bgезик
Начало / знание / Съдържание

знание

Подобрена антимеланогенеза и антиоксидантни ефекти на полизахарид от семена на Cuscuta Chinensis Lam след ензимна хидролиза

Mar 30, 2023

Резюме

Полизахаридът от Cuscuta chinensis (CPS) се екстрахира с помощта на гореща вода и ензимно хидролизираният полизахарид от C. chinensis (ECPS) се получава чрез процеса на ензимна хидролиза на мананаза. Целта на това изследване беше да се изследва антимеланогенната активност на ECPS и CPS в меланомни клетки B16F10. Антиоксидантната активност in vitro беше оценена чрез тяхната редуцираща способност на фери желязото и активността на DPPH за отстраняване на свободните радикали. Разпределението на молекулната маса на полизахаридите се определя с помощта на SEC-MALLS-RI. CPS беше успешно ензимно разграден с помощта на маноза и среднопретеглените молекулни тегла на CPS и ECPS бяха 434,6 kDa и 211,7 kDa. Резултатите от анализите на биологичната активност предполагат, че ензимно хидролизираният полизахарид има по-добра антимеланогенна активност и антиоксидантен ефект от оригиналния полизахарид. ECPS проявява антимеланогенна активност чрез понижаване на експресията на тирозиназа, MITF и TRP-1 без цитотоксични ефекти в B16F10 меланомни клетки. В заключение, ECPS има потенциала да се превърне в продукт за избелване на кожата. Според съответните проучвания,цистанчее широко разпространена билка, известна като „чудотворната билка, която удължава живота“. Основният му компонент е цистанозид, който има различни ефекти като антиоксидант, противовъзпалително и стимулиране на имунната функция. Механизмът междуцистанчеиизбелване на кожатасе крие в антиоксидантния ефект на цистанхевите гликозиди.Меланинв човешката кожа се произвежда от окислението на тирозин, катализирано оттирозиназа, а окислителната реакция изисква участието на кислород, така че свободните от кислород радикали в тялото се превръщат във важен фактор, влияещ върху производството на меланин. Cistanche съдържа цистанозид, който е антиоксидант и може да намали генерирането на свободни радикали в тялото, като по този начининхибиране на производството на меланин.

Ключови думи:Cuscuta chinensis полизахарид; Антимеланогенна активност; Полизахарид за ензимна хидролиза; Антиоксидантна активност

Въведение 

Меланинът е краен продукт на трансформация на L-тирозин, който е основният определящ фактор за цвета на косата и кожата и играе жизненоважна роля в защитата срещу увреждане от ултравиолетовото лъчение (1). Въпреки това, натрупването на меланин може да участва в анормална пигментация и да доведе до хиперпигментация на кожата, мелазма, слънчева меланоза и ефелиди (2). Биосинтезата на меланин включва последователност от ензимни и окислителни реакции и тирозиназата играе важна роля в процеса (3). Свързаният с тирозиназа протеин (TRP-1) улеснява образуването на DHICA оксидаза в биосинтетичния път на меланин (4). Вътреклетъчният транскрипционен фактор, свързан с микрофталмия (MITF), е важна транскрипция

регулатор на гените за биосинтеза на меланин. MITF също участва в регулирането на пигментацията, пролиферацията и диференциацията на меланоцитите (5). a-MSH-меланокортин 1 рецепторно сигнализиране се случва в меланогенни специфични ензими, включително TRP-1; тирозиназата също се регулира от MITF (5). Много средства за избелване на кожата упражняват антимеланогенни ефекти чрез регулиране на експресията на тирозиназа или инхибиторни ефекти върху активността на тирозиназата. Освен това нивото на вътреклетъчните антиоксиданти и производството на свободни радикали също влияят върху съдържанието на меланин (6). Следователно инхибиторите на тирозиназата и антиоксидантните съединения често се избират като агенти за избелване на кожата. Cuscuta chinensis Lam., наречена TuSiZi на китайски, е традиционна китайска медицина, която обикновено се използва като функционална храна и е известно, че подобрява способността на репродуктивната система (7). През последните години някои доклади показват използването му за лечение на лунички и витилиго (8). Други доклади показват, че той има положителен ефект върху защитата на кожата (9) и индуцира инхибирането на активността на тирозиназата (10).

rou cong rong whitening

Кликнете върху Rou Cong Rong Предимства за избелване

Питай за още:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

Полизахаридите са основните съставки на водния екстракт от C. chinensis Lam. семена, за които се счита, че имат антиапоптозна (11) и имунологична активност (12). Предишни аналитични резултати показват, че C. chinensis Lam. полизахаридът се състои от фруктоза, маноза, ксилоза и арабиноза; манозата е основният компонент на захарта (13). Много изследователи са показали, че вискозитетът (14), разпределението на молекулното тегло (Mw) (15) и съотношението на монозахаридите (16) на полизахаридите имат голям ефект върху тяхната биоактивност. Нещо повече, скорошни изследвания показват, че разградените полизахариди с ниска Mw проявяват по-високи антиоксидантни и инхибиращи тирозиназа активности от оригиналния полизахарид (17). По този начин, производството на полизахарид с ниско Mw от C. chinensis Lam. семето е необходимо за подобряване на биоактивността му. Сред различните процеси на разграждане, основните предимства на ензимното разграждане са специфичността на субстрата, високата селективност и меките условия, които произвеждат хидролизати с добре дефинирани структури (18).

Въз основа на тези фармакологични изследвания, ние спекулирахме, че C. chinensis полизахарид (CPS) и ензимно хидролизиран C. chinensis полизахарид (ECPS) могат да бъдат ефективни ботанически лекарства за подобряване на хиперпигментацията. Маназата се използва за получаване на ниско Mw ECPS от семена. Освен това бяха оценени антимеланогенезата и антиоксидантната активност на полизахаридите с различно Mw и беше изследвана връзката между биоактивностите и Mw на полизахаридите.

материали и методи

Реактиви

Химикали за ензимна и антиоксидантна активност са закупени от Sigma Co. (САЩ). Всички други реагенти и химикали са закупени от Aladdin (Китай).

Изготвяне на CPS и ECPS

Лечебните материали от семената на Cuscuta chinensis Lam са предоставени от Guang Dong Feng Chun Pharmaceutical CO., LTD (Китай). Около 500 g сухи материали се стрити на прах и се накисват с 1200 ml 80 процента етанол за 24 часа при стайна температура, за да се отстранят липидите, олигозахаридите и оцветените материали. Предварително обработените проби се инфилтрират с плат и след това изсушеният остатък се екстрахира с 3000 mL вода при 90 градуса три пъти. Водните екстракти се отделят от остатъка чрез центрофугиране (4000 g за 5 минути при 22 градуса) и след това се концентрират при 70 градуса под вакуум; кондензатът се утаява с 60 процента етанол при 3 градуса за 24 часа. Накрая, утайката беше депротеинизирана по метода на Sevag, диализирана с 3500 Da мембрана, лиофилизирана и след това белязана с C. chinensis полизахарид (CPS).

Ензимно хидролизираният полизахарид C. chinensis (ECPS) се получава чрез хидролиза с маноза (0.1 процента в натриев ацетатен буфер) в съотношение маноза към субстрат 5:1 (v/w) при 60 градуса, pH 4.5 за 6 часа. След това реакцията на катализа се прекратява във вряща вода за 10 минути. Реакционният разтвор се центрофугира при 10,{10}} g за 15 минути (4 градуса) и супернатантата се събира за диализа при 3 градуса за 3 дни с мембрана 3500 Da за отстраняване на малките молекулни вещества и се лиофилизира.

Съдържанието на въглехидрати се тества по метода на фенолна сярна киселина с глюкоза като стандартно вещество на калибрационната крива.

cistanche tubulosa

SEC-MALLS-RI измерване

Използвана е хроматография с изключване на размера (Waters, САЩ), комбинирана с многоъгълен детектор за разсейване на лазерна светлина (Wyatt, САЩ) и детектор с индекс на пречупване (Waters, САЩ) (SEC-MALLS-RI) за откриване на среднопретеглените молекулни тегла на полизахариди. SEC-MALLS-RI се провежда с Phenomenex Polysep-GFC-Linear колона (8 mm×3{{10}}0 mm); проби (2 mg/mL) се разтварят с подвижна фаза, която се състои от 0.1 М натриев хлорид. Обемът на инжектиране беше 100 mL, а скоростта беше настроена на 0,7 mL/min.

Тест за инхибиране на гъбична тирозиназа

Инхибирането на гъбична тирозиназа (19) се извършва, както беше съобщено по-рано с модификации. Накратко, 25 mL коджикова киселина (положителна контрола) или разтвори на проби (25 mL от 10 mM L-тирозин, 25 mL от 0.5 mM L-DOPA и 875 mL от 50 mM фосфатен буфер (рН 6,5) разтвор) се смесват. След това се добавят 38 mL от 2100 U/mL гъбена тирозиназа и се разбърква на вортекс. След 0.5-h инкубиране при 37 градуса, абсорбцията се измерва с четец на микроплаки при 475 nm (Thermo Fisher, САЩ). Процентът на инхибиране на тирозиназната активност се изчислява по следната формула: процент на инхибиране на тирозиназа=[(А-контрола – А-проба) / А-контрола] ×100, където А-контрола представлява абсорбцията при 475 nm без проба и A-проба представлява абсорбцията при 475 nm с пробата.

Клетъчна култура и тест за жизнеспособност

Миши B16F10 меланомни клетки бяха закупени от Biochemistry and Cell Biology (Китай). Клетките се поддържат в модифицирана среда на Dulbecco Eagle Medium (DMEM), допълнена с 10 процента фетален говежди серум (FBS), 100 mg/mL стрептомицин и 100 IU/mL пеницилин при 37 градуса във влажна среда, съдържаща 5 процента CO2. Клетките се посяват върху културални плаки и се допълват с различни концентрации на проби и а-меланоцит стимулиращ хормон (a-MSH) в продължение на 72 часа за измерване на вътреклетъчната тирозиназна активност и количествено определяне на съдържанието на меланин.

Анализът на 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолиев бромид (MTT) беше извършен за тестване на клетъчната жизнеспособност (20). Накратко, 96-плаки с гнезда се посяват с миши B16F10 меланомни клетки. Обем от 50 mL от 2 mg/ml МТТ се прехвърля във всяка ямка след третиране със 100 mL от различни концентрации на пробата в продължение на 24 часа. След 4-h инкубиране реакцията се прекратява и диметилсулфоксидът се добавя за разтваряне на неразтворимия резултат. Абсорбцията се измерва при 590 nm с четеца на микроплаки.

Измерване на съдържанието на меланин

Откриването на съдържанието на меланин се извършва с леко модифициран метод (21). След промиване с леден PBS, меланомните клетки (2 × 104 клетки на ямка) се посяват в 96-плака с ямки и се инкубират при 37 градуса за 48 часа. След това към всяка ямка се добавят 100 mL NaOH (1N) за разтваряне на меланомни клетки при 80 градуса за 30 минути. Лизатът се центрофугира при 15,000 g за 15 минути (4 градуса). След това се измерва абсорбцията с четеца на микроплаки при 405 nm. Всички експерименти бяха проведени в три екземпляра.

Анализ на вътреклетъчната тирозиназна активност

Анализът на вътреклетъчната тирозиназна активност беше извършен съгласно предишна литература с незначителни модификации (22). Накратко, меланомните клетки бяха лизирани с лизисен буфер (1 mM PMSF, 1 процент Triton X-100, 20 mM натриев фосфат) чрез замразяване-размразяване. След центрофугиране на лизата при 15,000 g за 10 min (4 градуса), протеиновото съдържание на супернатанта се определя чрез анализ на бицинхонинова киселина (BCA). Супернатантният протеин (10 mg) се прехвърля в 100 mL от реакционната смес (0.1 процента L-DOPA и 0.1 М фосфатен буфер). След 60 минути инкубиране при 37 градуса, тирозиназната активност се измерва с четеца на микроплаки при 450 nm. Всички експерименти бяха проведени в три екземпляра.

Желязото намалява мощността

Анализът на силата на редуциране на фери желязото беше извършен съгласно публикуван преди това метод с незначителни модификации (23). Различните концентрации на пробите (2 mL) или Vc (положителна контрола) се смесват с 2 mL калиев ферицианид (1 процент, W/V) и 2 mL фосфатен буфер (0.2 М, рН 6,8). След инкубиране при 50 градуса за 30 минути, 2 mL трихлороцетна киселина (10 процента, W/V) се прехвърлят в реакционната смес и се центрофугират при 4000 g за 15 минути (22 градуса). Супернатантата (2 mL) се смесва със сместа, съдържаща 2 mL дестилирана вода и 0.4 mL FeCl3 (0.1 процента, W/V). След 10 минути инкубиране при 37 градуса, абсорбцията се измерва с четеца на микроплаки при 700 nm.

Анализ на DPPH радикал-поглъщаща активност

Анализът на DPPH-почистваща активност беше проведен, както беше докладвано по-рано с някои модификации (24). Накратко, 2 mL от пробата се добавят към 2 mL 0.1 mM DPPH разтвор и се разбъркват. След 30 минути инкубиране на тъмно, абсорбцията се измерва с четеца на микроплаки при 517 nm.

Анализ на протеинова експресия чрез Western blot

cistanche supplement whitening

След третиране с различни концентрации на ECPS в продължение на 72 часа, клетките се промиват с PBS и се лизират в RIPA буфер (150 mM NaCl в 50 mM pH 8.0 Tris-HCl , 0.5 процента натриев деоксихолат, 1,0 процента недиетичен P-40 и 0,1 процента натриев додецилсулфат). След центрофугиране при 10,000 g за 25 минути (4 градуса), супернатантата от лизатите се събира. Протеините се подлагат на 12% SDS-PAGE и след това се прехвърлят в поливинилиден дифлуоридна мембрана. Блокирането се извършва в Tris-буфериран физиологичен разтвор с Tween-20 и 2 процента обезмаслено мляко на прах (TBST) и след това се инкубира в продължение на 12 часа при 4 градуса. Използваните първични антитела са: анти-актин (1:5000), анти-TRP-1 (1:500), анти-тирозиназа (1:500) и анти-MITF (1:1000). Първичните антитела бяха отстранени и мембраните бяха почистени два пъти с TBST. След това мембрани с вторично антитяло, конюгирано с пероксидаза от хрян (Santa Cruz, САЩ) се инкубират в продължение на 60 минути при стайна температура. Протеиновите ленти се промиват отново с TBST и се визуализират с ECL комплект (Amersham Pharmacia Biotech, САЩ), използвайки UVP система за изображения (UVP, САЩ).

Статистически анализ

Всички резултати са докладвани като средно ± SD и експериментите са повторени три пъти. Сравненията между групите бяха оценени с помощта на ANOVA, последван от теста на Dunnett. Единични сравнения между две групи бяха направени чрез t-тест на Student. Всички статистически анализи бяха направени с помощта на софтуер SPSS (версия 16.0). Po0.05 обикновено се смяташе за статистически значимо.

Резултати

Mw и общите полизахариди на ECPS и CPS

Общото съдържание на полизахариди в ECPS и CPS, измерено чрез анализ на фенол-сярна киселина, е съответно 89,17 и 90,26 процента. Междувременно, Mw на ECPS и CPS бяха измерени от SEC-MALLS-RI. Mw на ECPS е 211.7 kDa, което е по-ниско от CPS (434.6 kDa). Фигура 1А показва относителния интензитет (RI) за ECPS и CPS; след ензимна хидролиза от маноза, пиковото време на задържане на ECPS е по-дълго от това на CPS. Както е показано на фигура 1B, диференциалните тегловни фракции на полизахаридите са представени като функция на моларната маса за пробите. Разпределението на моларната маса на полизахаридите се променя значително чрез ензимна хидролиза. Диференциалната тегловна фракция на ECPS в областта с ниско Mw се увеличава, което предполага, че CPS е ензимно разграден до полизахарид с ниско Mw.

rou cong rong benefits

Антиоксидантна активност на полизахаридите

Способностите на DPPH за отстраняване на свободните радикали на ECPS и CPS са докладвани на Фигура 2А. Дейностите за отстраняване на свободните радикали на полизахаридните проби и Vc показват зависима от дозата активност. В настоящото проучване способността на CPS за улавяне на свободните радикали е по-ниска от тази на ECPS. И двете обаче показват по-слаб ефект на улавяне на свободните радикали от положителната проба. Стойностите на IC50 на ECPS и CPS бяха съответно 0.39 и 0.51 mg/mL. Както е показано на Фигура 2B, общата антиоксидантна активност може да бъде оценена чрез тестване на мощността на редуциране на желязото. Концентрациите варират от 0,1 до 1 mg/mL; както полизахаридните проби, така и Vc показват антиоксидантна активност по дозозависим начин. Освен това стойността на абсорбцията на ECPS винаги е била по-висока от CPS при същата концентрация.

Ефект на ECPS и CPS върху активността на гъбичната тирозиназа и жизнеспособността на клетките

Както е показано на Фигура 2C, инхибиторната активност на тирозиназата на полизахаридите (0.1B1 mg/mL) представлява зависима от дозата зависимост. Освен това, инхибиторният ефект на ECPS винаги е бил по-висок от CPS при същата концентрация. МТТ анализът беше извършен за оценка на цитотоксичните ефекти на ECPS и CPS в B16F10 меланомни клетки. Както е показано на Фигура 2D, няма значителни промени в жизнеспособността на клетките B16F10 с различни концентрации (0B320 mg/mL) на ECPS и CPS. Въз основа на тези резултати използвахме тези диапазони на концентрация в

допълнителни изследвания.

cistanche for sale

Ефект на ECPS и CPS върху вътреклетъчната активност на тирозиназата и съдържанието на меланин

За да се сравнят ефектите на ECPS и CPS върху активността на вътреклетъчната тирозиназа и меланогенезата в меланомния клетъчен модел B16F10, инхибиторната сила на ECPS и CPS върху съдържанието на меланин и активността на тирозиназа в a-MSH-стимулиран B16F1{{ Изследвани са 16}} клетки. Както е показано на Фигура 3, съдържанието на меланин и тирозиназната активност на клетките B16F10 са значително повишени в сравнение с нестимулираните клетки B16F10 (Po 0.01). При концентрации от 40 mg/mL (ECPS) и 160 mg/mL (CPS), повишаването на съдържанието на меланин може да бъде смекчено по дозозависим начин (Po0,01 и Po0,05). По подобен начин, лечението с ECPS (40 mg/mL) и CPS (160 mg/mL) потиска тирозиназната активност на B16F10 клетки (Po 0,01 и Po 0,05). Освен това, ECPS показва по-висока инхибиторна активност на тирозиназа върху меланогенезата, отколкото CPS. ECPS (160 и 320 mg/mL) упражнява анти-меланогенезен ефект, сравним с положителната контрола (койична киселина), която се използва широко като биоактивно съединение за избелване на кожата.

how to take rou cong rong

Ефект на ECPS върху протеиновите нива на тирозиназа, MITF и TRP-1 в клетки B16F10

Както е показано на Фигура 4, ECPS значително намалява нивата на експресия на тирозиназа, MITF и TRP-1 протеини в B16F10 клетки по дозозависим начин (Po0.05 и Po0. 01). Тези резултати показват, че ECPS инхибира експресията на тирозиназа чрез понижаване на протеиновата експресия на TRP-1 и MITF.

Дискусия

Естествените полизахариди от C. chinensis са получили внимание, което се дължи на добрите им ефекти върху инхибирането на тирозиназата, улавянето на свободните радикали и защитата на кожата (25-27). Въпреки това, малко изследвания са фокусирани върху антимеланогенезната активност на ензимната модификация на полизахаридите. Предишни изследвания показват, че разградените полизахариди чрез процес на ензимна хидролиза показват превъзходен ефект на улавяне на свободните радикали (28). Освен това, биологичната активност на полизахаридите е тясно свързана с тяхното разпределение на Mw. Теоретично, полизахаридите с ниско Mw са по-активни от полизахаридите с високо Mw поради тяхното силно проникващо свойство върху клетъчните мембрани (29, 30). Въпреки това, антимеланогенезният ефект на ECPS върху B16F10 клетки все още не е проучен. Полизахаридът с ниско Mw се получава чрез ензимна хидролиза с маноза.

Оксидативният стрес може да произведе прекомерни свободни радикали и да доведе до оксидативно увреждане. Предишни проучвания са доказали, че кожните заболявания са тясно свързани с натрупването на свободни радикали (31). Освен това прекомерните свободни радикали играят жизненоважна роля в потискането на меланогенезата на меланомните клетки и растежа на меланоцитите (32). Тирозиназата е многофункционален оксидантен ензим, който съдържа бронз и е жизненоважен за насърчаване на биосинтезата на меланин (33). Пигментацията на кожата и различни кожни заболявания обаче са тясно свързани с натрупването на меланин и причиняват сериозен естетичен проблем (34).

Активните съставки с антиоксидантни и антитирозиназни способности могат да упражнят защита на кожата и да инхибират меланогенезата (35). Нашите резултати показват, че по-ниската Mw на ензимно модифицираните полизахариди показват по-добри антиоксидантни и антитирозиназни активности в сравнение с оригиналните полизахариди in vitro. Подобрението се дължи на по-голямата повърхностна площ и по-добрата разтворимост във вода, което е в съответствие с предишно проучване (17), което показва, че разграденият полизахарид от Sargassum fusiforme притежава превъзходна антитирозиназна активност и антиоксидантна активност от оригиналния полизахарид.

cistanche reddit whitening

Нормалните меланоцити лежат на кръстовището на епидермиса и дермата на кожата и генерират меланин, който се прехвърля към кератиноцитите (36). В настоящото изследване бяха използвани миши B16F10 меланомни клетки, тъй като те притежават меланогенни механизми, известно е, че имат вътреклетъчна тирозиназа и могат да генерират меланин, който е свързан с a-MSH стимулация и меланогенеза (37). Тирозиназната активност, съдържанието на меланин и клетъчната жизнеспособност са in vitro анализите, използвани за скрининг на антимеланогенезата в настоящото изследване. CPS и ECPS показват зависим от дозата инхибиторен ефект върху активността на тирозиназата и синтеза на меланин в B16F10 клетки. ECPS показа по-силен антимеланинов синтез и антитирозиназен ефект.
Свързаният с тирозиназа протеин-1 (TRP-1) и тирозиназата играят жизненоважна роля в биосинтезата на меланин и пътищата на меланогенезата (38). MITF е клетъчен транскрипционен фактор на гена тирозиназа, който участва в меланогенезата. Обикновено активирането на TRP-1 и тирозиназата повишава експресията на MITF протеин и предизвиква увеличаване на синтеза на меланин (39). По този начин агентите за избелване на кожата могат да имат свойството да инхибират сигналния път, участващ в активирането на TYP-1 или тирозиназа. Следователно, ние изследвахме ефектите на ECPS върху TRP-1, клетъчната тирозиназа и MITF протеиновите експресии, за да проучим механизмите, лежащи в основата на инхибирането на активността на тирозиназата и меланогенезата. Резултатите от Western blot анализа показват, че ECPS потиска експресията на TRP-1, тирозиназа и MITF в B16F10 клетки и предполага, че ECPS намалява меланогенезата чрез понижаване на експресията на тирозиназа, MITF и TRP-1 в B16F10 меланомни клетки. Резултатът е от предишно проучване, показващо, че водният екстракт от семена на Cuscuta japonica значително инхибира a-MSH-индуцираната синтеза на меланин и тирозиназната активност чрез потискане на p38 MAPK фосфорилирането, инхибиране на нивата на cAMP и впоследствие намаляване на експресията на TRP и MITF (40) .
В обобщение, ензимно модифицираният полизахарид притежава превъзходни антиоксидантни и антимеланогенни ефекти от оригиналния полизахарид. Освен това, този антимеланогенен ефект на ECPS е медииран от потискането на експресията на TRP-1, тирозиназа и MITF в миши B16F10 клетки. ECPS може да бъде приложим за използване в областта на козметичните и медицински продукти.

Благодарности

Тази работа беше подкрепена от Националната природонаучна фондация на Китай (грант № 81373640).

Препратки

1. Райли PA. Меланогенеза и меланом. Pigment Cell Research 2003; 16: 548–552, doi: 10.1034/j.1600-0749. 2003.00069.x.
2. Ortonne JP, Bissett DL. Последни прозрения за хиперпигментацията на кожата. J Investig Dermatol Symp Proc 2008; 13: 10–14, doi: 10.1038/jidsymp.2008.7.
3. Arung ET, Kuspradini H, Kusuma IW, Shimizu K, Kondo R. Валидиране на листата на Eupatorium triplinerve Vahl, билка за грижа за кожата от Източен Калимантан, използване на анализ на биосинтеза на меланин. J Acupunct Meridian Stud 2012; 5: 87–92, doi: 10.1016/ j.jams.2012.01.003.
4. Kobayashi T, Urabe K, Winder A, Jiménez-Cervantes C, Imokawa G, Brewington T, et al. Свързаният с тирозиназа протеин 1 (TRP1) функционира като DHICA оксидаза в биосинтезата на меланин. EMBO J 1994; 13: 5818–5825.
5. Costin GE, Hearing VJ. Пигментация на човешката кожа: меланоцитите модулират цвета на кожата в отговор на стрес. FASEB J 2007; 21: 976–994, doi: 10.1096/fj.06-6649рев.
6. Galván I, Alonso-Alvarez C. Вътреклетъчен антиоксидант определя експресията на базиран на меланин сигнал в птица. PLoS One 2008; 3: e3335, doi: 10.1371/journal.pone. 0003335.
7. Yang J, Wang Y, Bao Y, Guo J. Общите флавони от аускулт на спермата обръщат намаляването на нивото на тестостерон и експресията на гена на андрогенния рецептор при мишки с бъбречен ян дефицит. J Ethnopharmacol 2008; 119: 166–171, doi: 10.1016/j.jep.2008.06.027.
8. Donnapee S, Li J, Yang X, Ge AH, Donkor PO, Gao XM и др. Cuscuta chinensis Lam.: Систематичен преглед на етнофармакологията, фитохимията и фармакологията на важна традиционна билкова медицина. J Ethnopharmacol 2014; 157: 292–308, doi: 10.1016/j.jep.2014.09.032.
9. Nisa M, Akbar S, Tariq M, Hussain Z. Ефект на водния екстракт от Cuscuta chinensis върху 7,12-диметилбенз[a]антрацен-индуцирани кожни папиломи и карциноми при мишки. J Ethnophar macol 1986; 18: 21–31, doi: 10.1016/0378-8741(86)90040-1.
10. Wang TJ, An J, Chen XH, Deng QD, Yang L. Оценка на ефекта на семената на Cuscuta chinensis върху меланогенезата: Сравнение на водни и етанолни фракции in vitro и in vivo. J Ethnopharmacol 2014; 154: 240–248, doi: 10.1016/j.jep. 16.04.2014 г.
11. Sun SL, Guo L, Ren YC, Wang B, Li RH, Qi YS и др. Антиапоптозен ефект на полизахарид, изолиран от семената на Cuscuta chinensis Lam върху кардиомиоцитите при стареещи плъхове. Mol Biol Rep 2014; 41: 6117–6124, doi: 10.1007/s11033- 014-3490-1.
12. Wang Z, Fang JN, Ge DL, Li XY. Химическа характеристика и имунологична активност на кисел полизахарид, изолиран от семената на Cuscuta chinensis Lam. Acta Pharmacol Sin 2000; 21: 1136–1140.
13. Yang S, Xu X, Xu H, Xu S, Lin Q, Jia Z и др. Пречистване, характеризиране и биологичен ефект на обръщане на бъбречно-ян дефицита на полизахариди от мускулната сперма. Carbohydr Polym 2017; 175: 249–256, doi: 10.1016/j.carbpol. 2017.07.077.
14. Katayama S, Nishio T, Nishimura H, Saeki H. Имуномодулиращи свойства на високо вискозен полизахарид екстракт от Gagome alga (Kjellmaniella crassifolia). Растителна храна Human Nutr 2012; 67: 76–81, doi: 10.1007/s11130-011- 0271-z.
15. Pengzhan Y, Ning L, Xiguang L, Gefei Z, Quanbin Z, Pengcheng L. Антихиперлипидемични ефекти на сулфатирани полизахариди с различно молекулно тегло от Ulva pertusa (Chlorophyta). Pharmacol Res 2003; 48: 543–549, doi: 10.1016/ S1043-6618(03)00215-9.
16. Jiang Y, Qi X, Gao K, Liu W, Li N, Cheng N и др. Връзка между молекулното тегло, монозахаридния състав и имунобиологичната активност на полизахаридите на Astragalus. Glycoconj J 2016; 33: 755–761, doi: 10.1007/ s10719-016-9669-z.
17. Chen BJ, Shi MJ, Cui S, Hao SX, Hider RC, Zhou T. Подобрена антиоксидантна и антитирозиназна активност на полизахарид от Sargassum fusiforme чрез разграждане. Int J Biol Macromol 2016; 92: 715–722, doi: 10.1016/j.ijbiomac. 2016.07.082.
18. McCleary BV. Ензимна модификация на растителни полизахариди. Int J Biol Macromol 1986; 8: 349–354, doi: 10.1016/ 0141-8130(86)90054-1.
19. Baurin N, Arnoult E, Scior T, Do QT, Bernard P. Предварителен скрининг на някои тропически растения за антитирозиназна активност. J Ethnopharmacol 2002; 82: 155–158, doi: 10.1016/S0378- 8741(02)00174-5.
20. Mosmann T. Бърз колориметричен анализ за клетъчен растеж и оцеляване: Приложение към анализи на пролиферация и цитотоксичност. J Immunol Methods 1983; 65: 55–63, doi: 10.1016/0022- 1759(83)90303-4.
21. Hosoi J, Abe E, Suda T, Kuroki T. Регулиране на синтеза на меланин на B16 миши меланомни клетки от 1 алфа, 25-дихидрокси витамин D3 и ретиноева киселина. Cancer Res 1985; 45: 1474–1478.
22. Wang HM, Chen CY, Wen ZH. Идентифициране на инхибитори на меланогенезата от Cinnamomum subavenium с in vitro и in vivo системи за скрининг чрез насочване към човешката тирозиназа. Exp Dermatol 2011; 20: 242–248, doi: 10.1111/j.1600-0625. 2010.01161.x.

23. Berker KI, Güc ¸lü K, Tor I˙, Apak R. Сравнителна оценка на анализи на антиоксидантен капацитет, базирани на намаляване на Fe(III) в присъствието на фенантролин, бат-хо-фенантролин, трипиридилтриазин (FRAP) и ферицианид реактиви. Таланта 2007; 72: 1157-1165, doi: 10.1016/j.talanta.2007.01.019.

24. Parejo I, Codina C, Petrakis C, Kefalas P. Оценка на почистващата активност, оценена чрез Co(II)/EDTA-индуцирана хемилуминесценция на луминол и DPPH ● (2,2-дифенил-1 пикрил хидроксил ) тест за свободни радикали. J Pharmacol Toxicol Methods 2000; 44: 507–512, doi: 10.1016/S1056-8719(01)00110-1.

25. Rout S, Banerjee R. Свойства на потискане на свободните радикали, анти-гликиране и инхибиране на тирозиназа на полизахаридна фракция, изолирана от кората на Punica granatum. Биоресурс
Technol 2007; 98: 3159–3163, doi: 10.1016/j.biortech.2006. 10.011.
26. Yu P и Sun H. Пречистване на фукоидан от полизахарид от водорасли и неговата инхибиторна кинетика за тирозиназа. Въглехидратни полимери 2014; 99: 278-283, doi: 10.1016/ j.carbpol.2013.08.033.
27. Wei X, Liu Y, Xiao J, Wang Y. Защитни ефекти на чаените полизахариди и полифеноли върху кожата. J Agric Food Chem 2009; 57: 7757–7762, doi: 10.1021/jf901340f.
28. Xu J, Xu LL, Zhou QW, Hao SX, Zhou T, Xie HJ. Повишена in vitro антиоксидантна активност на полизахариди от Enteromorpha prolifera чрез ензимно разграждане. J Food Biochem 2016; 40: 275–283, doi: 10.1111/jfbc.12218.
29. Zhou J, Hu N, Wu Yl, Pan Yj, Sun CR. Предварителни проучвания върху химическата характеристика и антиоксидантните свойства на киселинни полизахариди от Sargassum fusiforme. J Zhejiang Univ Sci B 2008; 9: 721–727, doi: 10.1631/jus. B0820025.
30. Wu Q, Zheng C, Ning ZX, Yang B. Модификация на полизахариди с ниско молекулно тегло от Tremella fuciformis и тяхната антиоксидантна активност in vitro. Int J Mol Sci 2007; 8: 670–679, doi 10.3390/i8070670.
31. Yasui H, Sakurai H. Зависещо от възрастта генериране на реактивни кислородни видове в кожата на живи плъхове без косми, изложени на UVA светлина. Exp Dermatol 2003; 12: 655–661, doi: 10.1034/j.1600-0625.2003.00033.x.
32. Yamakoshi J, Otsuka F, Sano A, Tokutake S, Saito M, Kikuchi M, et al. Изсветляващ ефект върху индуцирана от ултравиолетова пигментация на кожата на морско свинче чрез перорално приложение на богат на проантоцианидин екстракт от гроздови семки. Pigment Cell Res 2003; 16: 629–638, doi: 10.1046/j.1600-0749. 2003.00093.x.
33. Strothkamp KG, Jolley RL, Mason HS. Кватернерна структура на гъбена тирозиназа. Biochem Biophys Res Commun 1976; 70: 519–524, doi 10.1016/0006-291X(76)91077-9.
34. Parvez S, Kang M, Chung HS, Bae H. Естествено срещащи се инхибитори на тирозиназа: механизъм и приложения в индустриите за здраве на кожата, козметика и селско стопанство. Phytother Res 2007; 21: 805–816, doi: 10.1002/ptr.2184.

35. Perluigi M, De Marco F, Foppoli C, Coccia R, Blarzino C, Luisa Marcante M, et al. Тирозиназата предпазва човешките меланоцити от ROS-генериращи съединения. Biochem Biophys Res Commun 2003; 305: 250–256, doi: 10.1016/S0006- 291X(03)00751-4.

36. Hirobe T. Как се регулират пролиферацията и диференциацията на меланоцитите? Pigment Cell Melanoma Res 2011; 24: 462–478, doi: 10.1111/j.1755-148X.2011.00845.x.
37. Buscà R, Ballotti R. Cyclic AMP е ключов пратеник в регулирането на пигментацията на кожата. Pigment Cell Res 2000; 13: 60–69, doi: 10.1034/j.1600-0749.2000.130203.x.
38. Slominski A, Tobin DJ, Shibahara S, Wortsman J. Меланинова пигментация в кожата на бозайници и нейната хормонална регулация. Physiol Rev 2004; 84: 1155–1228, doi: 10.1152/physrev. 00044.2003.
39. Shibahara S, Yasumoto KI, Amae S, Udono T, Watanabe KI, Saito H, et al. Регулиране на генната експресия на пигментни клетки чрез MITF. Pigment Cell Res 2000; 13: 98-102, doi: 10.1034/j.1600-0749.13.s8.18.x.
40. Jang JY, Kim HN, Kim YR, Choi YH, Kim BW, Shin HK и др. Водна фракция от семена на Cuscuta japonica потиска синтеза на меланин чрез инхибиране на р38 митоген-активирана протеин киназа сигнален път в B16F10 клетки. J Ethnopharmacol 2012; 141: 338–344, doi: 10.1016/j.jep. 2012.02.043.
Може да харесаш също