［J］. Китайска билкова медицина, 2021, 52 (6): 1772-1784.

[9] Tao Yi, Jiang Yanhui, Tang Kejian и др. Сравнително изследване на химичните компоненти на Rehmannia glutinosa преди и след обработка чрез UHPLC-Q-TOF/MS［J］. Нови китайски лекарства и клинична фармакология, 2016, 27(1): 102-106.

［10］ Xu Zhuo, Dai Xinxin, Su Shulan и др. Динамично натрупване на нуклеозидни и аминокиселинни компоненти в Rehmannia glutinosa въз основа на UPLC-TQ-MS［J］. Китайска билкова медицина, 2021, 52(23): 7323-7330.

［11］ Ли Юдзяо. Проучване на технологията на обработка и механизма на "девет изпарения и девет излагане" на Rehmannia glutinosa［D］. Джинан: Университет Шандонг, 2023 г.

［12］ Wang Yue, Zhou Qiao, Zhang Xuelan и др. HPLC Едновременно определяне на съдържанието на осем компонента в Rehmannia glutinosa и неговите различни преработени продукти чрез UPLC анализ на пръстови отпечатъци и многоиндексно определяне на съдържанието на компонент [J]. Китайски медицински материали, 2021, 44 (7): 64-68.

[13] Guo Xiaokai, Xue Shujuan, Chen Suiqing. Оценка на качеството на Rehmannia glutinosa въз основа на UPLC пръстов отпечатък и определяне на съдържанието на многоиндексни компоненти [J]. Китайски медицински материали, 2021, 44 (4): 917-923.