2 Методи за изпитване

2.1 Мрежов фармакологичен анализ

2.1.1 Активни съставки на Cistanche deserticola

Въз основа на съществуващи проучвания [7, 22], "Echinacoside", "Вербаскозид", "Цистанозид А", "Тубулозид А", "Изоактеозид", "2-Ацетилактеозид" и "Тубулозид Б" бяха избрани като биоактивни компоненти за анализ. Намерете данните за триизмерната химическа структура на горните седем съставки чрез Pubchem (https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/) и ги запазете в sdf формат.

2.1.2 Прогноза и скрининг на потенциални цели

Импортирайте файловете с триизмерна структура наактивни съставки в базата данни PharmMapper(http://lilab-ecust.cn/pharmmapper/index.html). Изберете „само човешки протеинови цели“ като целеви видове и запазете другите опции по подразбиране, за да получите съответните данни за различни съставки. Съответна целева цел.

Базата данни UniProt (https://www.uniprot.org/) беше използвана за получаване на информация за името на протеина и името на гена, съответстваща на всяка цел. Обединете целевите точки, съответстващи на 7-те компонента.

В базата данни GeneCards (https://www.genecards.org/) използвайте „възпалително заболяване на червата“ като ключова дума за търсене на гени, свързани с възпалително заболяване на червата, и организирайте резултатите от търсенето.

Cistanche добавка Противовъзпалителна поддържаща добавка PhGs75% Ech 30% Действие 12%

2.1.3 Взаимодействие протеин-протеин (PPI)

Изграждане на мрежа Използвайте jvenn (https:/jvenn.toulouse.inrae.fr/app/example.html), за да начертаете диаграма на Venn онлайн, за да получите пресечната точка на целите за активна съставка на Cistanche deserticola и цели за IBD. Качете получените цели за пресичане в базата данни String за скрининг анализ на PPI. Изтеглете TSV файла на мрежата PPI, импортирайте го в Cytoscape 3.8.0, изчислете стойността на степента на мрежата за взаимодействие на протеини и след това разкрасете диаграмата на мрежата PPI въз основа на стойността на степента.

2.1.4 Генна онтология (GO)

Функционално обогатяване и анализ на пътя на обогатяване на Енциклопедия на гените и геномите от Киото (KEGG) бяха извършени с помощта на базата данни DAVID (https://david.ncifcrf.gov/), за да се идентифицират целите на защитните ефекти на активните съставки на Cistanche deserticola върху IBD. Беше извършен GO анализ на точките и след това базата данни DAVID беше използвана за провеждане на анализ на обогатяване на пътя на KEGG върху мишените, където активните съставки на Cistanche deserticola играят защитна роля при IBD.

2.1.5 Изграждане на мрежата „активна съставка-мишена-път“ на Cistanche deserticola

Активните съставки на Cistanche deserticola, целите за пресичане на активните съставки на Cistanche deserticola и IBD и пътищата, обогатени с KEGG, бяха използвани за изграждане на мрежа от активна съставка-мишена-път.

2.2 Валидиране на животински модел

2.2.1 Създаване на животински модел

Използвани са мъжки мишки BALB/c с клас SPF (5~8 седмици, 18~21 g), предоставени от Центъра за тестване на здравословни храни към Училището за приложни изкуства и науки, Пекинския съюзен университет [Номер на лиценза за използване на експериментални животни: SYXK (Пекин) ) 2017-0038], Те бяха държани в стая за животни с SPF клас с температура (23±2) градуса, относителна влажност от 50% до 70% и 12 часа излагане на флуоресцентна светлина, редуващи се ден и нощ . Всички протоколи за експерименти с животни бяха одобрени от Лабораторията за животни към Центъра за тестване на здравословни храни, Училището за приложни изкуства и науки, Пекинския съюзен университет. След адаптивно хранене в продължение на 3 дни, 20 мишки бяха разделени на случаен принцип в 4 групи според телесното тегло, с 5 мишки във всяка група. ①Контролна група (CZ): пийте стерилна вода свободно и сондирайте стерилна вода в продължение на 7 последователни дни; ②DSS контролна група

(DZ): Безплатен за пиене 3% DSS разтвор, приготвен ежедневно в продължение на 7 последователни дни; ③ Група с ниска доза от общи гликозиди на Cistanche deserticola (LZ) (течна концентрация: 0.1 g/mL): Безплатен за пиене 3% DSS разтвор, приготвен ежедневно в продължение на 7 дни; , течност за сонда за 7 последователни дни; ④ Cistanche deserticola група с висока доза общи гликозиди (HZ) (течна концентрация 0.4 g/

mL): Пийте прясно приготвения 3% DSS разтвор всеки ден свободно и давайте разтвора чрез сонда в продължение на 7 последователни дни. След 7 дни непрекъснато моделиране, те бяха гладни в продължение на 12 часа и след това умъртвени чрез цервикална дислокация. Пилешки червени кръвни клетки бяха инжектирани интраперитонеално 4 часа преди екзекуцията. Веднага след екзекуцията очните ябълки са отстранени, за да се вземе кръв. Перитонеалната течност се извлича и коремната кухина се отваря. Измерена е дължината на дебелото черво и са отстранени далакът на мишката, възелът на Пейер и други органи.

Добавка Cistanche Противовъзпалителна поддържаща добавка

2.2.2 Индекс на активност на заболяването (DAI)

Мишките се претеглят преди интрагастрално приложение в определено време всеки ден и се наблюдават психическото състояние и фекалните свойства на мишките. Окултната кръв в изпражненията беше измерена и отбелязана съответно. Стандартите за оценка са показани в таблица 1. DAI резултат=(резултат за телесно тегло + резултат за фекален характер + резултат за фекална окултна кръв)/3 (1)

Таблица 1 Критерии за точкуване на DAI

2.2.3 Количествена PCR флуоресценция в реално време Откриване на имунен сигнален път (qRT-PCR)

Далаците на мишки бяха събрани, нарязани на 0.5 cm тъканни блокове и накиснати в стабилизиращ тъканна РНК разтвор за съхранение. Отстранете тъканта и я нарежете на парчета, добавете разтвор за екстракция на РНК и смелете на парчета, за да извлечете цялата РНК. След обратна транскрипция и PCR амплификация, беше открито активирането на два ключови имунни сигнални пътя, mTOR и TGF-, в далака на мишка. Праймерните последователности, използвани в qRT-PCR, са показани в Таблица 2.

Таблица 2 Таблица на последователността на праймерите