Човешки амниотични мезенхимни стволови клетки облекчават AGVHD след Allo-HSCT чрез регулиране на взаимодействията между чревната микробиота и чревния имунитет
Oct 18, 2023
Резюме
Острата болест на присадката срещу приемника (aGVHD) след алогенна трансплантация на хематопоетични стволови клетки представлява едно от най-неприятните предизвикателства. Дисбиозата на чревната микробиоза може да продължи с aGVHD и мезенхимните стволови клетки (MSC) имат обещаващ терапевтичен потенциал за aGVHD. Въпреки това, дали hAMSCs засягат чревната микробиота по време на смекчаването на aGVHD остава неизвестно. Съответно, ние се опитахме да дефинираме ефектите и основните механизми на MSCs, получени от човешка амниотична мембрана (hAMSCs), регулиращи чревната микробиота и чревния имунитет при aGVHD. Чрез установяване на хуманизирани aGVHD миши модели и лечение с hAMSCs, ние открихме, че hAMSCs значително подобряват симптомите на aGVHD, обръщат имунния дисбаланс на Т клетъчни подгрупи и цитокини и възстановяват чревната бариера. Освен това, разнообразието и съставът на чревната микробиота бяха подобрени при лечение с hAMSCs. Корелационният анализ на Spearman показа, че има връзка между чревната микробиота и протеините с плътна връзка, както и имунните клетки и цитокините. Нашето изследване предполага, че hAMSCs облекчават aGVHD чрез насърчаване на нормализирането на чревната микробиота и регулиране на взаимодействията между чревната микробиота и чревната бариера, имунитета.
Cistanche ползи за мъжете - укрепване на имунната система
Ключови думи
Остра реакция присадка срещу гостоприемник · Амниотични мезенхимни стволови клетки · Чревна микробиота · Чревна бариера · Чревен имунитет
Въведение
Основното предимство на алогенната трансплантация на хематопоетични стволови клетки (ало-HSCT) е мощният антитуморен отговор, дължащ се на ефекта на присадка срещу левкемия (GVL), който се задейства от разпознаването на пептиди, произтичащи от разликите в геномните полиморфизми между пациента и донор. Въпреки това, острата болест на присадката срещу гостоприемника (aGVHD) се върти около развитието на увреждане на тъканта на реципиента поради атаката от ало-реактивните донорни Т клетки и представлява животозастрашаващо основно усложнение при alloHSCT [1, 2]. Съобщава се, че микробното разстройство на червата предизвиква възпалителни реакции и корелира със свързани с възпаление заболявания [3, 4]. Многобройни проучвания показват, че смущенията в чревната микробиота са съществен фактор, предизвикващ aGVHD след ало-HSCT, и се превръщат в нова цел за лечение [5, 6]. По-конкретно, дисбиозата на чревната микробиоза при aGVHD обикновено се характеризира със загуба на чревно бактериално разнообразие и израстване на опортюнистични патогени [6]. При стомашно-чревния GVHD компрометираната мукозна бариера инициира активиране на гостоприемни антиген-представящи клетки и донорни Т-клетки, достигайки кулминация в Т-клетъчна диференциация по парадигмите на патогенния тип-1 и тип-17 за сметка на толерогенните регулаторни Т- клетъчни модели [7]. Основно на базата на 16S рибозомна РНК (16S rRNA) секвениране показва, че множество видове чревна микробиота са свързани с GVHD и например произвеждащите бутират клостридии са свързани с поддържането на функцията на епителната бариера и отслабването на остра GVHD [8 ]. Мезенхимните стволови клетки (MSC) привлякоха огромно внимание през последното десетилетие поради техния потенциал за самообновяване и многолинейна диференциация, както и имуномодулиращи свойства [9]. Смята се, че MSC позволяват на увредените тъкани да се развиват балансирани възпалителни и регенеративни микросреди в присъствието на силно възпаление и са били широко използвани за лечение на имунно базирани разстройства, при които най-успешното клинично приложение е включено в лечението на GVHD [10]. Човешките амниотични мезенхимни стволови клетки (hAMSCs) са перинатални стволови клетки, които притежават подобна на ембрионалните стволови клетки способност за диференциация и имуномодулиращи свойства, подобни на възрастни стволови клетки. Споделяйки фенотипове, подобни на типичните MSCs, hAMSCs се превърнаха в обещаващ източник на стволови клетки поради лекотата, неинвазивността и безопасността на придобиването на тъкани, изобилния добив на клетки и много ниските етични и морални спорове в сравнение със стволовите клетки от други източници. Човешките AMSC имат предимствата на ниска имуногенност и липса на туморогенност, което ги прави идеалният клетъчен източник за клетъчна терапия [11, 12]. Експериментите in vitro потвърдиха, че hAMSC показват по-висок пролиферативен капацитет и по-голяма способност за дългосрочен растеж от MSC, получени от костен мозък [13, 14]. Многобройни проучвания показват, че hAMSC имат потенциала да облекчат много възпалителни заболявания, включително възпалително заболяване на червата, остеоартрит и автоимунно заболяване [11]. Нашето скорошно проучване показа, че hAMSC подобряват aGVHD чрез регулиране на баланса на Т ефектор и Treg клетки [15]. Въпреки това, ефектът и механизмът на hAMSC върху чревното микробно разстройство при GVHD са неизвестни. Тук се стремим да проучим потенциалното въздействие на hAMSCs върху aGVHD, както и върху чревната микроекосистема. Това би било първото проучване, което разкрива чревната микробиота и нейната корелация с чревния имунитет след лечение с hAMSCs на aGVHD.
Материали и методи
Изолиране, култура и идентификация на hAMSC
hAMSC бяха извлечени, както е описано по-горе [15]. Клетки от трети пасаж (P3) бяха събрани от идентификация на фенотип чрез оцветяване с антитела срещу CD34 (581, BD Pharmingen, САЩ), CD45 (HI30, BD Pharmingen, САЩ), HLA-DR (G46-6, BD Pharmingen , САЩ), CD11b (ICRF44, BD Pharmingen, САЩ), CD90 (5E10, BD Pharmingen, САЩ), CD73 (AD2, BD Pharmingen, САЩ) и CD105 (SN6, bioscience, САЩ), и след това анализирани с поточен цитометър ( BD FACS Песен II). Клетките бяха проверени за тяхната многолинейна диференциация с помощта на специфична индукционна среда (BGscience, Китай) и оцветени съответно с Oil Red-O и Alizarin Red за адипогенеза и остеогенна диференциация. hAMSCs в пасажи 3 до 6 бяха използвани за експериментите.
cistanche tubulosa - подобряват имунната система
Колекция от човешки PBMC
Плазмените проби са взети от здрави доброволци с писмено информирано съгласие. Човешки мононуклеарни клетки от периферна кръв (PBMC) се изолират от периферна кръв чрез центрофугиране на плътност на Ficoll-Hypaque (Tianjin Haoyang, Китай), промиват се с PBS, суспендират се в буфер за лизис на червена кръв (Solarbio, Китай) при 4 градуса за 15 минути. Промийте отново и след това суспендирайте в PBS за инжектиране на опашната вена в NPG мишки.
мишки
На възраст 8–10 седмици и 25–30 g мъжки и женски NPG мишки бяха закупени от Beijing Vitalstar Biotechnology Co., Ltd. и отгледани при условия на SPF при 12-часов цикъл светлина-тъмнина с постоянна температура и влажност. Всички процедури за животни бяха одобрени от Комитета за институционална грижа и използване на животни към Южния медицински университет (№ L2019132) в съответствие с Насоките на Националния съвет по здравеопазване и медицински изследвания на Китай за експерименти с животни.
Животински модел и лечение на остър GVHD
Моделът на aGVHD мишка е създаден, както е описано по-горе [15]. За лечение, 5 × 105 hAMSCs на мишка (тук hAMSCs група) и PBS (тук aGVHD група) се инжектират през опашната вена във всяка мишка на третия ден след трансплантацията. Във всички модели мишки мишките се проверяват на всеки два дни за заболеваемост и промени в теглото. Всяка мишка беше оценена за патологични характеристики, включително загуба на тегло, прегърбена поза, разрошена козина, кожни лезии, намалена подвижност и диария и след това класифицирана според aGVHD клинична точкова система, адаптирана от първоначално описаната от Cooke [16]. В някои случаи мишките в групата с aGVHD страдат от тежък aGVHD и мишките в групата с hAMSCs на третия ден след лечението са умъртвени за събиране на периферната кръв и целевите органи, включително черен дроб, далак, бели дробове и черва. Изпражненията на тези мишки бяха събрани преди умъртвяването.
GFP-белязани hAMSCs и in vivo проследяване
Белязаните с GFP hAMSC бяха установени и идентифицирани, както е описано по-горе [15]. Накратко, ние трансфектирахме гена на зеления флуоресцентен протеин (GFP) в hAMSCs с лентивирус като вектор. 5 × 105 GFP-белязани hAMSCs, суспендирани в 500 μL PBS, се инжектират в aGVHD мишки през опашната вена. След 24 часа и 72 часа, мишките бяха евтаназирани за събиране на червата и след това генерирани замразени участъци. Използва се противооцветяване с DAPI за разграничаване на реципиентните клетки.
Хистопатологична оценка
Прицелните органи на aGVHD бяха събрани по време на аутопсията и след това обработени до вградени в парафин блокове, за да се генерират срезове с дебелина 5- μm за оцветяване с хематоксилин и еозин (H&E). Хистологичните резултати бяха оценени въз основа на разрушаване на тъканната структура и лимфоцитна инфилтрация [17]. За имунохистохимия срезовете се депарафинизират, рехидратират и третират с 3% H2O2 в метанол в продължение на 20 минути, за да се инактивира ендогенната пероксидазна активност. След това срезовете се подлагат на извличане на антиген и се третират със серумен албумин в продължение на 1 час. Впоследствие срезовете се инкубират със заешки анти-човешки CD45 антитела (EP322Y, Abcam, Англия) или ZO-1 антитела ((EPR19945-296, Abcam, Англия) в продължение на 1 час при 37 градуса. антитела бяха открити с HRP-конюгирано вторично антитяло (Genentech, САЩ) и визуализирани с DAB Положителната област беше анализирана от Image J.
растение цистанче, повишаващо имунната система
16S rRNA секвениране на фекална микробиота
Фекална геномна ДНК се екстрахира от 0.1 g замразени фекални проби с помощта на EZNA® ДНК комплект за изпражнения (Omega BioTek, Norcross, GA, САЩ), следвайки протокола на производителя. Използвайки геномна ДНК като шаблон, бяха използвани специфични праймери (338F: 5′-ACTCCTACGGGAGGCAGCA-3′ и 806R: 5′-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3′) с баркодове и PremixTaq (TaKaRa, Китай) за амплифициране V3-V4 хиперпроменливи региони на бактериалния 16S rRNA ген. След амплификация и пречистване, целият геном на пробата беше секвениран на Illumina Hiseq или Miseq високопроизводителна платформа за секвениране от Magigene Technology Co., Ltd. (Гуанджоу, Китай), за да се получат необработени данни във формат FASTQ. Анализите на последователни данни се извършват главно с помощта на платформата Magichand.
Поточен цитометричен анализ
Целевите органи на aGVHD и периферната кръв на мишки бяха получени и приготвени в едноклетъчна суспензия. Клетките бяха оцветени с моноклонални антитела срещу CD3 (UCHT1, Biolegend, САЩ), CD4 (RPA-T4, Invitrogen, САЩ), CD8 (RPA-T8, Biolegend, САЩ), CD25 (BC96, Biolegend, САЩ) или съвпадащи по изотип контролен IgG (eBioscience, САЩ) за 30 минути при стайна температура на тъмно. След това клетките се обработват с лизиращ буфер (BD Pharm Lyse™) при 4 градуса на тъмно в продължение на 15 минути. Вътреклетъчното оцветяване с Foxp3 (236A/E7, Invitrogen, САЩ) се извършва съгласно препоръките на производителя (Fixation/Permeabilization Solution Kit; eBioscience). След това бяха извършени полихроматични поточни цитометрични анализи на поточен цитометър.
Количествено определяне на цитокини
Нивата на цитокини в серума и тъканния супернатант на мишки се определят с помощта на Cytometric Bead Array (CBA) Human Th1/Th2/Th17 цитокинов комплект (BD Pharmingen, САЩ) съгласно инструкциите на производителя. Накратко, 50 μL от всяка от супернатантните проби се инкубират с 50 μL от смесени човешки Th1/Th2/Th17 цитокинови улавящи перли и 50 μL от човешки Th1/Th2/Th17 PE реагент за откриване при стайна температура на тъмно, след което се суспендират за анализ на поточна цитометрия 3 часа по-късно.
Количествен PCR в реално време
Общата РНК се екстрахира от тъкан на дебелото черво на мишка след изолиране с помощта на реагент Trizol (TaKaRa, Китай). Общата РНК се използва като шаблон за обратна транскрипция на сДНК. -актинът беше използван като вътрешна референция. Експресията на иРНК се измерва чрез qPCR с помощта на следните праймери: ZO-1-F, 5'-ACCACCAACCCGAGAAGAC-3' и ZO- 1-R, 5'-CAGGAGTCATGGACGCACA-3 '; Occludin-F, 5'-TTGAAAGTCCACCTCCTTACAGA-3' и OccludinR, 5'-CCGGATAAAAAGAGTACGCTGG-3'; -актин-F, 5'-GGCTGTATTCCCCTCCATCG-3' и -актин-R, 5'-CCAGTTGGTAACAATGCCATGT-3'. Методът 2-ct беше използван за измерване на нивата на експресия на РНК.
Ензимно-свързан имуносорбентен анализ (ELISA)
Нивата на D-LA и DAO в плазмите се измерват с помощта на комплекти ELISA (Jingmei, Китай) съгласно инструкциите на производителя. Накратко, събраните плазмени супернатанти бяха поставени съответно в 96-плаки, покрити със специфично антитяло. Абсорбцията се записва при 450 nm с помощта на четец на микроплаки (Multiskan MK3, Thermo Fisher Scientific).
Статистически анализ
Данните бяха представени като средно ± SD. Беше извършен и визуализиран t-тест за независими проби с помощта на GraphPad Prism8.0. Анализите на данните за секвениране на 16S rRNA бяха извършени с помощта на платформата Magichand (http://cloud.magigenecom/). Корелационният анализ между чревната микробиота и имунитета беше проведен от R пакети (v3.6.3), за да се покаже корелационна матрица. P стойности<0.05 were considered statistically significant. * p<0.05, ** p<0.01, *** p<0.001, **** p<0.0001, n.s. not signifcant.
Резултати
Идентифициране на hAMSC
hAMSC показват многоъгълна или фибробластоподобна морфология в културата (Фигура 1А) и са силно положителни за повърхностна експресия на MSC-специфични маркери CD90, CD105 и CD73, но отрицателни за CD34, CD45, HLA-DR и CD11b (Фигура 1C). Що се отнася до многолинейната диференциация, нашите резултати показват, че hAMSCs демонстрират адипоцитна и остеобластна диференциация (Фиг. 1B).
hAMSCs значително облекчават симптомите на aGVHD при мишки
Първо оценихме терапевтичния ефект на hAMSC върху aGVHD. В сравнение с aGVHD групата, hAMSCs значително подобряват aGVHD, както се вижда от значително намалената загуба на тегло (Фигура 2B) и намаления aGVHD клиничен резултат (Фигура 2C). Освен това, групата на hAMSCs има значително по-висока степен на преживяемост в сравнение с aGVHD мишки (фиг. 2D). Патологичният хистологичен анализ показа, че aGVHD причинява тежко увреждане на тъканите и левкоцитна инфилтрация. hAMSCs, както е демонстрирано от H&E, намаляват разрушаването на тъканите и инфилтрацията на екзогенни Т клетки в целевите органи на aGVHD (фиг. 2E). Последователно, резултатите от IHC също потвърждават, че hAMSCs подобряват анормалните патологични прояви (фиг. 2F). Тези резултати предполагат, че hAMSC имат потенциала да подобрят симптомите на aGVHD при aGVHD мишки.
hAMSCs засягат имунитета на гостоприемника в aGVHD мишки
За да разберем основните имуномодулаторни механизми, чрез които hAMSCs намаляват aGVHD, ние измерихме активирането и експанзията на Т клетките в периферната кръв и целевите органи. Тестът с поточна цитометрия разкри, че hAMSC забележително инхибират броя на CD3+CD4+T и CD3+CD8+T клетки в кръвта и целевите органи (фиг. 3A, Б). Нещо повече, делът на CD4+CD25+Foxp3+Tregs в кръвта и целевите органи на мишки в групата с hAMSCs е значително по-висок от този в групата с aGVHD (фиг. 3C) . След това изследвахме ефекта на hAMSCs върху цитокиновия профил (фиг. 4). Прилагането на hAMSCs доведе до очевидно намаляване на нивата на IL-17A, IFN-, TNF, IL-6 и IL-2 в целевите органи и кръв в сравнение с тези на групата на aGVHD, с изключение на нивото на TNF в далака. Междувременно, в допълнение към нивата на IL-10 в черния дроб, мишките, лекувани с hAMSCs, показват значително повишени нива на IL-10 и IL-4 в целевите органи и кръвта. Взети заедно, hAMSC изиграха защитна роля в aGVHD чрез обръщане на имунния дисбаланс на Т клетъчни подгрупи и цитокинова буря.
Ползи от Cistanche tubulosa- укрепване на имунната система
Щракнете тук, за да видите продуктите Cistanche Enhance Imunity
【Попитайте за повече】 Имейл:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692
hAMSC подобряват увреждането на чревната бариера при aGVHD мишки
За да проучим дали hAMSCs могат да поправят чревната бариера в aGVHD, първо наблюдавахме дали hAMSCs могат да мигрират към червата. Както е показано на Фиг. 5А, GFP-маркирани hAMSCs бяха открити в червата след инжектиране в hAMSCs и можеха да се присадят и инфилтрират в червата. След това проектирахме хистопатологична оценка на тъканта на тънките черва. В групата на aGVHD, червата са ерозирали и некротични, чревните власинки са очевидно унищожени, власинките са счупени и масивни левкоцити са инфилтрирали чревната лигавица, субмукозата и lamina propria. Чревните власинки бяха правилно подредени и нямаше счупване на чревни власинки или отлепване на епитела на власинките след третиране с hAMSCs (фиг. 5В). Инфилтрация на човешки лимфоцити също се наблюдава чрез имунохистохимия в червата в групата на aGVHD, докато лечението с hAMSCs може да намали тяхната инфилтрация (фиг. 5C). За да оценим защитния ефект на hAMSCs върху целостта на чревната лигавица, ние проведохме имунохистохимия, за да открием ефекта върху ZO -1. В групата на лечение с hAMSCs, нивото на експресия на протеина с плътна връзка ZO-1 беше значително повишено в сравнение с групата на aGVHD (фиг. 5D). Ние също така изследвахме нивата на експресия на иРНК на чревни протеини с плътна връзка (TJs) и плазмени нива на D-млечна киселина (D-LA) и диамин оксидаза (DAO), за да определим функцията на чревната бариера и чревната пропускливост. Когато се прилагат интравенозно, hMASC могат значително да повишат нивата на експресия на mRNA на ZO-1 и Occludin, ключовите протеини на TJs (фиг. 5E, F), като същевременно намаляват нивата на D-LA и DAO (фиг. 5G, З). Следователно, когато се появи aGVHD, чревната бариера беше повредена с намаляване на чревните плътни протеини на връзката и увеличаване на чревната пропускливост. Междувременно hAMCS могат значително да обърнат разрушаването на чревната бариера.
Фиг. 1 Фенотипна и функционална характеристика на hAMSC. (A) Представителни микрографии на hAMSCs от пасаж 0 до 3 (без оцветяване, 100 ×). (B) Способност за многолинейна диференциация на hAM SCs. Адипогенната диференциация на hAMSC (вляво) се оцветява с Oil Red-O, а остеобластната диференциация на hAMSC (вдясно) се оцветява с Alizarin Red (оцветяване, 100 ×). (C) Поточен цитометричен анализ, показващ hAMSCs положителни за CD90, CD105 и CD73, докато отрицателни за CD34, CD45, CD11b и HLA-DR
Фиг. 2 hAMSC облекчават aGVHD при NPG мишки. (A) Схематична диаграма, илюстрираща графика на администриране на hAMSCs в aGVHD миши модели. (B) Промени в телесното тегло в различни групи (n=10). (C) aGVHD клиничен резултат (въз основа на загуба на тегло, прегърбена поза, настръхнала козина, кожни лезии, намалена подвижност и диария) в различни групи (n=10). (D) Оцеляване сред различни групи (n=10). (E) Представителни микроскопски снимки на H&E оцветяване (400 ×) и хистологичен резултат (на базата на разрушаване на тъканната структура и лимфоцитна инфлтрация) (n=4). (F) Представителни микроскопски снимки на имунохистохимия (400 ×) и пропорцията на CD45 положителна област (n=4). Стойностите бяха представени като средни ± SD
Фиг. 3 hAMSCs инхибират експанзията на донорните Т клетки, докато усилват генерирането или експанзията на Tregs in vivo. (A) Анализ с поточна цитометрия на CD3+CD4+T клетки(n=6), (B) Анализ с поточна цитометрия на CD3+CD8+ Т клетки (n=6), (C) Анализ на поточна цитометрия на CD4+CD25+Foxp3+Tregs (n=6). Стойностите бяха представени като средни ± SD
Фиг. 4 hAMSCs понижават регулираните провъзпалителни цитокини IL-17A, IFN-, TNF, IL-6, IL-2 и повишават регулираните противовъзпалителни цитокини IL-10 и IL -4 in vivo (n=5). Стойностите бяха представени като средни ± SD
Промени в чревната микробиота след лечение с hAMSCs при aGVHD мишки
Секвенирането на 16S rRNA се извършва във фекална бактериална ДНК, изолирана от различни групи мишки. Индексите на разнообразие, включително индексите OUT, Chao1 и Shannon, проявяват сходни тенденции и мишките, лекувани с hAMSCs, съдържат микробиота със значително по-високо разнообразие в сравнение с това на групата aGVHD (фиг. 6А). Анализът на главните координати (PCoA), базиран на Un претеглено-unifrac разстояние, разстояние Манхатън и метрично разстояние на Брей-Къртис, даде разпръснати точки от данни върху графиките на двете групи, въпреки че разликата не беше значителна (фиг. 6B). Впоследствие ние оценихме пейзажа на чревната микробиота, за да проучим допълнително потенциалната разлика в състава между двете групи. Бяха изчислени общо 773 OTUs и групата на hAMSCs имаше по-високи OTUs в сравнение с групата aGVHD (фиг. 6C). По отношение на бактериалния състав на ниво тип, Firmicutes и Bacteroidetes са двата най-преобладаващи типа (фиг. 6D). Ние също така организирахме сравнителна топлинна карта за анализ на чревната микробиота между двете групи (фиг. 6E). Родът на Odoribacter и Ruminococcus _1 показва относително голямо изобилие в групата на hAMSCs, които са важни микроби за поддържане на чревната хомеостаза (фиг. 6F, G). За да потвърдим коя бактерия е била променена от лечението с hAMSCs и на свой ред е повлияла на прогресията на заболяването срещу aGVHD, ние извършихме високомерни сравнения на класове, използвайки линейния дискриминантен анализ (LDA) на размера на ефекта (LEfSe), който открива значителни разлики в преобладаването на бактериалните общности между двете групи. Както е показано на (фиг. 6H, I), Streptococcaceae (семейството и рода Streptococcus), Paludibacteraceae, F0058 и Delftia са ключовите видове бактерии, допринасящи за дисбиозата на чревната микробиота в групата на aGVHD. Независимо от това, полезните бактерии Lachnospiraceae, Roseburia, Ruminococcaceae, Ruminiclostridium, Oscillibacter и Clostridia (клас и ред Clostridiales) показват относително обогатяване в групата на hAMSCs, което може да бъде свързано с медиираното от hAMSC облекчаване на aGVHD. Взети заедно, разнообразието и съставът на чревната микробиота бяха подобрени след прилагането на hAMSC и се преместиха в обща тенденция, която беше полезна за тялото.
cistanche tubulosa - подобряват имунната система
hAMSCs регулират взаимодействията между чревната микробиота и чревния имунитет
За да се разбере потенциалната връзка между чревната микробиота и бариерата на чревната лигавица, корелациите между TJs и чревната микробиота на ниво род бяха анализирани чрез корелационния анализ на Spearman. Както е показано на фиг. 7, има положителна връзка между ZO-1 и полезните бактерии, Ruminococcaceae_UCG.014, Muribaculum, Ruminococcus_1 и Ruminiclostridium_9. Относителното изобилие на полезните бактерии Roseburia, Odoribacter, Ruminococcus_1 и Ruminococcaceae_UCG.014 показва драматично положителни корелации с Occludin. След това проведохме корелационен анализ между чревната микробиота и чревната имунна бариера чрез метода на ранговата корелация на Spearman (фиг. 7). Наблюдавахме, че увеличението на Roseburia, Muribaculum и Ruminococcus _1 е отрицателно свързано с процента на CD3 +CD4+T клетки. Освен това, увеличението на полезните бактерии, Ruminococcus_1 и Ruminiclostridium _9, корелира положително с процента на Tregs, докато корелира отрицателно с IL-17. Изобилието на Lactobacillus и Candidatus_Arthromitus е в отрицателна корелация с IFN-. Имаше отрицателна корелация между изобилието на Muribaculum и IL-2. Увеличаването на изобилието на Candidatus_Saccharimonas и намаляването на Escherichia. Изобилието на Shigella е в положителна корелация с нивото на IL-10 (фиг. 7). Резултатите от корелационния анализ показват, че hAMSCs подобряват възпалителната среда на гостоприемника и регулират чревната хомеостаза, което може да бъде свързано с модулацията на чревната микробиота, и следователно предотвратяват aGVHD.
Фиг. 5 hAMSCs подобряват дисфункцията на чревната бариера при aGVHD мишки. (A) GFP-маркирани hAMSCs, инфилтрирани в червата. (B) Представителни микроскопични снимки на H&E оцветяване на червата (400 ×) и хистологичен резултат (на базата на разрушаване на тъканната структура и лимфоцитна инфилтрация) (n=4). (C) Представителни микроскопски снимки на имунохистохимия (400 ×) на червата и пропорцията на CD45 положителна област (n=4). (D) Представителни микроскопски снимки на имунохистохимия (400×) на червата и пропорцията на ZO-1 положителната област (n=4). (E) нива на експресия на иРНК на ZO-1 и Occludin (n=3). (F) Плазмени нива на D-LA и DAO (n=4).Стойностите бяха представени като средни ± SD
Дискусия
Усъвършенстваният микробен анализ предостави нови прозрения за сложните взаимодействия между гостоприемника и чревната микробиота [18]. Чревната микробиота може да бъде променена след ало-HSCT и е тясно свързана с aGVHD, което предполага, че чревната микробиота може да бъде нова цел за лечение на aGVHD [5]. Многобройни проучвания, включително нашето скорошно проучване, изследват и потвърждават терапевтичния ефект на MSC върху aGVHD [15, 19, 20]. Ефектът върху чревната микробиота през този период обаче остава неясен. В това проучване ние изследвахме въздействието на hAMSC върху aGVHD и потенциалните механизми в него in vivo. В съответствие с предишни проучвания [15, 21–23], нашите резултати показват, че hAMSCs имат благоприятен защитен ефект върху aGVHD при мишки, както се вижда от отслабените симптоми на aGVHD и удължената преживяемост. Ние също така демонстрирахме, че hAMSC показват имуносупресивен ефект чрез намаляване на експанзията на донорните Т клетки, като същевременно повишават генерирането на Tregs в aGVHD. Междувременно, hAMSC могат да понижат провъзпалителните цитокини и да повишат противовъзпалителните цитокини in vivo, така че да инхибират възпалителните реакции. Чревната бариера, плътна структура, съставена от монослой от чревни епителни клетки, поддържа своята цялост и предотвратява транслокацията на луминална микробиота в здраво състояние [24]. По време на ало-HSCT режимите за кондициониране увреждат чревната бариера, което е началната стъпка в развитието на aGVHD, тъй като позволява транслокацията на бактерии през бариерата и води до нарушаване на чревната имунна хомеостаза [24, 25]. Натрупващите се доказателства показват, че MSC притежават способността да възстановяват тъканите, което е доказано, че възстановява целостта на чревната бариера при мишки с колит [26]. Протеините с плътно свързване, включително ZO-1 и Occludin, имат съществена роля във функцията на чревната бариера и транслокацията на чревната микробиота над увредената чревна бариера провокира възпаление [27]. D-LA се извлича от чревни бактерии, а DAO се концентрира главно в чревната лигавица. По този начин високите концентрации на плазмени D-LA и DAO могат частично да отразяват промени в чревната пропускливост и чревната бариерна функция [28]. Понастоящем открихме, че нивата на експресия на TJs се повишават драстично след прилагане на hAMSCs, докато плазмените нива на D-LA и DAO значително намаляват, което показва, че hAMSCs могат да подобрят дисфункцията на чревната бариера и да възстановят чревната пропускливост. Червата са един от най-силно засегнатите от aGVHD органи и изследванията подчертават, че бактерията, особено чревната микробиота, играе централна роля в патогенезата и развитието на aGVHD [5, 6]. Както се съобщава в предишни проучвания, загубата на бактериално разнообразие на пациенти с ало HSCT е свързана с повишена смъртност от aGVHD [29, 30]. Фекална доминация от опортюнистични патогени Enterococcus и Proteobacteria също е свързана с повишена GVHD [6, 31]. През последните десетилетия се обръща повишено внимание на връзката между чревната микробиота и лечението на MSC при възпалителни заболявания. Доказано е, че MSC подобряват дисбиозата на чревната микробиоза при ревматоиден артрит, сепсис и възпалително заболяване на червата [32–34]. За по-нататъшно изследване на механизма, чрез който hAMSCs подобряват aGVHD, ние изследвахме въздействието на hAMSCs върху чревната микробиота. В настоящото проучване администрирането на hAMSCs показа значителен ефект върху разнообразието на микробните общности в сравнение с липсата на трансплантация, което показва, че изобилието от чревна микробиота може да бъде променено след лечение с hAMSCs. Въпреки това, няма значителна разлика в измерванията на разнообразието, вероятно поради малкия размер на извадката от двете групи или недостатъчния цикъл на лечение на hAMSC. Анализът, използващ сравнителна топлинна карта в нивата на рода, показва, че приложението на hAMSCs увеличава изобилието от полезни бактерии, Odoribacter и Ruminococcus _1 в чревната флора, които са производители на късоверижни мастни киселини (SCFA) с противовъзпалителни свойства [35]. , 36]. За да се идентифицират основните доминиращи бактерии, медиирани чрез трансплантация на hAMSCs, беше проведен анализ на LEfSe между двете групи. В сравнение с групата на aGVHD, лечението с hAMSCs значително увеличи изобилието от някои полезни микроби, свързани с противовъзпалителни ефекти, като Lachnospiraceae, Roseburia, Ruminococcaceae, Ruminiclostridium, Oscillibacter, Clostridia, които всички бяха описани като полезни за производството на метаболити на чревната микробиота SCFAs [ 37–42]. Следователно, нашите наблюдения показват, че след прилагането на hAMSC, дисбиозата на чревната микробиота е подобрена, което се проявява чрез подобреното разнообразие и увеличеното относително изобилие на полезни бактерии.
Фиг. 6 Промени в чревната микробиота при aGVHD мишки. (A) сравнение на -разнообразие. (B) сравнение на -разнообразието. (C) Диаграма на Venn на OTU. (D) Относително бактериално изобилие на ниво тип. (E) Топлинна карта на изобилието на видовете на ниво род. (F) Относително изобилие на Odoribacter на ниво род. (G) Относително изобилие на Ruminococcus_1 на ниво род. (H) Кладограма, базирана на LEfSe анализ. (I) LDA резултат, изчислен от характеристики, различно изобилни между aGVHD и hAMSCs групи. (AI) n=3 мишки на група. Стойностите бяха представени като средни ± SD
aGVHD е сложен възпалителен процес, който се инициира от разрушаването на целостта на чревната бариера, последвано от транслокация на чревната микробиота и техните компоненти. Разпознаването на свързани с увреждане молекулярни модели и свързани с патогени молекулярни модели от антиген-представящи клетки индуцира провъзпалителен отговор, включително активиране на Т клетки и цитокинова буря, за да влоши увреждането на чревната бариера и да насърчи развитието на aGVHD [24, 43]. От друга страна, чревната микробиота и метаболитите, получени от микробиотата, като SCFA, играят важна роля в поддържането на целостта на чревната бариера и чревната хомеостаза, както и в оформянето на имунната система на лигавицата и балансирането на защитата на гостоприемника с микробни компоненти и метаболити [24, 44] . Взаимната комуникация между гостоприемника и чревната микробиота на чревната бариера регулира мукозните и системните имунни отговори и при патологични състояния може да доведе до GVHD [6, 45, 46]. Предполага се, че чревната микробиота е тясно свързана с експресията на протеини с плътно свързване [47]. Настоящото проучване показа, че експресията на mRNA на TJs ZO-1 и Occludin е отрицателно корелирана с относителното изобилие на вредни бактерии, докато има положителна корелация с полезните бактерии, което показва, че чревната микробиота е важна за поддържане на целостта на чревна бариера. Освен това чревната микробиота също е много важна за поддържането на чревната имунна бариера [47]. Наблюдавахме, че някои от полезните бактерии са в отрицателна корелация с процента на CD3+CD4+T клетки, но в положителна корелация с процента на Tregs. Тук разкрихме, че полезните бактерии, предимно производители на SCFA, са корелирани отрицателно с провъзпалителните цитокини, но са корелирани положително с противовъзпалителните цитокини, докато вредните бактерии са корелирани обратно. В обобщение, значителната разлика в чревната микробиота между леченията предполага пълна картина на взаимодействията между чревната микробиота и чревната бариера, имунитета. Все още имаше няколко ограничения, които си струва да обсъдим в нашите експерименти. Първо, въпреки че нашето проучване изследва ефектите на hAMSC върху имунитета, чревната бариера и чревната микробиота при aGVHD, основният механизъм все още трябва да бъде проверен в по-нататъшно проучване. Второ, изчерпването на чревната микробиота и трансплантацията на фекална микробиота са необходими за справяне с причинно-следствените корелации между чревната микробиота, чревната бариера и имунитета. Трето, по-нататъшни изследвания, изследващи въздействието на hAMSCs върху получените от микробиота SCFAs и други метаболити, са оправдани. В заключение, нашето изследване предполага, че hAMSC облекчават aGVHD чрез насърчаване на нормализирането на чревната микробиота и регулиране на взаимодействията между чревната микробиота и чревната бариера, имунитета. Нашето проучване е първото, което систематично дефинира ефектите и основните механизми на hAMSCs, регулиращи чревната микробиота и чревния имунитет при aGVHD.
Фиг. 7 Корелационен анализ между чревната микробиота и чревния имунитет. Корелационният анализ на Spearman беше проведен между относителното изобилие на 15 различни чревни микробиоти (на ниво род) и нивото на експресия на mRNA на TJs, процента на имунните клетки, както и концентрацията на цитокини в червата между двете групи. Стойностите на Spearman r варират от -0.5 (синьо) до 0.5 (червено)
Препратки
1. Шмид, К. (2021). Стъпка по-близо до GVL без GVHD. Кръв, 137 (19), 2565–2566. https://doi.org/10.1182/blood.2020010132
2. Chang, Y., Zhao, X., & Huang, X. (2018). Стратегии за засилване и запазване на анти-левкемичните ефекти без влошаване на реакцията присадка срещу приемник. Граници в имунологията, 9, 3041. https:// doi.org/10.3389/fmmu.2018.03041
3. Zhu, W., Winter, MG, Byndloss, MX, Spiga, L., Duerkop, BA, Hughes, ER, Büttner, L., de Lima Romão, E., Behrendt, CL, Lopez, CA, Sifuentes- Домингес, Л., Хъф-Харди, К., Уилсън, Р. П., Гилис, К. И., Тюкел, Ч., Ко, А. Й., Бърщайн, Е., Хупър, Л. В., Баумлер, А. Дж., и Уинтър, SE (2018). Прецизното редактиране на чревната микробиота облекчава колита. Природа, 553 (7687), 208–211. https://doi.org/10.1038/nature25172
4. Zhao, L., Zhang, F., Ding, X., Wu, G., Lam, YY, Wang, X., Fu, H., Xue, X., Lu, C., Ma, J. , Ю, Л., Сю, Ч., Рен, З., Сю, Й., Сю, С., Шен, Х., Джу, Х., Ши, Й., Шен, К., … Джан, С (2018). Чревните бактерии, селективно стимулирани от диетичните фибри, облекчават диабет тип 2. Наука (Ню Йорк, Ню Йорк), 359 (6380), 1151–1156. https:// doi.org/10.1126/science.aao5774
5. Shono, Y., & van den Brink, MRM (2018). Увреждане на чревната микробиота при алогенна трансплантация на хематопоетични стволови клетки. Отзиви за природата. Рак, 18 (5), 283–295. https://doi.org/10.1038/ nrc.2018.10
6. Стафас, А., Бургос да Силва, М. и ван ден Бринк, MRM (2017). Чревната микробиота при алогенна трансплантация на хематопоетични клетки и болест на присадката срещу приемника. Кръв, 129 (8), 927–933. https://doi.org/10.1182/blood-2016-09-691394
7. Wu, K., Yuan, Y., Yu, H., Dai, X., Wang, S., Sun, Z., Wang, F., Fei, H., Lin, Q., Jiang, H ., & Чен, Т. (2020). Чревният микробен метаболит триметиламин N-оксид влошава GVHD чрез индуциране на поляризация на M1 макрофаги при мишки. Кръв, 136 (4), 501–515. https://doi.org/10.1182/blood.2019003990
8. Матюсън, Н.Д., Дженк, Р., Матю, А.В., Кьонигскнехт, М., Ханаш, А., Тубай, Т., Оравец-Уилсън, К., Ву, С., Сън, Ю., Роси, К. ., Fujiwara, H., Byun, J., Shono, Y., Lindemans, C., Calafore, M., Schmidt, TM, Honda, K., Young, VB, Pennathur, S., … Reddy, P. (2016). Метаболитите, получени от микробиома на червата, модулират увреждането на чревните епителни клетки и смекчават болестта присадка срещу гостоприемник. Природна имунология, 17 (5), 505–513. https://doi.org/10.1038/ni.3400
9. Дейв, JR, Chandekar, SS, Behera, S., Desai, KU, Salve, PM, Sapkal, NB, Mhaske, ST, Dewle, AM, Pokare, PS, Page, M., Jog, A., Chivte , PA, Srivastava, RK, & Tomar, GB (2022). Човешките гингивални мезенхимни стволови клетки запазват своя растеж и имуномодулиращи характеристики независимо от възрастта на донора. Научен напредък, 8 (25), m6504. https://doi.org/10. 1126/sciadv.abm6504
10. Zhao, K., & Liu, Q. (2016). Клинично приложение на мезенхимни стромални клетки при трансплантация на хематопоетични стволови клетки. Journal of Hematology & Oncology, 9(1), 46. https://doi.org/ 10.1186/s13045-016-0276-z
11. Liu, Q., Huang, Q., Wu, H., Zuo, G., Gu, H., Deng, K., & Xin, H. (2021). Характеристики и терапевтичен потенциал на стволови клетки, получени от човешки амнион. Международен вестник за молекулярни науки, 22 (2), 970. https://doi.org/10.3390/ijms22020970
12. Li, J., Zhou, Z., Wen, J., Jiang, F., & Xia, Y. (2020). Човешки амниотични мезенхимни стволови клетки насърчават ендогенна костна регенерация. Граници в ендокринологията, 11, 543623. https:// doi.org/10.3389/fendo.2020.543623
13. Díaz-Prado, S., Muiños-López, E., Hermida-Gómez, T., Cicione, C., Rendal-Vázquez, ME, Fuentes-Boquete, I., de Toro, FJ, Blanco, FJ ( 2011). Човешката амниотична мембрана като алтернативен източник на стволови клетки за регенеративна медицина. диференциация; Изследвания в биологичното разнообразие, 81 (3), 162–171. https:// doi.org/10.1016/j.dif.2011.01.005
14. Hong, J., Gao, Y., Song, J., Zhuo, W., Sun, H., & Ping, B. (2016). Сравнение на биологични характеристики и имуносупресивна активност между човешки амниотични мезенхимни стволови клетки и мезенхимни стволови клетки от човешки костен мозък. Zhongguo Shi Yan Xue Ye Xue Za Zhi, 24(3), 858–864. https:// doi.org/10.7534/j.issn.1009-2137.2016.03.041
15. Гао, Й., Ли, В., Бу, Х., Сю, Й., Цай, С., Джонг, Дж., Ду, М., Сун, Х., Хуанг, Л., Хе, И ., Hu, X., Liu, Q., Jin, H., Wang, Q., & Ping, B. (2021). Човешките амниотични мезенхимни стволови клетки инхибират aGVHD чрез регулиране на баланса на Treg и T efector клетки. Вестник за изследване на възпалението, 14, 3985–3999. https://doi.org/10.2147/ JIR.S323054
16. Кук, К.Р., Кобзик, Л., Мартин, Т.Р., Брюър, Дж., Делмонте, Дж.Дж., Крауфорд, Дж.М., & Ферара, Дж.Л. (1996). Експериментален модел на синдром на идиопатична пневмония след трансплантация на костен мозък: I. Ролята на второстепенни H антигени и ендотоксин. Кръв, 88 (8), 3230–3239.
17. Yañez, R., Lamana, ML, García-Castro, J., Colmenero, I., Ramírez, M., & Bueren, JA (2006). Произведените от мастната тъкан мезенхимни стволови клетки имат in vivo имуносупресивни свойства, приложими за контрол на болестта присадка срещу гостоприемник. Стволови клетки (Дейтън, Охайо), 24 (11), 2582–2591.
18 Hooper, LV, Littman, DR, & Macpherson, AJ (2012). Взаимодействия между микробиотата и имунната система. Наука (Ню Йорк, Ню Йорк), 336 (6086), 1268–1273. https://doi.org/10.1126/ science.1223490
19. Кели, К. и Раско, JEJ (2021). Мезенхимни стромални клетки за лечение на реакция на присадка срещу приемник. Frontiers in Immunology, 12, 761616. https://doi.org/10.3389/fmmu.2021.761616
20. Macías-Sánchez, MDM, Morata-Tarifa, C., Cuende, N., Cardesa-Gil, A., Cuesta-Casas, M. Á., Pascual-Cascon, MJ, Pascual, A., Martín-Calvo , C., Jurado, M., Perez-Simón, JA, Espigado, I., Garzón López, S., Carmona Sánchez, G., Mata-Alcázar-Caballero, R., & Sánchez-Pernaute, R. (2022 г. ). Мезенхимни стромални клетки за лечение на резистентна към стероиди остра и хронична реакция на присадка срещу гостоприемник: многоцентров опит за състрадателна употреба. Транслационна медицина на стволови клетки, 11 (4), 343–355. https://doi.org/10.1093/stcltm/szac003
21. Tago, Y., Kobayashi, C., Ogura, M., Wada, J., Yamaguchi, S., Yamaguchi, T., Hayashi, M., Nakaishi, T., Kubo, H., & Ueda, Y. (2021). Произведените от човешки амнион мезенхимни стволови клетки намаляват ксеногенната болест на присадката срещу приемника чрез предотвратяване на активирането и пролиферацията на Т клетките. Научни доклади, 11 (1), 2406. https://doi. org/10.1038/s41598-021-81916-y
22. Ямахара, К., Харада, К., Ошима, М., Ишикане, С., Ониши, С., Цуда, Х., Отани, К., Тагучи, А., Сома, Т., Огава, Х ., Katsuragi, S., Yoshimatsu, J., Harada-Shiba, M., Kangawa, K., & Ikeda, T. (2014). Сравнение на ангиогенни, цитопротективни и имуносупресивни свойства на човешки мезенхимни стволови клетки, получени от амнион и хорион. PLoS One, 9 (2), e88319. https:// doi.org/10.1371/journal.pone.0088319
23. Ямахара, К., Хамада, А., Сома, Т., Окамото, Р., Окада, М., Йошихара, С., Йошихара, К., Икегейм, К., Тамаки, Х., Кайда, К. ., Inoue, T., Ohsugi, Y., Nishikawa, H., Hayashi, H., Ito, YM, Iijima, H., Ohnishi, S., Hashimoto, D., Isoe, T., … Фухимори, Y (2019). Безопасност и ефикасност на получени от амнион мезенхимни стволови клетки (AM01) при пациенти с рефрактерна на стероиди остра реакция присадка срещу гостоприемник след алогенна трансплантация на хематопоетични стволови клетки: протокол от проучване за фаза I/II японско изпитване. BMJ Open, 9(7), e26403. https://doi.org/10.1136/bmjop bg-2018-026403
24. Lin, D., Hu, B., Li, P., Zhao, Y., Xu, Y., & Wu, D. (2021). Роли на чревната микробиота и микробните метаболити при остра GVHD. Експериментална хематология и онкология, 10(1), 49. https:// doi.org/10.1186/s40164-021-00240-3
25. Ghimire, S., Weber, D., Mavin, E., Wang, XN, Dickinson, AM, & Holler, E. (2017). Патофизиология на GvHD и други основни усложнения, свързани с HSCT. Граници в имунологията, 8, 79. https://doi.org/10.3389/fmmu.2017.00079
26. Xu, J., Wang, X., Chen, J., Chen, S., Li, Z., Liu, H., Bai, Y., & Zhi, F. (2020). Мезенхимни стволови клетки, получени от ембрионални стволови клетки, насърчават целостта и регенерацията на епитела на дебелото черво чрез повишаване на циркулиращия IGF-1 при мишки с колит. Тераностика, 10 (26), 12204– 12222. https://doi.org/10.7150/thno.47683
27. Zhao, Y., Huang, J., Li, T., Zhang, S., Wen, C., & Wang, L. (2022). Берберинът подобрява aGVHD чрез ремоделиране на чревната микробиота, потискане на сигнала TLR4 и възстановяване на бариерата на дебелото черво за инхибиране на инфламазомата на NLRP3. Вестник за клетъчна и молекулярна медицина, 26 (4), 1060–1070. https://doi.org/10. 1111/jcmm.17158
28. Юан, М., Лин, Л., Цао, Х., Джън, У., Ву, Л., Зуо, Х., Тиен, X., и Сонг, Х. (2022). Чревната микробиота участва в защитния ефект на HO-1/BMMSC върху чернодробна трансплантация със стеатотични чернодробни присадки при плъхове. Граници в микробиологията, 13, 905567. https://doi.org/10.3389/fmicb.2022.905567
29. Taur, Y., Jenq, RR, Perales, M., Littmann, ER, Morjaria, S., Ling, L., No, D., Gobourne, A., Viale, A., Dahi, PB, Ponce , DM, Barker, JN, Giralt, S., van den Brink, M., & Pamer, EG (2014). Ефектите на бактериалното разнообразие на чревния тракт върху смъртността след алогенна трансплантация на хематопоетични стволови клетки. Кръв, 124 (7), 1174–1182. https://doi.org/10.1182/ кръв-2014-02-554725
30. Jenq, RR, Taur, Y., Devlin, SM, Ponce, DM, Goldberg, JD, Ahr, KF, Littmann, ER, Ling, L., Gobourne, AC, Miller, LC, Docampo, MD, Peled, JU, Arpaia, N., Cross, JR, Peets, TK, Lumish, MA, Shono, Y., Dudakov, JA, Poeck, H., … van den Brink, MRM (2015). Intestinal Blautia се свързва с намалена смъртност от реакция на присадка срещу гостоприемник. Биология на трансплантацията на кръв и костен мозък: Вестник на Американското дружество за трансплантация на кръв и костен мозък, 21 (8), 1373–1383. https://doi.org/10.1016/j.bbmt.2015.04.016
31. Le Bastard, Q., Chevallier, P., & Montassier, E. (2021). Чревен микробиом при алогенна трансплантация на хематопоетични стволови клетки и специфични промени, свързани с остра болест на присадка срещу приемник. Световен вестник по гастроентерология, 27 (45), 7792–7800. https:// doi.org/10.3748/wjg.v27.i45.7792
32. Li, X., Lu, C., Fan, D., Lu, X., Xia, Y., Zhao, H., Xu, H., Zhu, Y., Li, J., Liu, H ., & Xiao, C. (2020). Човешките пъпни мезенхимни стволови клетки показват терапевтичен потенциал при ревматоиден артрит чрез регулиране на взаимодействията между имунитета и чревната микробиота чрез арилния въглеводороден рецептор. Граници в клетъчната и биологията на развитието, 8, 131. https://doi.org/10.3389/fcell.2020.00131
33. Sun, J., Ding, X., Liu, S., Duan, X., Liang, H., & Sun, T. (2020). Мезенхимни стволови клетки, получени от адипоза, намаляват острото белодробно увреждане и подобряват чревната микробиота при септични плъхове. Изследване и терапия на стволови клетки, 11(1), 384. https://doi.org/10.1186/ s13287-020-01902-5
34. Soontararak, S., Chow, L., Johnson, V., Coy, J., Wheat, W., Regan, D., & Dow, S. (2018). Мезенхимни стволови клетки (MSC), получени от индуцирани плурипотентни стволови клетки (iPSC), еквивалентни на MSC, получени от мастна тъкан, за насърчаване на заздравяването на червата и нормализирането на микробиома в модел на възпалително заболяване на червата при мишки. Транслационна медицина на стволови клетки, 7 (6), 456–467. https://doi.org/ 10.1002/sctm.17-0305
35. Li, J., Zou, C. и Liu, Y. (2022). Подобряване на индуцираната от овалбумин хранителна алергия при мишки чрез насочено ректално и колонно доставяне на цианидин-3-О-глюкозид. Храни (Базел, Швейцария), 11 (11), 1542. https://doi.org/10.3390/foods11111542
36. Маруяма, С., Мацуока, Т., Хосоми, К., Парк, Дж., Нишимура, М., Мураками, Х., Кониши, К., Миячи, М., Кавашима, Х., Мизугучи, К. ., Кобаяши, Т., Оока, Т., Ямагата, З. и Кунисава, Дж. (2022). Класификация на появата на дислипидемия въз основа на чревни бактерии, свързани с приема на ечемик. Граници в храненето, 9, 812469. https://doi.org/10.3389/fnut.2022.812469
37. Lee, SH, Park, H., Kang, CD, Choi, DH, Park, SC, Park, JM, Nam, S., Chae, GB, Lee, KY, Cho, H., & Lee, SJ ( 2022). Висока доза интрамускулна добавка на витамин D3 влияе върху чревната микробиота на пациенти с инфекция с clostridioides difcile. Граници в клетъчната и инфекциозна микробиология, 12, 904987. https://doi.org/10.3389/fcimb.2022.904987
38. Майер, Р. К., Лейн, А. И., Уенингер, С. Н., Мартинез, Т. М., Кангат, А., Лаубиц, Д., & Дука, Ф. А. (2022). Олигофруктозата възстановява постпрандиалните нива на късоверижни мастни киселини по време на хранене с високо съдържание на мазнини. Затлъстяване (Silver Spring, Md.), 30 (7), 1442–1452. https://doi.org/ 10.1002/oby.23456
39. Sang, J, Zhuang, D, Zhang, T, Wu, Q, Yu, J, Zhang, Z (2022) Конвергентно и различно възрастово моделиране на разнообразието на чревната микробиота при хора и нечовекоподобни примати. M-системи: e151221. https:// doi.org/10.1128/msystems.01512-21
40. Ge, X., He, X., Liu, J., Zeng, F., Chen, L., Xu, W., Shao, R., Huang, Y., Farag, MA, Capanoglu, E. , El-Seedi, HR, Zhao, C., & Liu, B. (2022). Подобряване на диабет тип 2 чрез новата 6, 8-гуанидил лутеолин хинон-хромова координация чрез биохимични механизми и взаимодействие на чревната микробиота. Journal of Advanced Research, S2090–1232(22), 121–129. https://doi.org/ 10.1016/j.jare.2022.06.003
41. Ding, Q., Cao, F., Lai, S., Zhuge, H., Chang, K., Valencak, TG, Liu, J., Li, S., & Ren, D. (2022). Lactobacillus plantarum ZY08 облекчава хроничната чернодробна стеатоза, предизвикана от алкохола, и чернодробно увреждане при мишки чрез възстановяване на чревната хомеостаза. Food Research International (Отава, Онтарио), 157, 111259. https://doi.org/10. 1016/j.foodres.2022.111259
42. Rees, NP, Shaheen, W., Quince, C., Tselepis, C., Horniblow, RD, Sharma, N., Beggs, AD, Iqbal, TH, & Quraishi, MN (2022). Систематичен преглед на предсказуемите биомаркери на донора и реципиента за отговор на трансплантация на фекална микробиота при пациенти с улцерозен колит. EBioMedicine, 81, 104088. https:// doi.org/10.1016/j.ebiom.2022.104088
43. Li, A., Abraham, C., Wang, Y., & Zhang, Y. (2020). Нови прозрения в основната биология на острата болест на присадката срещу приемника. Haematologica, 105 (11), 2540–2549. https://doi.org/10.3324/haematol. 2019.240291 44. Каяма, Х., Окумура, Р. и Такеда, К. (2020). Взаимодействие между микробиотата, епитела и имунните клетки в червата. Годишен преглед на имунологията, 38, 23–48. https://doi.org/ 10.1146/Annu rev-immunol-070119-115104
45. Schluter, J., Peled, JU, Taylor, BP, Markey, KA, Smith, M., Taur, Y., Niehus, R., Stafas, A., Dai, A., Fontana, E., Amoretti , LA, Райт, RJ, Morjaria, S., Fenelus, M., Pessin, MS, Chao, NJ, Lew, M., Bohannon, L., Буш, A., … Xavier, JB (2020). Чревната микробиота е свързана с динамиката на имунните клетки при хората. Природа, 588 (7837), 303–307. https://doi.org/10.1038/ s41586-020-2971-8
46. Yang, J, Yang, H, Li, Y (2022) Тройните взаимодействия между чревната микробиота, микобиотата и имунитета на гостоприемника. Критични прегледи в науката за храните и храненето: 1–21. https://doi.org/10.1080/10408 398.2022.2094888
47. An, J., Liu, Y., Wang, Y., Fan, R., Hu, X., Zhang, F., Yang, J., & Chen, J. (2022). Ролята на чревната мукозна бариера при автоимунно заболяване: потенциална цел. Frontiers in Immunology, 13, 871713. https://doi.org/10.3389/fmmu.2022.871713
