Знаете ли, че оксидативният стрес може да причини увреждане на бъбреците?

За повече информация:ali.ma@wecistanche.com

Част Ⅰ: Оксидативният стрес след остро бъбречно увреждане причинява разрушаване на ресничките на белодробните клетки и тяхното освобождаване в течността на бронхоалвеоларния лаваж и белодробно увреждане, които се влошават от делеция на Idh2

Yong Kwon Hana, Ji Su Kim, Gwan Beom Leea, Jae Hang Lim, Kwon Moo Park

1. Въведение

Остра бъбречна травма(AKI) възниква в различни клинични условия, включително шок, сепсис, трансплантация на органи и съдова хирургия [1-3]. АКИ (Остра бъбречна травма) причинява увреждане на отдалечени органи, включително белите дробове, черния дроб, сърцето и мозъка [4-9]. Това увреждане на отдалечен орган след AKI (Остра бъбречна травма)се признава като основен рисков фактор за лоши резултати [5,9]; следователно подходящото лечение на увреждане на отдалечени органи е важно за подобряване на изхода при пациенти с AKI (Остра бъбречна травма). Въпреки това, точните механизми, включени в AKI (Остра бъбречна травма)-свързаното увреждане на отдалечени органи остава да бъде дефинирано.

Кликнете върху Cistanche за остро бъбречно заболяване и странични ефекти на Cistanche

Ресничките са получени от центриоли издатини от клетъчната повърхност, които съдържат базиран на микротубули цитоскелет (аксонема), заобиколен от цилиарна мембрана. Ресничките се характеризират със своята структура и подвижност и се определят като неподвижни реснички (първични реснички) или подвижни реснички. Първичните реснички са единични, неподвижни, базирани на микротубули 9 плюс 0 аксонемални антеноподобни органели, които излизат от клетъчната мембрана и трансдуцират извънклетъчни сигнали в клетката чрез координацията на няколко сигнални пътя [10-12 ]. Подвижните реснички с множество 9 плюс 2 аксонемални структура се намират главно в респираторния тракт и яйцепровода и функционират за транспортиране на материали [10,13]. Все повече доказателства показват, че дефектите във формирането и функцията на ресничките са свързани с различни човешки заболявания, включителнополикистоза бъбречни заболяванияи първична цилиарна дискинезия [14-20]. Освен това, скорошни проучвания показват, че разрушаването на ресничките възниква под влияние на патологични състояния и че това разрушаване участва в медиирането на клетъчно увреждане и дисфункция [15-20].

Натрупаните доказателства показват товабъбрекисхемия-реперфузия (IR), причина за AKI (Остра бъбречна травма), предизвиква увреждане на отдалечени органи [6-8,21]. Увреждането на отдалечени органи е свързано с възпалителни реакции, промени в сигналните пътища, свързани с клетъчна смърт и оцеляване, иоксидативен стрес [8,22-24]. Оксидативен стресе пряко свързано с дисфункцията на клетъчните компоненти, което може да доведе до органни нарушения и се признава за една от основните причини забъбрекИндуцирано от IR увреждане на далечни органи [21,25,26]. По-рано сме го показалибъбрекIR- и цисплатин-индуцирана AKI (Остра бъбречна травма)променя дължините на първичните реснички вбъбрекепителни клетки чрез сглобяване, разглобяване и разрушаване (децилииране, отделяне или фрагментиране) на реснички [17-19]. Тези процеси са свързани с реактивни кислородни видове (ROS) иоксидативен стрес. в зависимост от концентрацията на водороден прекис и степента наокислителенстрес; ниската концентрация на H2O2 предизвиква удължаване на дължината на първичните реснички, докато високата концентрация на H, O предизвиква разрушаване [17-20]. В допълнение, ние открихме, че нарушените първични реснички на нараненибъбректубулните епителни клетки се екскретират в урината и че това разрушаване и екскреция могат да бъдат предотвратени чрез лечение с антиоксиданти [17-20]. Rodriguez-Ribera и др. също съобщава, че реактивни карбонилни съединения като малондиалдехид, продукт наоксидативен стрес, предизвикват загуба на първични реснички при човекабъбрекклетки на проксималните тубули [27]. Следователно, ние предположихме, че AKI (Остра бъбречна травма)-предизвиканото остро белодробно увреждане (ALD) и клетъчното увреждане са свързани с ресничките и белодробните клеткиокислителенстреси че предотвратяването наокислителенстреснамалява AKI (Остра бъбречна травма)- предизвикано белодробно увреждане. В настоящото проучване проучихме далибъбрекIR-индуцирана AKI (Остра бъбречна травма)причинява разрушаване на ресничките и клетките на белите дробове и ако е така, дали тези смущения са свързани сокислителенB. За тази цел ние използвахме фармакологични и генетични подходи, включително използването на изоцитрат дехидрогеназа 2(Idh2)-изтрити мишки. IDH2 е ензим, локализиран в митохондриите [28]. В митохондриите IDH2 катализира окислителното декарбоксилиране на изоцитрат до -кетоглутарат, придружено от редукция на NADP до NADPH, което е критичен фактор в антиоксидантната система на тиоредоксин и глутатион [29-32]. В допълнение, ние изследвахме дали наличието на цилиарни протеини и фрагменти в бронхоалвеоларната промивна течност (BALF) е показателно за белодробно увреждане. Тук съобщаваме за първи път, че AKI (Остра бъбречна травма)причинява разрушаване на ресничките на белодробните клетки и освобождаването им в BALF, както и белодробно увреждане, което се влошава от делецията на IDH2.

оксидативният стрес причинява увреждане на бъбреците

2. Материали и методи

Подготовка на животните.

Всички експерименти бяха проведени с използване на 8-10-седмични мъжки мишки C57BL/6 (Koatech, Pyeongtaek, Gyeonggi-do, Корея), женски мишки с изтрит ген Idh2 (Idh2~/) и див тип (dh2 плюс / )мишки [28]. На мишките беше разрешен свободен достъп до вода и стандартна храна за мишки. Изследването върху животни е одобрено от Комитета за институционална грижа и използване на животните на Националния университет Kyungpook, Република Корея. За да се предизвика двустранна бъбречна исхемия,бъбрецибяха изложени през хълбочни разрези под анестезия с пентобарбитал натрий (60 mg/kg телесно тегло), а след това, педикулите набъбрецибяха напълно захванати за 35 минути с помощта на скоби за микроаневризми. Същата процедура, безбъбрекзатягане на крака, беше извършено при фиктивната операция. Телесната температура се поддържаше на 36,5 градуса -37 градуса C по време на хирургичните процедури с помощта на нагревателно устройство с контролирана температура (FHC, Bowdoin, ME, USA). На някои мишки беше приложено {{4 }}(2,2,6,6-Тетраметилпиперидин-1-окс-ил-4-ариламино)-2-оксоетил трифенилфосфониев хлорид (Mito--TEMPO,{{14 }}.7 mg/kg телесно тегло; Сигма, Сейнт Луис, Мисури, САЩ) или 17 и 1 час преди операцията (предварителна обработка) или 6 часа след операцията (след обработка).

В края на експериментите белият дроб ибъбректъканите бяха моментално замразени в течен азот или перфузия, фиксирани с PLP (4 процента параформалдехид, 75 mM L-лизин, 10 mM натриев периодат: Sigma) разтвор за биохимични и хистологични изследвания, съответно. Замразените тъкани се съхраняват при -70 градуса, докато не е необходимо.

Колекция от BALF.

BALF се събира след евтаназиране на мишките чрез инжектиране на свръхдоза на пентобарбитал натрий. Белодробните изтичания бяха оценени чрез определяне на концентрацията на протеин и броя на клетките в BALF. За да се вземе BALF, бронхът на левия бял дроб беше напълно клампиран с помощта на скоби за микроаневризми. Игла беше вкарана в трахеята и 0.8 ml студен фосфатно буфериран физиологичен разтвор (PBS) беше бавно инжектиран в десния дял на белия дроб. BALF се събира чрез еднократно прибиране на буталото на спринцовката. Общият брой клетки и концентрацията на протеин в BALF бяха анализирани незабавно с помощта на хематоцитометър и комплект за анализ на BCA (Thermo Fisher Scientific, Waltham, Масачузетс, САЩ), съответно. BALF се поддържа при -70 степен, докато не се изисква за Western blotting анализ.

Бъбрекфункция. Кръвта се събира от мишки с помощта на хепаринизирана спринцовка. Концентрацията на уреен азот в кръвта (BUN) в плазмата се определя с помощта на химичен анализатор Vitros 250 (Johnson&Johnson, New Brunswick, NJ, USA).

Периодна киселина-Шиф (PAS) и оцветяване с хематоксилин и еозин (H&E).

PLP-фиксиранбъбреки белодробните тъкани бяха вградени в парафин, нарязани на срезове с дебелина 3- μm с помощта на микротом (Leica, Bensheim, Германия) и монтирани върху предметни стъкла.Бъбреки белодробните срезове бяха оцветени с PAS и H&E. Theбъбрекщетарезултатът е оценен на сляпо от изследователи, както е описано по-рано [3,19].

Western blot анализ.

Western blotting се извършва, както е описано по-горе [3]. Антителата, използвани за Western blotting, са както следва: анти-4-хидрокси номинал (4-HNE; Abcam, Кеймбридж, Масачузетс, САЩ), анти- -тубулин (Santa Cruz, CA, САЩ) , анти-ацетилиран -тубулин (ac- -tubulin, Sigma), анти-манган-зависима супероксид дисмутаза (MnSOD; Calbiochem, Сан Диего, Калифорния, САЩ), анти-каталаза (Fitzgerald, Concord, MA, USA) , анти-ADP-рибозилиращ фактор-подобен протеин 13B (Arl13B, Proteintech, Чикаго, Илинойс, САЩ), анти-изоцитрат дехидрогеназа 2 (IDH2; Санта Круз), анти-оптична атрофия 1 (Opal; BD Bioscience, Сан Диего, Калифорния ), анти-деляне 1 (Fis1; Sigma), анти-динамин свързан протеин 1 (Drpl; Cell Signaling Technology, Danvers, MA, USA) и анти-глицералдехид 3-фосфат дехидрогеназа (GAPDH; NOVUS, Littleton, CO, САЩ).

Имунофлуоресцентно оцветяване.

След депарафинизиране срезовете се инкубират в PBS, съдържащ {{0}}.2 процента Triton X-100(Sigma) за 1 минута и след това се промиват в PBS за 10 минути. За да се изложи антигенният епитоп, срезовете се варят в 10 mm натриев цитратен буфер (рН 6.0) в продължение на 10 минути, охлаждат се в продължение на 20 минути и след това се промиват три пъти с PBS в продължение на 5 минути при всяко измиване. Срезовете се блокират с 3 процента говежди серумен албумин в PBS (блокиращ буфер) за 30 минути и след това се инкубират с анти-Arll3b антитяло при 4 градуса за една нощ. След промиване срезовете се инкубират с FITC-конюгиран кози анти-заешки IgG (Vector Laboratories, Burlingame, СА, САЩ) за 60 минути и след това се промиват 3 пъти с PBS за 5 минути всеки. Клетъчните ядра се оцветяват с помощта на 4'-6-диамидино-2-фенилиндол (DAPI; Sigma).

Измерване на супероксид в белодробна тъкан.

Нивата на супероксид бяха измерени с помощта на дихидроетидий (DHE; Sigma), както е описано по-рано 【33,34】. Накратко, 10 μM DHE в 1 ml предварително загрят (37 градуса) PBS се добавя към 96-ямкова плака, съдържаща 20 ul лизат от белодробна тъкан. Плаката се отчита на всеки 10 минути за общо 30 минути при филтри за възбуждане/емисия от 530 nm/620 nm.

Измерване на IL-6.

Нивата на IL-6 в плазмата и BALF бяха определени чрез ELISA анализ, като се използва ELISA анализен комплект съгласно инструкциите на производителя (BD Bioscience).

Статистика.

Всички данни бяха анализирани с помощта на софтуер GraphPad Prism 7 (Сан Диего, Калифорния, САЩ). Резултатите са изразени като средна ± стандартна грешка на средната стойност (SEM). Статистическият анализ беше извършен с помощта на t-тест на Student и еднопосочен анализ на дисперсията с post hoc процедурата на Tukey. Разликите се считат за статистически значими, когато p-стойностите са били<>

3. Резултати

1. ИЧ на бъбреците причинява белодробно увреждане.

Както се очакваше, значителни морфологични увреждания набъбреци(Фиг. 1A и B) и повишения на плазмения BUN (Фиг. 1C) се наблюдават 4 и 24 часа след 35 минути двустраненбъбрекисхемия. В белите дробове се наблюдава увеличение на неутрофилите и удебеляване на алвеоларната стена 4 и 24 часа следбъбрекисхемия (фиг. 1D). В допълнение, повишаването на експресията на лимфоцитен антиген 6 комплексен локус G6D (Ly6G, маркер за моноцити, гранулоцити и неутрофили) в белодробната тъкан се наблюдава по начин, зависим от времето на реперфузия (Фиг. 1E и F). Концентрацията на интерлевкин-6 (IL-6) в плазмата се повишава след товабъбрекIR, пик на 4 часа след исхемия (фиг. 1G). Концентрациите на I-6 и протеин, както и общият брой клетки в BALF постепенно се повишават на 4 и 24 часа след бъбречна исхемия (Фигура 1H-J). Степента на оцеляване на 24 часа след 35 минути отбъбрекIR е приблизително 92 процента (данните не са показани).

Когабъбрекисхемичното време е удължено до 45 минути, пост-исхемичните увеличения на концентрацията на BUN в плазмата и концентрацията на общия протеин и броя на клетките в BALF са по-големи от тези след 35 минути исхемия (Фигура 1K-M). Тези данни показват, че белодробното увреждане, предизвикано отбъбрекIR нараняването зависи от степента набъбрекнараняване.

Фиг. 1. Хистологично и функционално увреждане на белия дроб след IR бъбрек. C57BL/6 мъжки мишки бяха подложени на 35 (A–M) и 45 (K–M) минути двустранна бъбречна исхемия или фиктивна операция. Бъбрек, бял дроб, кръв и BALF бяха събрани 4 и 24 часа след операцията. BALF се събира, както е описано в Материалите и методите. (A-J) Мишките бяха умъртвени или 4, или 24 часа след 35 минути исхемия. (А, Б)Бъбрексрезове (3 μm) се оцветяват с PAS ибъбрекотбелязано е тубулно увреждане. (C, K) Концентрациите на BUN са измерени в плазмата. (D) Белодробни срезове (3 μm) бяха оцветени с H&E. (E, F) Експресията на Ly6G в белодробната тъкан се анализира чрез Western blotting. GAPDH се използва като контрола на натоварването. Плътностите на лентите бяха измерени с помощта на софтуера ImageJ. (G, H) Концентрацията на IL-6 се измерва в плазмата и BALF. (I, J, L, M) Концентрацията на протеин и общият брой клетки бяха измерени в BALF. (K – M) Мишките бяха умъртвени 4 часа след 35 или 45 минути исхемия. Резултатите са изразени като средни стойности ± SEM (n=3–6). *p < 0.05="" срещу="" фалшиво.="" †p="">< 0,05="" спрямо="" 4="" часа="" след="" исхемия="" или="" исхемия="" за="" 35="">

2. ИР на бъбрекапричинява разрушаване на ресничките на белодробните епителни клетки и тези фрагменти се освобождават в BALF.

Срезове от белодробна тъкан и предметни стъкла, натоварени с BALF, бяха имунооцветени с анти-ADP-рибозилиращ фактор, подобен на протеин 13B (Arl13B, маркер на ресничките) антитяло. Arll3B положителни сигнали се наблюдават върху луминалната част на алвеолите и крайните бронхиоли на белия дроб (Фигура 2А). Загуба на Arl13B-положителен сигнал се наблюдава в белия дроб набъбрекМишки, подложени на IR (Фигура 2А). Тази загуба на Arll13B-положителен сигнал постепенно нараства след товабъбрекисхемия във времето (фиг. 2А). В BALF се наблюдават различни дължини на Arl13B-позитивни частици след бъбречна исхемия и броят на Arl13B-положителни частици в BALF постепенно се увеличава с течение на времето след исхемия (Фиг. 2B и C). Експресията на Arl13B, ацетилиран -тубулин (ac- -тубулин, гранулоцити и неутрофили) в белодробната тъкан се наблюдава по начин, зависим от времето на реперфузия (Фиг. 1E и F). Концентрацията на интерлевкин-6 (IL-6) в плазмата се повишава следбъбрекIR, пик на 4 часа след исхемия (фиг. 1G). Концентрациите на I-6 и протеин, както и общият брой клетки в BALF постепенно се повишават на 4 и 24 часа след бъбречна исхемия (Фигура 1H-J). Степента на преживяемост след 24 часа след 35 минути IR на бъбреците е приблизително 92 процента (данните не са показани).

Когабъбрекисхемичното време е удължено до 45 минути, пост-исхемичните увеличения на концентрацията на BUN в плазмата и концентрацията на общия протеин и броя на клетките в BALF са по-големи от тези след 35 минути исхемия (Фигура 1K-M). Тези данни показват, че белодробното увреждане, предизвикано отбъбрекIR нараняването зависи от степента набъбрекнараняване.

Фиг. 2. Разрушаване в ресничките на белодробните клетки и техните фрагменти и протеини, освободени в BALF след IR на бъбреците.C57BL/6 мъжки мишки бяха подложени или на 35 минути двустранна бъбречна исхемия, или на фиктивна операция. Белодробната тъкан и BALF бяха събрани 4 и 24 часа след операцията, както е описано в Материали и методи. (A) Белодробни срезове (5 μm) бяха подложени на имунофлуоресцентно оцветяване с помощта на анти-Arl13B антитяло; зеленото показва Arl13B-положителен. DAPI оцветяване (4′,6-диамидино-2-фенилиндол; синьо) се използва за визуализиране на ядрата на клетките. Върховете на стрелките показват ресничките. (B) BALF (10 ul) се поставя върху предметно стъкло, което се оцветява имунофлуоресцентно, като се използва анти-Arl13B антитяло; зеленото показва Arl13B-позитивен (n=3). (C) Броят на Arl13B-позитивните частици се преброява под флуоресцентен микроскоп (n=3). (D–G) Arl13B, ацетилиран - -тубулин (ac- -tub) и -тубулин (-tub) експресии в BALF бяха анализирани чрез Western blotting. Плътностите на лентите бяха измерени с помощта на софтуера ImageJ. Резултатите са изразени като средни стойности ± SEM (n=3). *p < 0.05="" срещу="" фалшиво.="" †p="">< 0,05="" спрямо="" 4="" часа="" след="" исхемия.="" a:="" алвеоли,="" tb:="">

3. ИР на бъбреците повишава нивата на супероксид и оксидативен стрес както в белодробната тъкан, така и в BALF.

БъбрекIR повишава нивото на супероксид в белодробната тъкан (Фигура 3A), докато намалява експресията на IDH2 (Фигура 3B и C), но не и MnSOD и каталаза (Фигура 3B.DE). Тези констатации показват, че увреждането на белия дроб, предизвикано от IR на бъбреците, е свързано с повишаване на нивата на ROS иоксидативен стресв белите дробове. В подкрепа на това, нивото на 4-хидрокси номинал (4-HNE), продукт на липидна пероксидация, в белодробната тъкан значително се повишава 4 и 24 часа следбъбрекисхемия(Фиг.3F-D). 4-HNE се наблюдава в почти всички области на белодробната тъкан, включително алвеолите и бронхиолите (фиг. 3H и D. Освен това, експресията на 8-хидрокси-2'-дезоксигуанозин ({{ 7}}OhdG), добре известен маркер за окисление на ДНК като окислено производно на дезокси-гуанозин, увеличен както в цитозола, така и в ядрата в белодробните епителни клетки следбъбрекисхемия (Фиг. 3J и K. При BALF експресията на 4-HNE също се увеличава следбъбрекисхемияпо начин, зависим от времето на реперфузия (фиг. 3L, M). Освен това, когато времето на бъбречна исхемия се удължи до 45 минути, пост-исхемичното увеличение на експресията на 4-HNE в белите дробове е по-голямо от това след 35 минути набъбрекисхемия (фиг.3N, O). Тези резултати показват, че както митохондриалната ДНК, така и ядрената ДНК са окислително увредени от повишено образуване на ROS и увреждания в системите за отстраняване, което предполага, че увреждането на ресничките на белодробните епителни клетки е свързано соксидативен стрес.

Фиг. 3. Оксидативен стрес в белодробната тъкан след IR на бъбреците. C57BL/6 мъжки мишки бяха подложени на 35 (A–O) и 45 (N, O) минути двустранна бъбречна исхемия или фиктивна операция.Бял дроб ибъбрекбяха събрани 4 и 24 часа след 35 минути или 45 минути исхемия. (A-M) Мишките бяха умъртвени или 4, или 24 часа след 35 минути исхемия. (A) Нивото на супероксид в белодробната тъкан се измерва, както е описано в Материали и методи (n=3–5). (B–E) експресията на IDH2, каталаза и MnSOD в белодробната тъкан се анализира чрез Western blotting (n {{10}}). GAPDH се използва като контрола на натоварването. (C–E) Плътностите на лентите бяха измерени с помощта на софтуер ImageJ. (F, G) 4-HNE експресията в белия дроб се анализира чрез Western blotting и плътността на лентата се измерва с помощта на ImageJ (n=4). (H–K) Белодробни срезове (3 μm) бяха имунохистохимично оцветени с помощта на анти-4-HNE и 8-OHdG антитела и обратно оцветени с помощта на хематоксилин; кафявото означава 4-HNE- и 8-OHdG-положителни (n {{20}}). (I, K) Интензитетите на 4-HNE- и 8-OHdG-позитивните сигнали бяха измерени с помощта на програмата i-Solution (n=3). (L, M) 4-HNE експресията в BALF беше анализирана чрез Western blotting и плътността на лентата беше измерена с помощта на ImageJ (n=3). (N, O) Мишките бяха умъртвени 4 часа след 35 минути или 45 минути исхемия. 4-Експресията на HNE в белия дроб беше анализирана чрез Western blotting и плътността на лентата беше измерена с помощта на ImageJ (n=3). Резултатите са изразени като средни стойности ± SEM (n =3–5). *p <0,05 спрямо="" фалшиво.="" †p=""><0,05 спрямо="" 4="" часа="" след="" исхемия="" или="" 35="" минути="" исхемия.="" (за="" тълкуване="" на="" препратките="" към="" цвета="" в="" тази="" легенда="" на="" фигурата,="" читателят="" се="" препраща="" към="" уеб="" версията="" на="" тази="">

В клетките, митохондриите. основна вътреклетъчна органела, произвеждаща ROS, обикновено претърпява сливане и делене, за да се адаптира към физиологични и патологични условия. Нарушаването на тези процеси на сливане и делене може да предизвика клетъчна дисфункция и увреждане[36]. Предишни проучвания показват товаокислителенстресуврежда нормалната динамика на митохондриалното сливане и делене, което води до митохондриална дисфункция и клетъчно увреждане [32, 36-38]. Ние се опитахме да оценим динамиката на митохондриите чрез определяне на протеинови експресии на митохондриално делене и сливане. Експресиите на Fis1 и Drp1, които регулират митохондриалното делене, са значително повишени в белите дробове на мишки сбъбрекисхемия(Фиг.4A-C). Въпреки това, експресията на OPA1, която регулира митохондриалното сливане, не е значително променена от IR на бъбреците (фиг. 4A, D). Тези данни показват, че балансът на митохондриалното сливане и делене в белодробните клетки е нарушен в резултат на AKI (Остра бъбречна травма).

Фиг. 4. Промяна в митохондриалната динамика в белия дроб след IR на бъбреците. C57BL/6 мъжки мишки бяха подложени или на 35 минути двустранна бъбречна исхемия, или на фиктивна операция.Белите дробове се събират 4 и 24 часа след исхемията. (A-D) Експресиите на Drp1, Fis1 и OPA1 в белодробните тъкани бяха анализирани чрез Western blotting. GAPDH се използва като контрола на натоварването. Плътностите на лентите бяха измерени с помощта на софтуера ImageJ. Резултатите са изразени като средни стойности ± SEM (n=4). *p < 0.05="" срещу="" фалшиво.="" †p="">< 0,05="" спрямо="" 4="" часа="" след="">

4. Специфичното за митохондриите антиоксидантно лечение намалява увреждането на белите дробове, предизвикано от инфрачервени лъчи, и разрушаването на белодробните реснички.

За потвърждаване на ролята на митохондриалнитеокислителенстресНабъбрекИндуцирано от IR белодробно увреждане и разрушаване на ресничките на белодробните епителни клетки, тествахме дали предварителната обработка (фиг. 5A-D или последваща обработка (фиг. 5J-L) с Mito-TEMPO, специфичен за митохондриите антиоксидант, инхибира индуцираната от бъбреците IRокислителенстрес, производство на I-6 и децилиация в белите дробове на C57BL/6 мъжки мишки. Предварителното третиране (Фигура, 5A-D), но не и последващото третиране (Фигура 5J-L), с Mito-TEMPO, значително инхибира повишаването на концентрациите на BUN и IL-6 в плазмата (Фигура 5A и B) като както и концентрацията на IL-6, общата протеинова концентрация и общия брой клетки в BALF (Фигура, 5C-E). Експресиите на Arl13B, ac- -тубулин и -тубулин в BALF на мишки, третирани предварително с Mito-TEMPO, са по-ниски от тези при мишки, третирани с носител (фиг. 5F-I). В това проучване, a 6-h след лечението не предпазва белите дробове отбъбрекIR (фиг.5J-L). Тези резултати показват, че ранното производство на ROS, неговото натрупване иокислителенстресможе да допринесе значително за AKI (Остра бъбречна травма)- предизвикано белодробно увреждане. Нивата на супероксид и експресията на 4-HNE в белодробната тъкан (Фиг. 6A-C) и в BALF (Фиг. 6D и E) са по-ниски при мишки, третирани с Mito-TEMPO, отколкото при мишки, третирани с носител. Тези резултати показват, чебъбрекИндуцираното от IR белодробно увреждане и децилиацията на белодробните епителни клетки са свързани с митохондриалниокислителенстрес.

Фигура 5. Предотвратяване на бъбречно IR-индуцирано увреждане на белия дроб и разрушаване на ресничките от Mito-TEMPO, антиоксидант, насочен към митохондриите. C57BL/6 мъжки мишки бяха подложени на 35 минути двустранна бъбречна исхемия.На някои мишки е приложен Mito-TEMPO (Mito-T, 0.7 mg/kg BW, ip) или 17 и 1 час преди исхемия, два пъти, (A–I) или 6 часа след исхемия (J– L). Бял дроб, BALF и кръв бяха събрани 24 часа след исхемията. (A, J) Измерена е концентрацията на BUN в плазмата. (B, C) Концентрациите на IL-6 в плазмата и BALF бяха измерени с помощта на комплекта за анализ ELISA. (D, E, K, L) Концентрацията на протеин и броят на клетките в BALF бяха измерени. (F–I) Arl13B, ацетилиран {{10}}тубулин (ac- -tub) и -тубулин (-tub) експресии в BALF бяха анализирани чрез Western blotting. Плътностите на лентите бяха измерени с помощта на софтуера ImageJ. Резултатите са изразени като средни стойности ± SEM (n=4). *p <0,05 спрямо="">

НАТИСНЕТЕ ТУК ЗА ЧАСТ Ⅱ