Майчината автогенна инактивирана вирусна ваксинация повишава имунитета към PRRSV при прасенца Част 1

Резюме:

Имунитетът, произтичащ от майката, е критичен компонент за оцеляването и успеха на потомството при прасетата за защита от циркулиращи патогени като тип 2 вирус на репродуктивен и респираторен синдром на свинете (PRRSV-2).

Целта на това проучване е да се изследва прехвърлянето на анти-PRRSV имунитет към прасенца от женски, които са получили модифициран жив вирус (MLV) самостоятелно (лечение (TRT) 0) или в комбинация с един от двата автогенни инактивирани ваксини (AIV, TRT 1 плюс 2). Прасенцата от тези женски свине бяха заразени с автогенен щам PRRSV-2 на две седмици и техният адаптивен имунен отговор (IR) беше оценен до 4 седмици след инокулацията (dpi).

Системният хуморален и клетъчен IR се анализира при женските женски преди опрасването, при прасенцата, преди инокулацията и при 2 и 4 wpi. И двете AIVs частично защитиха прасенцата с намалена белодробна патология и повишено наддаване на тегло; TRT 1 също понижава виремията на прасенцата, най-добре обяснено с индуцираното от AIV производство на неутрализиращи антитела в женските и тяхното прехвърляне в прасенцата. При прасенцата, преди инокулацията, основните системни производители на IFN са CD21 плюс В клетки. От 0 до 4 wpi, ролята на тези В клетки намалява и CD4 Т клетките стават първичните системни производители на IFN.

Добрите живи вируси се отнасят за вируси, които не причиняват заболяване и имат определена връзка с имунитета на човешкото тяло. Живите вируси могат да стимулират човешката имунна система да произведе имунен отговор, като по този начин повишава човешкия имунитет. Проучванията показват, че след като човешкото тяло е заразено с жив вирус, то ще освободи някои медиатори и цитокини, които могат да активират имунните клетки, да насърчат функцията на имунната система и да подобрят способността на тялото да устои на вируси.

В допълнение, доброкачествените и жизнеспособни вируси могат също конкурентно да заемат клетките, което затруднява нахлуването и възпроизвеждането на патогените, като по този начин предпазва човешкото тяло от други инфекции. Следователно подходящата доброкачествена и жива вирусна инфекция може да подобри човешкия имунитет, но прекомерната инфекция може да доведе до заболяване. Следователно в ежедневието си хората трябва да обръщат внимание на контролирането на инфекцията с живи вируси и подобряването на имунитета чрез здравословен начин на живот. От тази гледна точка трябва да подобрим имунитета. Цистанче може значително да подобри имунитета. Месната пепел съдържа различни биологично активни съставки, като полизахариди, две гъби и Huangli и др. Тези съставки могат да стимулират различни функции на имунната система. клетъчно-подобни клетки, повишаващи тяхната имунна активност.

Кликнете върху ползите за здравето от цистанче

В белите дробове CD8 Т клетките са първичните, а CD4 Т клетките са вторичните производители на IFN, включително нова подгрупа от свински CD8 −CCR7− CD4 Т клетки, потенциално терминално диференцирани CD4 TEMRA клетки. В обобщение, това проучване демонстрира, че AIV ваксинацията на майката може да подобри защитата на прасенцата преди отбиване срещу PRRSV-2; той показва значението на прехвърлянето на неутрализиращи антитела към прасенца и въвежда две нови подгрупи имунни клетки при прасета — IFN-продуциращи CD21 плюс В клетки и CD8 −CCR7− CD4 Т клетки.

Ключови думи:

ваксинация на майката; автогенна инактивирана ваксина; трансфер на имунитет; хуморален имунен отговор; клетъчно медииран имунен отговор; Т клетки; PRRSV; свине; IFN-продуциращи В клетки; CD4 TEMRA клетки.

1. Въведение

Имунитетът, произтичащ от майката (MDI) при бозайниците е вдъхваща страхопочитание симфония („хармонична сложност“—[1]). В тази система, или симфония, майката прехвърля имунна защита (временна и/или трайна) на потомството си или по време на бременност през плацентата, след раждането чрез млечни секрети, или и двете [2]: хората получават имуноглобулини по време на бременността и в крайна сметка през млечната жлеза секрети [3]; кучетата и гризачите получават имуноглобулини по време на бременността и чрез млечните секрети, а прасетата и другите животни получават имуноглобулини само чрез млечните секрети.

Подобно на други видове, прасенцата получават този MDI под формата на имуноглобулини, имунни клетки и други свързани с имунитета молекули [4,5]. Докато имуноглобулините могат да бъдат получени от различни свине майки (= кръстосано отглеждане), само биологичните майки могат успешно да прехвърлят имунни клетки на своето потомство [5], а количеството коластра, поето от прасенцата, значително намалява смъртността и подобрява производителността [6 ]. Тези имунни клетки включват В клетки [7], както и различни Т-клетъчни подгрупи - CD4, CD8 и главно Т-клетъчен рецептор (TCR) - δ Т клетки [8].

След това тези Т-клетъчни подгрупи могат да бъдат допълнително разграничени въз основа на техния етап на диференциация и модел на насочване. При прасета веригата CD8 се използва за разграничаване на CD8 - нелекувани от CD8 плюс антиген-преживени или CD4 Т клетки на паметта [9–11]. Експресията на хемокиновия рецептор (CCR) 7 допълнително разграничава CCR7 плюс насочване на лимфен възел от CCR7− периферни тъканно насочващи Т клетки [12]. С комбиниран анализ на CD8 /CCR7 можем след това да различим множество различни Т-клетъчни подгрупи: CD8 −CCR7 плюс наивни CD4 Т клетки, CD8 плюс CCR7 плюс CD4 Т клетки на централната памет (TCM) и CD8 плюс CCR7− ефекторна памет (TEM ) CD4 Т клетки; периферни тъканно насочващи CCR7− и насочващи лимфни възли CCR7 плюс CD8 Т клетки и CD8 −CCR7−, CD8 плюс CCR7− и CD8 плюс CCR7 плюс TCR-δ Т клетки.
Докато по-рано съобщавахме, че свинските TCR- δ Т клетки притежават обратен модел на насочване в сравнение с техните TCR-колеги, специфичната роля на тези различни подгрупи все още не е описана [13]. Както подгрупите на имунните клетки, така и антителата се прехвърлят към потомството, за да ги предпазят от различни патогени [4,5].

От десетилетия най-катастрофалният патоген за прасетата са вирусите на репродуктивния и респираторен синдром на свинете (PRRSV, [14,15]). Съществуват два основни типа PRRSV — тип 1 и 2 (PRRSV-1 и 2); тяхното голямо разнообразие и имуносупресивен капацитет правят PRRSV проблематично заболяване, което води до огромни икономически загуби за свиневъдството [16] и досега, докато ваксините осигуряват частична защита срещу PRRSV, те не са успели да контролират напълно това заболяване.

Налични са два основни типа ваксини за защита срещу PRRSV – модифицирани живи вирусни (MLV) ваксини и инактивирани ваксини, главно автогенни инактивирани ваксини (AIV); обаче и двата типа са изправени пред своите предизвикателства.

Дългото време за разработване на много имуногенните MLV ваксини означава, че те обикновено са по-хетероложни към преобладаващите във фермите щамове PRRSV и докато AIVs са насочени срещу тези преобладаващи във фермите щамове, тяхната инактивирана природа ги прави като цяло по-малко имуногенни.

Тези предизвикателства водят до липса на защита, особено при млади прасета, което може да се отдаде на три фактора: първо, високият процент на мутация на PRRSV ограничава хетероложната защита, така че намалява ефикасността на MLV ваксината; второ, неговият имуносупресивен капацитет ограничава по-слабите ваксини (напр. AIV) и неговото забавяне на индуцирането на защитен имунен отговор оставя младите прасета особено податливи [17]; и трето, нашето разбиране за имунния отговор към PRRSV, особено при прасенца, е ограничено. Loving и Lunney направиха хубав преглед относно общото разбиране на имунния отговор към PRRSV [18,19].

Основно въз основа на удълженото време за установяване на индуциран от ваксината имунитет към PRRSV, производителите на свине често ваксинират женските женски и свине майки, за да позволят предаването на имунитета на прасенцата. Изследване на майчината ваксинация с използване на търговски MLV срещу тип PRRSV-1 не възпрепятства ваксинирането на 2 или 3-седмични прасенца и частично защитава прасенцата срещу хетероложно заразяване [20]. Тази стратегия за ваксиниране също индуцира PRRSV-1-специфични IgG, IgA и интерферон (IFN)-секретиращи клетки в коластрата и млякото на ваксинирани свине майки. Тези IFN-продуциращи клетки са много важни за антивирусните отговори, включително при PRRSV [19,21].
Тази ваксинация също индуцира серумен анти-PRRSV IgG, който се открива след шестседмична възраст за неваксинирани прасенца и остава стабилен при ваксинираните прасенца преди заразяването; все пак IFN-секретиращите клетки не могат да бъдат разграничени от фоновите нива при предварително отбити прасенца [22]. Въпреки че използването на MLVs е индустриален стандарт, комбиниран режим на ваксиниране на MLV основна и AIV усилваща ваксинация изглежда обещаващ за преодоляване на всеки един от недостатъците на независимото използване на MLVs и AIVs.

Ето защо основната цел на това проучване беше да се определи не само дали, но и как ваксинацията на майката с два различни AIV (лечение (TRT) 1 плюс 2) може да повиши стандартната за индустрията MLV ваксинация самостоятелно (TRT 0 ), за по-добра защита на потомството от ранно предизвикателство с PRRSV2. За тази цел, ние проучихме индуцирания от ваксината хуморален и клетъчно-медииран имунен (CMI) отговор при тези женски млади и изпитахме ранни отбити женски женски от всяка от тези групи на 2-седмична възраст. Системният и локален имунен отговор на тези прасенца е проследен в продължение на 2-4 седмици.

Ние показваме, че усилващата ваксинация срещу AIV може да подобри защитата на прасенцата срещу заразяване с PRRSV на 2-седмична възраст и също така идентифицираме основните имунни механизми и характеризираме анти-PRRSV хуморалния и CMI отговор при тези млади прасета. В допълнение, ние открихме два нови типа клетки при прасета: (1) CD8 −CCR7− CD4 Т клетки, които силно допринасят за производството на IFN в бронхоалвеоларен лаваж (BAL) – потенциални CD4 TEMRA клетки, и (2) основен източник на анти-PRRSV отговор, особено при прасенца - IFN-продуциращи В клетки.

2. Материали и методи

2.1. Дизайн на изследването, животни и обработка на проби

Целта на това проучване беше да се оцени ефектът от различни серии ваксинации срещу PRRSV2 на майката върху защитния имунитет при отбити прасенца срещу PRRSV-2. Преди изследването циркулиращ PRRSV-2 щам (полиморфизъм на дължината на рестрикционния фрагмент (RFLP), 1-7-4) от компания за свинско месо в Северна Каролина беше изолиран и размножен от две независими компании за биологични науки; те произвеждат две различни автогенни ваксини. И двете ваксини съдържаха различни патентовани компоненти, но съдържаха един и същ инактивиран щам 1-7-4 PRRSV-2. Дизайнът на това проучване е илюстриран на фигура 1.

И двете ваксинации бяха приложени интрамускулно в серия от четири дози преди опрасване: според корпоративния график за ваксиниране на компанията за свинско месо в Северна Каролина, 46 PRRSV-2 отрицателни женски женски свине в търговска ферма за свине бяха ваксинирани с ваксината Ingelvac PRRS MLV (Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH, Германия) девет седмици преди размножаване. За да се поддържа последователна терминология в това проучване, записаните полово зрели женски прасета (тук дефинирани като женски) ще бъдат наричани женски, дори след като са били отгледани и родени (обикновено наричани свине майки). Четири седмици преди размножаването бяха взети кръвни проби от всички женски за серум и след това женските бяха разпределени за три третирания: TRT 0 (само MLV ваксинация); TRT 1 (MLV ваксинация плюс 4 дози автогенна (1-7-4) инактивирана ваксина 1); или TRT 2 (MLV ваксинация плюс 4 дози автогенна (1-7-4) инактивирана ваксина 2).

Gilts that did not breed were dropped from the study. 3 weeks before farrowing, blood was collected from pregnant gilts for the isolation of serum and peripheral blood mononuclear cells (PBMC). At this point, five gilts remained in both TRT 0 and TRT 2; nine gilts remained in TRT 1. Within these gilts, we selected three gilts per group to provide the piglets for the challenge study. The selected gilts had an adequate litter size (>7) и най-високия титър на серумната флуоресцентна фокусна неутрализация (FFN) (първични имунни критерии) и най-високия CD4 Т-клетъчен IFN-отговор (вторични имунни критерии) срещу AIV провокационен щам в рамките на тяхната група. За TRT 1 плюс 2, тези FFN титри варират от 1:4 до 1:128. Тъй като TRT {{10}} няма никакви титри срещу AIV щама, ние избрахме женските с най-високи анти-MLV титри; тези титри варират от 1:16 до 1:32. IFN-отговорът във всички избрани женски животни варира от 0.09–0.21 процента от общия брой CD4 Т клетки.

Всяко от тези женски прасенца предостави четири прасенца за изследването на предизвикателството. На 2-седмична възраст (= 0 седмици след заразяването, wpi), четирите прасенца с най-средно тегло на котилото бяха избрани за проучването за предизвикателство и транспортирани до жилищните помещения за ниво 2 на биосигурност на Държавния университет на Северна Каролина ( NCSU) Ресурси за лабораторни животни (LAR) (Роли, Северна Каролина). Тук те бяха разпределени на случаен принцип в една от шест кошари в една и съща стая; две прасета на третиране бяха настанени във всяка кошара (по едно на позлатено). В обобщение, в проучването имаше общо 36 прасенца с 12 прасенца на група за лечение.

During the study, four piglets died before the end of the study: three piglets from one gilt (TRT 0) died within 30 h of arrival at LAR and were dropped from the study. Additionally, one pig (TRT 2) was euthanized between weeks three and four of the study due to high fever (>106◦ F) и липса на отговор на физическа стимулация. Това прасе беше включено във всички анализи до седмица 3 и белите му дробове бяха оценени за патология. При аутопсията за това животно не е направен анализ с поточна цитометрия (FCM).

Един ден след отбиването и пристигането в NCSU, всички прасенца бяха инокулирани интраназално с 1 × 105,5 PRRSV-2 вирусни частици (автогенен щам 1-7-4) в 1 ml 1X фосфатно буфериран физиологичен разтвор (PBS, Corning, Corning, Ню Йорк, САЩ) (500 µL/ноздра), поддържани в легнало положение за 30 секунди и върнати в техните кошари. Половината животни бяха умъртвени при 2 dpi, а останалите животни бяха умъртвени при 4 dpi. При аутопсията, BAL, белите дробове и трахеобронхиалните лимфни възли (TrBr LNs) бяха събрани и обработени, както е описано по-горе [13].

Вземането на проби се извършва преди инокулацията (0 wpi) и след това всяка седмица, както е показано на Фигура 1. Серумът се събира в епруветки за разделяне на серума (SST) (Becton Dickinson (BD) Biosciences, Сан Хосе, Калифорния, САЩ) и кръв за изолиране на PBMC се събира в епруветки с хепарин (BD Biosciences). Настаняването на животни беше от ръководството на Националния институт по здравеопазване за изследователски животни. Прасенцата имаха неограничен достъп до вода, бяха хранени с преходна диета за отбиване, след това с редовна диета два пъти дневно и се поддържаха при 83 ◦F с 12--часов цикъл светлина/тъмнина. Експерименталните процедури бяха одобрени от Комитета за институционална грижа и използване на животните на държавния университет на NC (IACUC) ID# 17-166A (29 ноември 2017 г.).

2.2. Размножаване на вируси, титруване и оценка

Вирусният изолат PRRSV-2 (щам, 1-7-4) се размножава върху PRRSV-отрицателни свински алвеоларни макрофаги (PAM) в RPMI-1640, 1 × с L-глутамин (Corning, Corning, NY , САЩ), допълнен с 10 процента фетален говежди серум (FBS) (VWR, Radnor, PA, САЩ) и 1X антибиотик-антимикотик (Corning) (наричан RPMI-пълен) за приблизително 30 часа в T-75 колби (Sarstedt, Nümbrecht, Германия), докато се наблюдава цитопатичен ефект. Колбите се замразяват-размразяват веднъж и супернатантата се върти при 2200 g при 4 °C за 10 минути. За да се концентрира вирусът, супернатантата след това се прехвърля в 36 mL Nalgene центрофужни епруветки (Thermo Fisher Scientific, Rochester, NY, USA) и се върти в Sorvall 100S Ultracentrifuge (Sorvall, Thermo Fisher Scientific), Newtown, CT, USA) при 73 ,000 g при 4 ◦C за 2 часа.

Супернатантата се изхвърля и пелетата се ресуспендира в среда (RPMI завършен) и се съхранява в 100 µL аликвотни части при -80 ◦C. Титрите на инфекциозната доза 50 на тъканната култура (TCID50) на вирусни изходни разтвори се определят с помощта на PAMs, както е описано по-горе (метод на Spearman–Karber TCID50 съгласно наръчника за диагностични тестове на OIE [Световна организация за здравеопазване на животните, преди това Office International des Epizooties (OIE) ), „Глава 2.8.7 Репродуктивен и респираторен синдром на свинете“, Terr. Man., № май 2015 г., 2015 г.].

2.3. Виремия

Изолираният серум беше анализиран от диагностичната лаборатория на компанията за свинско месо в Северна Каролина, използвайки количествена полимеразна верижна реакция с обратна транскрипция (RT qPCR) с 5X MagMAX патоген РНК/ДНК комплект (Thermo Fisher Scientific) и VetMAX PRRSV qPCR комплект (Thermo Fisher Scientific). Ваксинираният позлатен серум е PRRSV-отрицателен (qPCR) при опрасване, както е определено от Ветеринарната диагностична лаборатория на Държавния университет на Айова (ISU VDL, Ames, IA, САЩ). Стойностите на ∆Ct бяха изчислени чрез изваждане на стойността на Ct на проба от стойността на Ct, считана за PRRSV-отрицателна (Ctneg=37) за PRRSV: ∆Ct=37 − Ctx.

2.4. Валидиране на неутрализиращи антитела и определяне на положителни проби

Серумни проби от женски и прасенца бяха изпратени до Лабораторията за изследване и диагностика на животни към Държавния университет на Южна Дакота (Брукингс, SD), които завършиха определянето на PRRSV-2 неутрализиращи антитела (NA), използвайки FFN и 1-7-4 инокулационния щам. Положителен резултат е най-високото разреждане на серума с 90 процента или по-високо намаление на броя на флуоресцентните образуващи фокус единици [23].

2.5. Процедури за аутопсия, оценяване и изолиране на тъканни клетки

При аутопсия (2 или 4 wpi), животните се умъртвяват чрез летална интравенозна инжекция на Euthasol (Covetrus, MW, 390 mg/mL пентобарбитал, 50 mg фенитоин/mL). След това белите дробове, тимусът и TrBr LNs бяха събрани.

За белите дробове бяха направени дорзални и вентрални снимки; белите дробове бяха промити с 1 × PBS за събиране на бронхиалния алвеоларен лаваж (BAL) и бяха взети общо пет проби за хистология: по една от десния и левия опашен лоб, десния и левия среден лоб и след това една от допълнителния лоб. Хистологичните проби се фиксират във формалдехид/Zn фиксатор (Electron Microscopy Sciences, Hatfield, PA) за 24 часа, прехвърлят се в 70 процента етанол и се оцветяват с хематоксилин и еозин (H&E). Оцветените слайдове (хистология) и белодробни снимки (обща патология) бяха изпратени до ISU VDL и отбелязани от ветеринарен диагностичен патолог, който беше заслепен за лечението и датите на аутопсията; оценката за белодробна лезия и интерстициална пневмония се извършва, както е описано по-горе [24].

Дорзалните и вентралните изгледи на белодробни снимки бяха оценени за процента на белия дроб, засегнат от пневмония. По-конкретно, процентът на пневмония беше оценен визуално за всеки белодробен лоб и общият процент за целия бял дроб беше изчислен на базата на претеглената част на всеки лоб спрямо общия белодробен обем. Всеки от четирите краниовентрални лоба представлява 10 процента, допълнителният лоб 5 процента и всеки от двата каудални лоба представлява 27,5 процента от общия бял дроб.

Белодробните хистопатологични срезове бяха изследвани сляпо за микроскопични лезии и на всеки лоб беше даден приблизителен резултат въз основа на тежестта на интерстициалната пневмония, както следва: 0=няма микроскопични лезии; 1=минимална интерстициална пневмония; 2=лека интерстициална пневмония; 3=умерена интерстициална пневмония; 4=обилна интерстициална пневмония; 5=тежка, мултифокална интерстициална пневмония; 6=тежка, дифузна интерстициална пневмония. За всички събрани тъкани (бели дробове, тимус и TrBr LNs), тъканта се нарязва на малки парчета и се пресова през кръгли дренажни цедки от неръждаема стомана (Grainger, Lake Forest, IL, САЩ) в 50 ml епруветки с ледено студен PBS за елуиране суспензии от единични клетки. Влакнестите бучки се филтруват с 40 цт филтри (BD Biosciences, Сан Хосе, Калифорния, САЩ).

2.6. Изолиране на периферна кръв, вирусна стимулация и IFN-FCM оцветяване/анализ

Изолирането на PBMC се извършва с помощта на центрофугиране с плътност Ficoll-Paque (GE Healthcare, Uppsala, Швеция) и SepMate{1}} ml епруветки (STEMCELL Technologies, Ванкувър, Британска Колумбия, Канада) по протокола на производителя. Преброяването на PBMC и суспензията на единични клетки беше завършено на система за броене на клетки CASY (Schärfe System, сега: Roche Innovatis AG, Билефелд, Германия). За анализа за производство на IFN, 5 × 105 PBMCs и лимфоцити от белите дробове и TrBr LNs се посяват в осем повторения в 96-плочка с кръгло дъно (Corning) в 100 µl RPMI-complete и се оставят за една нощ в инкубатор при 37 ◦ C и 5 процента CO2. На следващата сутрин 100 µL от RPMI-complete, съдържащ PRRSV щам 1-7-4 (Множество инфекции, MOI=0.1) се добавят към всяка ямка; плаките се връщат в инкубатора за 24 часа вирусна стимулация.

За последните 4 часа от културата се добавя монензин (5 µg/mL, Alfa Aesar, Haverhill, MA, САЩ), за да се блокира освобождаването на IFN от клетките. След завършване на 24-часовото инкубиране, репликите се събират и оцветяват, както е посочено в Таблица 1; средно 276 756 единични живи лимфоцити (SLL) са записани на Cytoflex с помощта на софтуера CytExpert (Beckman Coulter, Brea, CA, USA). Анализът на данните беше извършен с FlowJo версия 10.6.1 (FLOWJO LLC). Стробиращата йерархия за анализа на IFN-отговора е показана на фигури 4 и 5 за PBMC и на допълнителна фигура S1 и фигура 7 за BAL, белодробна тъкан и TrBr LNs.

2.7. Статистически анализ

Статистическите анализи бяха извършени с помощта на Graphpad Prism 8 (Graphpad Software, Сан Диего, Калифорния, САЩ). Данните с пълен набор от данни бяха анализирани чрез двупосочна (по време на цялото изследване) или еднопосочна (при аутопсия) ANOVA. Данните с липсващи точки от данни (главно поради аутопсията на 50 процента от прасетата при 2 dpi) бяха анализирани чрез модел със смесени ефекти (ограничена максимална вероятност, REML). Всички множествени сравнения бяха извършени с теста за множествено сравнение на Dunnett. Илюстрацията на данните беше извършена с помощта на цигулкови диаграми, показващи разпределението, отделните точки, медианата (както е приложимо, пунктирана черна линия) и 25-ти/75-ти интервали (като приложима, цветна линия). Корелационните анализи между нивата на nAb при позлатени и прасенца бяха извършени с помощта на корелационни коефициенти на Pearson и двустранен 95% доверителен интервал.

3. Резултати

3.1. Дизайн на изследването и ефикасност на ваксината - клинични признаци, виремия, наддаване на тегло и белодробна патология

Проучването е проведено, както е показано на Фигура 1. При инокулация с PRRSV, прасетата показват леки симптоми на PRRSV, започващи в рамките на 3-4 дни от заразяването - треска [главно при 1 wpi, dns], летаргия, намалена консумация на храна, леко кашляне/кихане. Не са наблюдавани значителни разлики за тези симптоми и те са персистирали в различна степен до аутопсията. Фигура 2 илюстрира виремия, седмично наддаване на телесно тегло, както и брутни и хистопатологични резултати.

Както е показано на Фигура 2A, всички прасета са PRRSV-2 отрицателни при отбиването и интраназалната инокулация с PRRSV-2 индуцира виремия, която достига пик при 2 wpi. Докато нямаше разлика във виремията между TRT 0 и TRT 2, TRT 1 имаше значително по-ниска виремия през първите две седмици от контролната група TRT 0. Наддаването на тегло на прасетата във всички групи беше много сходно през първите три седмици; но в края на проучването – и в сравнение с TRT 0 – TRT 2 и TRT 1 имаха значително по-високи седмични наддавания на тегло – Фигура 2B. Най-вече, докато белодробната патология обикновено се разрешава при инфекция с PRRSV и следователно е сходна между групите при 4 dpi (dns), и двете AIV ваксинации на майката, така че TRT 1 плюс 2, значително намаляват белодробната патология при 2 wpi: и двете намаляват процентните нива на макроскопски лезии и/или интерстициална пневмония (Фигура 2C, D). Преобладаването на макроскопските белодробни лезии в белите дробове от TRT 0 е между 20–70 процента; за разлика от това, повечето прасета в TRT 1 плюс 2 са имали разпространение на белодробни лезии под 20 процента — Фигура 2C. По подобен начин, докато средният хистопатологичен резултат за интерстициална пневмония в белите дробове от прасета TRT 0 е три, той е 1,8 за TRT 1 и 1,2 за TRT 2, съответно. В сравнение с TRT 0, това демонстрира тенденция към значимост (p=0.07) и значително намаляване на белодробната хистопатология при прасета от AIV-ваксинирани женски животни — Фигура 2D. Тези данни показват, че AIV ваксинацията може значително да намали виремията и белодробната патология, освен това те също показват, че AIV ваксинацията на майката срещу PRRSV-2 може да повиши имунитета на 2-седмични прасенца.

3.2. Индуциране на майчини неутрализиращи антитела и тяхното предаване на прасенца

Индукцията на хуморален имунен отговор при женските и тяхното потомство се анализира чрез определяне на NA FFN титри (Фигура 3).

Ваксинирането на всички групи с MLV индуцира NA титри при женските между четири и 64 без значителни разлики между трите групи (dns). За разлика от това, докато само MLV ваксинацията (TRT 0) не включва NAs срещу хетероложния 1-7-4 щам, и двете усилващи ваксинации с AIV индуцират NA титри до 1:16 (за TRT 2) и дори 1 :128 (за TRT 1)—Фигура 3A.

Тези серумни NA са прехвърлени от майката на прасенца (Фигура 3B): Докато TRT 0 прасенца не показват титри на NA при 0 wpi, TRT 1 и TRT 2 прасенца притежават серумни NAs за щам 1-7-4 преди инфекция, която пряко корелира с нивата на NA на майката (Фигура 3C, r=0.886, p < 0.0001). Тези NA титри намаляват през първите две седмици, преди да се стабилизират с 4 wpi. И все пак, в сравнение с TRT 0, прасенцата от AIV-ваксинирани женски женски (TRT 1 плюс 2) са имали значително по-високи серумни титри на NA още преди провокацията и тези повишени титри са продължили до 2-3 wpi, така че до 4-5 седмична възраст - Фигура 3B.

For more information:1950477648nn@gmail.com