Gao-Zi-Yao подобрява функцията за учене и памет при стари плъхове със спонтанна хипертония, част 2

Опитни животни

Дванадесетмесечни и осемседмични мъжки плъхове със спонтанна хипертония (SHR) бяха закупени от Nanjing Animal Model Center.

Съществува силна връзка между 8-седмичните мъжки екземпляри и паметта. През този период мозъкът на мъжкото създание се развива бързо и връзките между невроните му постепенно се увеличават, което от своя страна се отразява на развитието на паметта му.

Изследванията показват, че паметта на мъжките същества продължава да се подобрява с възрастта. Това не само оказва значително влияние върху тяхното оцеляване и размножаване, но също така им помага да се адаптират по-добре към околната среда и да се справят с новите предизвикателства.

Следователно трябва активно да насърчаваме младите мъже да участват в различни полезни дейности, като решаване на пъзели, усвояване на нови умения и изследване на нови области. Тези дейности стимулират мозъците им, позволявайки им да се развиват по-бързо и да подобрят паметта си.

В същото време трябва да осигурим подходяща среда и атмосфера за младите мъжки същества. Като ги накарате да се чувстват сигурни и близки, това може да насърчи развитието на мозъка им и да подобри паметта им.

Накратко, трябва да направим всичко възможно, за да помогнем на младите мъже да подобрят паметта си, така че да станат по-умни, по-уверени и способни същества. Това е благоприятно не само за тяхното лично развитие, но и за просперитета и оцеляването на целия вид. Може да се види, че трябва да подобрим паметта и Cistanche deserticola може значително да подобри паметта, тъй като Cistanche deserticola има антиоксидантни, противовъзпалителни и анти-стареещи ефекти, които могат да помогнат за намаляване на оксидативните и възпалителни реакции в мозъка, като по този начин предпазват здраве на нервната система. В допълнение, Cistanche deserticola може също така да стимулира растежа и възстановяването на нервните клетки, като по този начин подобрява свързаността и функцията на невронните мрежи. Тези ефекти могат да помогнат за подобряване на паметта, ученето и скоростта на мислене и могат също така да предотвратят развитието на когнитивна дисфункция и невродегенеративни заболявания.

Щракнете върху познайте добавките за увеличаване на паметта

В този модел хипертонията започва да се развива на 4-месечна възраст с появата на свързани с хипертонията промени в мозъчната микроваскулатура на 6-месечна възраст [37].

Плъховете бяха настанени при оптимални условия със стандартна хигиена, държани при температура от 25 градуса с цикъл 12/12 светлина/тъмнина и хранени със стандартна храна за плъхове и вода ad libitum.

Всички процедури бяха одобрени и изпълнени съгласно указанията за грижа и използване на животни, установени от университета Soochow, което е в съответствие с нашия предишен доклад[35].

Експериментите са извършени съгласно Насоките на Националния институт по здравеопазване за използване на лабораторни животни (NIH, публикация номер 85-23, ревизирана 1996 г.). Настоящото проучване е докладвано от насоките на ARRIVE.

SHR на осем седмици беше приложен за контрол на стареенето (SHR-Young, n=10). Дванадесетмесечни плъхове са третирани със или без Gao-Zi-Yao за дестилирана вода (стар SHR-C, n=10), ниска доза (стар SHR-L, n=10), средна доза (Стар SHR-M, n=10), висока доза (Стар SHR-H, n=10) чрез стомашно хранене.

Дозировки от ниски, средни и високи Gao-Zi-Yao, равни на 1/2-, 1-, трикратни дози за клинично прилагане на пациенти, изчислени според телесната повърхност. Gao-Zi-Yao се разтваря в 5 mL дестилирана вода преди прилагане и се прилага еднократно млечни продукти в продължение на 4 седмици.

Кръвното налягане и сърдечната честота се наблюдават всяка седмица по метода на маншета на опашката, а телесното тегло също се наблюдава всяка седмица според предишното наше наблюдение [35].

След 4 седмици беше проведен експеримент с воден лабиринт на Morris и плъхове бяха умъртвени под анестезия с натриев пентобарбитал (50 mg/kg ip), тъкан от хипокампус беше събрана за по-нататъшен анализ. Всички експериментални протоколи бяха одобрени от лицензионната комисия по етика на университета Soochow.

Експеримент с воден лабиринт на Морис

Експериментът с воден лабиринт на Морис (BW-MWM101, Shanghai Bio-will Co., Ltd., Шанхай, Китай) беше извършен, както е описано по-рано с някои модификации [38]. Тестът беше планиран за 6 дни, дни от 1 до 5 бяха за периода на обучение, а ден 6 беше за резултатите от тестването.

Плъховете бяха обучени за 2 минути млечни продукти, записвайки времето за качване на платформата като време на латентност. На 6-ия ден платформата беше премахната. Плъховете бяха поставени в най-далечния квадрант на разстояние и траекторията на плуване беше записана за 2 минути.

Параметрите за функцията на учене и памет бяха изчислени от софтуера.

Измерване на серумните нива на NO и възпалителни фактори чрез ELISA

Серумни нива на NO (Каталожен номер: S0023), IL-1 (Каталожен номер: A301BH80153), IL-2 (Каталожен номер: A31038348), IL-6 (Каталожен номер: A30681042), и TNF- (Каталожен номер: A38280855) бяха измерени с помощта на налични в търговската мрежа комплекти ELISA (BiotechnologyCo., Ltd. Shanghai enzyme research. Shanghai, China). Всички стъпки бяха извършени съгласно инструкциите на производителя.

Оцветяване по Nissl

Тъкан от хипокампус на плъх се изолира, фиксира, залива с парафин, след което се инкубира в 1% разтвор за оцветяване с толуидиново синьо за 5-10 минути при стайна температура. Десет секции се изплакват в дестилирана вода, накисват се в 95% етанол за 5-30 минути и се дехидратират в 100% етанол.

След дехидратиране срезът се поставя в ксилен и се покрива с плъзгащо се покритие, като се използва смола. Броят на невроните в областите CA1, CA2 и dentate gyrus (DG) на хипокампуса бяха наблюдавани и анализирани с помощта на програмата за анализ ImageJ.

Western blot за протеини, свързани с ученето и паметта

Western blot за протеини, свързани с ученето и паметта, беше извършен, както е описано в нашия предишен доклад с някои модификации [39].

Хипокампусните тъкани се хомогенизират с RIPA буфер (50 mmTris, 150 mM NaCl, 1% Triton-X-100, рН 7.0), съдържащ фенилментансулфонил флуорид (R&D Systems Inc., Минеаполис, САЩ). Хомогенатите се центрофугират при 12, 000 × g за 10 минути при 4 градуса.

Клетъчните протеини бяха разделени чрез SDS-PAGE и прехвърлени към PVDF мембрани (Hybond TM-ECL; AmershamPharmacia Biotech, Inc.). Мембраните бяха блокирани в 5% обезмаслено мляко в PBS и 0.1% Tween-20при стайна температура.

След това блотовете се инкубират с първично антитяло: анти-глутаматен рецептор 1 (1:1000, Abcam, Inc., каталожен номер: ab183797), анти-NMDAR2B антитяло (1:1000, Abcam, Inc., каталожен номер: ab28373), анти-фосфо -CaMKII антитяло (1:1000, Abcam, Inc., каталожен номер: ab171095), антифосфо-CREB антитяло (1:1000, Abcam, Inc., каталожен номер: 32096) или анти-GAPDH (Santa Cruz Biotech, Inc., Каталожен номер: sc-47724).

След това мембраните се инкубират в продължение на 1 час с вторично антитяло (HRP-конюгирано анти-заешко Ig-G, 1:2000, Abcam, Inc. Каталожен номер: ab205718). След това мембраните се промиват три пъти в продължение на 15 минути с помощта на TBS-T за отстраняване на излишните антитела преди инкубиране в продължение на 1 минута с хемилуминесцентни реагенти (ECL, R&D Systems Inc., Минеаполис, Минесота, САЩ).

Освен това, имунореактивни ленти бяха открити чрез система за анализ на електрофореза на гел (GL2200 Pro, Crestream Inc. USA). Интензитетът на лентите се анализира чрез софтуер Image J. Количеството на целевите протеини се нормализира чрез GAPDH експресия [39].

Статистически анализ

За статистически анализ беше използван софтуерът SPSS 18.0. Данните са представени като средно ± SEM Групираните данни са анализирани с помощта на еднопосочен анализ на дисперсията, последван от теста на Student–Newman–Keuls. Стойност на P < 0.05 се счита за статистически значима в нашия предишен доклад [35].

Резултати

Систолично кръвно налягане (SBP), сърдечна честота и телесно тегло между млад SHR и стар SHR

Yong SHR показа по-ниско SBP през първите две седмици в сравнение със стария SHR, след което се увеличи до липса на разлика между двете групи през следващите три седмици (фиг. 2A).

Напротив, сърдечната честота не е била разлика между двете групи през първите две седмици, след това SHR при млади се е увеличил значително в сравнение със SHR при стари през следващите три седмици (фиг. 2B). Младият SHR показва по-ниско телесно тегло в сравнение със стария SHR по време на целия период на наблюдение (фиг. 2C).

Параметри на водния лабиринт на Морис между млад SHR и стар SHR

За да се определи зависещото от хипокампа учене и памет, беше проведен експериментът с воден лабиринт на Морис. Старият SHR показа по-дълга латентност на бягство през първите четири дни в сравнение с младия SHR (фиг. 3A).

Времената на пресичане на целевия квадрант са по-малко при стария SHR, отколкото при младия SHR (фиг. 3B).

Процентът на времето в квадранта на целевата платформа е по-кратък в стария SHR в сравнение с младия SHR (фиг. 3C). Процентът на дължината на пътя в квадранта също беше по-къс при стария SHR в сравнение със стария SHR (фиг. 3D). Тези резултати предполагат, че старият SHR има увреждане на когнитивната функция.

Броят на невроните в хипокампуса между млад SHR и стар SHR

Броят на невроните в различни области на хипокампуса се преброява чрез оцветяване по Nissl. Резултатите показват, че има по-малък брой неврони в CA1, CA2 и DGрегионите на стария SHR в сравнение с младия SHR (фиг. 4).

Експресии на протеини, свързани с ученето и паметта, в хипокампуса между млад SHR и стар SHR

Резултатите от Western blot показаха, че експресията на протеини, свързани с обучението и паметта (GluR1, NMDAR 2B, фосфорилиран-CaMK II и фосфорилиран-CREB) в стария SHR хипокампус е по-нисък от този в младия SHRхипокампус (фиг. 5).

Ефект на Gao‑Zi‑Yao върху SBP, сърдечната честота и телесното тегло при стар SHR

Беше анализиран ефектът на Gao-Zi-Yao върху SBP. Лечението с ниска доза Gao-Zi-Yao значително понижи SBP при стар SHR от втората до четвъртата седмица в сравнение с контролната стара SHR група, средните и високи дози Gao-Zi-Yao значително понижиха SBP при стар SHR от първата седмица до четвъртата седмица в сравнение с контролния стар SHR (фиг. 6A). Тези резултати показват, че Gao-Zi-Yao упражнява антихипертензивен ефект при стар SHR.

Също така сравнихме данните за ефектите на сърдечната честота и телесното тегло на Gao-Zi-Yaoon. Нашите данни показват, че няма значителна разлика в сърдечната честота и телесното тегло сред всички групи по време на целия период на наблюдение (фиг. 6B, C).

Ефект на Gao‑Zi‑Yao върху серумните нива на NO, IL-1, IL-2 и TNF‑ при стар SHR

Лечението със средни и високи дози GAO-ZIYAO повишава серумните нива на NO в сравнение с нивата в SHR контролната група (фиг. 7А). Лечението с всички тествани дози на GAO-ZI-YAO намалява серумните нива на IL-1, IL-2 в сравнение с нивата в SHR контролната група (фиг. 7B, C); въпреки това, само високата доза GAO-ZI-YAO потиска серумните нива на TNF- (фиг. 7D).

Тези резултати показват, че GAO-ZI-YAO може да регулира оксидативния стрес и възпалението.

For more information:1950477648nn@gmail.com