Ефект на интравенозния глутамин върху Caspase-12 Израз в апоптозата на гломерулните епителни клетки на мъжки плъхове, изложени на цисплатин

Контакт:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Тамара Aulia Fakhrinnisal,Имам Сусило,Арифа Мустика, Мияю Сонета Софян

Въвеждането

Разпространението на метаболитни заболявания в Индонезия, особено бъбречно заболяване, проявява висока тенденция. Въз основа на данните от 2017 г. на Администриращата агенция за здравно осигуряване(BPJS), държавата покрива 3 657 691 регистрирани случая на хронични процедури за диализа на бъбречни заболявания с общ разход за покритие на IDR 3,1 трилиона. Една от етиологиите при бъбречна недостатъчност е трайното увреждане на нефроните чрез токсини.

Цисплатин е мощен химиотерапия лекарство, което се използва широко за широкоспектърна терапия за злокачествени заболявания, включително главата и шията, хранопровода, пикочния мехур, тестисите, яйчника, гърдата, и недребноклетъчни белодробни ракови заболявания(Fillipski et al.,2008; Рек и др.,2010). Въпреки това, клиничното приложение на цисплатин е ограничен поради високите орган токсичност ефекти, като нефротоксичен, невротоксични, ототоксични, и хепатотоксични ефекти(Karasawa, and Steyger, 2015; Guo et al.,2018). Цисплатин причинява апоптоза при по-ниски дози(10-100uM)и некротична клетъчна смърт при по-високи дози (200-800 μM)(Ханиган и Девараджан, 2003)Повече от 70% от педиатричните пациенти, получили цисплатин, получават бъбречна дисфункция(Skinner et al.1998). Освен това, остра бъбречна травма се случва при 20-30% от всички приложени пациенти (Miller et al.,2010). Бъбречната дисфункция обикновено започва няколко дни след стандартната доза цисплатин(50-120 mg/m²)приложение и се изразява чрез нарастващите нива на серумно създаване Азот от урея в кръвта (Akcay et al.2010), лечението с цисплатин индуцира масивна тръбна дилатация и образуване на отливки в няколко тубулни лумена. Фокална тръбна некроза, сгъстяване на основната мембрана на бъбречните тубули и капсулата на Боуман, и фокална мононуклеарна клетъчна инфилтрация се наблюдават от време на време, както и. Възниква и бъбречно тръбно увреждане, заедно с вакуолизация и десквамация на епителните клетки. Някои гломерули изпитват некроза и нормални остатъчни гломерули често показват разширени перигломерулни пространства.

acteoside при цистанш имат добри ефекти върху бъбреците

Един от нефротоксични механизми на цисплатин е апоптоза, която е програмиран клетъчен смъртен път, активиран от цисплатин чрез някои механизми. Цисплатин намалява Bcl-2 израз в митохондриалния път, който уж инхибира развитието на про-апоптотичните молекули(Oltvai и Korsmeyer, 1994). В пътищата на смъртния рецептор цисплатин активира fas-зависими пътища и апоптоза, или in vivo (Noga et al.,1998)или in vitro (Feldenberg et al.,1999). Цисплатин също активира каспазни пътища. Ролята на каспаза-3 се среща за първи път в култивираните тръбни проксимални клетки, които реагират на цисплатин чрез увеличаване на активността на каспаза-3 по зависим от дозата начин (Fukuoka et al,1998; Лау,1999). След проучвания са разкрили активирането на каспаза-9 и в по-малка степен активирането на каспаза-8 (Kaushal et al.2001:Park et al., 2001).

ИнтравенозноГлутамин(Gln или Q) е α-аминокиселина, използвана в протеиновата биосинтеза. Това е една от съставките за производство на глутатион, който е мощен антиоксидант. Единична доза отинтравенозен глутамин(0,15-0,75 g/kg)може да увеличи hSP израза, да намали нараняването на крайните органи и да подобри процента на преживяемост от септичен шок при мишки (Wischmeyer, 2002).ИнтравенозноГлутаминсъщо така повишена съдова реактивност чрез предизвикване hSP израз и инхибиране на освобождаването на възпалителни цитокини и пероксид биосинтеза при LPS шок мишки (Jiang et al.. 2017).ИнтравенозноГлутаминможе също така да намали апоптозата чрез инхибиране на оксидативния стрес, както се наблюдава от резултатите от изпитванията с използване на мишки с колит, предизвикани от а2,4,6-тринитробензен сулфонова киселина (Crespoet al.2012)

Нивата на каспаза-12 в гломерулния епител не са проучени, въпреки че времето на излагане на токсина, получен на гломерулус, е високо и епителните клетки са изложени първо след това тубулите. Проучване показва, че капсулите на Боуман имат роля във физиологичната функция на нормалния гломерулус. Подоцитното нараняване стимулира активирането на капсулните париетални клетки на Боуман, които се простират в гломерулната греда, което води до сегментна и глобална склероза чрез производство на повече матрици и унищожаване на лумена на гломеруловата капилярка(Al Hussain et al.,2017).

Това проучване има за цел да анализира нефропротективния ефект наинтравенозен глутаминвърху гломерулните епителни клетки апоптоза чрез изследване на експресията на каспаза-12, която е инициатор на апоптоза в ендоплазмения ретикулум стрес път. Про-каспаза-12 се намира в ендоплазмения ретикулум, особено в проксималните тубули на бъбрека. Theинтравенозен глутаминсе очаква да бъде алтернативно решение за бъбречна недостатъчност, причинено от цисплатин химиотерапия модалности.

Материали и методи Животни и лечение

Това изследване е одобрено от Комитета по етика на здравните изследвания към Училището по медицина Universitas Airlangga (No.25/C/KEPKFKUA/2020). В това изследване, 30 мъжки бели плъхове(Rattus norvegicus), на възраст 2-3 месеца с телесно тегло от 150-200 грама са получени от експериментална животинска единица на Факултета по ветеринарна медицина, Universitas Airlangga. Всеки от тях се държеше отделно в анапластична кутия, облицована с люспа в дъното, а след това покрита с тъкани проводници отгоре. Хъсовете се сменяха всеки ден.

Химикали

TheИнтравенозноГлутамине получена от Serva(Германия). TheИнтравенозноГлутаминразтвор е приготвен в 0,9% NaCl, с доза l g глутамин в 10 mL от0,9% NaCl. Дозата на глутамин се инжектира 100mg/kg телесно тегло(BW)и еднократна инжекция се прави максимум 0,2 mL IV. TheИнтравенозноГлутамине инжектиран интравенозно в опашката на плъха с помощта на 1 mL 27-ма габаритна спринцовка.

Цисплатиновият материал е получен от Kalbe Farma (Индонезия), с доза от 20 mg/kg BW, приложена чрез интраперитонеална инжекция с помощта на I mL 27-габаритна спринцовка. Също така използвахме Първични антителаКаспаза-12 (Поликлонално антитяло PA5-27094 Thermo Scientific)и Апоптоза откриване комплект в Situ CellPOD(11684817910ROCHE).

Експериментален дизайн

В това изследване, 30 Wistar мъжки бели плъхове са били случайно разделени на три групи в началото на изследването. Контролната група (ОП) е пожертвана от цервикален дислокация след анестезия с етер и след това бъбреците са взети за имунохистохимия подготовка.

На ден 7 групата P1 е приложена с цисплатин в единична доза от 20 mg/kg BW чрез интраперитонеална инжекция и след това се наблюдава за 72 h. Плъховете са пожертвани на 10-ия ден от цервикален дислокация след анестезия с етер, а след това бъбреците са взети за имунохистохимия подготовка. Времето за изпълнение се дължи на гломерулните епителни клетки апоптоза се появява след инжектиране на цисплатин на ден 10(Tsuruya et al.. 2003 г.). Групата P2 е приложена сИнтравенозноГлутаминв доза от 100 mg/kg BW веднъж дневно чрез интравенозна инжекция от ден 1 до ден 7(Zhang et al.2009). На ден 7 плъховете са приложени с цисплатин в единична доза от20 mg/kg BWvia интраперитонеална инжекция. Впоследствие плъховете се наблюдават за 72 ч и след това се жертват на 10-ия ден чрез цервикален дислокация след анестезия с етер. По-късно бъбреците са взети, както и за имунохистохимията препарат.

Хистопатологична подготовка

Бъбречната тъкан е фиксирана в 10% формалин за15-24 ч. Дехидратацията е извършена за 60 минути с помощта на серията алкохол (30%,50%,70%,80%,96%, и абсолютна концентрация)за предотвратяване на всякакви промени в тъканната морфология. След това, изчистването с помощта на ксилол е извършено два пъти(60 мин всеки). Впоследствие инфилтрацията с нежен парафин е извършена за 60 min при 48°C°C. По-късно твърдият парафин е блокиран в мухъла и се съхранява за l ден. На следващия ден втвърдените бяха поставени върху държача и нарязани на 4-5-ум-дебели секции с помощта на ротационен микротом. След това монтажът към стъклото на предмета е извършен с поли-L-лизин покритието. Монтираната тъкан е потопена в ксилол два пъти(5 мин всяка). След това рехидратацията се извършва с помощта на серията алкохол (абсолютни,96%,80%,70%,50%,и 30%концентрация)за5 мин, съответно. След това, тя е изплакната в dH, O за 5 мин.

Имунохистохимичен асай на CSP12

Пързалките са измити веднъж с фосфат-буфериран физиологичен разтвор(PBS)(Millipore 524650) при рН 7,4 за 5 мин три пъти. Блокирането на ендогенния пероксид е пренесено с помощта на 3% H2O2 за 20 мин. След това слайдовете отново бяха измити със същата процедура преди блокиращата обработка. Неспецифичния протеин блокиране е направено с помощта на 5% PBS(Millipore 524650)съдържащ0.25%TritonX-100 (Сигма-Алдрич T8787)и след това повторете процедурата за измиване. Инкубацията на първични антитела каспаза-12(Поликлонално антитяло PA5-27094 Thermo Scientific)е направено за една нощ при 40°C. След това слайдовете са измити с помощта на PBS(Millipore 524650), pH 7.4, три пъти за 5 мин всеки. Инкубацията, използваща антимишка биотин-конюгирана, е направена за 1 ч при стайна температура след това процедурата за измиване се повтаря. Инкубацията с помощта на streptavidin-кон репички пероксидаза (Thermo Fisher Scientific NI00)е направено за 40 мин и след това се измива още веднъж. След това слайдовете са добавени с капки с диам в бензидин (DAB)(Thermo Fisher Scientific 3400)и инкубирани за 10 мин и след това се измиват с подобна процедура. Контразадържането използваше хематоксилин разтвор на Майер (Sigma-Aldrich MHS32)за 10 мин, след което се измива с помощта на чешмяна вода, изплакнат с dH2O, и въздушно изсушен. Подготвените слайдове са наблюдавани с помощта на лек микроскоп при увеличение от 400×след монтиране и покрито със стъклен капак. Положителният молекулярен израз с първични антитела би изглеждал кафяв, когато се наблюдава. Изчислените гломерулни епителни клетки са били разположени в областта на бъбречния корпус, белязани от плосък слой епителни клетки в париеталната част на пространството на Боуман.

Изследване на апоптозата

Тъканната депарафинизация е извършена чрез три пъти измиване на тъканта с ксилен (Supelco 108297) в продължение на 5 мин. Тъканта е напоена два пъти в абсолютен етанол за 5 мин всеки и след това се прехвърля на 95% етанол и 70%етанол за 3 мин всеки. Тъканта е измита с PBS (Millipore 524650) за 5 мин.

Усвояването на антигена е направено чрез даване на протеиназа К (Сигма-Олдрих 70663) за 15 мин на пробата. След това, тъканта е измита два пъти с HO в Коплин тръба за 2 мин. Ендогенната пероксидаза е отстранена чрез капене на 3% H, O, PBS и оставена за 5 мин при стайна температура. След това тъканта е измита два пъти с PBS(Millipore 524650)за 2 мин всеки в Коплин тръба. Излишната течност беше изсушена с помощта на хартия. Около 75 ул буфер за равновесие е изпуснат върху тъканта и след това се инкубира за 10 мин при стайна температура. След това течността около тъканта е изсушена с помощта на хартия. Ензимната активност е намалена с 55ul/5 cm в тъканта на TdT(Sigma-Aldrich SAB5600268). и след това тъканта е инкубирана при 37°C в влажнен съд за l h. Препаратите са поставени в буркан coplin, съдържащ силна буферна/почистваща работа и след това инкубирани за 10 мин при стайна температура. Препаратите са измити четири пъти с PBS(Millipore 524650)за 2 мин в Коплин буркан при стайна температура. Излишната течност около тъканта беше изсушена с помощта на хартия. Анти-дигоксигенин (Roche 11333089001)конюгат, който преди това е бил отстранен от съхранение и затоплен до стайна температура, е изпуснат на тъканна повърхност от65 ул/5 см² и след това инкубиран за 30 мин при стайна температура. Препаратът е измит четири пъти с PBS (Millipore 524650)в буркан coplin за 2 мин при стайна температура. След това излишната течност около тъканта беше изсушена с помощта на хартия. Цветът е бил изложен след пероксидазния субстрат(Sigma-Aldrich CPS160)капки от75μl/5cm2 на повърхността на тъканта и оставен за 10мин при стайна температура. Препаратите бяха измити три пъти с DH, O за i min в Коплин буркани и след това инкубирани с DH, Oin Coplin буркани за5 мин при стайна температура. Метилзеленото противодействие (Сигма-Олдрих М8884) е извършено за 30-те години при стайна температура. След това препаратът се измива три пъти с dH.O за 1 мин в Коплин ар. Препаратите са почистени с ксилен(Supelco 108297), а излишната течност около тъканта е изсушена с помощта на хартия. Препаратите са наблюдавани с помощта на лек микроскоп при увеличение от 400× а кафявите епителни клетки от гломерулния бъбречен епител са преброени във всяко зрително поле.

Статистически анализ

Съотношението беше използваната скала за данни за каспаза-12, изразяваща клетки и апоптотични клетки, така че беше необходимо да се проведе тест за нормалност с помощта на теста Shapiro-Wilk (α=0,05)и тест за хомогенност с помощта на теста Leaven (α=0,05). Ако резултатите са били в нормалното разпределение и хомогенни, тогава е проведено различно изпитване с помощта на еднопосочна ANOVA (α= 0,05). Ако резултатите са били нормални, но разнородни, тогава проведеният тест е Kruskal-Wallis(α=0,05). Ако е имало разлика в получените данни. след това анализът е последван от теста Mann-Whitney U (α= 0,05). В крайна сметка тестът за корелация на Пиърсън е проведен, за да се разбере съответствието между каспаза-12, изразяващи клетки и апоптотични клетки.

Резултати

Гломерулни епителни клетки Морфология

Преди да се наблюдават каспаза-12 експресиращи клетки и апоптотични клетки, морфологията на капсулата на Боуман бъбречна епител първо се наблюдава с хематоксилин-еозин (HE) оцветяване при увеличение 400×. Наблюдаваният обект е избран произволно, за да представи хистологичната картина на всяка група. Цисплатинът от време на време се среща при фокална тръбна некроза, удебеляването на основната мембрана в бъбречните тубули и капсулите на Боуман, и инфилтрацията на фокалните мононуклеарни клетки в гломерулус. Някои гломерули изпитват некроза и нормални остатъчни гломерули често проявяват разширени перигломерулни пространства.

Каспаза-12 Протеин експресия и апоптотични клетки в гломерулните епителни клетки

Резултатите от имунохистохимично оцветената бъбречна тъкан проявяват промени в експресия на каспаза-12 във всяка група. Приложението на инжектиране на цисплатин в група P1 проявява по-висок среден израз на каспаза-12 след 72 h(4.1±0.86), когато се сравнява с контролната група (P0). Приложението на инжектиране на глутамин и инжекция с цисплатин (P2)проявява по-нисък среден израз на каспаза-12 след 72 h (2,54± 0,72)при сравнение с P1 (Таблица 1).

Освен това, цисплатин инжекция в група PI проявява по-висок процент на клетъчна апоптоза след 72h(52.7±17.06), когато се сравнява с контролната група (P0). Приложението на инжектиране на глутамин и цисплатин инжекция в P2 проявява по-нисък среден израз на каспаза-12 след 72 ч (31.5±6.73), когато се сравнява с PI(Таблица 1). Тестът Kruskal-Wallis посочва разликите в броя на гломерулните епителни клетки, изразяващи каспаза-12 и в броя на апоптотичните клетки в трите групи на лечение. Впоследствие тестът Mann-Whitney U заключава, че има разлики в броя на париеталните епителни клетки, изразяващи каспаза-12 протеин и в броя на апоптотичните клетки между групите P1 и P2 с контролната група и между групите Pl и P2. Имаше и разлики в броя на париеталните епителни клетки, изразяващи каспаза-12 протеина и броя на клетъчната апоптоза(Таблица 2).

Корелацията между клетките на израза Capase-12 и апоптотичните клетки

Резултатите от тестовете за корелация на Пиърсън показват, че съществува значителна корелация между гломерулните епителни клетки, изразяващи каспаза-12, и броя на клетките, подложени на апоптоза с коефициента на корелация от 0,707, което е силно и положително. По този начин може да се заключи, че ако броят на клетките за експресия на протеини намалява, броят на апоптотичните клетки също намалява и обратно.

Таблица 1. Описателна статистика на Каспаза-12 израз и апоптотични клетки. P0: контролна група. Р1:цисплатининжектиране на 7-мия ден. P2 е лекуван сИнтравенозноГлутамининжектиране 7 дни подред, преди да ви инжектиратцисплатинна 7-мия ден.	Таблица 2. Ман–Уитни U Резултатите от теста

Разискване

В това проучване лечението е извършено при експериментални животни, които са разделени на три групи: контролната група(ОП); групата pi, която е получила интраперитонеална инжекция цисплатин; и групата P2, които са получили интраперитонеална инжекция с цисплатин иинтравенозен глутамининжекция. Отговорът на лечението е наблюдаван за 72 h след лечението, защото апоптозата е била очевидна след 72 h инжекция цисплатин (Tsuruya et al.. 2003). Мястото, наблюдавано в това проучване, е гломерулният епител. Досега все още няма изследвания върху цисплатиновата нефротоксичност в гломерулния епител. Гломерулусът е по-проксимален от тубулите и затова се смята, че е засегнат от цисплатиновата нефротоксичност по-рано от тубулите.

Разликите в нивото на изразяване на каспаза-12 са били пряко пропорционални на нивото на приложение на глутамин при всяко лечение. Тези резултати са подкрепени от проучване, което заяви, че глутамин може да предизвика високи нива на HSP експресия във всички органи, включително бъбреците(Zhang et al.,2009). Единична доза отинтравенозен глутаминможе да увеличи hSP израза, да намали нараняването на крайните органи и да подобри преживяемостта от септичен шок при цели мишки(Wischmeyer,2002). Цитопротективните и антиоксидантни свойства на глутамин могат да бъдат от решаващо значение в ситуации с висок катаболизъм, където активността и изразяването на възпалителни пътища, медиирани от NF-kB, са модулирани(Cruzat et al.,2014). Съобщава се, че намалената наличност на плазмен глутамин причинява намаляването на лимфоцитната пролиферация, нарушава изразяването на повърхностните активирани протеини и производството на цитокини и предизвиква апоптоза в клетките (Roth. 2008). Това е, което може да бъде причината глутамин може да предотврати клетките към апоптоза в това проучване.

Както бе споменато в резултатите, приложението на глутамин намалява апоптозата на клетките, третирани с цисплатин. Това е доказано за противното в проучване от Kadri et al. (2017), където потискането на метаболизма на глутамин може да увеличи цитотоксичен потенциал на някои терапевтични лекарства, като цисплатин, като по този начин позволява намаляване на химиотерапевтични съединения доза за минимизиране на токсичността и нежеланите реакции.

Механизмите на клетъчната смърт зависят от дозата на приложение на цисплатин, или от некроза или апоптоза (Lieberthal et al,1996). В ин витро експерименти, ниски концентрации на цисплатин причиняват клетки да претърпят апоптоза, докато некроза при високи концентрации (Megyesi et al.1998: Рамеш и Рийвс.2003). В това изследване дозата е била достатъчна, за да накара епителните клетки да преминат апоптоза.

В настоящото проучване инжектирането на цисплатин в Р1 проявява по-висока скорост на клетъчна апоптоза след 72 h в сравнение с контролата(PO). Също така установихме, че инжектирането на глутамин и цисплатин в Р2 изразява по-нисък израз на каспаза-12 след 72 h в сравнение с P1.

Апоптозата след лечение с цисплатин може да включва и ER-стрес пътя. Каспазният инициатор в ER пътеката е каспаза-12, който е локализиран на цитозолното лице на ER и активиран от ER налягането(Boyce и Yuan,2006). Caspase-12 се активира по време на лечението на цисплатин в LLC-PK1 клетки (Liu и Baliga,2005). Наблюденията in vitro наскоро бяха разширени до миши модели на цисплатинова нефротоксичност, където бяха наблюдавани ER напрежения и свързана сигнализация, като разцепване на каспаза-12 (Peyrou et al.,2007).

Може да се заключи, че апоптозата, дължаща се на цисплатин приложение се появява поради повишената експресия на каспаза-12, което индуцира апоптоза в бъбречните гломерулни епителни клетки. При 72 h наблюдение слединтравенозен глутаминприложение, честотата на апоптоза в бъбречните гломерулни епителни клетки е значително инхибирана(p<0.0001)between the="" groups="" and="" was="" directly="" proportional="" to="" the="" effect="" of="" glutamine,="" which="" inhibited="" the="" expression="" of="">

В заключение, въз основа на резултатите, има намаляване на изразяването на каспаза-12 и апоптотични клетки в гломерулните епителни клетки на мъжки бели плъхове, изложени на цисплатин слединтравенозен глутаминадминистрация. Понижената експресия на каспаза-/2 приинтравенозен глутаминприложение е последвано от намаляване на апоптозата в гломерулния епител. По този начин се предполага, че имунохистохимичният преглед върху бъбречния гломерулен епител може да се използва като маркер за нефротоксичен ефект на цисплатин.

Ограничението на това проучване е различни променливи не са наблюдавани. Изследователят не направи наблюдения към изпълнителя каспаза(каспаза-3)защото изследователят искаше да види значението на лечението се извършва в инициатора каспаза. Това проучване също не видя честотата на апоптоза през два или повече маршрута. В този случай изследователят иска първо да се опита да мине през един маршрут и няма нужда да се изучава повече от един маршрут, ако резултатите са значителни. Предлага се също така да се направят допълнителни изследвания за прилагането наинтравенозен глутамининтравенозно за хора, получаващи цисплатинова химиотерапия, а също и върху лечението при животното с рак, така че да може да се наблюдава ефектът на глутамин при ракова група и неракови.

Фигура 1. Гломерулни епителни клетки Морфология след CSP-12 Антитяло. P0:контролна група. P1:цисплатин инжекция на 7" ден. P2, лекувани синтравенозен глутамининжектиране в продължение на7 дни подред, преди да бъде заразен с цисплатин на 7"h ден. Положителният резултат, показан с кафява цитоплазма.	Фигура 2. Морфология на гломерулните епителни клетки след Апоптоза откриване комплект. ОП: контролна група. P1:цисплатин инжекция на 7" ден. P2, лекувани синтравенозен глутамининжектиране в продължение на 7 дни подред, преди да се инжектира с цисплатин в 7-те дни. Положителният резултат, показан с кафява цитоплазма.

Препратки

1. Акчая, Туркменски К, Лий Д, Еделщайн CL(2010). Актуализация на диагностиката и управлението на остра бъбречна травма. Int J Нефрол Реноваск Dis, 3,129-40

2. Ал Хюсеин Т, Ал Мана Х, Хюсеин М, Ахтар М (2017). Подоцит и париетални епителни клетъчни взаимодействия в здравето и болестта. Ейди Анат Патол,24,24-34.

3. Бовче М. Юан Й(2006). Клетъчен отговор на ендоплазмен ретикулум стрес; въпрос на живот или смърт. CellDeathДифер, 13,363-73

4. Креспо I, Сан-Мигел Б, Прауз C.et ал (2012). Глутамин лечение атенуати ендоплазмен ретикулум стрес и апоптоза в TNBS индуцирана колит. PLoS One,7,50407 Крузат VF,BittencourtA,Scomazzon SP, et al (2014). Устни свободни и дипептидни форми на глутамин добавки атенюат оксидативен стрес и възпаление йон, предизвикани от ендотоксемия. Хранене, 30,602-11

5. Фелденберг LR,Thevananther S,Дел Рио М, Де Леон М, Девараджан P(1999). Частично atp изчерпване индуцира Fas-и каспаза-медиирана апоптоза в MDCK клетки. Am.J/ Физиол (бъбречна физиол),276.837-46.

6. Филлипски КК,Лоос WJ, Вервай J, Спаребум А(2008). Взаимодействие на цисплатин с човешкия органичен цитат транспортер 2. Клин рак ВЕИ,15,3875-80

7. Фукуока К, Такеда М, Кобаяши М и др(1998). Обособен интерлевкин-1β-конвертиращ ензим семейството протеази посредничи цисплатин-и стауроспорин индуцирана апоптоза на миши проксимални тубулни клетки. Живот Сей,62.1125-38.

8. Гуо Й, Уанг М,МуЖ,етал(2018). Pretreatmentofhuaiqihuang екстракт предпазва от цисплатин индуцирана нефротоксичност. Sci Rep,8, 7333

9. Ханиган МХ. Девараджан П(2003). Цисплатин нефротоксичност: Молекулярни механизми. Рак Ther,1,47-61

10. Jing L, Wu O, Уанг Ф(2017). Глутаминът индуцира топлинно-шоков протеин и предпазва от Escherichia coli

Бележка:горното не е пълен референтен списък