Индуциране на мукозен имунитет чрез белодробно приложение на клетъчно-насочена наночастица

РЕЗЮМЕ

По-рано установихме, че наночастица, конструирана с антиген, бензалкониев хлорид (BK) и c-полиглутаминова киселина (c-PGA), показва висока Th1 и Th{3}}имунна индукция след подкожно приложение. За профилактика на респираторни инфекции обаче трябва да се индуцира лигавичен имунитет. В това проучване ние изследвахме ефекта от белодробно приложение на наночастици, съдържащи овалбумин (OVA) като модел на антиген, BK и c-PGA върху индуцирането на мукозен имунитет в белите дробове и серума.

Комплексът беше силно поет от RAW264.7 и DC2.4 клетки. След белодробно приложение задържането на белите дробове е по-дълго за комплекса OVA/BK/c-PGA, отколкото само за OVA. OVA-специфичният серумен имуноглобулин (Ig)G беше силно индуциран от комплекса. Високи нива на IgG и IgA също са индуцирани в бронхоалвеоларната промивна течност и in vivo не са наблюдавани токсични ефекти. В заключение, ние ефективно и безопасно индуцирахме мукозен имунитет чрез белодробно приложение на OVA/BK/c-PGA комплекс.

През последните години все повече проучвания показват, че мукозният имунитет играе важна роля в имунната система на организма. Мукозният имунитет се отнася до имунната система, базирана на лигавицата в човешкото тяло, и нейните защитни способности са насочени главно към инвазията на патогени в човешките лигавици като дихателния тракт, храносмилателния тракт и репродуктивния тракт.

Мукозният имунитет сам по себе си не прави тялото по-устойчиво, но може да помогне на тялото ни да се справи по-ефективно с инвазията на чужди патогени. Чрез непрекъснато стимулиране на имунитета на лигавицата, тялото ни произвежда повече антитела, което повишава имунитета ни.

И така, как може да се стимулира мукозният имунитет? Ето няколко предложения:

1. Приемайте достатъчно витамин С. Витамин С е естествен антиоксидант, който засилва функцията на имунните клетки, което помага в борбата с инфекциите. Плодовете и зелените листни зеленчуци като лимони, портокали и ягоди са богати на витамин С.

2. Увеличете приема на млечнокисели бактерии. Млечнокиселите бактерии могат да насърчат баланса на чревната флора и да потиснат растежа на вредните бактерии. Обичайните храни с млечнокисели бактерии включват кисело мляко, кисело зеле, кимчи и др.

3. Практикувайте дишане Дълбоки вдишвания. Дълбокото дишане увеличава снабдяването с кислород и вентилацията на белите дробове, което може да помогне за отстраняването на натрупаните патогени от белите дробове.

Накратко, стимулирането на мукозния имунитет е важно средство за подобряване на имунитета. Трябва да направим всичко възможно да подобрим лигавичния имунитет чрез диета и навици на живот, за да защитим здравето си. От тази гледна точка трябва да подобрим имунитета. Cistanche може значително да подобри имунитета, тъй като пепелта от месо съдържа различни биологично активни компоненти, като полизахариди, две гъби и Huang Li, които могат да стимулират имунната система. Различни видове клетки, повишават имунната си активност.

Кликнете върху добавката Cistanche deserticola

1. Въведение

Острите респираторни инфекции почти със сигурност са водещата причина за смърт сред деца под 5-годишна възраст в развиващите се страни (Williams et al., 2002). Няколко ваксини, като тези срещу грип, коклюш и пневмококи, са разработени за респираторни инфекции (White, 1988; Pittman, 1991; Chen et al., 2020). Повечето от тези ваксини се прилагат мускулно и подкожно, което може ефективно да индуцира серумен имуноглобулин (Ig)G. Други начини обаче са по-полезни за стимулиране на мукозния имунитет за предотвратяване на остри респираторни инфекции. Съобщава се, че мукозните администрации, като интраназални и белодробни, ефективно индуцират мукозен IgA и предотвратяват респираторни инфекции (Giri et al., 2005; Ainai et al., 2017).

От друга страна, ваксините за интраназално и белодробно приложение не трябва да съдържат адюванти, за които се съобщава, че причиняват възпалителни реакции и язви на мястото на приложение (Tamura et al., 1988; McKee et al., 2007). Друг подход за подобряване на ефикасността на ваксини без адюванти е да се разработи система, която може ефективно да достави ваксини в мукозни антиген-представящи клетки (APC).

В предишно проучване разработихме нов вектор за доставяне на ваксина, конструиран с антиген, бензалкониев хлорид (BK) и c-полиглутаминова киселина (c-PGA). Комплекс, включващ овалбумин (OVA) като модел на антиген, BK и c-PGA (OVA/BK/c-PGA комплекс) ефективно доставя OVA в дендритни клетки и подобрява OVA-специфичната серумна IgG индукция след подкожно приложение в мишки (Kurosaki et al. ., 2012). Настоящото проучване имаше за цел да изследва ефекта от белодробното приложение на OVA/BK/c-PGA комплекс върху индуцирането на мукозен имунитет в белите дробове и серума.

2. Материали и методи

2.1. Химикали

OVA беше закупен от Sigma-Aldrich (Сейнт Луис, Мисури, САЩ). BK беше получен от Nacalai Tesque, Inc. (Киото, Япония). c-PGA беше предоставен от Yakult Pharmaceutical Industry Co., Ltd. (Токио, Япония). Белязана с флуоресцеин изотиоцианат OVA (FITC-OVA) и белязана с Alexa Fluor 647-OVA (Alexa647- OVA) беше получена от Invitrogen (Carls, Калифорния, САЩ). Фетален говежди серум (FBS) беше закупен от Biological Industries Ltd. (Kibbutz Beit Haemek, Израел). OPTI-MEM I беше получен от GIBCO BRL (Гранд Айлънд, Ню Йорк, САЩ), а предварително смесен антибиотичен разтвор, съдържащ пеницилин, стрептомицин и L-глутамин, беше получен от Wako Pure Chemical Industries, Ltd. (Осака, Япония). Модифицираната среда на Dulbecco Eagle (DMEM) и средата RPMI1640 бяха получени от Nissui Pharmaceutical Co., Ltd. (Токио, Япония).

2.2. Комплексна подготовка

Преди това конструирахме OVA/BK/c-PGA комплекс при тегловно съотношение 1:0.2:0.2 (Kurosaki et al., 2012). За да се подготви комплексът OVA/BK, подходящо количество BK разтвор (pH 5.{11}}), разтворен в 5 процента глюкоза, се смесва с OVA разтвор (pH 7.0), разтворен в 5 процента глюкоза и оставени за 15 минути при 4°C. За да се покрие комплексът OVA/BK с c-PGA, разтвор на c-PGA (рН 7,0), разтворен в 5 процента глюкоза, се добавя към комплекса OVA/BK и се оставя за още 15 минути при 4С. Размерът на частиците и f-потенциалът на всеки комплекс бяха измерени чрез използване на Zetasiser Nano ZS (Malvern Instruments, Ltd., Malvern, UK).

2.3. клетки

Използвани са клетъчна линия от миши макрофаги RAW264.7 и дендритна клетъчна линия DC2.4. Клетките RAW264.7 се отглеждат в DMEM, допълнен с 10 процента FBS и антибиотици. DC2.4 клетки се отглеждат в среда RPMI1640, допълнена с 10 процента FBS, антибиотици, 1 mM несъществени аминокиселини и 1 nM 2-меркаптоетанол. Тези клетки бяха оценени във влажна атмосфера с 5 процента CO2 във въздуха при 37°C.

2.4. In vitro експеримент за клетъчно усвояване

RAW264.7 клетки и DC2.4 клетки се поставят върху 24-плаки с ямки (Корнинг, Ню Йорк, САЩ) при плътност от 2.0 104 клетки/ямка и се култивират в 50{ {21}} mL културална среда. След 24-h предварителна инкубация, средата беше заменена със среда OPTI-MEM I и клетките бяха инкубирани с 5 mg FITC-OVA и комплекса, съдържащ 5 mg FITC-OVA за 2 часа. След инкубиране тези клетки се промиват с PBS и се наблюдават под флуоресцентен микроскоп (BIOREVO BZ-9000; Keyence Co., Осака, Япония). След наблюдение тези клетки бяха лизирани в 300 lL лизисен буфер (рН 7,8 и 0,1 М Tris/HCl буфер, съдържащ 0,05 процента Triton X-100 и 2 mM EDTA). Лизатите се поставят в 96-плаки с ямки и флуоресценцията на FITC-OVA се измерва при дължина на вълната на излъчване 530 nm с дължина на вълната на възбуждане 480 nm, като се използва флуорометричен четец на микроплаки (Infinite-200Pro M-Plex, Tecan Japan Co., Ltd., Канагава, Япония). Съдържанието на протеин в лизата се определя чрез анализ на Bradford, като се използва BSA като стандарт. Абсорбцията се измерва с помощта на четеца на микроплаки при 570 nm. Усвояването на FITC-OVA се посочва като mg на mg протеин.

2.5. Животни

Грижата за животните и експерименталните процедури бяха извършени от Насоките за експерименти с животни на университета в Нагасаки с одобрение от Комитета за грижа и използване на животните в институциите. Мъжки C57BL/6N мишки (на 5 седмици) са закупени от Japan SLC (Shizuoka, Japan). След като бяха транспортирани, мишките бяха оставени да се аклиматизират към новата си среда за 1 ден преди експериментите. Белодробно приложение (40 mL) се извършва чрез използване на езиков депресор със светлина чрез спонтанно дишане при мишки, анестезирани чрез вдишване на изофлуран (Horiguchi et al., 2015).

2.6. Натрупване на комплекс в белите дробове

За да се изследва натрупването на OVA, 40 mg Alexa647-OVA и комплексът, съдържащ 40 mg Alexa647- OVA в обем от 40 mL на мишка, се прилагат на мишки по белодробен път. Шест дни след приложението, мишките бяха умъртвени и белите дробове бяха дисектирани. Флуоресцентният интензитет на Alexa647-OVA в белия дроб на мишка се наблюдава с Xenogen IVIS Lumina System, съчетана със софтуер Living Image за събиране на данни (Xenogen, Co, Almeda, CA, USA). След наблюдението тези бели дробове се хомогенизират с лизисен буфер и хомогенатите се центрофугират при 15,000 rpm (Kubota-3500, Kubota Corporation, Токио, Япония) за 5 минути и флуоресценцията на Alexa647 в тези супернатанти се определя с лидер на микроплака при дължина на вълната на възбуждане и емисия съответно 640 и 670 nm.

2.7. Имунизация

Мишките бяха имунизирани с 5% разтвор на глюкоза, 40 mg OVA, празен комплекс от 8 mg BK и 8 mg c-PGA (носител) и OVA/BK/c-PGA комплекс, съдържащ 40 mg OVA чрез белодробно приложение, 4 пъти седмично. Две седмици след последната имунизация бяха получени течност от бронхоалвеоларен лаваж (BALF) и серум. BALF и серумът бяха използвани за ензимно-свързан имуносорбентен анализ (ELISA).

2.8. Определяне на индукция на OVA-специфични антитела

За OVA покритие, 100 mL OVA разтвор (10 mg/mL, в 1 М натриев хидроген карбонат) се добавя към всяка ямка на ELISA плаките (Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, MA, USA) и се инкубират една нощ при 4°С. Плаките се промиват три пъти с фосфатно буфериран физиологичен разтвор, съдържащ 0,05 процента Tween-20 (PBST), 200 mL блокиращ реагент N 102 (Nichiyu, Co., Ltd., Токио, Япония ) се добавят за блокиране на неспецифичното свързване и след това се инкубират в продължение на 6 часа при 4°С. Плаките се промиват два пъти с PBST. След това към всяка ямка се добавят 100 mL аликвотни части от 1000-кратно разреден серум и неразредени BALF проби и се инкубират за една нощ при 4°C. След пет пъти промиване с PBST, 100 mL пероксидаза от хрян (HRP) – конюгирана коза анти -миши IgG, IgA, IgM, IgE, IgG1, IgG2a, IgG2b и IgG3 (1:10, 000) (Abcam, Cambridge, UK) – се добавят към всяка ямка и се инкубират при стайна температура за 1 час и след това се промива пет пъти с PBST. Използва се разтвор TMB One (Promega, WI, USA) и се приготвя съгласно инструкциите на производителя. След това реакцията се спира на 15 min чрез добавяне на 1 N солна киселина. Абсорбцията се отчита при 450 nm с помощта на четец на микроплаки.

2.9. In vivo токсичност на OVA/BK/c-PGA комплекс

OVA и OVA/BK/c-PGA комплекс се прилагат на мишки по белодробен път. BALF се получава 3 и 24 часа след прилагане от мишки. Двадесет и четири часа след приложението, белият дроб също беше дисектиран. Активността на лактат дехидрогеназа (LDH) в BALF се измерва с помощта на комплекта за лактат дехидрогеназа QuantiChromTM (BioAssay Systems, Калифорния, САЩ) съгласно инструкциите на фабриката. Белодробните проби се фиксират в 4% параформалдехид фосфатен буферен разтвор. Секцията и оцветяването с хематоксилин-еозин (HE) бяха поверени на GenoStaff (Токио, Япония). Оцветените с HE участъци от белия дроб се наблюдават чрез микроскопия при 20 увеличение.

2.10. Статистически анализ

Статистическата значимост на разликите между двете групи беше оценена чрез изпълнение на t-тест на Student. Множество сравнения между групите бяха извършени чрез изпълнение на теста на Tukey. p-стойностите < .05 се считат за показателни за статистическа значимост.

3. Резултати

3.1. Физикохимични свойства на комплекса

Конструирахме анионен OVA/BK/c-PGA комплекс при тегловно съотношение 1:0.2:0.2. Покритият с c-PGA комплекс има размер на частиците от приблизително 105.4 nm и f-потенциал от приблизително 35.5 mV.

3.2. Клетъчното усвояване на комплекса

RAW264.7 клетки и DC2.4 клетки бяха третирани с FITC-OVA и FITC-OVA/BK/c-PGA комплекс и клетъчното поглъщане на FITC-OVA беше визуализирано, както е показано на Фигура 1. FITC-OVA/BK/ c-PGA комплексът беше силно погълнат от клетките RAW264.7 и DC2.4 клетките и се наблюдава силна зелена флуоресценция на FITC-OVA (Фигура 1 (А, В), съответно). В същото време се наблюдават малки количества FITC-OVA и в двете клетки, третирани с FITC-OVA.

Клетъчните поглъщания на FITC-OVA бяха количествено определени в клетките RAW264.7 и DC2.4 клетките (Фигура 1(C)). Комплексът FITC-OVA/BK/c-PGA показва значително по-високо усвояване от FITC-OVA и в двете клетки (p <.01).

3.3. Натрупване на Alexa647-OVA в белите дробове след белодробно приложение

Alexa647-OVA и Alexa647-OVA/BK/c-PGA комплекс бяха приложени на мишки по белодробен път, за да се определи белодробното натрупване на Alexa647-OVA като антиген. На 6-ия ден след прилагането, белите дробове бяха дисектирани и техният интензитет на флуоресценция беше визуализиран с помощта на Xenogen IVIS Lumina System. Флуоресцентно изображение ex vivo е показано на Фигура 2(A). Висок интензитет на флуоресценция се наблюдава в целия бял дроб 6 дни след белодробно приложение, въпреки че няма интензитет на флуоресценция в далака, сърцето, бъбреците и черния дроб (данните не са показани). Натрупването в белите дробове е по-високо за комплекса Alexa647-OVA/BK/c-PGA, отколкото за Alexa647-OVA на ден 6. Както е показано на фигура 2(B), натрупването в белите дробове е значително по-високо за Alexa 647-OVA/BK/c-PGA комплекс в сравнение с Alexa647- OVA (p < .05).

3.4. OVA-специфично антитяло в серума след белодробно приложение на комплекса

5% разтвор на глюкоза, BK/c-PGA комплекс (носител), OVA и OVA/BK/c-PGA комплекс се прилагат по белодробен път на мишки четири пъти и след това серумен OVA-специфичен IgG, IgA, IgM, и IgE се определят чрез ELISA, както е показано на Фигура 3. Белодробното приложение на OVA и комплекса OVA/BK/c-PGA повишава нивата на IgG при мишки, въпреки че OVA-специфични IgG не се откриват при мишки, на които е приложена 5 процента глюкоза и носител. Освен това производството на IgG и IgA е значително по-високо след прилагане на комплекса OVA/BK/c-PGA, отколкото след прилагане на OVA (p < 0,05 или 0,01). От друга страна, OVA-специфичните IgM и IgE не са индуцирани от OVA или OVA/BK/c-PGA комплекса.

3.5. OVA-специфично антитяло в BALF след белодробно приложение на комплекса

OVA-специфичните IgG, IgA, IgM и IgE в BALF също бяха определени, както е показано на Фигура 4. Нивото на IgG беше значително повишено от OVA спрямо нивата след прилагане на контролата и носителя (p < .05 или .01). Независимо от това комплексът OVA/BK/c-PGA повишава значително не само IgG, но и IgA в BALF (p < 0,01). Въпреки това, OVA-специфичните IgM и IgE не са индуцирани от OVA или OVA/BK/c-PGA комплекса.

3.6. IgG подтипове в серума след белодробно приложение на комплекса

Индукционните ефекти на OVA-специфични IgG подтипове, като IgG1, IgG2a, IgG2b и IgG3 в серума бяха определени, както е показано на Фигура 5. В сравнение с контролата и носителя, OVA значително увеличи само IgG1 (p < .01). Нивата на антителата на всички подтипове, индуцирани от комплекса OVA/BK/c-PGA, бяха значително по-високи от нивата, индуцирани от контролата и носителя (p < .05 или .01).

3.7. IgG подтипове в BALF след белодробно приложение на комплекса

OVA-специфични IgG подтипове, като IgG1, IgG2a, IgG2b и IgG3 в BALF, също бяха определени, както е показано на Фигура 6. OVA значително повишава само нивата на IgG1 спрямо тези, индуцирани от контролата и носителя (p < .01) . В сравнение с контролата, носителя и OVA, комплексът OVA/BK/c-PGA индуцира значително по-високи нива на антитела от всички подтипове (p < .05 или .01).

3.8. In vivo токсичност на OVA/BK/c-PGA комплекс

На мишките се прилага 5% разтвор на глюкоза, OVA и OVA/BK/c-PGA комплекс. LDH активността в BALF се определя 3 или 24 часа след приложението (Фигура 7). Прилагането на OVA и OVA/BK/c-PGA комплекс има малък ефект върху нивата на LDH в BALF.

Двадесет и четири часа след приложението, белите дробове бяха дисектирани от тези мишки за хистологичен анализ. HE-оцветени белодробни срезове са показани на Фигура 8. Не са наблюдавани хистологични аномалии при мишките, третирани с OVA и OVA/BK/c-PGA комплекса.

4. Дискусия

Белият дроб контролира дишането и е изложен на много патогени, като вируси и бактерии, които причиняват респираторни инфекции. Тези патогени се заразяват през белодробната мукозна мембрана, така че мукозният имунитет трябва да бъде индуциран за защита срещу респираторни инфекции. Предотвратяване на респираторни инфекции, имунитетът на лигавицата има важна роля; въпреки това, интрадермалното и интрамускулното приложение на ваксината не може силно да стимулира мукозния имунитет (Ito et al., 2003; Amorij et al., 2007). Мукозната имунна система, която индуцира секреторен IgA, се развива върху лигавичната повърхност. Съобщава се, че няколко APC, като дендритни клетки и макрофаги, са разположени в повърхността на лигавицата (Kopf et al., 2015). Освен това, свързаната с бронхите лимфоидна тъкан (BALT) се намира в бронхиоларната лигавица и е лимфоиден фоликул, който има централна роля в мукозния имунитет на дихателните пътища (Bienenstock, 1980). Очаква се белодробното приложение на ваксината да стимулира ефективно имунната система на лигавицата. Следователно, ние конструирахме комплекса OVA/BK/c-PGA, за да оценим неговата полезност като ваксина, прилагана по белодробен път.

Фигура 4 показва концентрацията на BALF на OVA-специфични антитела след белодробно приложение на OVA и комплекса OVA/BK/c-PGA. Белодробното приложение на OVA повишава IgG, но има малък ефект върху IgA при BALF. От друга страна, комплексът OVA/BK/c-PGA значително индуцира IgA секреция в BALF. Освен това, серумната индукция на IgG е значително по-висока след прилагането на комплекса OVA/BK/c-PGA, отколкото след прилагането на OVA (Фигура 3). Серумният IgG е важен за предотвратяване на влошаване на възникнали инфекции (Huber et al., 2006; Schroeder & Cavacini, 2010). Резултатите показват, че комплексът OVA/BK/c-PGA може да предотврати респираторни инфекции чрез силна мукозна IgA индукция и влошаване на респираторната инфекция чрез висока серумна IgG индукция. Освен това не се наблюдава индуциране на IgE от комплекса OVA/BK/c-PGA и този резултат показва малък риск от алергична реакция от комплекса OVA/BK/c-PGA.

Комплексът OVA/BK/c-PGA може също да индуцира не само IgG1 и IgG2b, но и IgG2a и IgG3 (Фигура 5). IgG1 и IgG2b са известни като имуноглобулини тип Th2-, които медиират хуморалния имунен отговор, а IgG2a и IgG3 са известни като имуноглобулини тип Th1-, които медиират клетъчния имунен отговор (Firacative et al., 2018) . Следователно комплексът OVA/BK/c-PGA може да индуцира както хуморален, така и клетъчен имунен отговор. Тези резултати предполагат, че тази система може да бъде полезна за ваксини срещу инфекции, както и срещу рак. Превантивният ефект, антиген-индуцирани Th1- и Th2-типови цитокинови отговори при индуцируема BALT, Treg популация и IL-10 индукция трябва да бъдат оценени с използване на реални антигени от инфекции или рак в бъдеще проучвания.

Силната индукция от комплекса OVA/BK/c-PGA на имунния отговор трябва да се дължи на високото задържане на комплекса в белия дроб и ефективното доставяне на OVA в APCs в белодробната лигавица. Нашите резултати потвърдиха това, като показаха, че 6 дни след приложението комплексът Alexa647-OVA/BK/c-PGA остава в белия дроб и показва значително по-висока флуоресценция от Alexa647- OVA (Фигура 2). Образуването на комплекс може да предотврати дифузията на OVA и да защити OVA от разграждане от протеази в белодробната лигавица. Освен това комплексът OVA/BK/c-PGA е в състояние ефективно да достави OVA в RAW264.7 клетки на макрофаги и DC2.4 дендритни клетки (Фигура 1). Тези резултати показват, че комплексът OVA/BK/c-PGA ще бъде поет от алвеоларните APC и ще предизвика силен имунен отговор след белодробно приложение. Съобщава се, че наночастиците, покрити с c-PGA, са били поети от медиирания от гама-глутамил транспептидаза ендоцитозен път (Du et al., 2015). Ние също потвърдихме, че наночастиците, покрити с c-PGA, са поети от c-PGA-специфичния ендоцитозен път (Kurosaki et al., 2009). Комплексът OVA/BK/c-PGA може да бъде поет от APC в белия дроб чрез същите механизми. Въпреки това, все още не е ясно кои клетки са отговорни за усвояването на OVA и последващото представяне на антиген при индуцирането на специфичен имунитет. В бъдеще трябва да се извършат допълнителни проучвания за подробни механизми на имунна индукция.

Разработени са много адюванти за подобряване на ефективността на ваксините; въпреки това се съобщава, че адювантите причиняват възпалителни реакции на мястото на инжектиране (Tamura et al., 1988; McKee et al., 2007). Следователно прилагането на адюванти към белите дробове може да причини тежки странични ефекти, като например пневмония. След белодробно приложение на комплекса OVA/BK/c-PGA, нивата на LDH в BALF не се повишават (Фигура 7) и не се наблюдават хистологични аномалии в HE-оцветения участък (Фигура 8). Съобщава се, че c-PGA е биосъвместим и биоразградим полимер, който не показва имуновъзпалителни реакции (Prodhomme et al., 2003; Ye et al., 2006). BK е безопасно кватернерно амониево съединение, което е широко използвано клинично като антимикробна добавка (Marple et al., 2004). Тези доклади също подкрепят безопасността на комплекса OVA/BK/c-PGA. От друга страна, по-високи нива на LDH се наблюдават на 3 часа след белодробното приложение, отколкото на 24 часа, дори в контролната група. Тези резултати показват, че леко дразнене е причинено от белодробно приложение. Необходими са допълнителни проучвания за безопасност преди клиничното приложение на комплекса OVA/BK/c-PGA.

В настоящото проучване ние демонстрирахме висока индукция на имунната система на лигавицата чрез нов вектор за доставяне на ваксина, конструиран с антигенен протеин, BK и c-PGA след белодробно приложение. Системата може да се използва за ваксини срещу различни респираторни инфекции.

Декларация за разкриване

Авторът(ите) не съобщава за потенциален конфликт на интереси.

Финансиране

Тази работа беше подкрепена от Японското дружество за насърчаване на науката (JSPS) KAKENHI под субсидии [JP20K12649 и JP20K07156].

Препратки

1. Ainai A, Suzuki T, Тамура SI и др. (2017). Интраназално приложение на цяла инактивирана ваксина срещу грипен вирус като обещаващ кандидат за ваксина срещу грип. Вирусен имунол 30: 451–62.

2.Amorij JP, Saluja V, Petersen AH, et al. (2007). Белодробното доставяне на стабилизирана с инулин грипна субединица ваксина, приготвена чрез сушене със спрей и замразяване, индуцира системни, лигавични хуморални, както и клетъчно-медиирани имунни отговори при BALB/c мишки. Ваксина 25:8707–17.

3. Bienenstock J. (1980). Свързана с бронхите лимфоидна тъкан и източник на имуноглобулин-съдържащи клетки в лигавицата. Здравна перспектива на околната среда 35:39–42.

4.Chen JR, Liu YM, Tseng YC и др. (2020 г.). По-добри противогрипни ваксини: гледна точка на индустрията. J Biomed Sci 27:11.

5. Du X, Xiong L, Dai S, et al. (2015). c-PGA-покрити мезопорести силициеви наночастици с ковалентно прикрепени пролекарства за подобрено клетъчно поглъщане и вътреклетъчно GSH-реагиращо освобождаване. Adv Healthc Mater 4: 771–81.

6. Firacative C, Gressler AE, Schubert K, et al. (2018). Идентифициране на T хелпер (Th)1- и Th2-свързани антигени на cryptococcus neoformans в миши модел на белодробна инфекция. Sci Rep 8:14.

7. Giri PK, Sable SB, Verma I, et al. (2005). Сравнителна оценка на интраназален и подкожен път на имунизация за разработване на мукозна ваксина срещу експериментална туберкулоза. FEMS Immunol Med Microbiol 45:87–93.

8. Horiguchi M, Oiso Y, Sakai H, et al. (2015). Белодробното приложение на фосфоинозитид 3-киназен инхибитор е лечебно лечение на хронична обструктивна белодробна болест чрез алвеоларна регенерация. J Контролно издание 213:112–9.

9. Huber VC, McKeon RM, Brackin MN, et al. (2006). Различни приноси на индуцирани от ваксина имуноглобулин G1 (IgG1) и IgG2a антитела към защитния имунитет срещу грип. Clin Vaccine Immunol 13: 981–90.

10. Ito R, Ozaki YA, Yoshikawa T, et al. (2003). Роли на анти-хемаглутинин IgA и IgG антитела в различни места на респираторния тракт на ваксинирани мишки за предотвратяване на смъртоносна грипна пневмония. Ваксина 21:2362–71.

11. Копф М, Шнайдер С, Нобс С.П. (2015). Развитието и функцията на белодробните макрофаги и дендритни клетки. Nat Immunol 16: 36–44.

12.Kurosaki T, Kitahara T, Fumoto S, et al. (2009). Тройни комплекси от pDNA, полиетиленимин и гама-полиглутаминова киселина за системи за доставяне на гени. Биоматериали 30: 2846–53.

13.Куросаки Т, Китахара Т, Накамура Т и др. (2012). Разработване на ефективна ваксина срещу рак, използваща система за насочване на антигенен протеин към APC. Pharm Res 29:483–9.

14. Марпъл Б, Роланд П, Бенингер М. (2004). Преглед на безопасността на бензалкониев хлорид, използван като консервант в интраназални разтвори: преглед на противоречиви данни и мнения. Otolaryngol Head Neck Surg 130: 131–41.

15. McKee AS, Munks MW, Marrack P. (2007). Как действат адювантите? Важни съображения за ново поколение адюванти. Имунитет 27: 687–90.

For more information:1950477648nn@gmail.com